СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ГЕРПЕТИЧЕСКИХ ХОРИОРЕТИНИТОВ Российский патент 1999 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболевания в экспериментальной офтальмологии.

Известен способ создания экспериментальных моделей герпетического хориоретинита путем внутримозгового введения вируса простого герпеса новорожденным крысятам и мышам, после чего наблюдаются двусторонний передний увеит с диффузным отеком и некрозом сетчатки, ретинальные поражения, отличающиеся инфильтрацией воспалительных клеток, рубцеванием, метаплазией и дистрофией пораженной ретинальной ткани, передняя и задняя кортикальная катаракта (Percy D.H., Gabil K.A., Hatch L.A. et al. Experimental type 2 herpes simplex ophthalmisin the newborn rat, 1980). Однако при использовании дорогостоящих новорожденных крысят линии Вистар введение в мозг является травматическим для животных, низка (20%) воспроизводимость герпетического хориоретинита, а также применение вируса простого герпеса 2 типа редко у больных вызывает хориоретинит герпетической этиологии. При заражении в мозг белых мышей одновременно отмечается развитие катаракты, увеита и низка воспроизводимость герпетического хориетинита.

Известен также способ заражения кроликов в вену (Sery T.W., Foster L. Viremia induction of herpes simplez uveitis, 1977), но при этом отмечается изолированное поражение только сосудистой оболочки - хориоидит, при этом поражения сетчатки не наблюдается, т.е. хориоретинит не развивается.

Наиболее близким по технической сущности является способ моделирования герпетического хориоретинита путем заражения кроликов в переднюю камеру глаза (Л. Н.Тарасова Цитологические и гистологические исследования при герпетической болезни глаз // Автореферат диссертации кандидата мед.наук, Ашхабад, 1968, стр. 25). В данном случае поражались все оболочки глаза. Были использованы два штама вируса (N 994 и 303), которые пассировали путем внутримозгового заражения мышей, что вызывало неспецифические воспалительные изменения самой тканью мозга мышей. Кроме того, отмечалась большая гибель животных от энцефалита, изменения в сетчатке характеризовались грубыми нарушениями ее структуры, что не соответствует такому герпетическому поражению (хориоретиниту) у человека. Эта модель не может быть использована для воспроизведения также и хронической стадии герпетического хориоретинита, так как по данным автора специфические изменения отмечались лишь в течение 3-4 месяцев.

Нами была поставлена задача создать модель герпетического хориоретинита с высокой частотой его воспроизведения, наиболее приближенную к указанному заболеванию у человека, уменьшающую гибель животных от энцефалита.

Для решения поставленной задачи предложен способ, заключающийся в заражении экспериментальных животных вирусом простого герпеса, для чего в переднюю камеру глаза белых беспородных половозрелых крыс вводят культуральную жидкость, содержащую вирус простого герпеса типа 1 штамм L₂ в дозе 10000 - 100000 ТЦД₅₀, и исследуют сосудистую и сетчатую оболочки глаза, начиная со второй недели. Введение дозы вируса простого герпеса типа 1 штамм L₂ менее 10000 ТЦД₅₀ не приводит к специфическим изменениям.

Пример 1. Белым беспородным крысам в переднюю камеру обоих глаз вводят 0,01 мл культуральной жидкости, содержащей 10000 ТЦД₅₀ ВПГ-1 штамм L₂. На 8 день производят забой животных и проводят гистологические исследования сетчатой оболочки глаза. В сетчатой оболочке появлялась диффузная инфильтрация лимфоидного характера в слое нервных волокон и ганглиозном слое, а также периваскулярные инфильтраты. Сосуды сетчатой оболочки во внутренних слоях были расширены, в просветах имелись форменные элементы типа плазмацитов и сегментоядерных нейтрофилов, вокруг сосудов отмечали периваскулиты. Имелись ретроретинальные кровоизлияния.

Проведенные вирусологические исследования при ЭГКУ крыс подтвердили специфичность вызываемых морфологических изменений: вирус простого герпеса обнаруживали в ткани их сосудов и сетчатой оболочек глаза в острый и хронический периоды заболевания, а также в периферической крови (табл.1 и 2). Частота воспроизведения хориоретинита составляет 64 ± 13%.

