СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГЕРПЕТИЧЕСКОГО КЕРАТОКОНЪЮНКТИВИТА КРОЛИКОВ Российский патент 1995 года по МПК A61K31/00 A61K31/00 A61K35/14 

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии и может быть использовано при лечении герпетического кератоконъюнктива (ЭКГ) кроликов.

ЭКГ является признанной моделью для выявления противогерпетической активности различных препаратов, поскольку экспериментальная инфекция вызывается одним и тем же возбудителем, а его клиническое проявление сходно с проявлением офтальмогерпеса у людей.

Известен способ лечения экспериментального герпетического кератита препаратом "Офтан-Иду" путем инстилляций его 0,1% раствора в конъюнктивальный мешок пораженного глаза.

Однако препарат характеризуется рядом недостатков: выраженное цитопатическое и аллергизирующее действие препарата на конъюнктиву и роговицу, сравнительно легкое развитие устойчивости вируса простого герпеса (ВПГ) к действию "Офтан-Иду". Препарат эффективен преимущественно при поверхностных формах ЭКГ.

Известен также способ лечения ЭКГ у кроликов введением препарата трансфер фактор (ТФ), полученного из лимфоцитов человека. Препарат ТФ вводились подкожно в дозе эквивалентной 2х10⁸ лимфоцитов на 3, 6, 10 и 15 сут. после заражения животных. До 10-го дня в опытной и контрольной группах происходило сходное нарастание патологических изменений. Начиная с 12 сут. у животных, получавших ТФ, наблюдалось заметное ослабление воспаления и обратное развитие герпетических поражений.

Однако используемая в эксперименте разовая доза препарата (2х10⁸ лимфоцитов) соответствует дозе препарата 10¹⁰ лимфоцитов при лечении офтальмогерпеса в клинике, а курсовая доза при этом составит не менее 4 ˙ 10¹⁰ лимфоцитов. Это резко ограничивает возможность широкого применения препарата в клинике ввиду дефицита исходного сырья. С другой стороны, отсутствие позитивных изменений в клинической картине кератоконъюнктивита вплоть до 12-и сут. после заражения в группе животных, получивших ТФ, свидетельствует о недостаточной эффективности данного способа лечения ЭКГ.

Нами была поставлена задача сократить сроки выздоровления кроликов от ЭКГ и снизить потребление исходного сырья (донорской крови). Для решения поставленной задачи предложен способ лечения ЭКГ кроликов путем введения препарата ТФ, отличающийся тем, что ТФ вводят 2-3 раза субконъюнктивально в дозе эквивалентной 10⁷ лимфоцитов через 2 сут. после заражения кроликов с интервалом между инъекциями в 3 сут. что приводит к ослаблению биомикроскопических проявлений ЭКГ, начиная с 9 сут. после заражения и позволяет сократить расход сырья за счет снижения эффективной разовой дозы препарата в 20 раз по сравнению с прототипом, где используют дозу 2 ˙ 10⁸ лимфоцитов.

Выбор предложенной схемы введения ТФ при ЭКГ и обоснование значений осуществлен с помощью математического моделирования эксперимента. Моделируемыми признаками были: срок первого введения ТФ-Х 1 (за 2 сут. до инокуляции вируса, в день заражения и через 2 сут. после заражения); интервал между инъекциями препарата Х 2 (1 сут. 2 сут. 3 сут.); разовая доза препарата Х 3 (эквивалентная 10⁸, 2 ˙ 10⁷, 10⁷ лимфоцитов соответственно цельный, разведенные 1:2 и 1:10). Препарат ТФ вводят субконъюнктивально в оба глаза в объеме 0,2 мл. Биомикроскопическую картину кератоконъюнктивита учитывают отдельно по каждому глазу по четырехбальной системе. Статистическую обработку полученных данных проводят с вычислением критериев Стьюдента (t) и Пирсона (Х²).

Схема и результаты эксперимента приведены в табл.1.

Таким образом, наибольшая клиническая эффективность достигнута при использовании следующей схемы введения препарата ТФ: через 2 дня после инокуляции вируса с интервалом в 3 суток в дозе эквивалентной 10⁷ лимфоцитов. Эффективность данной схемы введения препарата подтверждена в последующем эксперименте с использованием большего количества кроликов (табл.2).

