ПРЕПАРАТ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МАСТИТА У КОРОВ Российский патент 1995 года по МПК A61K31/00 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к препаратам для лечения мастита у коров.

Известны препараты для лечения мастита у коров. Например, мастицид (наставление по применению. Утверждено Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 17.08.1977 г.). Мастисан А (Наставление по применению. Утверждено Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 25.10.1982 г.) Мастисан Б (Наставление по применению. Утверждено Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 22.10.1982 г. ). Мастисан Е (Наставление по применению. Утверждено Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 22.10.1982 г.).

Однако эти препараты содержат антибиотики и сульфаниламиды, применение которых в настоящее время имеет ряд отрицательных сторон (быстрое развитие резистентных рас микрорганизмов, угнетение защитных механизмов организма, появление мастита микотической этиологии, возникновение случаев аллергии и анафилаксии у животных и человека потребителя молока).

Наиболее близким прототипом является применение для лечения мастита у коров 1% водного раствора диоксидина (Наставление по применению. Утверждено Главным управлением ветеринарии ГКЗП СМ СССР 13 апреля 1989 г.).

Основным недостатком 1% водного раствора диоксидина является низкая терапевтическая эффективность, повысить которую за счет увеличения его концентрации не предоставляется возможным, так как предел растворимости диоксидина в воде при комнатной температуре составляет 1% Увеличение же объема вводимого интрацистернально 1% диоксидина вызывает раздражение эпителия молочной железы.

Другим его недостатком является необходимость многократного введения в цистерну вымени (6 и более раз) за курс лечения), что увеличивает затраты труда ветеринарных специалистов, отрицательно влияет на состояние слизистой оболочки соскового канала и цистерны молочной железы.

Для повышения терапевтической эффективности при мастите 1% водного раствора диоксидина необходимо дополнительно в его состав включить другие антимикробные средства.

Целью настоящего изобретения является повышение лечебной эффективности 1%-ного водного раствора диоксидина при мастите у коров.

Поставленная цель достигается тем, что в 1%-ный водный раствор диоксидина дополнительно включен фурацилин, а комплексный препарат содержит указанные компоненты в следующем соотношении, мас. Диоксидин 0,75-1,00 Фурацилин 0,0190-0,021 Вода дистиллирован- ная Остальное
Препарат условно назван нами "диофур".

Основное действующее вещество диоксидин-1,4-ди-N-окись 2,3 бис (оксиметил) хиноксалина химиотерапевтический препарат, характеризующийся активностью при инфекциях, вызванных грамположительными и грамотрицательными бактериями (Инструкция по применению диоксидина, Минздрав СССР, 23.12.1982 г.).

Фурацилин-5 нитро-фурфурилиден-семикарбазон. Наиболее ценной особенностью фурацилина является широкий спектр антимикробного действия, как на грамположительные, так и грамотрицательные микробы, а также на некоторые грибы, простейшие и крупные вирусы. Фурацилин мало токсичен для животных, активизирует процессы грануляции, а также фагоцитоз. К нему в отличие от антибиотиков очень медленно развивается устойчивость микроорганизмов (Антибиотики, сульфаниламиды и нитрофураны в ветеринарии. Москва. В.О. "Агропромиздат", 1988 г.).

П р и м е р 1. Токсичность препарата для коров. Подобрано 6 клинически здоровых лактирующих коров. Препарат, подогретый до температуры 38^оС в количестве 10 мл, вводили интрацистернально в левую переднюю долю вымени после предварительного сдаивания секрета и обработки соска 70^о этиловым спиртом. В правые задние доли препарат не вводили, они служили контролем. Перед введением препарата и через 6, 24, 48, 72 и 120 ч проводили общее клиническое обследование животных, молочной железы, реакцию с 2%-ным раствором мастидина. В лаборатории подсчитывали количество соматических клеток, определяли активность лизоцима М, пробу отстаивания, вид микрофлоры.

