СОСТАВ ДЛЯ СОХРАНЕНИЯ НАТИВНЫХ СТАНДАРТНЫХ ЭРИТРОЦИТОВ Российский патент 1995 года по МПК A61K31/18 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии.

Целью изобретения явилась разработка специального консервирующего раствора для длительного сохранения при положительной температуре нативных (не обработанных протеазами, т.е. не энзимированных) эритроцитов, стандартных по всем клинически наиболее значимым эритроцитарным изосерологическим системам АВО, MNSs, Pp, Lewis, Ph, Kell, Duffy, Kidd.

Применение этого раствора позволяет всегда иметь полноценную панель стандартных эритроцитов и использовать ее для выявления трансфузионно опасных антител всех возможных специфических, что имеет большое значение для своевременной диагностики, лечения и профилактики посттрансфузионных осложнений.

Создание расширенной эритроцитарной панели, содержащей необходимые сочетания (фенотипы) антигенов практически всех клинически значимых изосерологических систем, требует наличия редких и дорогих стандартных сывороток, длительной и квалифицированной работы по типированию большого числа доноров крови и обычно под силу только крупным специализированным учреждениям иммунологического профиля. В связи с этим тщательно оттипированные эритроциты, особенно сгруппированные в эритроцитарную тест-панель, сами по себе являются дорогим и дефицитным реагентом. Однако существующий порядок заготовки и хранении стандартных эритроцитов практически ежедневный забор у доноров, их многократное отмывание и приготовление взвеси в физиологическом растворе хлористого натрия, предопределяет их нестойкость при хранении, постоянный дефицит и частное отсутствие необходимых стандартов в нужный момент.

В связи с этим в литературе уже достаточно давно описаны консервирующие растворы, специально разработанные для хранения стандартных эритроцитов при положительной (4-6^оС) температуре. Как правило, приводимые растворы многокомпонентны, содержат труднодоступные веществ, например свободный от липидов бычий альбумин. Коммерческие консервирующие растворы ряда известных иммунологических фирм (ДАДЕ, США, БИОТЕСТ, ФРГ) для хранения стандартных эритроцитов трудно воспроизводимы, т. к. фирмы не приводят их точной рецептуры (технология ноу-хау).

В нашей стране стандартные эритроциты или приготавливают ежедневно из крови, забираемой из пальцев доноров, или хранят в виде консервированной крови, заготовленной с различными гемоконсервантами ЦИЛИПК-7^б, глюгициром, цитроглюкофосфатом. Однако все указанные выше растворы, в том числе и предназначенные для хранения стандартных нативных эритроцитов, так же как и новейшие растворы для хранения консервированной донорской крови циглюфад, эритромассы и эритроконцентрата эритронаф, эритропифеден, раствор для хранения энзимированных стандартных эритроцитов, которые могут служить аналогами предлагаемому изобретению, не способны сохранять эритроциты долее 21-35 сут.

Следует отметить, что известны и криологические способы хранения крови (при температуре 196^оС), при которых эритроциты сохраняют свои антигенные свойства в течение ряда лет. Однако криологические способы хранения требуют наличия дорогостоящей (многомиллионной) специальной аппаратуры, сложной техники замораживания и оттаивания, основаны на принципиально иных идеях, и как не относящиеся к предмету изображения, не могут служить объектом сравнения.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению является специально для хранения нативных стандартных эритроцитов раствор [1]
Пропись предлагаемого авторами раствора следующая: Сорбит 40,0 Глюкоза 6,0 Na₂HPO₄˙12H₂O 2,0 KH₂PO₄ 0,9 Этиловый спирт 96^о 100,0 (мл) Левомицетин 0,06 Вода бидистил- лированная До 1000,0 (мл) рН раствора 6,8-6,9
Как видно из представленной прописи, состав раствора достаточно прост, не содержит каких-либо дефицитных веществ. Эритроциты, сохраняемые в этом консерванте, остаются пригодными для работы в течение 1-3 мес.

