СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ВАРИАНТОВ ТЕЧЕНИЯ АТОПИЧЕСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ У ДЕТЕЙ Российский патент 1994 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, аллергологии, касается дифференциальной диагностики вариантов течения атопической бронхиальной астмы у детей.

Известен способ, применяемый для выявления причинно-значимого аллергена посредством кожной скарификации, с последующим нанесением на место скарификационной царапины испытуемого аллергена и оценки реакции взаимодействия аллергена с тучными клетками кожи больного по возникающей гиперемии и отеку на месте скарификации. Однако данный способ является неинформативным и не точным для количественной и качественной оценки клеточно-медиаторных ассоциаций, определяющих визуальную гиперемию и отек.

Наиболее близким по технической сущности является способ диагностики, включающий скарификацию кожи эпидермиса, нанесение причинно-значимого аллергена и оценку реактивности хемотаксиса клеточных популяций, однако данный метод не позволяет выявлять особенности взаимодействия причинно-значимого аллергена с клетками кожи, медиаторы аллергического воспаления, качественный клеточный состав, определяющих особенности патогенеза аллергического заболевания.

Цель - повышение точности способа.

Наиболее высокий технический результат достигают новым способом диагностики вариантов течения атопической бронхиальной астмы у детей, включающим скарификацию эпидермиса, нанесение на него причинно-значимого аллергена и последующую оценку активности хемотаксиса клеточных популяций, причем проводят скарификацию и нанесение причинно-значимого аллергена на обоих предплечьях, затем на верхние участки скарификаций фиксируют стерильные предметные стекла, а на нижние - камеры с физиологическим раствором, смену которых проводят через 1,6, и 24 ч, после чего в полученном содержимом камер определяют в 1 и 6-ти часовых пробах концентрацию гистамина и в 6-ти часовой пробе концентрацию простогландина Е₂, а на окрашенных 6-ти часовых стеклах микроскопически определяют процентное содержание гранулоцитов, и на 24-часовых - макрофагов, рассчитывают диагностические показатели К₁, К₂, К₃ и К₄ по формулам
K₁ = ,
K₂ = ,
K₃ = ,
K₄ = и при их значении К₁≥2, К₂ ≥ 10, К₃ ≥ 1,5 и К₄ ≅0,85 диагностируют атопическую бронхиальную астму с поздней и ранней фазой гиперчувствительности немедленного типа, а при их значении К₁ < 2, К₂ < 10, К₃ < 1,5, и К₄ > 0,85 - атопическую бронхиальную астму с ранней фазой гиперчувствительности немедленного типа.

Новым является то, что проводят скарификацию и нанесение причинно-значимого аллергена на обоих предплечьях, затем на верхние участки скарификаций фиксируют стерильные предметные стекла, а на нижние - камеры с физиологическим раствором, смену которых проводят через 1, 6 и 24 ч, после чего в полученном содержимом камер определяют в 1 и 6-ти часовых пробах концентрацию простогландина Е₂, а на окрашенных 6-ти часовых стеклах микроскопически определяют процентное содержание гранулоцитов, и на 24-часовых - макрофагов, рассчитывают диагностические показатели К₁, К₂, К₃ и К₄ по формулам
K₁ = ,
K₂ = ,
K₃ = ,
K₄ = и при их значениях К₁ ≥2, К₂ ≥ 10, К₃ ≥1,5 и К₄ ≅0,85 диагностируют атопическую бронхиальную астму с поздней и ранней фазой гиперчувствительности немедленного типа, а при их значении К₁< 2, К₂<10, К₃<1,5 и К₄>0,85 - атопическую бронхиальную астму с ранней фазой гиперчувствительности немедленного типа.

Способ осуществляют следующим образом. Этиловым спиртом (50^о) обрабатывают дистальные отделы обоих предплечий, подсушивают. Скарификационным пером (общепринятым методом в аллергодиагностике) наносят на обработанные предплечья две пары насечек (длиной 0,5, расстояние от первой пары до второй не менее 4 см) с таким условием, что повреждается лишь эпидермис без повреждения кровеносных сосудов.

На подготовленные места cкарификаций правой и левой руки в виде капель наносят на правое предплечье экстракт аллергена (в 1 мл 10.000РNИ), на левую - аналогично физиологический раствор (контрольная проба).