При исследовании секрета с 2% -ным раствором мастидина положительную реакцию в два креста отметили у всех животных только через 6 ч после введения препарата.

Изменение содержания соматических клеток и титра лизоцима М в различные сроки после введения препарата представлено в табл.1.

Установлено, что после введения препарата в здоровые доли вымени уровень соматических клеток возрастает через 6 часов до 1766,3 ± 787,6 тыс/мл, затем снижается и приходит к исходному значению через 48 часов, титр лизоцима М снижается только через 6 часов, после введения препарата, затем приходит к исходному уровню.

П р и м е р 2. Изучение токсичности препарата диофур на лабораторных животных.

I. Хроническую токсичность диофура изучали на 15 белых крысах-самцах массой 140 ± 5 г в течение 31 дня. Животные были разделены на 3 группы по 5 животных в каждой. Крысам первой группы ежедневно в питьевую воду вносили однократную терапевтическую дозу 60 мг/кг диофура, второй трехкратную терапевтическую дозу 180 мг/кг препарата. Предлагаемый раствор диофура с водой крысы выпивали полностью. Третья группа служила контролем, крысы получали питьевую воду. Однократную терапевтическую дозу препарата диофур определяли при лечении коров, больных маститом. Терапевтический эффект был получен при введении 30 мл диофура коровам, больным маститом, живой массой в среднем по 500 кг. Следовательно, на 1 кг живой массы приходится 60 мг препарата диофур (терапевтическая доза), а 180 мг/кг живого веса трехкратная терапевтическая доза.

При ежедневном клиническом наблюдении за крысами в течение опыта учитывали клиническое состояние, аппетит. Групповое взвешивание белых крыс проводили в начале и через каждые 5 дней опыта. На следующий день после прекращения введения препарата всех животных убивали методом декапитации. Кровь от них использовали для проведения морфо-биохимических исследований. При паталогоанатомическом исследовании визуально оценивали внутренние органы и взвешивали печень, почку, селезенку. В крови определяли количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобин, общий белок, холестерин, глюкозу по общепринятым методам (табл.2).

Исследования по определению хронической токсичности показали, что крысы хорошо переносят как однократную, так и трехкратную терапевтическую дозы препарата диофур. В период опыта гибели животных не отметили. Среднесуточные привесы животных за период опыта составили: в группе по терапевтической дозе 12,82 г. трехкратной терапевтической дозе 13,83 г. в контроле 12,23 г.

Наружный осмотр убитых животных и их вскрытие не выявили видимых изменений покровных тканей и внутренних органов. При взвешивании органов убитых животных опытных и контрольной групп не было установлено существенной разницы по массе.

II. Изучение острой токсичности препарата на белых крысах.

Опыт проведен на 56 белых крысах живой массой 170 ± 5 г. подобранных по принципу парных аналогов. Препарат вводили внутрижелудочно с использованием зонда двукратно с интервалом 1 час в дозах от 420 до 960 мг активнодействующего вещества на 1 кг живой массы тела. Наблюдение за животными вели в течение 14 дней.

При введении диофура в дозе 420 мг/кг клинических признаков отравления и отклонений в поведении животных не отмечено. Диофур в дозах от 480 до 960 мг/кг вызывает у животных острое отравление, характеризующееся угнетением общего состояния, одышкой, малой подвижностью, парезом конечностей, приступами судорог. Часть животных в этих группах пала. Количество павших животных возрастало с увеличением дозы препарата. При введении диофура в дозе 960 мг/кг живой массы все крысы пали. Гибель животных наступала от остановки дыхания.

Паталогоанатомическим исследованием установлены отек легких с обширными геморрагиями, дистрофия миокарда, печени, селезенки, почек. Катарально-геморрагический гастроэнтерит, отек головного мозга с кровоизлияниями.

Результаты опыта представлены в табл.3.