Однако практическое использование предлагаемого раствора имеет ряд существенных недостатков:
эритроциты, взвешенные в растворе по прототипу, не могут считаться полноценной эритроцитарной панелью, т.к. пригодные для выявления антител к антигенам только двух эритроцитарных изосерологических систем АВО и Rh, т.е. с ее помощью не исследуются трансфузионно опасные антитела к антигенам большинства других изосерологических систем;
длительность хранения эритроцитов, заготавливаемых на этом растворе, является недостаточной, поскольку пригодность эритроцитов для самой массовой серологической реакции желатиновой пробы, составляет всего 1 мес. т.е. не превышает даже длительности перерыва между кроводачами у доноров (2 мес.), это вызывает неоправданные трудности в формировании расширенной эритроцитарной тест-панели, предопределяет необходимость использования эритромассы и крови нетипированных доноров, что в свою очередь, вызывает большие затраты времени редких сывороток на их надлежащее типирование:
предлагаемый консервант не содержит веществ, поддерживающих фосфатно-энзиматический метаболизм эритроцитов и адекватного количества эффективных антимикробных средств, это обусловливает отсутствие у раствора т.н. омолаживающего эффекта (восстановление жизнеспособности эритроцитов и их последующего сохранения), необходимость использования для хранения только свежевзятой крови, заготовленной в условиях строгой асептики. Следовательно, не используется кровь большинства других способов заготовки (консервирования, III фракция крови, кровь, взятая из пальца) являющихся основными источниками получения стандартных эритроцитов, особенно редких групп.

С целью расширения функциональных возможностей консервирующего раствора, а именно получения возможности длительного (не менее 4-8 мес.) хранения стандартных эритроцитов, заготовленных как в стерильных, так и в нестерильных условиях из крови различных способов получения, была испытана пригодность, прежде всего, известных и наиболее применяемых гемоконсервантов (глюгицир, цитроглюкофосфат, эритронаф, ЦОЛИПК-7^б -8^б -9, -10, -12, -15 гемоконсервант с маннитом), взвешивающих растворов (ЦОЛИПК-8^а, -8^в, -14 и др.) питательных сред (среда-199, раствор Хенкса), специального консервирующего раствора фирмы Биотест для хранения стандартных эритроцитов. Однако все эти растворы по разным причинам, объясняемым ниже, не отвечали необходимым требованиям, выдвинутым нами к консервирующему раствору для стандартных нативных эритроцитов. Попытки модификации некоторых известных консервантов показали, что добавление тех или иных веществ, обладающих метаболической (для эритроцитов) или бактериостатической активностью, может резко улучшить свойства гемоконсерванта как раствора, позволяющего более длительно сохранять эритроциты без гемолиза, делая его одновременно совершенно непригодным для хранения эритроцитов как стандартных серологических реагентов для выявления антител, поскольку указанные вещества могли вызвать выраженное ингибирование агглютинационной активности эритроцитарных антигенов или нарушение специфичности реакции агглютинации.

Поэтому указанные опыты привели нас к пониманию того, что при решении задачи длительного сохранения стандартных эритроцитов одновременно должны решаться три разные проблемы: сохранение морфологической целостности эритроцитов (предотвращение их гемолиза), сохранение агглютинационной активности эритроцитов и сохранение специфичности реакции агглютинации. Это делает длительное хранение стандартных эритроцитов чрезвычайно трудной задачей. Для решения этой задачи необходимо было найти оптимальное рН среды, состав и количество метаболических активных веществ и бактериостатических средств, длительно поддерживающих метаболизм и антибактерильную защиту эритроцитов без ингибирования их агглютинационной активности и нарушения специфичности реакции агглютинации.

