КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ СМЕСЬ ЭКСТРАКТОВ РАСТЕНИЙ ИЛИ СМЕСЬ МОЛЕКУЛ, СОДЕРЖАЩИХСЯ В УКАЗАННЫХ РАСТЕНИЯХ, И ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ КОНТРОЛИРОВАНИЯ МЕТАБОЛИЗМА УГЛЕВОДОВ И/ИЛИ ЛИПИДОВ Российский патент 2020 года по МПК A61K36/28 A61K36/45 A61K36/67 A61P3/00 A61P3/10 A61P9/00 A61P3/06 

Настоящее изобретение относится к профилактике и лечению расстройств метаболизма углеводов и/или жиров у человека и животных.

Сахарный диабет 2-го типа, представляющий собой наиболее распространенную форму сахарного диабета, является хроническим прогрессирующим метаболическим заболеванием. Он характеризуется хронической гипергликемией, т.е. патологически высокой концентрацией сахара в крови, и непереносимостью углеводов. Основной причиной этого хронического гипергликемического состояния является резистентность к инсулину и неадекватная секреция инсулина в ответ на данное метаболическое состояние, но могут быть вовлечены и другие факторы (Ismail-Beigi F N Engl J Med 2012; 366: 1319-27). Основные подходы к борьбе с сахарным диабетом 2-го типа должны состоять в снижении уровней гликемии, в снижении уровня гликированного гемоглобина (HbA₁c) до уровня, меньшего или равного 6,5%, и в повышении чувствительности к инсулину.

Лечение сахарного диабета 2-го типа состоит, прежде всего, в изменении образа жизни или соблюдении гигиено-диетических мер (ГДМ: диета, отказ от курения, физические нагрузки и спортивные занятия). Если ГДМ недостаточно, следует применять противодиабетические терапевтические средства, в основном метформин. Однако метформин имеет множество медицинских противопоказаний, таких как хроническая почечная недостаточность, ацидоз, гипоксия, обезвоживание и т.д. Таким образом, применение метформина по существу представляет собой парадокс, поскольку его назначение невозможно в случае наличия у пациентов с сахарным диабетом 2-го типа почечной недостаточности, при том, что почечная недостаточность является одним из распространенных последствий сахарного диабета 2-го типа. Разработаны другие терапевтические средства, такие как ингибиторы дипептидилпептидазы-IV (DPP-IV), аналоги глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1), тиазолидиндионы (TZD), сульфонилмочевины, ингибиторы гликозидазы (акарбоза, миглитол, воглибоза) или ингибиторы натрий-зависимого котранспортера глюкозы-2 (SGLT2). Однако составить правильную терапевтическую комбинацию сложно, поскольку необходимо учитывать большое число факторов, таких как противопоказания и нежелательные реакции, которые влияют на качество жизни пациентов и, следовательно, на их соблюдение лечения. Кроме того, некоторые терапевтические комбинации повышают общую смертность, такие как комбинация метформина с сульфонилмочевинами (Prescrire Int 2015; 24: 130-5).

Поскольку пациенты очень редко придерживаются ГДМ, необходимо очень быстро назначить терапевтическое лечение с учетом всех нежелательных реакций и противопоказаний, связанных с этими молекулами, и в настоящее время решение, подходящее для оказания помощи пациентам с сахарным диабетом 2-го типа между ГДМ и назначением терапевтического лечения отсутствует.

Кроме того, пациенты с сахарным диабетом 2-го типа подвержены высокому риску заболеваемости-смертности от сердечно-сосудистых заболеваний. Таким образом, в систему оказания помощи пациентам также необходимо включать общеизвестные факторы сердечно-сосудистого риска, в частности, такие как контроль циркулирующих жиров, массы тела и артериального давления. Эта необходимость в настоящее время подразумевает одновременный прием нескольких лекарственных препаратов различных терапевтических классов. Тем не менее, комбинирование лекарственных средств может в некоторых случаях вызывать серьезные побочные реакции, например, одновременный прием фибратов и статинов повышает риск миопатии (Denke MA J Manag Care Pharm 2003; 9: 17-9).

Поэтому существует действительная потребность в препаратах, которые можно применять как в процессе постепенного развития кардио-метаболических патологий, характеризующихся повышением некоторых факторов риска (нарушения метаболизма углеводов, жиров, избыточная масса тела, воспаление, окислительный стресс, артериальная гипертензия), так и во время вспышки этих патологий, в особенности, сахарного диабета 2-го типа.