Расчеты параметров острой токсичности препарата диофур проводили по методу Кербера, используя формулу:
ЛД₅₀= ЛД₁₀₀- , где ЛД₅₀ доза препарата, которая вызвала 50%-ную гибель животных;
d интервал между каждыми двумя смежными дозами;
z среднее арифметическое число животных, у которых наблюдалась учитываемая реакция, под влиянием каждых двух смежных доз;
m число животных в каждой группе;
ЛД₁₀₀ доза диофура, которая вызвала гибель всей группы животных составила 960 мг/кг живой массы;
МТД минимальная токсическая доза препарата диофур составила 480 мг/кг живой массы;
Σ(zd) 30+180+300+210+300+840 1860
ЛД₅₀= 960- 960-232,5 727,5 мг/кг
Следовательно, препарат диофур по степени воздействия на организм относится к третьему классу опасности по ГОСТ 12.1.007-76 (умеренно токсичные).

III. Изучение острой токсичности препарата диофур на белых мышах.

Опыт проведен на 70 белых мышах живой массой 20 ± 2 гр. подобранных по принципу парных аналогов. Препарат вводили внутрибрюшинно в дозе от 200 до 900 мг активнодействующего вещества на 1 кг массы тела. Место введения предварительно дезинфицировали 70^о этиловым спиртом. Наблюдение за животными вели в течение 14 дней.

При введении диофура в дозе 200 мг/кг клинических признаков отравления и отклонений в поведении животных не отмечено. При введении диофура в дозах от 300 до 900 мг/кг у животных проявляются признаки острого отравления, характеризующееся угнетением общего состояния, сильной одышкой, малой подвижностью, приступами судорог парезом конечностей. Часть животных в этих группах пала. Количество павших животных возрастало с увеличением дозы препарата. При введении диофура в дозе 900 мг на 1 кг живой массы все мыши пали. Гибель животных наступила от остановки дыхания. При патолого-анатомическом вскрытии отметили гемодинамические расстройства кровообращения внутренних органов. Легкие были отечны с обширными геморрагиями. Сердце дистрофично с точечными и полосчатыми кровоизлияниями. Печень анемична, неравномерно окрашена серо-коричневого цвета, дряблая. Почки серо-коричневого цвета, дряблые с сосудистой инъекцией, границы коркового и мозгового слоя сглажены. В желудочно-кишечном тракте отмечается картина катарально-геморрагического гастроэнтерита, на слизистой покраснение, точечными кровоизлияниями. Головной мозг отечен, с кровоизлияниями.

Результаты опыта представлены в табл.4.

Расчеты параметров острой токсичности препарата диофур проводили по методу Кербера, с использованием формулы:
ЛД₅₀= ЛД₁₀₀- , где ЛД₅₀ доза препарата, которая вызвала 50%-ную гибель животных;
d интервал между двумя смежными дозами;
z среднее арифметическое число животных, у которых наблюдалась учитываемая реакция, под влиянием смежных доз;
m число животных в каждой группе;
ЛД₁₀₀ доза диофура, которая вызвала гибель всей группы животных составила 900 мг/кг живой массы;
МТД минимальная токсическая доза препарата диофур составила 200 мг/кг живой массы;
Σ((zd) 100+150+300+550+800+950 2850
ЛД₅₀= 900- 900-285 615 мг/кг
Следовательно, препарат диофур по степени воздействия на организм относится к третьему классу опасности по ГОСТ 12.1.007-76 (умеренно токсичные).

П р и м е р 3. Изучение раздражающего действия.

Для определения раздражающего действия препарата на молочную железу и организм в целом изучали показатели неспецифической резистентности молока и крови, интенсивность процессов перекисного окисления липидов до введения препарата и спустя 48 часов на 6 животных. Препарат вводили животным в левую переднюю долю вымени, правая служила контролем. Результаты исследований представлены в табл.5.