По обшепринятой оценке скарификационных тестов в аллергодиагностике, контакта аллергена с тучными клетками кожи (как и физ. раствора в контроле) ограничивается 15-20 мин. Капли аллергена и физ. раствора убираются отдельными ватными тампонами. Оценивается визуально реакция гиперемии и отека на скарификационных участках с аллергеном.

После этого на верхние участки скарификаций правого и левого предплечий плотно накладываются отшлифованные предметные стекла (стерильно обработанные, размер 2х2 см) и прикрепляются небольшим участком лейкопластыря. На нижние места - соответственно накладываются стерильные пластиковые камеры силиконированные (объем 1 см³), заполненные физ. раствором. Камеры прикрепляются также с помощью лейкопластыря.

Содержимое камер собирается и производится замена камер с новыми порциями физ. раствора, также как и стекла в установленные временные интервалы: 1 ч, 6 ч и 24 с. В камерах производят оценку растворенного гистамина, серотонина, простагландинов Е₂ и F_2а. Гистамин оценивают унифицированным методом с ортофталиевым альдегидом с последующей флюориметрией, простагландины - радиоиммунным методом с использованием коммерческих диагностикумов (Baxter Travenol Diagnostics, США, "Zzinta" Венгрия).

Стекла фиксируют в метиловом спирте в течение 3 мин, окрашивают по Романовскому. Микроскопируют с иммерсией и подсчитывают количество клеточных субпопуляций в 25 квадратах зрения. Полученное количество клеток переводят в процентное соотношение.

Полученные данные вводят в предложенные формулы и вычисляют коэффициенты К с дальнейшим проведением дифференциальной диагностики вариантов течения бронхиальной астмы.

П р и м е р 1. Больной ребенок Рома П., 8 лет, диагноз: атопическая бронхиальная астма, средней степени тяжести, межприступный период.

В анамнезе - атопический диатез с 3 мес. до 1 г., первый приступ удушья возник год назад, поставлен на учет к аллергологу в районную поликлинику.

Семейный анамнез отягощен (во втором поколении у бабушки со стороны матери - бронхиальная астма). Микросоциальное окружение удовлетворительное.

Выявлена сенсибилизация к дом. пыли, серия 238 (++), гистамин (+).

Поверхность кожи предплечий обрабатывается этиловым спиртом, высушивают, с помощью скарификатора наносят по две пары насечек длиной 0,5 см, расстояние от первой пары до второй не менее 4 см, на каждое подготовленное предплечье по 2 пары. На правое предплечье наносят по капле аллергена, на левое - капли физ. раствора. Через 15 мин нанесенные капли убирают ватным тампоном. Фиксируют размер отека и гиперемии, отмечают, что на левом предплечье реакция на физ. раствор отсутствует.

На верхние скарификационные участки предплечий накладывают стерильные стекла (2х2 см) и фиксируют лейкопластырем.

На нижние скарификационные участки экспонируют пластиковые силиконированные камеры, наполненные физ. раствором, закрепляют лейкопластырем.

Смена и сбор содержимого камер производят через 1 ч, 6 ч и 24 ч. Смена стекол производится через 6 ч, 24 ч. В содержимом камер определяют концентрации растворенного гистамина, простагландинов через 1 ч, 6 ч, 24 ч. На фиксированных и окрашенных стеклах подсчитывают в 25 квадратах зрения клеточные субпопуляции и переводят их в процентное соотношение также по контрольным часам.

Полученные данные включают в формулы и получают следующие коэффициенты: К₁=2,05; К₂=1,00; К₄=2,28; К₅=1,03. К₃=0,89.

Таким образом, вариант течения атопической бронхиальной астмы с преобладанием ранней фазы гиперчувствительности немедленного типа, что подтверждается и проведением ингаляционных провокационных проб с причинно-значимым аллергеном с учетом спирограмм.

П р и м е р 2. Больной ребенок, Таня Д., 12 лет. Диагноз: атопическая бронхиальная астма средней тяжести, межприступный период.

Из анамнеза - атопический диатез до 1 г., первый приступ удушья в 6 лет. Поставлена на учет к аллергологу в 7 лет. Выявлена сенсибилизация к дом. пыли с. 50 (++++), серия 68 (++), библиотечная пыль (++), реакция на гистамин (+++).

