Способ регулирования половой деятельности млекопитающих Советский патент 1993 года по МПК A61K37/02 

сл

С

Изобретение относится к области животноводства, а именно к регулированию половой деятельности млекопитающих.

Цель изобретения - повышение эффективности способа.

Пример 1. Провоцирование суперовуляции в инфантильных крысах женской особи.. . .

60 штук инфантильных самок крыс в возрасте 21 день, весом 7-8. граммов внут- рибрюшинно были подвергнуты обработке препаратам D-Phe6, Gln8-GnRH, растворенном в физиологическом растворе поваренной соли. В зависимости от вида обработки животные были разделены на несколько групп. В серии обработок, продолжавшихся от одного дня и до 8 дней, отпускали предварительные дозы порядка Irg в день или дважды в день.

После завершения обработок всех животных умертвляли эфирным паром, их яичники в результате операции были изьяты после наступления смерти. 24 часа спустя после последней обработки. Анализ осуществлялся визуально и на основе гистологических проб. В яичниках контрольных животных было найдено множество фолликул, находящихся в развитии, однако ни один фолликул не достиг размера фолликула Граф а, не было также ни желтых тел, ни Corpus haemorrhagicum. В противоположность, этому, во всех обработанных группах можно было обнаружить гормональное действие, которое сказывалось в росте фолликул, в преобразовании в фолликулы Граф а, в овуляции больших фолликул и в образовании нормальных желтых тел. Яйцевод и матка были также увеличены. Из 60 обработанных животных всего 4 не показали реакции на обработку. У животных, которые в течение 4 дней ежедневно получали дважды дозу в количестве 2 мкг аналога GnRH и на

00

со ч

00 00 00

со

4-й день были подвергнуты обработке в течение 6 часов дозой в количестве 10 мкг после того, как они получили дозу 2 мкг. в яичниках были в большом количестве размягченные фолликулы Граф э, находящиеся непосредственно перед овуляцией. Число окончательно созревших фолликул Граф а в день находилось в пределах между 60 и 90, в то время как в случае выросших животных нормальная величина составляла 12. Вторую группу животных обрабатывали, подобным же образом, с тем отличием, что обработка продолжалась свыше 6 дней. В случае этой группы эффективность суперовуляции оценивали по числу нормальных желтых тел, появившихся в яичниках. Аналогично результатам, описанным подробно выше, количество желтых тел на каждое животное в день здесь также находилось в пределах между 60 и 90. Гистологический анализ подтвердил этот результат в достаточно полной мере.

Пример 2. Провоцирование суперовуляции на инфантильных самках мышей.

Аналогичным образом, как это описано в примере 1, были подвергнуты обработке в общем 105 самок мышей, которые имели возраст 28 дней и вес 5-6 г. Животные, обрабатываемые в течение 1-8 дн§й, еже

г. . ..-- ,.- g -Q

дневно получали 1-5 rg D-Phe , Gin , Gly - GnRH-этиламида. Между отдельными обработками интервал составлял 4 часа. Яичники были удалены через 27 часов после последней инъекции.

Яичники контрольной группы имели ма- тово-желтый цвет и гомогенную структуру, в некоторых яичниках находились 1-2 растущих фолликул. В группах обработанных животных на всех яичниках, увеличенных яйцеводах и матке можно было наблюдать действие гормона, У животных, которые ежедневно один раз получали дозу 1rg, а на 3-й день, через четыре часа после получения дозы 1 мкг названного аналога GnRH, в яичниках были обнаружены окончательно созревшие, нащупываемые волнистые фолликулы Граф а, а именно, на каждое животное по 45-70 штук. В группе, которую обрабатывали аналогичным образом, но в течение 5 дней, на месте фолликул Граф а образовались нормальные желтые тела в вышеназванном количестве. Результат гистологического исследования соответствовал визуальной оценке.

Эти результаты явились подтверждением результатов способа согласно примеру 1.

