УНИВЕРСАЛЬНАЯ ТЕСТ-ПОЛОСКА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ГЛЮКОЗЫ В МОЧЕ, КРОВИ И ДРУГИХ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ Российский патент 1994 года по МПК G01N33/48 A61K37/62 

Изобретение относится к медицине (диагностике), к устройствам для анализа глюкозы (сахара) в моче и крови и может быть использовано для диагностики сахарного диабета и контроля состояния больного.

Известны тест-полоски для определения уровня глюкозы в крови, содержащие ферментную (глюкозооксидаза, перексидаза) смесь и хромоген. Однако, эти полоски имеют моноцелевое назначение и не позволяют проводить анализ мочи на содержание глюкозы.

Известны также тест-полоски для анализа глюкозы в моче. Коммерческие тест-полоски фирмы Eiken Chemical CO, LTD содержат в реактивной смеси вещества, мас. % : Глюкозооксидаза 4 Пероксидаза 0,6 2-7-диаминофлуорен 2˙ HCl 1,3 Хромоген (производное бензидина) 4,9 Эритрозин B 0,2 Буфер До 100.

Это решение взято в качестве прототипа. Однако чувствительность известных полосок невелика и не позволяет определить наличие и концентрацию сахара в моче при содержании его ниже, чем 0,05% .

Таким образом, с помощью известных полосок невозможно определить скрытые формы диабета, когда содержание глюкозы в моче ниже порога их чувствительности.

Эти тест-полоски непригодны для анализа сахара крови.

Целью заявленного решения является повышение чувствительности теста и придания ему универсальности действия.

Поставленная цель достигается тем, что реактивная смесь содержит поликарбоновую кислоту и обработанный органическим растворителем связующий полимер при соотношении, мас. % : Пероксидаза 1-3 Глюкозооксидаза 2-6 Поликарбоновая кислота 2-6 Хромоген 8-12
Обработанный связующий полимер До 100, причем хромоген выполнен в микрогранулированной форме.

Этим достигается повышенная чувствительность заявляемых тест-полосок так, что с их помощью можно определить глюкозу в моче, начиная с концентрации 0,005% , что превосходит по чувствительности известные полоски (аналоги) в 10-20 раз.

Кроме того, предлагаемые полоски пригодны для определения глюкозы в крови, в других биологических средах, например в слюне, соках и т. д. , т. е. являются универсальными.

Предлагаемые тест-полоски изготовляются из водонепроницаемой глянцевой бумаги, имеют размер 5 х 70 мм и содержат в 5 мм от края "пятно" со смесью реактивов.

Определение глюкозы в моче с помощью предлагаемых полосок /так же как известными аналогами/ является полуколичественным и производится визуально по цветной шкале стандартов.

Определение глюкозы в крови можно проводить как визуально /полуколичественно - по цветной шкале стандартов/ так и инструментальным методом, используя глюкометр.

П р и м е р 1. Использование тест-полосок для полуколичественного определения концентрации глюкозы в моче.

Погружают конец полоски (с реактивным пятном) в свежую мочу на 30 с. Точно через 30 с полоску споласкивают водопроводной водой, слегка промокают (фильтровальная бумага, салфетка), помещают на сухую белую бумагу и через 1,5 мин (с начала погружения) определяют содержание глюкозы (% ), сравнивая цвет пятна с цветной шкалой.

В случае концентрации глюкозы в моче выше 0,7% мочу разводят водой в 10 раз, проводят определение вновь (как было описано) и результат умножают на 10.

Цветная шкала стандартов изготовляется следующим образом. Готовят серию водных растворов глюкозы в концентрациях 0,005; 0,02; 0,06; 0,2; 0,7% и проводят с каждым раствором реакцию на тест-полосках. Полученные цвета окрашенных пятен на полосках воспроизводят полиграфически с цифрами соответствующих концентраций глюкозы.

При исследовании образцов мочи 171 больного сахарным диабетом с помощью предложенных тест-полосок, а также параллельно с помощью импортных полосок и поляриметрическим методом было показано, что:
положительная реакция на глюкозу в моче обнаружена с помощью предложенных полосок у 157 больных, т. е. диагностическая ценность /совпадение с клиническим диагнозом/ равна до 92% ;
метод позволяет определять концентрацию глюкозы в моче, начиная с 0,005% , и превосходит по чувствительности в 10-20 раз возможности анализа на поляриметре и с помощью импортных полосок;
существует приемлемое для полуколичественных тестов совпадение (в 91,2% ) результатов анализов глюкозы в моче, полученных с помощью заявляемых полосок и поляриметра, а также с помощью импортных тест-полосок /прототипа/.