Как следует из представленных данных, через 48 часов после введения препарата не отмечается достоверных изменений изучаемых показателей в крови животных. При этом в секрете опытных долей возрастает активность лизоцима и лактопероксидазы на 30 и 45,2% соответственно и в 1,4 раза снижается концентрация лактоферрина.

Отмеченные изменения свидетельствуют о том, что препарат не вызывает угнетения защитного статуса молочной железы, а даже несколько стимулирует его, что проявляется в увеличении активности мурамидазы и снижении концентрации лактоферрина в молоке.

П р и м е р 4. Изучение аллергенных свойств препарата "диофур".

В опыт было взято 2 группы белых крыс по 4 особи в каждой. Крысам первой опытной группы препарат вводили подкожно в область предплечья, место введения предварительно выстригали и дезинфицировали 70^о этиловым спиртом. Препарат вводили согласно схеме: 1-ый день 0,2 мл; 3-й день 0,2 мл; 8-ой 0,2 мл; 15-ый 0,2 мл; 21-ый 0,2 мл; 38-ой 1,2 мл разрешающая доза. За крысами обеих групп вели клиническое наблюдение, в конце опыта от них взяли кровь из хвостовой вены и приготовили мазки для подсчета эозинофилов. Аллергенного действия диофура, характеризующегося общей реакцией на месте введения в виде гиперемии, утолщения кожной складки, отека, болезненности не обнаружено. В периферической крови животных как опытной, так и контрольной групп, нет эозинофильного лейкоцитоза. Это свидетельствует об отсутствии аллергенных свойств у препарата диофур.

П р и м е р 5. Определение степени кумуляции препарата "диофур".

Степень кумулятивного действия препарата определяли на 20 белых крысах массой 165-175 грамм в течение 62 дней. Животные были разделены на 2 группы по 10 в каждой. Крысам 1 группы ежедневно выпаивали с питьевой водой препарат диофур (предлагаемый раствор препарата животные выпивали полностью). Контрольные животные 2 группы получали питьевую воду. Ежедневная доза препарата диофур при определении степени кумуляции равнялась 72,7 мг/кг живой массы, что составляло 1/10 ЛД₅₀, установленную в остром опыте при внутрижелудочной даче препарата крысам. За животными вели ежедневное наблюдение, при котором учитывали клиническое состояние, аппетит, тактильную чувствительность. Групповое взвешивание проводили вначале и через каждые 10 дней опыта.

В период опыта случаев гибели животных не отметили, у них сохранялся аппетит, тактильная чувствительность. На 62-й день опыт был прекращен.

Расчет коэффициента кумуляции проводили по формуле
K_кум= , где К_кум. коэффициент кумуляции;
Суммарная доза количество вещества, поступившее в организм в результате многократного введения (ежедневная 1/10 ЛД₅₀ в течение не менее 60 дней);
ЛД₅₀ остр. ЛД₅₀, полученная при однократном введении.

K_кум= 6,1
Таким образом, результаты исследований показали, что коэффициент кумуляции при многократном введении препарата диофур белым крысам составляет 6,1, что по классификации химических веществ по степени кумуляции (по Л.Н. Медведю, 1964) позволяет заключить, что препарат диофур можно отнести к слабо выраженной группе кумуляции.

П р и м е р 6. Изучение раздражающего действия препарата диофур на конъюнктиву глаза кролика.

Оценка раздражающего действия препарата была проведена на четырех кроликах массой тела 2,4-2,5 кг породы шиншилла. В конъюнктивный мешок левого глаза кроликам наносили глазной пипеткой по две капли подогретого до 40^оС препарата диофур. Правый глаз животных служил контролем (на его конъюнктиву наносили две капли физиологического раствора). Оценку раздражающего действия препарата проводили через 5 минут, 0,5; 1, 2, 3, 4, 5, 6 и 24 часа после закапывания по изменению клинического статуса организма (температура тела, частота пульса и количество дыхательных движений), а также по видимым изменениям со стороны глаз (кровонаполнение конъюнктивы, наличие лакримации и выделений, состояние роговицы и век). При клиническом обследовании кроликов через 5 минут, 0,5; 1, 2, 3, 4, 5, 6 и 24 часа после нанесения на конъюнктиву препарата изменений температуры тела, частоты пульса и количества дыхательных движений отмечено не было. Визуальная оценка глаз кроликов по изменению кровонаполнения конъюнктивы, наличию лакримации и выделений, состоянию роговицы и век показали, что препарат диофур вызывает к первому часу лишь слабое раздражение конъюнктивы, с незначительным слезотечением и гиперемией, которые исчезают уже к 3-му часу после инстилляции препарата.