Пример 3. Провоцирование супер- овуляции на инфантильных кроликов,

20 молодых кроликов породы белый жемчуг, родившихся в условиях массового

0

5

0

5

0

5

0

5

0

5

содержания, в возрасте 42 дней подвергались обработке в течение 3 дней ежедневно дважды внутрибрюшинно, каждый соответственно 5 мкг D-Phe6, Gln8-GnRH. Затем животных разделили на две группы. Первую группу на 4-й день обработали биологически активным веществом в количестве 50 мкг, другую группу умертвили с помощью эфирного пара. Число зрелых фолликул Граф а в группе, умертвленной до обработки, служило в качестве контроля при установлении изменения, наступившего вследствие дозы 50 мкг. У оставшихся в живых животных наступление овуляции прослеживали на двух животных в результате лапароскопического исследования (отражение брюшной полости), осуществляемого в течение 10 часов, под наркозом. Обработка посредством 50 мкг через 26 часов привела к тому, что у каждого животного отмечалось 30-45 овуляций или Corpus haemorrhagicum в то время как яичники контрольных животных были не активны.

Посредством этого способа уже из инфантильных экземпляров кроликов можно было получить зрелые яйцеклетки и увеличить их число в расчете на физиологическую величину.

Пример 4. Провоцирование суперовуляции на инфантильных свиньях.

20 инфантильных самок поросят, в возрасте 100 дней подвергались обработке в течение 6 дней ежедневно, дважды внутримышечно посредством соответственно 10 мкг , Gin -GnRH. Для анализа из контрольных животных удалили соответственно яичник, методики исследования соответствовали методикам, описанным в примере 3, число образованных фолликул Граф а сравнивалось с числом желтых тел, образованных после овуляции. Наступление овуляции наблюдали с помощью лапароскопа. Дозы, отпущенные на 7-й день, в количестве 100 мкг D-Phe6, Gln8-GnRH через 41 час вызвали у 10 поросят, подвергнутых обработке 15-36 овуляций. Обработка инфантильных поросят привела к такому же результату, как и в случае видов животных, названных в примерах 1-3.

Пример 5. Провоцирование суперовуляций на инфантильных овцах.

10 ягнят женских особей, в возрасте 50 дней,в течение 5 дней ежедневно обрабатывали дважды внутримышечно препаратом D-Phe6, Gin8, Gly -GnRH-этиламидов в количестве 10 мкг. Дозас биологически активного вещества в количестве 70 мкг, отпущенная на 6-й день, вызвала у каждого животного овуляций. У контрольных животных не наступило никакого изменения.

Аь ализ осуществлялся как на обработанных животныхдак и на контрольных животных пс средством лапароскопии. Эти результаты ее ответствовали тем результатам, которые били описаны в примерах 1-3.

Пример 6. Провоцирование супер- огуляции на инфантильном крупном рога- тс м скоте.

8 инфантильных телят, в возрасте 65 дней, были подвергнуты обработке ежедневно в течение 8 дней посредством п эепарата D-Phe6, Glne, С1у10-СпВН-этила- м/да в количестве 2 мкг. После одного дня пэрерыва, на 10-й день животным внутримышечно вводили 100 rg биологически ак- Т1вного вещества. После последней v. нъекции были удалены оба яичника; в общем, в каждом яичнике были найдены примерно 5-11 развитых фолликул Граф а. Половина этих фолликул не нащупывалась больше как твердые, следовательно, они находились непосредственно перед овуляцией.

Этот эксперимент доказывает, что в случае крупного рогатого скота уже из инфантильных животных можно получить несколько зрелых яйцеклеток, в то время как взрослое животное овулирует обычно лишь одну яйцеклетку.

Пример 7. Провоцирование сперматогенеза у зубра, олигоспермического {следствие сезонного периода, с целью г олучения эякулята, пригодного для искус- (твенного охлаждения и для хранения в ус- /)овиях глубокого охлаждения.

