СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНТОМОПАТОГЕННОГО ПРЕПАРАТА Российский патент 1995 года по МПК A01N63/04 C12N1/14 C12N1/14 C12R1/645 

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и касается производства средств защиты растений от вредителей, в частности способа получения грибных энтомопатогенных препаратов.

Известны способы получения энтомопатогенных препаратов путем глубинного культивирования микроскопических грибов, таких как Verticilium lecanii, Beauveria bassiana на питательных средах, содержащих источники углерода, азота и минеральные соли, с последующим концентрированием и сушкой концентрата [1]
Наиболее близким техническим решением к изобретению является способ получения энтомопатогенного препарата путем глубинного культивирования микроскопического гриба Verticillium lecanii на питательной среде, содержащей глицерин, гидролизат белково-витаминного концентрата, мел и воду, концентрирование культуральной жидкости, введение в концентрат естественного цеолита клиноптилолита, гранулирование смеси, высушивание и измельчение гранул [2]
Недостатком известного способа является сравнительно низкое содержание в препарате активного начала за счет сравнительно низкой влагосвязывающей способности используемого клиноптилолита.

Целью изобретения является повышение содержания активного начала в препарате, а также возможность использования единой технологии для разных видов микроскопических грибов и получения таких энтомопатогенных препаратов, как вертициллин, боверин и метаризин, как в жидком, так и сухом виде.

Сущность способа заключается в следующем.

Готовят стерильную питательную среду, содержащую, мас. Глицерин 0,3-2,0 Глюкоза 0,3-2,0 Гидролизат бел- ково-витамин- ного концентра- та (БВК) 8-10 Мел 0,3-0,8 Вода Остальное.

Засевают одним из штаммов грибов Verticillium Lecanii или Beauveria bassiana, или Metarrhizium anisopliae и культивируют при перемешивании и аэрации. При использовании штаммов грибов вида Metarrhizium anisopliae и Beauveria bassiana в среду дополнительно вносят фосфорнокислый калий в количестве 0,04-0,06%
В процессе культивирования при естественном снижении рН культуральной жидкости до 3,7-5,9 добавляют глицерин в количестве 0,3-1%
Культивирование осуществляют в течение 3-5 сут. до максимального спорообразования и достижения показателя коэффициента преломления 1,4-1,44.

Полученную культуральную жидкость концентрируют.

Для получения жидкого препарата в концентрат культуральной жидкости вводят 4-10% глицерина и 1-3% поливинилпироллидона или 0,1-1,0% полиэтиленоксида.

Для получения сухого энтомопатогенного препарата в концентpат культуральной жидкости вводят смесь цеолита типа NaX и монтмориллонита или палыгорскита в соотношении 1:2 в количестве 10-30% к сухим веществам, полученную смесь гранулируют и высушивают.

П р и м е р 1. Готовят 3 м³ стерильной питательной среды, содержащей, мас. Глицерин 0,3 Глюкоза 2,0 Гидролизат БВК 10 Мел 0,8 Вода Остальное рН среды 6,7.

Засевают среду посевным материалом из расчета 3% от объема среды штамма гриба Verticillium lecanii N 9 и культивируют в ферментере объемом 5 м³ при аэрации и перемешивании. В процессе культивирования рН культуральной жидкости снижается и при достижении рН 5,9 в культуральную жидкость вводят стерильный глицерин в количестве 0,5% (15 кг на 3 м³) и продолжают культивировать до достижения значения коэффициента преломления культуральной жидкости 1,40.

Получают культуральную жидкость с титром спор 1,5 ˙10³ спор/мл.

По известному способу получают 0,9 ˙10³ спор/мл.

Культуральную жидкость разделяют на две части, одну из которых используют для получения жидкого препарата, а другую сухого.

Получение препарата в жидком виде.

Полученную культуральную жидкость концентрируют фильтрацией, получая 90 кг пасты, содержащей мицелий, остатки питательной среды и бластоспоры (титр 13˙10⁹ спор/г).

В пасту добавляют 10% (9 кг) глицерина и 0,1% (0,1 кг) смоченного полиэтиленоксида, перемешивают и охлаждают.

Полученный энтомопатогенный препарат, представляющий собой стойкую нерасслаивающуюся суспензию, имеет следующую характеристику:
титр бластоспор 11˙10⁹ спор/мл,
биологическая эффективность 80% на личинках оранжерейной белокрылки при рабочей концентрации 10 ˙10⁶ спор/мл,
срок хранения до трех месяцев при температуре не выше 10^оС.

Получение препарата в сухом виде.

В пасту добавляют 3,4 кг (10%) смеси цеолита типа NaX и монтмориллонита в соотношении 1:2, выдерживают при перемешивании для перераспределения влаги и пропускают через гранулятор 2Р-75. Гранулы высушивают, фасуют и маркируют.

Полученный препарат представляет собой гранулы от светло-серого до темно-коричневого цвета, которые в процессе хранения и транспортирования не слеживаются. Биологическая эффективность препарата на личинках оранжерейной белокрылки 70% при рабочей концентрации 10 ˙10⁶ спор/мл, число жизнеспособных спор 15 ˙10⁹ спор/г.

П р и м е р 2. Получение энтомопатогенного препарата боверин. Готовят 3,0 м³ стерильной питательной среды, содержащей, мас. Глицерин 2 Глюкоза 0,3 Гидролизат БВК 8,0 Мел 0,3 Калий фосфорно- кислый 0,04 Вода Остальное
Засевают среду штаммов Beauveria bassiana 124/1. Процесс культивирования и концентрирования осуществляют как описано в примере 1, но глицерин вводят при рН культуральной жидкости 3,7 в количестве 1%
Полученную культуральную жидкость также разделяют на две части (по 100 кг). Получение жидкого препарата осуществляют, как описано в примере 1, но в пасту вводят 4 л (4%) глицерина и 1,0 кг смоченного поливинилпироллидона.