Согласно данным В.В.Гацуры (1974), вещества, вызывающие слабую ответную реакцию организма, относят к группе средств, переносимых животными, и поэтому могут быть рекомендованы в качестве лекарственных препаратов.

П р и м е р 7. Изучение лечебной эффективности препарата "диофур".

Опыт проведен на 150 коровах голштинизированной симментальской породы, больных различными формами мастита. Животные находились в одинаковых условиях содержания и кормления. Рацион сбалансирован по основным питательным компонентам, животные пользовались активным моционом. Подобрано 5 групп коров по 30 голов в каждой группе, больных по 10 животных субклинической, серозной и катаральной формами мастита. Диагноз на мастит ставили на основании клинического обследования организма коров, при котором особое внимание уделялось состоянию молочной железы и лабораторного исследования секрета из пораженных долей вымени (реакция с 2% раствором мастидина, проба отстаивания, титр лизоцима М, количество соматических клеток, вид микрофлоры). Животных первой группы (п 30) и второй группы (п 30) лечили соответственно 1% водным раствором диоксидина и мастисаном А согласно инструкций по их применению. Коров третьей группы (п 30) лечили испытуемым препаратом в следующем соотношении составных частей: (мас.) рецепт N 1 Диоксидин 0,75 Фурацилин 0,02 Вода дистиллирован- ная Остальное
Испытуемый препарат вводили интрацистернально в дозе 10 мл 1 раз в сутки 3-4 дня подряд, после тщательного сдаивания пораженной доли и дезинфекции соска этиловым спиртом.

Коров четвертой группы лечили испытуемым препаратом в следующем соотношении составных частей: (мас.) рецепт N 2 Диоксидин 1,0 Фурацилин 0,02 Вода дистиллирован- ная Остальное
Коров пятой группы лечили испытуемым препаратом в следующем соотношении составных частей: (мас.) рецепт N 3 Диоксидин 1,25 Фурацилин 0,02 Вода дистиллирован- ная Остальное
За животными в течение опыта проводили ежедневные клинические наблюдения. Результаты лечения оценивали на 7 и 10 день после последнего введения препаратов комплексно с учетом клинического обследования коров и лабораторного исследования секрета из леченых долей вымени. Данные проведенных исследований представлены в табл.6.

После введения испытуемого препарата рецепт N 3 наблюдалось обострение процесса в молочной железе у 2 коров, больных субклиническим маститом (повышением количества соматических клеток, незначительной болевой реакцией), и у одной коровы, больной катаральным маститом (болезненностью и уплотнением леченой доли). Следовательно, рецепт N 3 испытуемого препарата вызывает раздражение вымени.

Как видно из таблицы лучший терапевтический эффект (выздоровело + улучшено состояние) получен при лечении животных испытуемым препаратом приготовленным по рецепту N 2 и составил при субклиническом мастите 90% серозном 80% и катаральном 70% коров тогда, как при лечении испытуемым препаратом по рецепту N 1 80; 70; 60% а испытуемым препаратом по рецепту N 3 80; 70 и 70% коров соответственно, кроме того последний препарат вызывает раздражение.

В сравнении с контрольными препаратами 1% водным раствором диоксидина и мастисаном А испытуемый препарат по рецепту N 2 также показал лучший терапевтический эффект при субклиническом мастите на 10 и 20% серозном на 20 и 20% катаральном на 10 и 30% соответственно.