От зубра, находящегося в зоологиче- ком саду, весом около 700 кг, в мае меся- е была взята под наркозом проба спермы шектрическим способом. Было установ- ено, что вол находился в состоянии оли- оспермии, обусловленной сезоном. Симптомы были следующие: в поле зрения шкроскопэ, обычно используемого для исследования спермы, с 1 500-кратным увеличением, число сперматозоидов было 5-20, удержание дефектных сперматозоидов составляло 75-80%, а плотность спермы-0,5. Сперма такого качества непригодна для оп- юдотворения,

Животное было подвергнуто обработке посредством инъекционного прибора, ра- Зотающего на сжатом воздухе), дважды в делю препаратом D-Phe ,Gln -GnRH в соличестве соответственно 200 мкг. На 55-й цень обработки это животное дважды, с интервалом в один час, доводили до семяиз- зержения. Оба эякулята были соединены вместе; плотность составляла 4, подвижность 55%. Сперма была подвержена глубокому охлаждению, а затем в результате

глубокого охлаждения определяли наступившее снижение подвижности. Оно составляло лишь 5%.

С помощью этого способа удалось ока- 5 зывать влияние на сперматогенез племенного животного таким образом, чтобы вместо эякулата, непригодного для оплодотворения, можно было получить сперму хорошего качества, пригодную как в свежем

0 состоянии, так и после хранения в условиях низкой температуры для оплодотворения нескольких коров (всего 14).

Примерв. Провоцирование сперматогенеза у красных (рыжих) лис, находя5 щихся в состоянии олигоспермии, обусловленной сезоном (vulpes vulpes).

На сперматогенез рыжих лис, содержащихся в зверинцах (охотничьих угодьях), которые находились в олигоспермическом

0 состоянии, обусловленном сезоном, оказывали влияние с той целью, чтобы обеспечить искусственное оплодотворение черно-бурых лис и голубых песцов, содержащихся в случном пункте, для того, чтобы получить

5 особые и высококачественные гибридные меха. Из специальной литературы известно, что все подвиды лис лишь один раз в год находятся в состоянии течки, и кроме одного этого периода половые железы обоих по0 лос являются полностью неактивными. Между течкой отдельных подвидов существует разница во времени порядка нескольких месяцев (рыжая лиса: январь; голубой песец: апрель до мая). Результаты исследо5 ваний сравнивали с изображением спермы популяции, находящейся в сезонной течке, у которой среднее количество эякулата составляло 2 мл, плотность 3, а подвижность 50-60%. Это рассматривали как физиологи0 ческую величину.

Пять половозрелых самцов рыжих лис, весом в среднем 8 кг, обрабатывали, начиная с апреля, в течение 7 недель, дважды в неделю, посредством препарата D-Phe6,

5 Gin-GnRH в количестве 1, 5, 10, 50 мкг. На 3-й неделе после начала обработки были изъяты пробы спермы. В этих пробах число сперматозоидов составляло примерно 60-70% физиологической величины, число

0 дегенерированных сперматозоидов превышало 40%. Дефектные формы были в основном формы мужских особей (капли плазмы на средней части шейного отдела). На 7-й неделе после начала обработки под нарко5 зом снова собрали эякулат. От всех животных можно было успешно взять сперму, объем эякулата составлял порядка 1,2 мл и 3,1 мл, плотность находилась в пределах 3. подвижность -65%, численно значительно превышала физиологическую величину4

(Самцы к этому моменту были отделены от самок, для опорожнения посредством копуляции не было возможности). Пробы спермы в зависимости от качества были разделены на группы и охлаждены в условиях низкой температуры. После разведения и глубокого охлаждения, а затем после оттаивания (размораживания)подвижность спермы, охлажденной до -196°С, составляла 45%. При применении спермы, подвергнутой глубокому охлаждению, можно было - при исполь- зовании программирования GnRH (см.пример 17) и техники искусственного оплодотворения - обеспечить нормальную беременность у голубых, песцов,

В результате однократного отбора эяку- лата, производимого у пяти лис, можно было получить 56 доз спермы, пригодной для оплодотворения. Такая техника приемлема для получения ценных мехов на крупных фермах.

Пример 9. Стимулирование физиологической нормоспермии на бенгальском тигре для получения гиперспермии, позволяющей глубокое охлаждение.

