ИММУНОКОРРЕГИРУЮЩЕЕ СРЕДСТВО ПРИ ОСНОВНОЙ ТЕРАПИИ РЕВМАТИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Российский патент 1996 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к применению болеутоляющего и противовоспалительного известного препарата "Фитодолор" в качестве основного терапевтического препарата при лечении ревматических заболеваний.

"Фитодолор", обладающий болеутоляющим и противовоспалительным действием, содержит водно-спиртовые втяжки (об.): 50 70 Populus tremula; 10 30 Solidago virgaurea и 10 30 Fraxinus excelsior.

В предпочтительном варианте композиция содеpжит (об.): водно-спиртовых вытяжек 60 Populus tremela; 20 Solidago virgaurea и 20 Fraxinus excelsior.

Пример. Для приготовления вытяжки Populus tremula берут 500 кг свежеприготовленных частиц осины (Salicaceae L) [сырье может содержать кору и листья 1: 2] и обрабатывают их в герметичной установке смесью 820 кг 60 об.-ного этанола и 170 кг 44,5 об.-ного этанола в течение 16 ч при 50^oС. Общий объем загрузки в установке 1000 л. В ходе обработки условия строго контролируются. Затем смесь профильтровывают на фильтр-прессе и затем из фильтрата отбирают пробу на анализ. Анализ осуществляют методами жидкостной хроматографии высокого давления и УФ-спектроскопии по условиям GMP ("Good Manufacturing Practice"). При этом определяют содержание в экстракте салицина и салицилового спирта, общее содержание глюкозидов и сухой остаток.

Продолжительность анализа составляет 12 ч.

Аналогичным образом получают вытяжку Soligaginis virgaurea из 300 кг свежеприготовленных частиц астры "Золотой корень" (Astaraceae L.), которые обрабатывают смесью 920 кг 60 об.-ного этанола и 2080 кг 41,5 об.-ного этанола. В пробе фильтрата определяют содержание рутина/ферозида, общее содержание флавоноидов и сухой остаток.

Аналогичным образом получают вытяжку Fraxinus excelsior из 480 г свежеприготовленных частиц ясеня (Oleaceae), которые обрабатывают смесью 800 кг 60 об.-ного этанола и 1700 кг 46,5 об.-ного этанола. В пробе фильтрата определяют содержание изофраксидина и сухой остаток.

В заключение смешивают свежеприготовленные вытяжки трех компонентов лекарственного средства по изобретению, причем вытяжки берут в таких количествах, что в целевой смеси активные компоненты находятся в соотношении Populus Solidago Fraxinus 6 2 2.

Получают лекарственный состав Phytodolor RN, содержащий 60 вытяжки Populus tremula, 20 вытяжки Solidago virgaurea и 20 вытяжки Fraxinus excelsior, а также 45,6 об. спирта.

Весь процесс получения лекарственного средства в готовом виде, пригодном для употребления осуществляется за 2 3 дн.

"Фитодолор" можно использовать не только для немедленного лечения ревматических заболеваний, но в большей степени в качестве основного терапевтического агента.

В качестве примера основного терапевтического действия ниже воспроизведены результаты исследований в ревматологическом отделении госпиталя, в частности, в форме РОЭ-значений. Можно видеть явное снижение этих значений. С уверенностью можно сказать, что благодаря применению препарата, воспалительная активность ревматических заболеваний, выраженная в терминах С-активного протеина, явно снижается. Некоторые результаты приведены ниже в виде табл. 1.

Необходимо иметь в виду, что пациенты в обеих группах, участвующих в исследованиях, дополнительно подвергались длительной основной терапии, которая была начата задолго до начала испытаний.

Во время исследования на 5 пациентах, страдающих ревматическим артритом, которые уже подвергались лечению, в результате дополнительного применения "Фитодолора" наблюдались изменения исходных значений в трех из пяти случаев в испытании на осаждение эритроцитов и в четырех из пяти случаев с С-активным протеином в течение четырех недель.

