СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРИХОДЕРМИНА Российский патент 1995 года по МПК A01N63/04 C12N1/14 C12N1/14 C12R1/885 

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и касается производства средств защиты растений от болезней, в частности способа получения грибного препарата триходермина.

Известны способы получения триходермина путем глубинного культивирования микроскопического гриба вида Trichoderma на питательных средах, содержащих источники углерода, азота и минеральные соли, с последующим концентрированием и сушкой концентрата [1]
Наиболее близким техническим решением к изобретению является способ получения триходермина путем глубинного культивирования микроскопического гриба на питательной среде, содержащей кукурузный экстракт, мелассу, соли и воду, концентрирования культуральной жидкости, введения в концентрат естественного цеолита клиноптилолита, гранулирования смеси, высушивания и измельчения гранул [2]
Недостатком известного способа является сравнительно низкое содержание в препарате активного начала за счет сравнительно низкой влагосвязывающей способности используемого клиноптилолита.

Целью изобретения является повышение содержания активного начала в препарате, а также получение триходермина как в сухом, так и в жидком виде.

Сущность способа заключается в следующем.

Готовят стерильную питательную среду, содержащую, мас. Глицерин 0,3-2 Зеленая патока 0,5-3 Гидролизат белко- во-витаминного концентрата (БВК) 3-10 Калий фосфорно- кислый 0,2-0,6 Сернокислый магний 0,3-0,5 Азотнокислый аммо- ний 0,3-0,6 Вода Остальное.

Засевают среду штаммов гриба вида Trichoderma lignorum и культивируют при перемешивании и аэрации. В процессе культивирования при естественном снижении рН культуральной жидкости до 4,5-3,0 добавляют глицерин в количестве 0,3-1,0%
Культивирование осуществляют в течение 3-5 сут.

Для получения жидкого препарата культивирование осуществляют до максимального накопления мицелиальной массы или спорообразования, для получения сухого препарата до максимального спорообразования.

При получении жидкого препарата культуральную жидкость концентрируют до СВ 6-10% и в концентрат вводят 4-10% глицерина и 1-3% поливинилпироллидона или 0,1-1,0% полиэтиленоксида.

Для получения сухого триходермина в концентрат культуральной жидкости (СВ 20-30%) вводят смесь цеолита типа NaX и монтмориллонита или палыгорскита в соотношении 1: 2 в количестве 10-30% к сухим веществам, полученную смесь гранулируют и высушивают.

П р и м е р 1. Готовят 3 м³ стерильной питательной среды, содержащей, мас. Глицерин 0,3 Зеленая патока 3,0 Гидролизат БВК 5,0 Фосфаты 0,2 Сернокислый магний 0,3 Азотнокислый аммоний 0,6 Вода Остальное
Засевают среду посевным материалом из расчета 5% от объема среды штамма гриба Trichoderma lignorum ТБ-10 и культивируют в ферментере объемом 5 м³ при аэрации и перемешивании, продолжительность культивирования 4 сут.

Получают культуральную жидкость с титром хламидоспор 1˙10⁸ в 1 мл.

По известному способу получают 0,7˙10⁸ спор/мл.

Культуральную жидкость разделяют на 2 части, одну из которых используют для получения жидкого препарата, а другую сухого.

Получение триходермина в жидком виде.

Полученную культуральную жидкость концентрируют фильтрацией (СВ 10%), получая 70 кг пасты, содержащей мицелий, остатки питательной среды и хламидоспоры (титр 2˙10⁹ спор/г).

В пасту добавляют 10% (7 кг) глицерина и 0,1% (0,07 кг) смоченного полиэтиленоксида, перемешивают и охлаждают.

Полученный препарат, представляющий собой стойкую нерасслаивающуюся суспензию, имеет следующую характеристику:
титр хламидоспор 1,0 ˙10⁹ спор/мл,
биологическая эффективность 70% против корневых гнилей огурцов и томатов,
срок хранения до трех месяцев при температуре не выше 10^оС.

Получение препарата в сухом виде.

В пасту (СВ 20%) добавляют 2,5 кг (10%) смеси цеолита NaX и монтмориллонита в соотношении 1:2, выдерживают при перемешивании для перераспределения влаги и пропускают через гранулятор ГР-75, гранулы высушивают, фасуют и маркируют.