Получают энтомопатогенный препарат боверин, представляющий собой устойчивую суспензию и имеющий следующую характеристику:
титр жизнеспособных бластоспор 10 ˙10⁹ спор/мл;
биологическая эффективность в рабочей концентрации 90% на трипсе и оранжерейной белокрылке.

Для получения сухого препарата в пасту вносят смесь цеолита типа NaX и монтмориллонита в количестве 20%
Получают боверин в виде гранул от светло-серого до темно-коричневого цвета, которые в процессе хранения и транспортирования не слеживаются. Биологическая эффективность на трипсе в рабочей концентрации 85% (число жизнеспособных спор 8 ˙10⁹ спор/г).

П р и м е р 3. Готовят 3 м³ питательной среды, содержащей, мас. Глицерин 1,5 Глюкоза 1,5 Гидролизат БВК 9 Мел 0,6 Фосфорнокислый калий 0,06 Вода Остальное
Засев осуществляют штаммом Metarrhizium anisopliae N 2 (коллекция УкрНИЗР).

Процесс культивирования и концентрирования культуральной жидкости осуществляют, как описано в примере 1, но глицерин в процессе культивирования вводят при рН 5,0 в количестве 0,3% для получения жидкого препарата метаризина в пасту вводят 6% глицерина и 1,0% полиэтиленоксида, а для получения сухого препарата в пасту вводят смесь цеолита типа NaX и палыгорскита в количестве 30%
Жидкий препарат имеет следующую характеристику:
титр жизнеспособных бластоспор 2 ˙10⁹ спор/мл,
биологическая эффективность в рабочей концентрации 85% на трипсе и оранжерейной белокрылке.

Сухой препарат гранулы от светло-серого до темно-коричневого цвета, не слеживающиеся в процессе хранения и транспортирования; биологическая эффективность в рабочей концентрации 80% (на трипсе и оранжерейной белокрылке), титр жизнеспособных бластоспор 2 ˙10⁹ спор/г.

П р и м е р 4. Готовят 3 м³ питательной среды, содержащей, мас. Глицерин 1,8 Глюкоза 0,5 Гидролизат БВК 9 Мел 0,5 Фосфорнокислый калий 0,05 Вода Остальное
Засев производят штаммом гриба Beauveria bassiana N 124/1.

Процесс культивирования и концентрирования культуральной жидкости осуществляют, как описано в примере 1, но глицерин в процессе культивирования вводят при рН 4,2 в количестве 0,4% для получения жидкого препарата боверина в пасту вводят 8% глицерина и 3% поливинилпироллидона, а для получения сухого препарата вводят смесь цеолита типа NaX и палыгорскита в количестве 15%
Жидкий препарат имеет следующую характеристику:
титр жизнеспособных бластоспор 11 ˙10⁹ спор/мл,
биологическая эффективность в рабочей концентрации 90% на трипсе и оранжерейной белокрылке.

Сухой препарат гранулы от светло-серого до темно-коричневого цвета, не слеживается в процессе хранения и транспортирования;
биологическая эффективность в рабочей концентрации 85% на трипсе и оранжерейной белокрылке, титр жизнеспособных бластоспор 9 ˙10⁹ спор/г.

Использование: сельскохозяйственная микробиология, производство средств защиты растений от вредителей, в частности грибных энтомопатогенных препаратов. Сущность изобретения: готовят стерильную питательную среду, содержащую 0,3-2% глицерина, 0,3-2,0% глюкозы, 8-10% гидролизата белково-витаминного концентрата, 0,3-0,8% мела, воду до 100%. Засевают среду одним из штампов грибов вида Verticillium Lesapii или Beauveria bassiana, или Metarrhizium anisopliae и культивируют при аэрации. При использовании штаммов грибов Beauveria и Metarrhizium в среду дополнительно вносят фосфорнокислый калий в количестве 0,04-0,06%. В процессе культивирования при естественном снижении pH культуральной жидкости до 3,7-5,9 добавляют глицерин в количестве 0,3-1%. Культивирование осуществляют до максимального спорообразования и достижения значений коэффициента преломления 1,4-1,44. Полученную культуральную жидкость концентрируют и получают из концентрата препарат в жидком или сухом виде. Для получения концентрата в жидком виде в концентрат вводят 4-10% глицерина и 1-3% поливинилпироллидона или 0,1-1,0% полиэтиленоксида. Для получения сухого энтимопатогенного препарата в концентрат культуральной жидкости вводят смесь цеолита типа NaX и монтмориллонита или полыгорскита в соотношении 1:2 в количестве 10-30% к сухим веществам, смесь гранулируют и высушивают. 4 з.п. ф-лы.

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНТОМОПАТОГЕННОГО ПРЕПАРАТА путем глубинного культивирования микроскопических грибов на питательной среде, содержащей глицерин, гидролизат белково-витаминного концентрата, мел и воду, с последующим концентрированием культуральной жидкости, отличающийся тем, что в питательную среду дополнительно вносят глюкозу, а в процессе культивирования при снижении pH культуральной жидкости до 3,7 5,9 дополнительно вводят глицерин в количестве 0,3 1,0 мас. при этом компоненты в питательной среде используют в следующем соотношении, мас.

Глюкоза 0,3 2,0
Глицерин 0,3 2,0
Гидролизат белково-витаминного концентрата 8 10
Мел 0,3 0,8
Вода Остальное
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что из микроскопических грибов используют один из видов грибов Verticillium lecanii, Beauveria bassiana или Metarrhizium anisopliae.