СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АУТОИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ С ИММУНОДЕФИЦИТОМ СУПРЕССОРОВ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ АУТОИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Российский патент 1996 года по МПК A61K35/50 A61K38/04 

Изобретение относится к медицине, в частности к применению иммунокорригирующих средств при лечении различных аутоиммунных заболеваний.

Известен препарат β-1-гликопротеин плацентарного происхождения, который применяют в качестве стимулятора роста и пролиферации гематопоэтических кроветворных клеток (патент США N 5169835, кл. A 61 K 35/50, 1989).

Известен белковый препарат трофобластический бета-1-гликопротеин (ТБГ) (гос.реестр СССР N 247, 1983), являющегося аналогом β-1-гликопротеина. Однако в патенте США отсутствуют данные, позволяющие судить о возможности использования ТБГ в качестве корректора (иммунорегулятора, иммуномодулятора), способного быть использованным для лечения аутоиммунных заболеваний.

Известно применение ТБГ в диагностике и прогнозе течения беременности [1]
Однако в этой работе не раскрыты возможности использования ТБГ для лечения аутоиммунных заболеваний.

Наиболее близким к предлагаемому является способ лечения аутоиммунных заболеваний, включающий введение дозы иммунокорригирующего препарата [2]
Однако в известном способе использован препарат, наличие примесей в котором может привести к развитию аллергических реакций, а применение его эффективно лишь в послеоперационный период и ограничено лишь аутоиммунным орхитом.

Цель изобретения применение средства, обладающего иммунокорригирующими свойствами и не вызывающего аллергических реакций, а также расширение области лечения аутоиммунных заболеваний.

Цель достигается тем, что в качестве средства для лечения аутоиммунных заболеваний применяют трофобластический бета-1-гликопротеин (ТБГ), а в способе лечения аутоиммунных заболеваний, включающем введение иммунокорригирующего препарата, в качестве иммунокорригирующего препарата используют ТБГ, а перед введением ТБГ проводят тестирование к нему мононуклеарных клеток (МНК), кроме того ТБГ вводят парентерально или инкубируют с МНК из периферической крови и вводят внутривенно, при этом ТБГ используют в дозах от 3 до 120 мкг.

Сущность изобретения заключается в том, что применение ТБГ зависит от показателей исходного статуса больных и может быть использовано лишь в случаях индуцирования супрессорной активности лимфоцитов.

Предварительное тестирование позволяет использовать ТБГ для лечения различных аутоиммунных заболеваний.

Лабораторные испытания и клинические примеры подтверждают возможность широкого применения.

ТБГ можно получать из отходов производства (фракция А) гамма-глобулина (а.с. N 1341736, кл. A 61 K 35/16, 1985).

Экспериментальным и клиническим путем установлены новые свойства ТБГ как иммунокорригирующего препарата, пригодного для лечения различных аутоиммунных заболеваний.

Оценка показателей иммунного статуса 154 больных при аутоиммунных заболеваниях (рассеянный склероз, ревматоидный артрит и др.) выявила наличие дефицита Т-супрессоров, который является пусковым механизмом аутоиммунизации, т.е. утраты аутотолерантности.

Лечебный эффект ТБГ заключается в том, что он обладает способностью индуцировать супрессорную активность лимфоцитов, больных рассеянным склерозом, ревматоидным артритом и др. Клинико-иммунологические обследования больных вышеуказанных аутоиммунных заболеваний и лиц контрольной группы (доноров в количестве 105 человек) определяли уровень Т- и B-лимфоцитов периферической крови, пролиферативную активность Т-лимфоцитов с помощью реакции бластрансформации (РБТ) и функциональную активность Т-супрессоров. Мононуклеарные клетки выделяли центрифугированием из периферической крови в одноступенчатом градиенте плотности фиколл-уротраст.

Установлено, что для больных рассеянным склерозом относительное количество Т-клеток в стадии обострения (41,3 ±2%) было в 1,5 раза ниже нормы (63,2±2%).

Дозы ТБГ оптимальны в диапазоне 3-120 мкг.

На чертеже представлена стимуляторная и супрессорная активность (в) ТБГ-индуцированных лимфоцитов периферической крови больных рассеянным склерозом в период обострения (1), начала ремиссии (2) и ремиссии (3).

На основании предварительных тестовых данных можно судить о возможности использования ТБГ в стадии обострения у всех больных, в стадии ремиссии у 40% больных, а у 60% остальных больных применение ТБГ противопоказано на момент исследования.

Предварительное тестирование на чувствительность к ТБГ мононуклеарных клеток проводят в следующей последовательности.

Периферическую кровь берут у диагностируемого больного путем венопункции, помещают в пробирки с раствором гепарина, получают суспензию мононуклеарных клеток (МНК) методом седиментации клеток в одноступенчатом градиенте фиколл-уротраст, делят их на две равные части. Культивируют в течение 48 ч первую из частей без активатора супрессоров ТБГ, а вторую с ТБГ. Далее отмывают МНК от среды культивирования и осуществляют блокировку пролиферации путем обработки МНК митомицином С.