Кроме того, существует неотложная потребность в профилактических мерах и лекарственных препаратах, «многоцелевой» механизм действия которых имеет преимущества в отношении соответствия, переносимости и эффективности. Такие препараты могут дать возможность снизить общий риск кардио-метаболических заболеваний, а также предупреждать и лечить каждую дисфункцию и/или ее последствия в отдельности.

Цель изобретения состоит в удовлетворении этих различных потребностей путем предложения композиций, способных одновременно воздействовать на несколько дисфункций метаболизма углеводов и жиров, представляющих собой как профилактические средства, так и терапевтические средства, обладающие преимуществами для профилактики и лечения кардио-метаболических заболеваний и их осложнений.

Для достижения этой цели изобретение относится к композициям, содержащим по меньшей мере смесь молекул, полученную по меньшей мере из:

- Chrysanthellum indicum, и

- Cynara scolymus, и

- Vaccinium myrtillus,

где указанная смесь молекул также содержит пиперин.

Эта смесь представляет собой синергическую смесь, поскольку молекулы, присутствующие в смеси, действуют синергически.

Экстракты Chrysanthellum indicum, экстракты Cynara scolymus, экстракты Vaccinium myrtillus и пиперин уже описаны, и некоторые из них применяются в пищевых продуктах, но неожиданно комбинация по меньшей мере одного экстракта Chrysanthellum indicum с по меньшей мере одним экстрактом Cynara scolymus, экстрактом Vaccinium myrtillus и пиперином приводит к удивительным результатам как в отношении метаболизма углеводов, так и в отношении метаболизма жиров у человека или животных.

Для достижения этой цели изобретение также относится к композициям, состоящим из по меньшей мере пиперина и конкретных специфичных молекул, содержащихся в Chrysanthellum indicum, Cynara scolymus и Vaccinium myrtillus (где эти молекулы является натуральными и/или синтетическими), в частности к композиции, содержащей смесь по меньшей мере четырех молекул, где по меньшей мере одна молекула представляет собой пиперин, по меньшей мере одна молекула выбрана из апигенин-7-О-глюкуронида, хризантеллина А, хризантеллина В, кофейной кислоты, лютеолина, маритиметина, эриодиктиола, изооканина, апигенина, лютеолин-7-О-глюкозида, маритимеина, мареина, эриодиктиол-7-О-глюкозида, флавомареина, апигенин-8-С-α-L-арабинозид-6-С-β-D-глюкозида (шафтозида), апигенин-6,8-С-ди-β-D-глюкопиранозида (виценина-2) или их аналогов, и по меньшей мере одна молекула выбрана из дикофеилхинной кислоты, сульфомонокофеилхинной кислоты, лютеолина, лютеолин-7-O-глюкозида, лютеолин-7-О-глюкуронида, апигенин-7-О-глюкозида, цинаропикрина или их аналогов, и по меньшей мере одна молекула выбрана из монокофеилхинной кислоты, дельфинидин-3-галактозида, дельфинидин-3-глюкозида, цианидин-3-галактозида, дельфинидин-3-арабинозида, цианидин-3-глюкозида, петунидин-3-галактозида, цианидин-3-арабинозида, петунидин-3-глюкозида, пеонидин-3-галактозида, петунидин-3-арабинозида, пеонидин-3-глюкозида, мальвидин-3-галактозида, мальвидин-3-глюкозида, мальвидин-3-арабинозида или их аналогов.

В настоящей заявке для обозначения композиций согласно изобретению единственное или множественное число используют без предпочтений.

Преимущественно, композиции согласно изобретению предотвращают развитие хронической гипергликемии и уменьшают гликемию, снижают уровень гликированного гемоглобина, позволяют улучшить толерантность к углеводам при приеме внутрь, повышают чувствительность к инсулину, но также способны действовать на другие факторы риска сердечно-сосудистых заболеваний, такие как дислипидемия, избыточная масса тела и ожирение и артериальное давление. Кроме того, они обладают немногочисленными или не обладают побочными эффектами по сравнению с существующими и проходящими разработку лекарственными средствами.

Изобретение, таким образом, также относится к применению композиций в качестве пищевых продуктов или оздоровительных продуктов, особенно в качестве лекарственных средств, в частности, для профилактики и/или борьбы с расстройствами метаболизма углеводов и жиров у человека или животных.