Бенгальский тигр, находящийся во владении зоопарка, в возрасте 8 лет, имеющий вес около 200 кг, регулярно спаривался, его самка прежде каждый год была беременной. Зная об этом, от тигра под наркозом электрическим путем в период спаривания была взята проба спермы. Было установлено, что плотность спермы составляла 3, подвижность 30%, а количество эякулата 0,2мл. Эякулат показывал картину физиологической нормоспермии. Такое небольшое количество эякулата нельзя было подвергать глубокому охлаждению по техническим причинам. Для того, чтобы избежать повреждения печени, наркоз можно осуществлять максимально через каждые 4 дня и поддерживать максимально в течение 4-5 часов. Такой способ сбора спермы является неприемлемым.

Самца закрыли в отдельную клетку и в течение 12 дней ежедневно обрабатывали препаратом этиламида в количестве 10 мкг. Это биологически активное вещество было растворено в 1 мл физиологического раствора поваренной соли, и его применяли внутримышечно посредством прибора для инъекций, работающего, на сжатом воздухе. На 12-й день это животное под наркозом, электрическим путем, дважды, с интервалом в один час, было доведено до семяизвержения, при этом было получено 1 мл или . 0,8 мл спермы. Плотность соединенных проб составляла 4, подвижность находилась в пределах 70%. Пробы спермы были охлаждены в условиях низкой температуры и разделены на 21 отдельные дозы для искусст- венного оплодотворения, После размораживания спермы подвижность составляла 60%.

Таким образом, от бенгальского тигра

можно было получить в достаточном количестве сперму, подлежащую хранению в банке спермы.

Пример 10. Яичниковое торможение

0 на львах с целью контрацептации.

В зверинцах всего мира среди крупных хищных животных показывают льва. Для различных панорам и Safari-парков требуется оба пола показывать одновременно, в

5 одном и том же жизненном пространстве. Среди крупных хищных животных лев является единственным, который хорошо размножается в неволе при достаточно хорошем питании. Вследствие абсолютного

0 насыщения рынка львов желательным является разработка способа предупреждения от беременности, который будет безопасным для животного, не будет вызывать никаких изменений в его внешнем виде

5 и его поведении, и несмотря на спаривание, способствующее появлению потомства, предупреждать беременность. Предохранение от беременности на основе сексуальных стероидов приводит к болезненному ожире0 нию и к потере демонстрационного значения животного.

Интактная плодовитая львица, находящаяся во владении зоопарка, весом около 200 кг, которая уже пять раз приносила при5 плод, каждые три недели была подвергнута обработке дважды посредством D- Phe ,Gln -GnRH, а именно сначала в количестве 50 мкг, через 4 часа - в количестве 500 мкг, а затем была выдержана пауза в три

0 недели. Такая обработка, продолжающаяся каждые три недели, осуществлялась от начала течки до 50-го дня после окончания момента течки, характерного для этого вида (то есть от апреля до августа). У животного

5 было нормальное поведение, и оно спаривалось регулярно, данный самец, согласно исследованию, был нормоспермический. Львица в течение периода обработки не была беременной, и ни в ее поведении, ни в ее

0 внешнем виде не наблюдалось отклонения от нормы,

Пример 11. Индуцирование половой деятельности подсвинок женских особей на откорме, находящихся в условиях массового

5 содержания в половом созревании, с целью первичного стимулирования состояния, готового для зачатия.

В условиях массового содержания отмечается стремление к тому, чтобы животных, предусмотренных для сохранения погоrv PI

П

лсвья, племенных, как можно быстрее исльзовать для разведения, а также синхронизировать для оплодотворения и опороса в ш тересэх приспособления к непрерывной технологии, Активность половых, желез

дсвинок женских особей, находящихся на массовом содержании и расположенные в

зультате интенсивного кормления к быстрому росту, в препубертанный период и в

риод полового созревания является неустойчивой (лабильной), поэтому встречает- Cf редко и рассеянно по всей популяции, - ее стояние, собственно, готовое к зачатию последовательно позднее от одной бере- мрнности.