Установлено, что при лечении мастита у лактирующих коров испытуемый препарат в следующем соотношении составных частей (вес.): Диоксидин 1,0 Фурацилин 0,02 Вода дистиллирован- ная Остальное показал наилучший терапевтический эффект по сравнению с двумя другими предложенными рецептами, 1% водным раствором диоксидина и мастисаном А.

П р и м е р 8. Изучение терапевтической (лечебной) эффективности препарата "диофур".

Опыт проведен на 314 коровах, больных субклинической, серозной, катаральной формами мастита. Животные находились в одинаковых условиях содержания и кормления. Рацион сбалансирован по основным питательным компонентам, животные пользовались активным моционом. Диагноз на мастит ставили на основании клинического обследования организма коров и лабораторного исследования секрета из пораженных долей вымени (реакция с 2% раствором мастидина, проба отстаивания, титр лизоцима М, количество соматических клеток, вид микрофлоры). Препарат "диофур" изготовлен в экспериментальном научно-производственном отделе института незаразных болезней животных. Его применяли интрацистернально, предварительно подогрев до температуры 36-39^оС в дозе 7-10 мл в зависимости от тяжести заболевания. Перед введением препарата из больной четверти выдаивали секрет, а сосок дезинфицировали 70% этиловым спиртом. Лечение проводили 1 раз в сутки в течение 3-4 дней.

Препарат "диофур" вводили 56 коровам, больным субклиническим маститом, в 60 долей, 25 коровам при серозном мастите в 28 долей и 22 коровам, больным катаральным маститом, в 22 доли. В качестве контрольных препаратов использовали 1% раствор диоксидина и мастисан А. Раствор диоксидина ввели 43 животных в 46 долей вымени при субклиническом мастите, 20 коровам в 20 долей при серозном и 18 коровам в 18 долей при катаральном мастите, согласно наставления по применению 1% раствора диоксидина.

Препарат мастисан вводили 43 коровам в 44 доли при субклиническом мастите, 17 коровам в 18 долей при серозном и 21 корове в 23 доли при катаральном мастите согласно инструкции по его применению.

49 коров (55 долей вымени), заболевших субклиническим маститом, служили контролем, их молочная железа обработке препаратами не подвергалась.

За животными в течение опыта проводили ежедневные клинические наблюдения. Результаты лечения оценивали на 20-й день после последнего введения препарата комплексно с учетом клинического обследования коров и лабораторного исследования секрета из леченых долей вымени.

Данные проведенных исследований представлены в табл.7. Как видно из таблицы, лучший терапевтический эффект (Выздоровело + улучшено состояние) достигнут при применении препарата "диофур". При этом при субклиническом мастите выздоровело 91,1% серозном 76,0% и катаральном 63,6% коров, тогда как при лечении 1% водным раствором диоксидина 72,1% 55,0% 55,8% а мастисаном А 62,8% 52,9% и 42,9% коров соответственно.

Как видно из приведенных выше данных препарат "диофур" является эффективным терапевтическим средством при лечении мастита у коров.

Экономическая эффективность от применения препарата "диофур" составила при субклиническом мастите 3,86 руб. а при клинически выраженных формах мастита от 2 до 5,5 руб. в год на 1 вылеченную корову.

Использование: в ветеринарии, в частности в препаратах для лечения мастита у коров. Сущность изобретения: комплексный препарат содержит 1% диоксидина и фурацилина, что улучшает качество молока, увеличивает удои, снижает количество выбракованных животных и уменьшает затраты на лечение больных животных. 7 табл.

ПРЕПАРАТ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МАСТИТА У КОРОВ, содержащий диоксидин и воду, отличающийся тем, что он дополнительно содержит фурацилин при следующем соотношении компонентов, мас.

Диоксидин 0,75 1,00
Фурацилин 0,019 0,021
Вода дистиллированная Остальное