С указанной целью нами было изучено более 50 вариантов различных растворов, имевших различное рН (5,0-8,3 при концентрации лимонной кислоты 10,0-16,0 г/л), равные метаболически активные вещества, взятые в различных количествах сахароза (2,0-8,0 г/л), глюкоза (10,0-70,0 г/л), фосфаты (Na₂HPO₄ и КН₃РО₄ Na₃PO₄ 1,0-10,0 г/л), аденин (0,1-3,5 г/л), инозин (рибоксин) 1,0-10,0 г/л, пируват натрия (0,68 г/л), бактериостатические вещества левомицетин (0,1-3,0 г/л), пенициллин (натриевая и калиевая соли), стрептомицин (сульфат, калиевая соль), мономицин (основание), канамицин (сульфат) 1,0-50,0 г/л, азид натрия (1,0-2,0 г/л), мертиолат натрия (0,1-1,0 г/л), вещества, повышающие устойчивость антибиотиков в растворах (поливинилпирролидон ПВП с м.м. 45000, 19000 и 9000), вещества, повышающие устойчивость эритроцитарной мембраны Са⁺⁺ (в виде CaCl₂) в количестве 0,03-0,18 г/л, изучалось также влияние соотношения консервант эритроциты (1: 1-10:1) и количества остаточного воздуха в герметически закрытых емкостях, в которых хранились эритроциты, возможность сохранения эритроцитов в условиях комнатного холодильника (4-6^оС) и при комнатной (20-22^оС) температуре.

Опыты показали, что в отличие от стандартных энзимированных эритроцитов, имеющих оптимум рН 6,3-6,4, оптимум рН реакции агглютинации нативных стандартных эритроцитов находится в иной зоне рН 6,8-7,1. При рН 5,0-5,4, которые имеют известные гемоконсерванты, содержащие кислый цитрат и значение рН которых принимают эритроциты при взвешивании в достаточно больших (не менее 4) объемах консервантов, агглютинация почти всегда отсутствует (меньшие количества гемоконсерванта не обеспечивают сколько-нибудь длительного сохранения эритроцитов). Именно поэтому все гемоконсерванты, содержащие в своем составе кислый цитрат (ЦОЛИПК-7^б, -9, -10 и др.) или же имеющие достаточно кислое значение рН среды (глюгицир, цитроглюкофосфат, эритронаф и др.) оказались непригодными для сохранения стандартных эритроцитов, хотя и увеличивали срок их хранения без гемолиза.

Необходимая рН и буферная емкость раствора лучше всего обеспечиваются применением натрия фосфорнокислого трехзамещенного, едкого натрия и лимонной кислоты. Наличие последней в растворе также удлиняет срок сохранности эритроцитов, по-видимому, за счет ее способности оказывать некоторое уплотняющее действие на мембрану эритроцитов. Кроме того, присутствие лимонной кислоты, обладающей антикоагулянтным действием, позволяет максимально упростить технологию стерильной заготовки стандартных эритроцитов путем добавления необходимого объема крови в определенный объем стерильного консерванта непосредственно из вены донора.