Для цели эксперимента на одной стан- щ||и по выращиванию молодняка подсвинок 200 будущих свиноматок, имеющихся в

споряжении. были выбраны 60 животных учетом наилучшего развития, самой луч- ш эй способности оценки кормов. Их иногда pi зделяли на две группы, соответственно, по 30 животных. Обе группы животных не кс рмили, ни поили в течение 24 часов, также в соответствии с технологией, имеющей мео на этой станции. Животных к моменту их вфбора внутримышечно обрабатывали прератом D-Phe6,Gln8-GnRH, растворенным

физиологическом растворе поваренной сс|ли. Инъекции с дозами соответственно 20 мсг названного соединения повторялись еме дважды с интервалом 24 часа. Как в необработанной контрольной группе, так и в бработанной группе состояние, готовое к

чатию, наступило у первого животного через 5 дней после выбора животных. Обе rf уппы содержались в одном помещении, в

инаковом жизненном пространстве, при идентичных условиях в течение 26 дней, доскаемых технологией, В течение этого пеода из контрольной группы, которую не

двергали обработке, 3 животных (10%, а обработанной группы 21 животное (70%)

успешно достигли состояния, способного зачатию. Успешными считались лишь1 те учаи, в которых состояние, способное к

зачатию, последовало от нормальной €ерем гнности и родов.

В этой серии опытов цель не распрост ронялась на точное установление момента опуляции, потому что не имелось в распоря- жэнии достаточного количества племенных хфяков. Поэтому цель состояла в том, чтобы ервое успешное состояние, способное к з|чатию, было обеспечено в течение 26 дней, Содержание 10% беременных животных а контрольной группе соответствовало средней производственной величине. Поэтому увеличение на 60%, появившееся в результате обработки, означает существенный экономический эффект.

Пример 12. Устранение отсутствия течки, обусловленной сезоном, у взрослых 5 лесных котов (Fells silocstris).

Две самки лесных котов, находящихся во владении зверинца, имеющие средний вес 6 кг, цикл которых при естественных условиях приходится на месяцы фев0 раль/март, подвергали обработке в августе посредством D-Phe6,Gln8, препарата Gly10- GnRH-этилэмида. Перед обработкой для проверки состояния обоих яичников под наркозом была открыта брюшная полость.

5 После того, как брюшную полость снова зашили, животных, при выдерживании паузы в два дня, в общем четыре раза обрабатывали биологически активным веществом, который применяли внутримышечно, рас0 творенным в физиологическом растворе поваренной соли. Между первой и второй инъекцией выдерживали паузу в два часа; первая доза составляла 100 мкг, вторая 500 мкг.Через 48 часов последовала третья

5 доза - 100 мкг, а еще через следующие два часа - четвертая доза (500 мкг). На 0-й, 2-й, 4-й и 8-й день под наркозом вскрыли брюшную полость, изменение состояния яичников оценивали визуально. После за0 вершения обработки, оба яичника были удалены в результате операции, зафиксированы и подвергнуты гистологическому анализу.

На 0-й день в случае обоих животных в

5 левом яичнике можно было увидеть 3-4 предполагаемые вторичные фолликулы, оставшееся старое желтое тело, и в правом яичнике 5-6 предполагаемых вторичных, фолликул. В результате обработки через 4

0 дня все вторичные фолликулы развились, превратившись в фолликулы Граф а, состоялась овуляция, а на месте фолликулы находились Corpora haemorrhagica, на пути превращения в желтое тело. Наряду с

5 Corpora haemorrhagica росли в визуально не учитываемом количестве вторичные фолликулы, которые в результате воздействия вторичной обработки продолжали развиваться, а после применения последней

0 дозы в количестве 500 мкг были атретизиро- ваны посредством интрафолликулярной лю- теинизации. Визуальные доказательства в полном объеме были подтверждены гистологическим анализом.

5 Овуляция, наступившая в результате описанной обработки, доказывает, что у вида кошачьих можно достичь оплодотворения также и вне сезона, и вне естественном содержании также можно обеспечить получение потомства.