П р и м е р 2. Использование предложенных тест-полосок для определения концентрации глюкозы в крови.

Каплю крови из пальца наносят на реактивное пятно полоски, покрывая его полностью. Через 1 мин пятно стирают ватным тампоном и еще через 1 мин для визуального полуколичественного определения концентрации глюкозы сравнивают цвет пятна с цветной шкалой стандартов, построенной по растворам глюкозы с концентрациями: 25, 50, 100, 150, 200, 300, 400 мг/100 мл /или соответственно 1,4; 27; 5,5; 8,2; 11; 16,5 и 22 ммоль/л/.

Для количественного определения пятно измеряют на глюкометре с предварительной калибровкой прибора раствором глюкозы и выбором подходящей программы.

Определение концентрации глюкозы в 100 образцах крови больных сахаpным диабетом и здоровых людей проводили параллельно с помощью предложенных полосок, а также полосок и глюкометра фирмы Bajer-Ames.

Визуальное полуколичественное определение (по цветным шкалам) известным и предложенным методами показало их полное совпадение.

Определение глюкозы на глюкометре (с использованием программы N 9) проводили, умножая показатель на вычисленный поправочный коэффициент 1,3.

При этом в 80 пробах крови различие не превышало 10 мг % (0,55 ммоль/л), а в 20 пробах не превышало 20 мг % (1,1 ммоль/л).

П р и м е р 3. Выбор оптимальных концентраций компонентов реактивной смеси для изготовления тест-полосок.

Исследование чувствительности полосок, приготовленных с различными реактивными смесями при испытании стандартного раствора глюкозы (0,01% ) представлено в таблице.

Из таблицы видно, что реактивные смеси N 2 и N 3 (интервал заявляемых концентраций компонентов) являются оптимальными.

При концентрациях ниже заявленного предела (смесь N 1) интенсивность окраски реактивного пятна резко уменьшена и не соответствует цветной шкале.

Более высокие концентрации компонентов (смесь N 4) также не желательны, так как при этом увеличен расход реактивов и увеличивается окраска контрольной пробы (с водой).

Таким образом, показано, что предложенные тест-полоски пригодны для определения глюкозы как в моче, так и в крови, т. е. являются универсальными. Они обладают также повышенной чувствительностью.

Эти полоски могут быть использованы как скрининговый диагностический тест для выявления лиц с подозрением на наличие сахарного диабета, удобный при массовом обследовании населения.

Они приемлемы также для врачебного контроля и самоконтроля больных сахарным диабетом.

(56) BLOOD Glucose test for visua 1 or meter use инструкции фирмы Bajer-Ames. 1976.

Использование: в медицине и может применяться для анализа глюкозы в моче, крови и других биологических жидкостях. Сущность изобретения: универсальная тест-полоска содержит бумажную основу с нанесенными на ее пероксидазой, глюкозооксидазой орто-толидином, поликарбоновой кислотой, с обработанным органическим растворителем связующим полимером при соотношении, мас. % : пероксидаза 1 - 3; глюкозооксидаза 2 - 6; поликарбоновая кислота 2 - 6; орто-толидин микрогранулированный 8 - 12; полипептидный полимер - до 100. Данная тест-полоска обладает высокой чувствительностью. 1 табл.

УНИВЕРСАЛЬНАЯ ТЕСТ-ПОЛОСКА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ГЛЮКОЗЫ В МОЧЕ, КРОВИ И ДРУГИХ БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ, содержащая бумажную основу с нанесенными на нее пероксидазой, глюкозооксидазой, ортотолидином, отличающийся тем, что дополнительно она содержит поликарбоновую кислоту, полипептидный полимер, а ортотолидин в микрогранулированной форме при следующем соотношении компонентов, мас. % :
Пероксидаза 1 - 3
Глюкозооксидаза 2 - 6
Микрогранулированный ортолидин 8 - 12
Поликарбоновая кислота 2 - 6
Полипептидный полимер Остальное