Все растворы, в состав которых входила сахароза (ЦОЛИПК-8^а -8^б, -13, -14, -15, экспериментальные растворы), несмотря на то, что они позволяли достаточно длительно сохранять эритроциты без гемолиза, оказались непригодными для хранения стандартных эритроцитов, поскольку в присутствии сахарозы эритроциты достаточно быстро теряли способность агглютинироваться под действием антител и собирались в трудноразбиваемый осадок. Выраженное ингибирование агглютинации наблюдалось также и в присутствии маннита. В то же время, как и ожидалось, глюкоза оказалась одним из самых необходимых компонентов для длительного сохранения эритроцитов без потери ими агглютинационной активности и специфичности в реакции агглютинации, причем длительное сохранение эритроцитов возможно только при довольно большой ее концентрации в растворе (50-70 г/л). Присутствие аденина и инозина (максимально эффективно их совместное применение), улучшающих энергетический (углеводно-фосфорный) метаболизм эритроцитов, в 2 раза удлиняет срок их хранения, придает раствору омолаживающий эффект, т.е. способность восстанавливать алую окраску эритроцитов и достаточно длительно препятствовать их дальнейшему гемолизу. При сохранении нативных стандартных эритроцитов в нестерильных условиях в качестве антимикробных препаратов оказались наиболее пригодными такие антибиотики широкого спектра действия, как мономицин (мономицин основание), пенициллин (бензил-пенициллин, натриевая соль) в комбинации со стрептомицином (стрептомицин-сульфат), взятые в количестве 5,0-15,0 г/л, именно недостаточным количество антибиотиков (хотя не только этим) объясняется непригодность для сохранения стандартных эритроцитов в нестерильных условиях многих гемоконсервантов (ЦОЛИПК-12, -12а), питательных сред, специального консервирующего раствора фирмы биотест. В то же время применение таких эффективных антимикробных средств, как азид и мертиолат натрия оказалось совершенно непригодным при длительном сохранении нативных стандартных эритроцитов из-за выраженной способности к метгемоглобинообразованию (почернение эритроцитов) и нарушению специфичности реакции агглютинации (азид натрия) и склонности вызывать гемолиз эритроцитов и ингибировать их агглютинационную активность при длительном (свыше 1,5-2 месяцев) хранении аэритроцитов (мертиолат натрия). При этом на существенные методические различия в подходе к сохранению нативных и энзимированных стандартных эритроцитов свидетельствует тот факт, что решить проблему достаточно длительного сохранения энзимированных стандартных эритроцитов удалось только лишь после включения в состав консервирующего раствора именно мертиолата натрия. Поливинилпирролидон (ПВП) с м.м. 19000 отчетливо удалил сохранность эритроцитов, по-видимому, за счет свойства ПВП улучшать сохраняемость растворенных антибиотиков, однако оказался непригодным в качестве компонента консервирующего раствора, т.к. отчетливо ингибировал агглютинационную активность такого клинически важного антигена, как Fy³ (Duffy). Кальций в количестве 0,18 г/л удивительным образом повышал устойчивость сохраняемых эритроцитов к гемолизу, однако, также оказался непригодным в качестве одного из ингредиентов консервирующего раствора, поскольку в указанной концентрации ионы Са⁺⁺ выраженно ингибировали агглютинационную активность резусантигенов С и сохраняемых эритроцитов. Нецелесообразным оказалось также применение в составе раствора и пирувата натрия (улучшающего углеводно-фосфорный метаболизм эритроцитов и удлиняющий их сохраняемость) из-за его тенденции нарушать специфичность реакции агглютинации. Опыты показали, что на длительность сохранения эритроцитов существенным образом влияет соотношение объемов консерванта и эритроцитов причем оптимальным является соотношение: 4-9 объемов консерванта к 1 объему эритроцитов. Наконец, было установлено, что при длительном хранении эритроцитов над эритроцитарной взвесью должно оставаться достаточное количество воздуха, для чего герметичные емкости с эритроцитами должны заполняться только на 1/2-2/3 их объема.