Пример 13. Обработка самки голубого песца, находящегося в периоде отсутствия течки, обусловленной сезоном, с целью стимулирования течки, обеспечивающей получение потомства.

Самка голубого песца, находящаяся в периоде отсутствия течки, обусловленной сезоном, была подвергнута исследованию в декабре, под наркозом, посредством лапароскопа. Было установлено, что оба яичника были неактивными и не содержали развивающихся фолликул или фолликул Граф а.

Это животное в течение 10 дней ежедневно обрабатывали дважды внутримышечно посредством D-Phe , Gin -GnRH в количестве 1-5 мкг. На 10-й день под наркозом снова повторили лапароскопическое исследование. В обоих яичниках находились большие желтые тела, число которых - вследствие недостаточности технических возможностей можно было оценивать лишь приблизительно - составляло 10-20. Одновременно было установлено, что шейка матки была открыта.

Точно также в декабре подвергали обработке самку, которую вследствие грудной атрофии нужно было исключить из числа выращиваемых животных; обработку осуществляли аналогичным образом, ежедневно дважды посредством соответственно 2 мкг препарата D-Phe6, Gin -GnRH. Действие обработки прослеживали по изменению состояния шейки матки. На 6-й день после первой обработки шейка матки открылась. Потом была отпущена доза в количестве 50 мкг. Через 16 часов состояние яичников исследовали посредством отражения; овуляция предстояла непосредственно. Теперь брюшную полость полностью открыли, яичники были удалены в ходе операции, а из общего количества 11 фолликул Граф а яйцеклетки были удалены в результате пункции. Было найдено 6 нормальных яйцеклеток, покрытых нормальной.

С помощью этого способа было обеспечено получение яйцеклеток, пригодных к оплодотворению в лабораторных условиях, эмбрионов в период отсутствия течки в половом цикле, обусловленного сезоном, без нарушения нормального годового цикла. Это позволяет получать особое гибридное потомство при использовании менее ценных животных - реципиентов,

Пример 14. Стимулирование функции яичников инфантильных домашних кошек (Felts cattus domestlcus) посредством D- Phe6,G ne-GnRH.

5 молодых кошек в возрасте 45 дней, вес которых составлял примерно 0,3 кг, были подвергнуты обработке, через интервал в

два дня, четыре раза посредством препарата D-Phe6,Gln8-GnRH в количестве, соответственно. 100 мкг. Биологически активное вещество было растворено в физиологическом растворе поваренной соли и применялось внутримышечно. После окончания обработки под наркозом оперативным путем удалены оба яичника и подвергнуты визуальному анализу. Затем яичники

0 фиксировали в формалине и подвергали гистологическим исследованиям. В обоих яичниках имелось 5-7 штук Corpus haemorraglcum. Под корой были найдены хорошо отделяемые от светлого цвета сливоч5 ного масла, яичника, находившиеся в развитии фолликулы, некоторые из них имели размер фолликул Граф а.

Эти результаты однозначно свидетельствуют о том, что яичник еще инфантильных

0 домашних кошек в результате действия описанного способа обладает гистологическими и морфологическими свойствами, характерными для половозрелых животных. Таким образом, животное перед биологиче5 половой зрелостью, понимаемой в обычном смысле, становится пригодным для того, чтобы получить (от него) яйцеклетки, способные к оплодотворению In vitro (в лабораторных условиях),

0 Пример 15, Стимулирование функции яичников инфантильных домашних кошек посредством D-Phe6, Trp , leu8-GnRH.

5 молодых кошек в возрасте 45 дней, имеющих вес около 0,3 кг, были обработаны

5 с помощью препарата D-Phe6,Trp, Leu8- GnRH, Перед обработкой левый яичник был . удален оперативным путем. Животным через интервал в 2 дня в общем трижды отпускали дозы соответственно 100 мкг в виде

0 раствора, приготовленного в физиологическом растворе поваренной соли; дозы вводили внутримышечно. После завершения обработки был удален в результате операции оставшийся (правый) яичник, подверг5 нут визуальному анализу, а после фиксирования - гистологическим исследованиям.