Далее изобретение подробно описано со ссылкой на прилагаемые фигуры, на которых показано:

- Фиг. 1: результаты перорального теста чувствительности к инсулину для четырех композиций, соответствующие результатам в Таблице 9 (пункт II.1);

- Фиг. 2: результаты, демонстрирующие синергический эффект, полученный в результате применения композиции согласно изобретению, эти результаты соответствуют результатам, приведенным в Таблице 13 (пункт II.1) для гликемии натощак;

- Фиг. 3: результаты, демонстрирующие синергический эффект, полученный в результате применения композиции согласно изобретению, эти результаты соответствуют результатам, приведенным в Таблице 13 (пункт II.1) для толерантности к углеводам;

- Фиг. 4: результаты, демонстрирующие синергический эффект, полученный в результате применения композиции согласно изобретению, эти результаты соответствуют результатам, приведенным в Таблице 14 (пункт II.1) для гликемии натощак;

- Фиг. 5: результаты, демонстрирующие синергический эффект, полученный в результате применения композиции согласно изобретению, эти результаты соответствуют результатам, приведенным в Таблице 14 (пункт II.1) для толерантности к углеводам;

- Фиг. 6: результаты, демонстрирующие синергический эффект, полученный в результате применения композиции согласно изобретению, эти результаты соответствуют результатам, приведенным в Таблице 14 (пункт II.1) для чувствительности к инсулину;

- Фиг. 7: результаты воздействия композиции согласно изобретению и метформина на чувствительность к инсулину, эти результаты соответствуют результатам, приведенным в Таблице 15 (пункт II.2);

- Фиг. 8: результаты воздействия композиции согласно изобретению на изменение массы тела, эти результаты соответствуют результатам, приведенным в Таблице 15 (пункт II.2);

- Фиг. 9: результаты воздействия композиции согласно изобретению на изменение гликемии натощак, эти результаты соответствуют результатам, приведенным в Таблице 15 (пункт II.2);

- Фиг. 10: результаты вестерн-блоттинга, демонстрирующие увеличение количества АМФ-активируемой протеинкиназы в печени мышей при применении композиции согласно изобретению (пункт II.2);

- Фиг. 11: результаты тестов, демонстрирующие отсутствие острого гипогликемического эффекта при применении композиции согласно изобретению (пункт II.3);

- Фиг. 12: результаты тестов, демонстрирующие воздействие композиции согласно изобретению на изменение в отношении увеличения массы тела (пункт II.4).

Объектом изобретения является композиция, содержащая по меньшей мере смесь молекул, полученную по меньшей мере из:

- Chrysanthellum indicum, и

- Cynara scolymus, и

- Vaccinium myrtillus,

где указанная смесь молекул также содержит пиперин.

Таким образом, изобретение относится к композиции, содержащей по меньшей мере пиперин, по меньшей мере одну молекулу, выделенную из Chrysanthellum indicum, по меньшей мере одну молекулу, выделенную из Cynara scolymus, и по меньшей мере одну молекулу, выделенную из Vaccinium myrtillus.

В дополнение к Chrysanthellum indicum, Cynara scolymus, Vaccinium myrtillus и пиперину композиция согласно изобретению может также содержать другие соединения, в частности, экстракт Olea europea. В этом случае композиция согласно изобретению содержит по меньшей мере одну молекулу, выделенную из Chrysanthellum indicum, по меньшей мере одну молекулу, выделенную из Cynara scolymus, по меньшей мере одну молекулу, выделенную из Vaccinium myrtillus, и по меньшей мере одну молекулу, выделенную из Olea europea, и пиперин.

Согласно первому воплощению изобретения композиция по изобретению содержит по меньшей мере:

- экстракт Chrysanthellum indicum, и

- экстракт Cynara scolymus, и

- экстракт Vaccinium myrtillus, и

- синтетический пиперин и/или экстракт Piper, содержащий пиперин.

Для целей изобретения термин «экстракт растения «X» или растительного сырья «X»» означает по меньшей мере одну молекулу, преимущественно группу молекул, полученных из растения «X» любым подходящим способом. В частности, можно упомянуть водные экстракты (полученные с использованием водного растворителя), спиртовые экстракты (полученные с использованием спиртового растворителя), либо полученные с использованием органического растворителя или с использованием натурального жирного вещества или смеси натуральных жирных веществ, особенно растительного масла или смеси растительных масел. Термин «водный растворитель» означает любой растворитель, состоящий полностью или частично из воды. Таким образом, можно упомянуть саму воду, водно-спиртовые растворители в любых соотношениях или растворители, состоящие из воды и соединения, такого как глицерин или пропиленгликоль, в любых соотношениях. Среди спиртовых растворителей можно особо упомянуть этанол.

Для целей изобретения термин «растение или растительное сырье» означает целое растение или часть растения, включая культуры клеток, еще не прошедшие специальную обработку, и предназначенные для включения в производство растительного препарата.