Таким образом, на основании проведенных исследований поставленная цель была достигнута применением разработанного нами консервирующего раствора, включающего аденин, инозин, лимонную кислоту, глюкозу, трехзамещенный фосфат натрия, едкий натрий, пенициллин, стрептомицин, при следующих экспериментально найденных соотношениях компонентов (в г/л дистиллированной воды): Аденин 1,34-1,36 Инозин (рибоксин) 3,00-5,00 Лимонная кислота 14,0-16,0 Глюкоза 50,0-70,0 Натрий фосфорно- кислый трехзаме- щенный 2,0-4,00 Едкий натрий 8,00-8,50 Пенициллин 5,00-10,0 Стрептомицин 5,00-10,0 Вода дистиллирован- ная до рН раствора 7,0-7,10 Соотношение объе- мов консерванта и осадка эритроцитов 4-9:1
Примечания:
аденин и инозин могут быть изъяты из прописи раствора: в этом случае длительность сохранения эритроцитов уменьшается примерно вдвое;
использование антибиотиков при стерильном консервировании эритроцитов необходимо для достаточно длительного сохранения стандартов после нарушения их стерильности (нестерильные заборы эритроцитов для работы из вскрытых ампул или флаконов);
мономицин обеспечивает более эффективную, чем пенициллин и стрептомицин, антибактериальную защиту эритроцитов, однако, некоторые серии мономицина в присутствии аденина и инозина нарушают стабильность раствора (осаждают указанные вещества), поэтому, мономицин целесообразно использовать в растворе без аденина и инозина.

Приготовление раствора согласно приводимой в Приложении Временной инструкции по сохранению нативных стандартных эритроцитов при положительной температуре в специальном консерванте, утвержденной директором Всероссийского гематологического научного центра АМН РФ академиком А.И.Воробьевым.

Указанный раствор оказался пригоден для сохранения нативных стандартных эритроцитов в течение 4-8 мес. при их стерильном консервировании и в течение 2-3 мес. при их нестерильном сохранении.

Сопоставимый анализ с прототипом показывает, что заявляемый раствор отличается от прототипа тем, что в его состав введены новые компоненты, а именно: аденин, инозин, лимонная кислота, трехзамещенный фосфат натрия, едкий натрий, антибиотики широкого спектра действия, взятые в новых дозировках и сочетаниях, т.е. пропись заявляемого раствора является оригинальной, существенно отличающейся от прототипа. По сравнению с прототипом заявляемый раствор позволяет расширить спектр сохраняемых эритроцитарных антигенов и значительно удлинить сроки хранения полноценной эритроцитарной панели. Найденное нами техническое решение в литературе не известно, и следовательно, соответствует критерию "новизна".

Анализ известных растворов-аналогов, используемых для хранения донорской крови и эритроцитной массы, тканевых клеточных взвесей и стандартных эритроцитов показывает, что применение некоторых и введенных в заявляемое решение веществ известно, например, глюкозы, аденина, трехзамещенного фосфата натрия. Однако количественные соотношения этих веществ в заявляемом растворе совершенно иные, чем в известных растворах. При этом следует подчеркнуть, что составов консервантов с мономицином или комбинацией пенициллина со стрептомицином вообще не известно, их введение в раствор не может рассматриваться как очевидное, т.к. другие дозировки и иные антибиотики вызывают довольно быстрый гемолиз эритроцитов, ингибирование реакции агглютинации или же не обеспечивают необходимой стерильности раствора и сохраняемости эритроцитов. Более того, если в 60-70 г в состав гемоконсервантов вводились небольшие количества антибиотика (левомицетина), то в современных 80-90-е гг. ) гемоконсервантах антибиотики полностью изъяты из прописей растворов из-за их выраженного аллергенного действия.

В целом сочетание известных компонентов с экспериментально найденными нами другими компонентами и в иных соотношениях обеспечило раствору те свойства, которые проявляются в заявляемом решении, а именно возможность длительного сохранения стандартных нативных эритроцитов как в стерильных, так и нестерильных условиях при положительной (4-22^оС) температуре без гемолиза, падения агглютинационной активности и нарушения специфичности реакции агглютинации антигенов эритроцитарных систем АВО, MNSs, Pp, Lewis, Rh, Kell, Duffy, Kidd возможность восстановления функциональной полноценности (омоложения) стандартных эритроцитов, а также эритроцитов трупной крови.

Таким образом, данный состав компонентов и их соотношение придает раствору новые свойства. Это позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого решения критерию существенные отличия. При этом состав компонентов и их количественное соотношение отработаны в результате проведения большой серии экспериментов в соответствии с поставленной целью, что следовательно, соответствует критерию изобретательский уровень.