Так, монотерапия препаратом ТФ по предложенной схеме у 12 кроликов приводит на 9-е сутки после заражения к снижению тяжести в клинической картине ЭКГ по сравнению с контролем (оценка в баллах соответственно 1,3 ± 0,3 и 2,4 ± 0,3, при р<0,01). При этом происходила эпителизация древовидного дефекта роговицы, уменьшение ее отека и инфильтрации. При этом отмечали повышение выживаемости в опытной группе по сравнению с контролем N 2 (соответственно умерло от энцефалита 1 и 6 кроликов, р<0,05).

Применение комбинированной терапии (ГК ТФ в сочетании с противогерпетическим препаратом" Офтан-Иду" привело к снижению тяжести клинической картины заболевания на 7 сут. по сравнению с терапией "Офтан-Иду". При этом ТФ вводят по изложенной выше схеме, "Офтан-Иду" по общепринятой схеме (ежедневно 6 раз в сутки по 1 капле в каждый глаз через 2 сут. после заражения животных). Результаты приведены в табл.2.

Следовательно, получено достоверное уменьшение тяжести клинической картины ЭГК при комбинированной терапии по сравнению с группой нелеченных кроликов, так и в отношении кроликов, получавших только препарат "Офтан-Иду". В сравнении с монотерапией ТФ введение препарат ТФ в сочетании с терапией "Офтан-Иду" приводит к уменьшению степени тяжести клинической картины ЭГК на 2 сут. раньше, а в сравнении с прототипом на 5 сут.

П р и м е р. На двух кроликах производят моделирование ЭГК путем введения вируса простого герпеса ВПГ (штамм Л₂, титр 10 ТЦЛ₅₀/0. 1 мл) в оба глаза. Через двое суток на фоне развития ЭГК древовидной форты одному кролику вводят субконъюнктивально в оба глаза 2-3 раза с интервалом в 3 дня ТФ в дозе 10⁷ лимфоцитов. Параллельно применяют "Офтан-Иду" по схеме (6 раз в сутки ежедневно в оба глаза). Второму кролику под конъюнктиву глазного яблока вводят физиологический раствор (контроль опыта). На 7 сут. инфекции у кролика, леченного комбинированной терапией, имеют место остаточные явления диэпителизации роговой оболочки в виде точечного окрашивания ее флюоресцеином (1,0 балл), у второго, не леченного кролика, отмечают тяжелую клиническую картину ЭГК (4,0 балла): роговичный синдром блефароспазм, светобоязнь, слизисто-гнойное отделяемое, отек роговицы, инфильтрация ее с изъявлением в оптической зоне, явления иритадеформация зрачка, пигментные задние синехии, отек радужной оболочки.

Таким образом, применение комбинированной терапии (ТФ + "Офтан-Иду") приводит к купированию ЭГК на 7-е сут инфекции по сравнению с контролем.

Как видно, предложенный нами способ лечения ЭГК путем введения ТФ в сочетании с "Офтан-Иду" приводит в сравнении с прототипом к более ранней, на 5 сут, нормализации клинической картины кератоконъюнктивита и снижению потребления сырья за счет уменьшения эффективной разовой дозы препарата в 20 раз.

Использование: в медицине, в частности, в офтальмологии при лечении герпетического конъюнктивита (ЭКГ). Сущность изобретения: препарат Трансфер фактор вводят субконъюнктивально, начиная с вторых суток, после заражения животного в дозе эквивалентной 10 лимфоцитов с интервалом между инъекциями в трое суток в сочетании с офтан-иду, что приводит к более ранней (на пять суток) нормализации клинической картины кератоконъюнктивита и снижению потребления сырья за счет уменьшения эффективной разовой дозы препарата в 20 раз. 2 табл.

СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГЕРПЕТИЧЕСКОГО КЕРАТОКОНЪЮНКТИВИТА КРОЛИКОВ, включающий введение им препарата трансферфактора, отличающийся тем, что трансферфактор вводят конъюнктивально через 2 суток после заражения кроликов в дозе, эквивалентной 10⁷ лимфоцитов, с интервалом между инъекциями трое суток в сочетании с Офтан Иду.