Экстракты растений могут быть получены посредством любого подходящего способа, например, посредством способа, включающего следующие стадии:

- экстракция твердого вещества жидкостью

- разделение/прессование

- фильтрование

- выпаривание

- сушка

- необязательное введение добавок

- гомогенизация

- кондиционирование.

Экстракт Chrysanthellum indicum предпочтительно представляет собой экстракт целого растения или его надземных частей.

Он может, в частности, представлять собой водно-спиртовой, либо водный, либо субкритический экстракт CO₂, либо субкритический экстракт H₂O, или экстракт, полученный экстракцией в комбинации с термической обработкой, проведенной путем стандартного нагревания, либо при микроволновой частоте, либо под действием ультразвука.

Отношение растение/экстракт преимущественно составляет от 1/1 до 100/1, в частности от 1/1 до 25/1.

Композиция согласно изобретению, предназначенная для человека, преимущественно содержит такое количество экстракта Chrysanthellum indicum, которое позволяет вводить по меньшей мере 0,00001 г, в частности от 0,00001 г до 0,60 г, экстракта Chrysanthellum indicum на кг массы тела человека, которому вводят композицию, в сутки.

Предпочтительно, экстракт Chrysanthellum indicum содержит по меньшей мере одну молекулу, выбранную из апигенин-7-О-глюкуронида, хризантеллина А, хризантеллина В, кофейной кислоты, лютеолина, маритиметина, эриодиктиола, изооканина, апигенина, лютеолин-7-О-глюкозида, маритимеина, мареина, эриодиктиол-7-О-глюкозида, флавомареина, апигенин-8-С-α-L-арабинозид-6-С-β-D-глюкозида (шафтозида), апигенин-6,8-С-ди-β-D-глюкопиранозида (виценина-2) или их аналогов. Преимущественно, экстракт содержит по меньшей мере апигенин-7-О-глюкуронид.

Для целей настоящего изобретения термин «аналоги» означает все соединения, имеющие химическую структуру, подобную структуре другого соединения, но отличающуюся от нее определенным компонентом. Она может отличаться одним или более атомов, функциональных групп, субструктур, которые заменены другими атомами, функциональными группами или субструктурами. Примеры, которые можно упомянуть, включают аналоги апигенин-7-О-глюкуронида, такие как апигенин-7-апиоглюкозид, апигенин-8-C-глюкозид (витексин), апигенин-6-С-глюкозид (изовитексин), апигенин-7-O-неосферидозид, апигенин-7-глюкозид, апигенин-7-апиоглюкозид.

Экстракт Cynara scolymus предпочтительно представляет собой экстракт из листьев или корней.

Он может, в частности, представлять собой водно-спиртовой, либо водный, либо субкритический экстракт CO₂, либо субкритический экстракт H₂O, или экстракт, полученный экстракцией в комбинации с термической обработкой, проведенной путем стандартного нагревания, либо при микроволновой частоте, либо под действием ультразвука.

Отношение растение/экстракт преимущественно составляет от 1/1 до 100/1, в частности от 1/1 до 30/1.

Композиция согласно изобретению, предназначенная для человека, преимущественно содержит такое количество экстракта Cynara scolymus, которое позволяет вводить по меньшей мере 0,00001 г, в частности от 0,00001 г до 0,60 г, экстракта Cynara scolymus на кг массы тела человека, которому вводят композицию, в сутки.

Предпочтительно, экстракт Cynara scolymus содержит по меньшей мере одну молекулу, выбранную из дикофеилхинной кислоты, сульфомонокофеилхинной кислоты, лютеолина, лютеолин-7-О-глюкозида, лютеолин-7-О-глюкуронида, апигенин-7-О-глюкозида, цинаропикрина или их аналогов. Преимущественно, экстракт содержит по меньшей мере одну дикофеилхинную кислоту.

Экстракт Vaccinium myrtillus предпочтительно представляет собой экстракт из плодов или листьев.

Он может, в частности, представлять собой водно-спиртовой, либо водный, либо субкритический экстракт CO₂, либо субкритический экстракт H₂O, или экстракт, полученный экстракцией в комбинации с термической обработкой, проведенной путем стандартного нагревания, либо при микроволновой частоте, либо под действием ультразвука.

Отношение растение/экстракт преимущественно составляет от 1/1 до 200/1, в частности от 1/1 до 60/1.