П р и м е р 1. Использования консервирующего раствора.

Так как колебания входящих в раствор ингредиентов невелики, приводим пропись раствора с предпочтительными весовыми соотношениями ингредиентов (в г/л дистиллированной воды) для стерильного сохранения стандартных эритроцитов в виде взвеси цельной крови в определенном количестве стерильного раствора: Аденин 1,35 Инозин (рибоксин) 4,00 Лимонная кислота 15,0 Глюкоза 60,0 Натрий фосфорно- кислый трехзаме- щенный (Na₃PO₄˙12H₂O) 3,00 Едкий натрий 8,50 Бензил-пенициллин (натриевая соль) 5,00 Стрептомицин (сульфат) 5,00 Вода дистиллиро- ванная до 1000,0 (мл) рН раствора 7,10
Указанный раствор, приведенный к стерильности стерилизующим фильтрованием, разливают на необходимые объемы (например, по 50, 100, 250 мл), сохраняют при 4-6^оС и используют по мере надобности: годность раствора 10 мес. Для сохранения неотмытых от плазмы эритроцитов (что существенно упрощает заготовку стерильных стандартов) кровь донора нужного фенотипа непосредственно из вены добавляют в определенный объем стерильного раствора в количестве, обеспечивающем соотношение консерванта и эритроцитов, примерно 5:1 (например, к 250 мл консерванта добавляют 100 мл крови), далее взвесь эритроцитов стерильно разливают на мелкие порции (по 2, 5, 10 мл) и в закрытом воде (в запаянных ампулах или герметически закрытых флакончиках) сохраняют при 4-8^оС в течение 4-8 мес. расходуя их по мере надобности. При разливании стандартов на мелкие порции необходимо следить за тем, чтобы над эритроцитарной взвесью оставалось достаточное количество воздуха, для чего ампулы или флакончики заполняют не более чем на 1/2-2/3 их объема. Перед использованием в серологических исследованиях эритроциты должны быть 2-3 раза отмыты. При нарушении стерильности (при нестерильных заборах эритроцитов для рутинных исследований) наличие в растворе значительного количества антибиотиков обеспечивает их хорошую сохранность в течение 2-3 недель, т.е. вполне достаточное время для осуществления их тщательного иммунологического типирования или для полного израсходования сохраняемых небольших порций эритроцитов.

П р и м е р 2. Повторение процедуры примера 1, за исключением того, что в стерильном растворе взвешивается не цельная донорская кровь, а трижды стерильно отмытые эритроциты необходимых фенотипов при соотношении консервант: эритроциты 9: 1, которые затем могут использоваться для работы без отмывания от консерванта.

Сохранение стандартов в виде отмытых эритроцитов позволяет всегда, в любое время суток иметь готовую для работы панель стандартных эритроцитов и использовать ее для немедленной диагностики иммунологических причин трансфузионных осложнений.

П р и м е р 3. То же, что в примере 1, за исключением того, что концентрация пенициллина и стрептомицина повышается до 10,0 г/л каждого антибиотика. В этом случае появляется возможность производить приготовление консерванта, заготовку и хранение стандартов в обычных, нестерильных, условиях работы серологической лаборатории, что существенно упрощает выполнение всех процедур. Длительность хранения неотмытых от плазмы (при соотношении консервант эритроциты 5:1) и отмытых (при соотношении 9:1) эритроцитов составляет 2-3 мес.

П р и м е р 4. Используют раствор примера 1 для омолаживания эритроцитов, т.е. восстановления их красно-алой окраски и предотвращения дальнейшего гемолиза в течение 7-15 сут, для этого к 1 объему дважды отмытых эритроцитов добавляют 5 объемов консерванта, взвесь перемешивают и помещают на 2-4 ч при температуре 4-6^оС, после восстановления красно-алой окраски эритроциты используют в серологических реакциях омолаживание эритроцитов, что позволяет производить полноценное типирование эритроцитов, длительно хранившихся при неблагоприятных условиях (комнатная температура), эритроцитов трупной крови, которое без предварительного омолаживания эритроцитов часто невозможно из-за их гемолиза при постановке серологических реакций.