Семейный анамнез отягощен (по линии матери бабушка страдает поллинозом). Микросоциальное окружение удовлетворительное.

Дифференциальную диагностику вариантов течения АБА производят описанным выше способом, как описано в примере 1.

Получены коэффициенты: К₁=2,75; К₂=2,20; К₃=1,51; К₄=60,0; К₅=0,56.

Таким образом вариант течения атопической бронхиальной астмы с наличием ранней и поздней реакции гиперчувствительности немедленного типа (преобладающий по активности клеточно-медиаторных ассоциаций является поздняя фаза).

Предлагаемый способ дифференциальной диагностики вариантов течений бронхиальной астмы у детей позволяет одновременно оценивать кинетику клеточно-медиаторных ассоциаций, отражающих особенности патохимических реакций, запускаемых взаимодействием причинно-значимого аллергена с тучными клетками кожи в экспериментальных условиях, что позволяет выделять раннюю и позднюю фазы гиперчувствительности немедленного типа или преобладающую роль одной из фаз, что ведет к повышению информативности и точности в оценке индивидуального иммунопатогенеза заболевания и дальнейшего прогноза течения, а также осуществить подбор индивидуального специфического лечения.

Предлагаемый способ может служить адекватно моделью in vivo для оценки патохимических реакций, отражающих взаимодействие специфического аллергена с тучными клетками кожи в экспериментальных условиях, а также научных медико-биологических исследованиях.

Использование: в медицине, в частности пульмологии и педиатрии. Сущность: осуществляют скарификацию кожи на правом и левом предплечьи больного и после проведения диагностических проб с причинно-значимым аллергеном и контрольной жидкостью на них, на верхние участки скарификационных царапин фиксируют стирильные предметные стекла, а на нижние соответственно камеры с физраствором, смену стекол и содержимого камер проводят через 1,5 - 6,23 - 24 ч, затем оценивают концентрации гистамина и простогландина Е, в камерах стекла фиксируют и окрашивают по романовскому, определяют процент клеточных субпопуляций и рассчитывают коэффициенты K₁, K₂, K₃, K₄ по формулам K₁ = гистамин контр./гистамин опыт (через 1,6 ч), K₂=ПГЕ₂ опыт/ ПГЕ₂ конт. (через 6 ч), K₃ = % гранулоцитов опыт/ % гранулоцитов контр. (через 6 ч), K₄ = % макрофагов опыт/ % макрофагов контр. (через 24 ч) и при значении K₁≥ 2, K₂≥ 10, K₃≥ 1,5, K₄≅ 0,85 диагностируют вариант течения атопической бронхиальной астмы с наличием поздней и ранней фазы, а при соотношении K₁<2, K₂<10, K₃<1,5, K₄>0,85 диагностируют вариант течения атопической бронхиальной астмы с наличием ранней фазы. Способ позволяет повысить точность диагностики.

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ВАРИАНТОВ ТЕЧЕНИЯ АТОПИЧЕСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ У ДЕТЕЙ, включающий скарификацию эпидермиса, нанесение на него причинно-значимого аллергена и оценку реакции его взаимодействия с тучными клетками кожи, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, скарификацию эпидермиса и нанесение причинно-значимого аллергена проводят на обоих предплечьях, затем на верхние участки скарификаций фиксируют стерильные предметные стекла, а на нижние-камеры с физиологическим раствором, смену которых проводят через 1,6 и 24 ч, после чего в полученном содержимом камер определяют в 1- и 6-часовых пробах концентрацию гистамина и в 6-часовой пробе концентрацию простогландина Е₂, а на окрашенных 6-часовых стеклах микроскопически определяют процентное содержание гланулоцитов, а на 24-часовых - макрофагов, рассчитывают диагностические показатели К₁, К₂, К₃ и К₄ по формулам
K₁ = ;
K₂ = ;
K₃ = ;
K₄ = ,
и при их значении К₁ ≥ 2, К₂ ≥ 10, К₃ ≥ 1,5 и К₄ ≅ 0,85 диагностируют атопическую бронхиальную астму с поздней и ранней фазой гиперчувствительности немедленного типа, а при их значении К₁ < 2, К₂ < 10, К₃ < 1,5 и К₄ > 0,85 - атопическую бронхиальную астму с ранней фазой гиперчувствительности немедленного типа.