Полученный препарат представляет собой гранулы от светло-серого до темно-коричневого цвета, которые в процессе хранения и транспортирования не слеживаются. Биологическая эффективность препарата против корневых гнилей огурцов и томатов 65% титр хламидоспор 1,0˙10⁹ спор/г.

П р и м е р 2. Готовят 3,0 м³ стерильной питательной среды, содержащей, мас. Глицерин 2,0 Зеленая патока 0,5 Гидролизат БВК 10 Фосфаты 0,6 Сернокислый магний 0,3 Азотнокислый аммоний 0,3 Вода Остальное
Процесс культивирования и концентрирования осуществляют, как описано в примере 1, но в процессе культивирования при снижении рН культуральной жидкости до 4,5 вводят глицерин в количестве 0,3% длительность культивирования 3 сут.

Из полученной культуральной жидкости готовят жидкий препарат триходермин, вводя в пасту 20 кг (10%) глицерина и 2 кг (1%) поливинилпироллидона.

Получают триходермин, представляющий собой устойчивую суспензию и имеющий следующую характеристику:
титр жизнеспособных хламидоспор 0,5 ˙10⁸ спор/мл,
биологическая эффективность 70% против корневых гнилей огурцов и томатов.

П р и м е р 3. Готовят 3,0 м³ стерильной питательной среды, содержащей, мас. Глицерин 1,5 Зеленая патока 2,5 Гидролизат БВК 3,0 Фосфаты 0,4 Сернокислый магний 0,4 Азотнокислый аммоний 0,5 Вода Остальное
Процесс культивирования и концентрирования осуществляют как описано в примере 2, но глицерин вводят при рН культуральной жидкости 3,0 в количестве 1,0% длительность культивирования составляет 5 сут.

Из полученной культуральной жидкости готовят сухой препарат как описано в примере 1, но в пасту вводят 15 кг (30%) смеси цеолита NaX и палыгорскита в соотношении 1:2.

Биологическая эффективность препарата против корневых гнилей огурцов и томатов 75% титр хламидоспор 2 ˙10⁹ спор/г.

Как видно из приведенных примеров, предлагаемый способ позволяет увеличить содержание активного начала в сухом препарате с 0,8 ˙10⁹ до 2 ˙10⁹ спор/г и получать жидкий препарат, не уступающий по биологической активности сухому.

Использование: сельскохозяйственная микробиология, производство средств защиты растений от возбудителей заболеваний, производство триходермина. Сущность изобретения: готовят стерильную питательную среду, содержащую, мас.%: глицерин 0,3-2,0; зеленая патока 0,5-3; гидролизат белково-витаминного концентрата 3-10; фосфаты 0,2-0,6; сернокислый магний 0,3-0,5; азотнокислый аммоний 0,3-0,6, вода остальное. Засевают штаммом гриба Trichoderma ligporum, культивируют при аэрации до максимального накопления мицелия или спорообразования. В процессе культивирования целесообразно при естественном снижении pH культуральной жидкости до 3,0-4,5 добавлять глицерин в количестве 0,3-1% . Полученную культуральную жидкость концентрируют до содержания сухих веществ (СВ) 6-10%. Для получения жидкого препарата в концентрат (СВ 6-10%) вводят 4-10% глицерина и 1-3% поливинилпироллидона или 0,1-1% полиэтиленоксида. Для получения препарата в сухом виде в концентрат культуральной жидкости (СВ 20-30%) вводят смесь цеолита типа NaX и монтмориллонита или полыгорскита в соотношении 1:2 в количестве 10-30% к СВ, смесь гранулируют и высушивают. 3 з.п. ф-лы.

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРИХОДЕРМИНА путем глубинного культивирования микроскопических грибов Trichoderma lignorum на питательной среде, содержащей источники углерода, органического азота, фосфаты, сернокислый магний, азотнокислый аммоний и воду, с последующим концентрированием культуральной жидкости, отличающийся тем, что в качестве источника углерода используют глицерин и зеленую патоку, в качестве источника органического азота - гидролизат белково-витаминного концентрата при следующем соотношении компонентов в среде, мас.

Глицерин 0,3 2,0
Зеленая патока 0,5 3,0
Гидролизат белково-витаминного концентрата 3,0 10,0
Фосфаты 0,2 0,6
Сернокислый магний 0,3 0,5
Азотнокислый аммоний 0,3 0,6
Вода Остальное
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в процессе культивирования при естественном снижении pH культуральной жидкости до 3,0 4,5 дополнительно вводят глицерин в количестве 0,3 1 мас.