Технико-экономический или иной эффект применения предлагаемого консервирующего раствора.

При использовании предлагаемого раствора отпадает необходимость в выполнении ежедневных трудоемких процедур по взятию крови от доноров многократному отмыванию эритроцитов и приготовлению готовых к использованию эритроцитарных стандартов. Поэтому, технико-экономический эффект применения предлагаемого консерванта носит условный характер и выражается в эконоии рабочего времени и труда, затрачиваемых на выполнение указанных процедур.

Главным же эффектом применения предлагаемого изобретения является повышение безопасности гемотрансфузионной помощи, поскольку применение полноценной консервированной панели обеспечивает своевременную и точную диагностику трансфузионно опасных антител и антигенов систем АВО, MNSs, Pp, Lewis, Ph, Kell, Duffy, Kidd, что является необходимым для достижения высокой степени иммунологической совместимости переливаемой крови, для своевременной диагностики причин и лечения посттрансфузионных осложнений.

Применение предлагаемого консервирующего раствора имеет следующие преимущества:
позволяет производить заготовку и хранение стандартных эритроцитов в виде взвеси цельной крови, забираемой непосредственно из вены донора в определенный объем предлагаемого раствора, указанная возможность реализуется введением в раствор определенного количества лимонной кислоты, обладающей антикоагулянтным действием, в целом это значительно упрощает работу по приготовлению эритроцитарных стандартов в стерильных условиях, способствует наиболее длительному сохранению эритроцитов;
позволяет сохранять готовые к работе отмытые эритроциты, задача сохранения отмытых от плазмы эритроцитов значительно труднее, чем сохранение эритроцитов в виде цельной крови или неотмытых от плазмы, поскольку эритроциты, лишенные жидкой части крови плазмы, становятся очень чувствительными к любым изменениям осмотического давления сохраняющего раствора, указанную задачу удалось решить включением в раствор таких компонентов, как глюкоза и неорганический фосфор, взятые в соответствующих количествах, эти компоненты создают необходимую стабильность осмотического давления, чувствительность и специфичность реакции агглютинации, обеспечивают энергетические потребности эритроцитов, этим же целям служат и включение в раствор пуриновых нуклеотидов (аденина, инозина), также поддерживающих и улучшающих энергетических (углеводородно-фосфорный) метаболизм эритроцитов, что в совокупности обеспечивает жизнеспособность эритроцитов ин витро длительное время и препятствует их разрушению (гемолизу), заявляемый раствор обладает также рН, являющимся оптимальным для реакции агглютинации эритроцитов, постоянство этого рН, необходимо для нормального функционирования энзиматических систем эритроцитов и их жизнеспособности ин витро, обеспечивается как указанными выше компонентами, так и щелочью, лимонной кислотой и буферными свойствами самих эритроцитов, на многократное отмывание эритроцитов и их подготовку к серологическим реакциям в лабораториях ежедневно тратится почти половина рабочего времени, а эритроцитарные стандарты становятся готовыми для использования часто лишь во второй половине дня, поэтому, решение задачи длительного сохранения готовых к работе, отмытых, эритроцитов фактически освобождает лаборатории почти от половины ежедневной рутинной работы, дает возможность немедленного использования эритроцитарных стандартов для диагностики иммунологических причин трансфузионных осложнений в неотложных случаях;
позволяет производить заготовку и хранение стандартных эритроцитов в обычных, нестерильных условиях работы серологической лаборатории, что существенно упрощает процедуру их приготовления, делает доступным приготовление и использование заявляемого раствора для любой практической лаборатории, не имеющей оборудования и специалистов для работы в условиях асептики, указанная возможность реализуется использованием в растворе оптимальной, найденной экспериментально, концентрацией антибиотиков широкого спектра действия (пенициллином со стрептомицином, мономицина), обеспечивающей длительное время необходимую стерильность раствора и не влияющей на агглютинационную активность и специфичность реакции агглютинации сохраняемых эритроцитов;
позволяет сохранять эритроциты крови любого способа заготовки что существенно расширяет возможности лабораторий в обеспечении себя разными, в том числе редкими и особо редкими стандартами;
позволяет использовать для работы эритроциты с выраженным гемолизом и измененной (темной) окраской, что особенно важно для рационального использования особо редких стандартов, указанная возможность реализуется наличием в заявляемом растворе пуриновых нуклеотидов, взятых в достаточных количествах, которые восстанавливают истощающуюся в процессе длительного хранения эритроцитов адениловую систему, играющую чрезвычайно важную роль в углеводно-фосфорном метаболизме эритроцитов, тем самым как бы омолаживая эритроциты, т.е. восстанавливая их красно-алую окраску и препятствуя их дальнейшему гемолизу в течение определенного времени;
наконец, сохраняемые в заявляемом растворе эритроциты могут применяться для выявления антител практически всех клинически важных изосерологических систем АФО, MNSc, Pp, Lewis, Ph, Kell, Diffy. Kidd, что по сравнению с прототипом значительно повышает ценность сохраняемых эритроцитов как полноценной эритроцитарной тест-панели, т.е. создает предпосылки для обеспечения высокой степени иммунологической совместимости переливаемой крови.