На следующем этапе в каждую из частей контрольных и стимулированных ТБГ лимфоцитов добавляют свежевыделенные лимфоциты здорового донора, стимулированных ФГА, которые служат отвечающими тест-клетками в равных соотношениях для получения тест-культур. Культивирование их проводят в течение 72 ч. После этого с помощью Н³-тимидина оценивают пролиферацию тест-культур и о величине супрессии судят по степени снижения пролиферации в них. Индекс супрессии определяют по формуле:
ИС 1- 100%
В зависимости от полученных данных тестирования иммунного статуса человека определяют конкретные действия для лечения аутоиммунного заболевания.

П р и м е р 1. Больной С, 29 лет. Диагноз рассеянный склероз, церебро-спинальная форма, с длительным ремитирующим течением, неоднократно лечился кортикостероидными препаратами, на фоне ремиссии, при иммунологическом исследовании выявляется стимуляторная (контрасупрессорная) активность Т-лимфоцитов в периферической крови 28% В данный период применение ТБГ этому больному противопоказано.

П р и м е р 2. Больной Б. 28 лет, с диагнозом рассеянный склероз, церебро-спинальная форма, ремитирующее течение, стадия обострения процесса. Длительность заболевания 3 года. В неврологическом статусе: горизонтальный нистагм при взгляде вправо, сухожильные рефлексы живые, на ногах D > S. Брюшные рефлексы верхние низкие, средние и нижние отсутствуют. Симптом Бабинского с двух сторон. Клонусы стоп, грубее справа. Парезов конечностей нет, мышечный тонус не изменен. Походка атактическая. В позе Ромберга неустойчив. Атаксия при выполнении пяточно-коленной пробы. Задержка мочеиспускания.

Спинно-мозговая жидкость: белок 0,76% реакция Ланге 66644322.

Осмотр окулиста: побледнение височных половин дисков зрительных нервов.

Активность Т-супрессоров периферической крови при индукции ТБГ 17%
В стерильных условиях у больного была взята из локтевой вены однократно кровь в объеме 110 мл. Мононуклеарные клетки (МНК) выделяли стандартным методом в градиенте плотности фиколл-уротраст. Выделенные МНК инкубировали с ТБГ в концентрации 60 мкг/мл. Отмытые центрифугированием клетки ввели внутривенно. На 5-й день наступили признаки ремиссии. Нормализовалась походка, мочеиспускание. В позе Ромберга устойчив. Пяточно-коленную пробу выполняет четко. Повторная оценка иммунного статуса выявила повышение функциональной активности Т-супрессоров периферической крови при индукции ТБГ 38% У больного в реакции Оухтерлони на 7,14 и 28 дни антитела против ТБГ не обнаружены.

П р и м е р 3. Больной Х. 42 года, поступил в клинику с диагнозом ревматоидный артрит полиартрит, серопозитивный, А-П, стадия 2, недостаточность функции суставов (НФС). Активность Т-супрессоров периферической крови при индукции ТБГ составила 22% Больному ввели ТБГ парентерально в патологически измененные суставы по 0,5 мл в концентрации 60 мкг/мл. На четвертые сутки наступили признаки ремиссии. Болевой синдром уменьшился. Регрессировала НФС. При повторном анализе выявили повышение функциональной активности Т-супрессоров периферической крови при индукции ТБГ 47% У больного в реакции Оухтерлони на 7,14 и 28 дни антитела против ТБГ не выявлены.

При исследовании 105 доноров и 154 больных с различными аутоиммунными заболеваниями выявлено, что при использовании дозы < 3 мкг эффект слабо выражен, а использование дозы > 120 мкг нецелесообразно.

Норма супрессорной активности 63,4% ± 4,7, при обострении 20,5%±9,8, при ремиссии 47,7% ±2,8, в начале ремиссии стимуляторная активность 66/6% t 16,1.

Изобретение относится к медицине, в частности к способу лечения аутоиммунных заболеваний и средству для их лечения. В качестве лечебного средства предлагается трофобластический бета-1-гликопротеин (ТБГ) для лечения различных аутоиммунных заболеваний (рассеянный склероз, ревматоидный артрит и др.), применение которого исключает различные аллергические реакции. Способ лечения аутоиммунных заболеваний заключается в предварительном выявлении больных с аутоиммунными заболеваниями, у которых препарат будет индуцировать супрессорную активность лимфоцитов, применении ТБГ как иммунокорригирующего препарата. Оптимальные дозы приема ТБГ 3 - 120 мкг. При этом вводят ТБГ парентерально или внутривенно. 2 с. и 2 з. п. ф-лы, 1 ил.

1. Применение трофобластического бета-1-гликопротеина в качестве средства для лечения аутоиммунных заболеваний с иммунодефицитом супрессоров. 2. Способ лечения аутоиммунных заболеваний, включающий введение иммунокорригирующего препарата, отличающийся тем, что предварительно исследуют иммунный статус и при выявлении дефицита супрессоров вводят трофобластический бета-1-гликопротеин в дозах 3 - 120 мкг. 3. Способ по п.2, отличающийся тем, что трофобластический бета-1-гликопротеин вводят парентерально. 4. Способ по п.2, отличающийся тем, что трофобластический бета-1-гликопротеин инкубируют в концентрации 60 мкг/мл с аутомононуклеарными клетками, выделенными из периферической крови, и вводят внутривенно.