Перед обработкой яичники, удаленные оперативным путем, были полностью гомо0 генные и имели цвет сливочного масла, развивающиеся фолликулы было невозможно заметить в них ни визуально, ни в результате гистологического исследования. После обработки в яичниках были найдены 7-8

5 штук Corpus haemorrhaglcum и много (не поддающиеся учету) фолликул , находящихся в развитии.

Этот результат подтвердили данные, полученные согласно примеру 14, в полной мере также и для другого аналога гормона,

способствовал углублению практических аний относительно физиологии следуюго цикла яичников.

Пример 16. Стимулирование примор- альных (первичных) фолликул инфантиль- 5 х домашних кошек.женских особей. (Fells ttus domesticum).

5 молодых кошек в возрасте 45 дней, торые имели вес приблизительно 0,3 кг ждая, обрабатывали посредством D- 10 е , Gln8-GnRH. Перед обработкой под ркозом был оперативным путем удален вый яичник. Затем эти животные в тече- е 3-х дней, ежедневно, три раза через тервзлы в А часа, в общем девять раз, лучали соответственно 0,1 мкг биологиче- и активное вещество, внутримышечно, в де суспензии, приготовленной с физио- гическим раствором поваренной соли и опиленгликоля. После завершения обра- 20 тки оставшийся яичник был удален опера- вным путем, подвергнут визуальному ализу, а после фиксации-гистологиче- им исследованиям. Визуально оба яични- были гомогенны, и имели цвет сливочного 25 ела, обработанный яичник был несколько льше. В необработанных яичниках гисто- гически можно было воспринять только шь примордиальные фолликулы, в то вре- как на поверхности разреза обработан- 30 ix яичников было зарегистрировано исчислимое количество (несколько сотен) ходящихся в развитии фолликул, показы- ющих различные стадии образования ан

15

ума.

С помощью этого способа удалось обес- чить одновременную стимуляцию не- ольких сотен примордиальных фолликул чника.

Пример 21. Получение яйцеклеток упного рогатого скота с целью выращива- я эмбрионов в лабораторных условиях (in го) из культуры органа post mortum.

5

10 0 5 0

Из животных, 30-55 минут спустя после того, как их убили и обескровили на бойне, были удалены интактные (неповрежденные) яичники, и в лабораторных условиях уложили в комплексный; Adjuvant.

К питательной жидкости в концентрации до г/мл добавили D-Phe6, Glri8, препарата GlylO-GnRH-этиламидэ. Яичники, выдерживаемые в культуре органа, ову- лировали в течение 16-43 часов. Из яйцеклеток, полученных из яичников в результате in vitro спонтанно осуществляемых овуляций и последующей пункции, 85% были способны для продолжения мейоза (вос- 15 становительного деления клетки), и их можно было успешно оплодотворять посредством хранимой спермы крупного рогатого скота in vitro. Первые два деления клетки оплодотворенных in vitro яйцеклеток можно было наблюдать в культуре.

С помощью этого способа была создана возможность так же, как и при распространенной в мире технологии искусственного оплодотворения у крупного рогатого скота, искусственно оплодотворять непосредственно живые эмбрионы, то есть трансплантировать. На бойнях имеется возможность получения такого количества эмбрионов, которое в значительной мере превышает потребность.

Формула изоСретения

Способ регулирования половой деятельности млекопитающих путем введения соединений GnRH-типа, отличающий- с я тем, что, с целью повышения эффективности способа, в качестве соединений GnRH-типа используют полипептид ylp- His-Trp-Ser-Tyr-Xi-X2-X3-Pro-X4, где Xi - D-Phe; Ха - Тгр или Leu; Хз - Leu или Gin; Хд - Gly-NH2 или -NH-Et, (который вводят в количестве 0,01-500 мг/кг с кратностью введения 1-25 раз и с интервалом введения 2 ч - 7 дней.

5

0