Пример 2. Белым беспородным половозрелым крысам в переднюю камеру обоих глаз вводят 0,01 мл культуральной жидкости, содержащей 15000 ТЦД₅₀ ВПГ-1 штамм L₂. На третьей неделе частота воспроизведения составила 43 ± 20%. Морфологические изменения аналогичны описанным в 1 примере. Они свидетельствовали о воспроизведении хориоретинита.

Пример 3. Белым беспородным половозрелым крысам в переднюю камеру обоих глаз вводят 0,01 мл культуральной жидкости, содержащей 100000 ТЦД₅₀ ВПГ-1 штамм L₂. На четвертой неделе частота воспроизведения составила 50 ± 29%. Морфологические изменения аналогичны описанным в 1 примере, что говорит о воспроизведении хориоретинита.

Пример 4. Белым беспородным половозрелым крысам в переднюю камеру обоих глаз вводят 0,01 мл культуральной жидкости, содержащей 100000 ТЦД₅₀ ВПГ-1 штамм L₂. На 2 и 5 месяце хронической инфекции животных забивают и проводят гистологические исследования сетчатой оболочки глаз. Гистологические исследования выявили очаговую инфильтрацию сетчатой оболочки лимфоцитами, плазматическими клетками, отек и появление экссудатов в преретинальной зоне. Изменения в сосудистой оболочке глаза варьировали от небольшого ее отека до выраженного воспалительного процесса. Выявленные морфологические изменения свидетельствуют о воспроизведении хронического герпетического хориоретинита, сходного с таковым у человека.

Пример 5. В переднюю камеру обоих глаз половозрелых животных - кроликов, белых крыс, петухов и морских свинок вводят культуральную жидкость, содержащую вирус простого герпеса типа 1 штамм L₂ в дозе 10000 ТЦД₅₀. В динамике герпетической инфекции на 1, 2, 3 и 4 неделях проводят гистологические исследования сетчатой оболочки глаз. Результаты представлены в табл. 3.

Как видно из таблицы, у птиц (петухи) сетчатая оболочка не поражалась. У морских свинок и кроликов ее воспаление отмечалось в небольшом числе случаев. Максимальная частота герпетических хориоретинитов наблюдалась у белых крыс, причем начиная только со 2-й недели. Кроме того, наиболее часто развитие энцефалитов при офтальмогерпесе обнаруживали у кроликов и наиболее редко - у белых крыс (табл. 4).

Как видно из таблицы, частота развития герпетического энцефалита у белых крыс составляет 3 ± 3%, тогда как у кроликов - 88 ± 6%. Это также свидетельствует о предпочтительности данного вида лабораторных животных для создания модели герпетических хориоретинитов.

Пример 6. Белым беспородным половозрелым крысам в переднюю камеру обоих глаз вводят 0,01 мл культуральной жидкости, содержащей 10000 ТЦД₅₀ ВПГ-1 штамм L₂. На неделе специфические воспалительные изменения в сосудистой и сетчатой оболочках, описанные в вышеприведенных примерах, находили у небольшого числа животных (18 ± 12%).

Пример 7. Белым беспородным половозрелым крысам в переднюю камеру обоих глаз вводят 0,01 мл культуральной жидкости, содержащей 1000 ТЦД₅₀ ВПГ-1 штамм L₂. Специфических воспалительных изменений в сосудистой и сетчатой оболочках, описанных в 1 примере, не находили.

Таким образом, предложенный способ моделирования герпетического хориоретинита позволяет создать модель, наиболее приближенную к данному заболеванию у человека. Кроме того, при предложенном способе моделирования наблюдается высокая частота воспроизведения (64%), а также низкая гибель от энцефалитов (3%).

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболевания в экспериментальной офтальмологии. Сущность способа заключается в следующем; проводят заражение белых беспородных половозрелых крыс вирусом простого герпеса типа I штамм L₂ в дозе 10000-100000 ТЦД₅₀ и исследуют сосудистую и сетчатую оболочки глаза, начиная со второй недели. Применение способа позволяет создать модель, наиболее приближенную к данному заболеванию у человека с высокой частотой воспроизведения и низкой гибелью от энцефалитов. 4 табл.

Способ моделирования герпетических хориоретинитов, заключающийся в заражении экспериментальных животных вирусом простого герпеса в переднюю камеру глаза, отличающийся тем, что проводят заражение белых беспородных половозрелых крыс вирусом простого герпеса типа I штамм L₂ в дозе 10000 - 100000 ТЦД₅₀ и исследуют сосудистую и сетчатую оболочки глаза, начиная со второй недели.