Исследование влияния "Фитодолора" (композиции согласно изобретению) на синовиальную фибробластовую клеточную культуру.

Для исследования цитостатического действия испытуемой композиции определяли действие "Фитодолора" на фазы клеточного цикла.

Отбирали синовиальные клетки пациентов, прооперированных по поводу поражения кристовидной связки, и после 10 пассажей эти клетки подвергали испытанию.

Под оптическим микроскопом определяли, что синовиальные клетки хорошо переносили добавление (24 ч) препарата при разбавлении от 1 100. Поэтому применяли для экспериментов следующие разбавления испытуемой композиции: 1 100; 1 500; 1 1000 и 1 10000.

Методика определения фаз клеточного цикла заключалась в следующем.

Культуры инокулировали по 50000 клеток на 1 мл и единицу на микрокамеру. Четырехкратное определение. После 24 ч периода адаптации и 48 ч инкубации в культуральной среде, к которой добавляли испытуемую композицию в указанных разбавлениях, в течение 30 мин прибавляли аналог тимидина бромдезоксиуридин (БрДУ) концентрации 20 микромолярной. БрДУ маркировал клетки, которые находились в S-фазе клеточного цикла. Далее осуществляли следующие этапы исследования: проникновение Твин 20 и ПБС через клеточную оболочку, добавление моноклонального антитела, маркировку связанного антитела кролик-анти-мышь-родамин-конъюгатом, фиксирование, количественное окрашивание ДНК бис-амино-оксадиолом (БАО), дифференцирование и оценка фазы покоя Go, постоянное автоматическое измерение зависимой от ДНК голубой флюоресценции окрашенных БАО ядер клеток, а также зависимой от БрДУ красной флюоресценции, причем из всех наблюдаемых клеток отмечали те клетки, которые находились в S-фазе.

Величины из обоих банков данных наносили на одну и ту же гистограмму, так что из отдельных классов гистограммы можно было считать принадлежность клеток к фазам Go/1. S и G2 + М.

Получили следующие результаты по изучению фаз клеточного цикла.

Композиция "Фитодолор" в нетоксичных концентрациях оказывает тормозящее пролиферацию действие, причем установлена зависимость от концентрации. Этот эффект можно было наблюдать в области разбавлений от 1 100 до 1 1000 (табл. 2).

Процентное содержание фаз клеточного цикла было рассчитано из четырех отдельных определений.

Проведенные испытания четко показали, что композиции Фетодолор приводит к сокращению S-фазы клеток и тем самым к уменьшению клеток, которые проходят клеточный цикл. Часть клеток более длительный период времени находится в фазе G2. Это является благоприятным для клеток, поскольку в этой фазе действует механизм восстановления ДНК. Не происходит повышения митотического индекса, так как он лежит у этих клеток ниже 1
Таким образом, вышеописанный испытания подтверждают, что композиция "Фитодолор" на чисто растительной основе обладает биологической активностью, свойственной основным терапевтическим средствам.

Исследуемая композиция "Фитодолор" вызывает подобно цитостатическим препаратам патогенетически релевантную пролиферацию клеток при хроническом полиартрите различного происхождения с хорошей носимостью.

Двойное действие препарата (с одной стороны, свойство снимать боль и воспаление), а также установленное свойство действия, подобного цитостатическому, позволяет использовать его в качестве основного терапевтического средства для долговременного лечения хронического полиартрита.

Предлагается применять известный препарат "Фитодолор", обладающий болеутоляющей и противовоспалительной активностью, содержащий водно-спиртовые вытяжки, об. %: 50 - 70 Populus tremela; 10 - 30 Solidago virgaurea; 10 - 30 Fraxinus excelsior в качестве единственного основного терапевтического препарата, при лечении ревматических заболеваний. 1 з. п. ф-лы, 2 табл.

1. Применение растительной композиции для лечения ревматических заболеваний, содержащей водно-спиртовые вытяжки, об.

Populus tremula 50 70
Solidago virgaurea 10 30
Fraxinus excelsior 10 30
в качестве иммунокоррегирующего средства при основной терапии того же заболевания.