Основные преимущества предлагаемого раствора кратко сформулированы ниже

Изобретение относится к медицине, именно к иммунологии, и предназначено для длительного сохранения нативных (не обработанных протеазой) эритроцитов, стандартных по изосерологическим системам АВО, MNSs, Pp, Lewis, Kell, Dntty, Kidd, используемым для диагностики изоиммунных антител к антигенам указанных систем, а также в качестве эритроцитарных контролей при выявлении соответствующих антигенов. Достигается это применением консервирующего раствора метаболически активные вещества и антимикробные средства которого, их количества и соотношения раствора к эритроцитам позволяют производить заготовку и длительное (4-8 мес) хранение не отмытых от плазмы и готовых к работе (отмытых) нативных стандартных эритроцитов как в стерильных, так и в нестерильных условиях при положительной температуре, а также получать эффект омолаживания эритроцитов. Использование длительно хранящейся консервированной эритроцитарной тестпанели освобождает лаборатории от значительной части ежедневной рутинной работы по заготовке стандартных эритроцитов и их подготовке к использованию в серологических реакциях, позволяет более рационально расходовать редкие и дефицитные образцы эритроцитов, дает возможность своевременной и правильной диагностики иммунологических причин пострансфузионных осложнений, создает предпосылки для обеспечения высокой степени иммунологической совместимости переливаемой крови.

СОСТАВ ДЛЯ СОХРАНЕНИЯ НАТИВНЫХ СТАНДАРТНЫХ ЭРИТРОЦИТОВ на основе глюкозы, отличающийся тем, что дополнительно содержит аденин, инозин, лимонную кислоту, натрий фосфорнокислый трехзамещенный, едкий натрий, пенициллин, стрептомицин, при этом рН среды в интервале 7,0 7,1 и соотношении объемов консерванта и осадка эритроцитов 4 9,1 при следующем соотношении компонентов, г/л:
Аденин 1,34 1,36
Инозин 3,00 5,00
Лимонная кислота 14,0 16,0
Глюкоза 50,0 70,0
Натрий фосфорнокислый трехзамещенный 2,00 4,00
Едкий натрий 8,00 8,50
Пенициллин 5,00 10,00
Стрептомицин 5,00 10,00
Дистиллированная вода До 1 л