Композиция согласно изобретению, предназначенная для человека, преимущественно содержит такое количество экстракта Vaccinium myrtillus, которое позволяет вводить по меньшей мере 0,00001 г, в частности от 0,00001 г до 0,60 г, экстракта Vaccinium myrtillus на кг массы тела человека, которому вводят композицию, в сутки.

Предпочтительно, экстракт Vaccinium myrtillus содержит по меньшей мере одну молекулу, выбранную из монокофеилхинной кислоты, дельфинидин-3-галактозида, дельфинидин-3-глюкозида, цианидин-3-галактозида, дельфинидин-3-арабинозида, цианидин-3-глюкозида, петунидин-3-галактозида, цианидин-3-арабинозида, петунидин-3-глюкозида, пеонидин-3-галактозида, петунидин-3-арабинозида, пеонидин-3-глюкозида, мальвидин-3-галактозида, мальвидин-3-глюкозида, мальвидин-3-арабинозида или их аналогов. Преимущественно, экстракт содержит по меньшей мере одну дикофеилхинную кислоту.

Пиперин, присутствующий в композиции согласно изобретению, может содержаться в экстракте Piper или может представлять собой синтетический пиперин.

Топологическая формула пиперина приведена ниже:

Композиция согласно изобретению, предназначенная для человека, преимущественно содержит такое количество пиперина, которое позволяет вводить по меньшей мере 0,001 мг, в частности от 0,001 мг до 166 мг, пиперина на кг массы тела человека, которому вводят композицию, в сутки.

Если пиперин содержится в экстракте Piper, смесь композиции по изобретению содержит указанный экстракт. Экстракт Piper преимущественно представляет собой экстракт Piper nigrum, Piper aduncum и/или Piper longum.

Экстракт Piper предпочтительно представляет собой экстракт из плодов или листьев.

Он может, в частности, представлять собой водно-спиртовой, либо водный, либо субкритический экстракт CO₂, либо субкритический экстракт H₂O, или экстракт, полученный экстракцией в комбинации с термической обработкой, проведенной путем стандартного нагревания, либо при микроволновой частоте, либо под действием ультразвука.

Отношение растение/экстракт преимущественно составляет от 1/1 до 10000/1, в частности от 1 /1 до 200/1.

Экстракт преимущественно содержит по меньшей мере 1 масс. % пиперина относительно общей массы экстракта.

Таким образом, смесь композиции согласно изобретению преимущественно содержит:

- по меньшей мере пиперин и

- по меньшей мере одну молекулу, выбранную из апигенин-7-O-глюкуронида, хризантеллина А, хризантеллина В, кофейной кислоты, лютеолина, маритиметина, эриодиктиола, изооканина, апигенина, лютеолин-7-О-глюкозида, маритимеина, мареина, эриодиктиол-7-О-глюкозида, флавомареина, апигенин-8-С-α-L-арабинозид-6-С-β-D-глюкозида (шафтозида), апигенин-6,8-С-ди-β-D-глюкопиранозида (виценина-2) или их аналогов, преимущественно апигенин-7-O-глюкуронида, и

- по меньшей мере одну молекулу, выбранную из дикофеилхинной кислоты, сульфомонокофеилхинной кислоты, лютеолина, лютеолин-7-O-глюкозида, лютеолин-7-О-глюкуронида, апигенин-7-О-глюкозида, цинаропикрина или их аналогов, преимущественно дикофеилхинной кислоты, и

- по меньшей мере одну молекулу, выбранную из монокофеилхинной кислоты, дельфинидин-3-галактозида, дельфинидин-3-глюкозида, цианидин-3-галактозида, дельфинидин-3-арабинозида, цианидин-3-глюкозида, петунидин-3-галактозида, цианидин-3-арабинозида, петунидин-3-глюкозида, пеонидин-3-галактозида, петунидин-3-арабинозида, пеонидин-3-глюкозида, мальвидин-3-галактозида, мальвидин-3-глюкозида, мальвидин-3-арабинозида или их аналогов, предпочтительно по меньшей мере одной монокофеилхинной кислоты.

В дополнение к экстрактам Chrysanthellum indicum, Cynara scolymus, Vaccinium myrtillus и пиперину смесь согласно изобретению может также содержать другие соединения, в частности, экстракт Olea europaea.

Экстракт Olea europaea предпочтительно представляет собой экстракт из плодов или листьев.

Он может, в частности, представлять собой водно-спиртовой, либо водный, либо субкритический экстракт СО₂, либо субкритический экстракт H₂O, или экстракт, полученный экстракцией в комбинации с термической обработкой, проведенной путем стандартного нагревания, либо при микроволновой частоте, либо под действием ультразвука.

Отношение растение/экстракт преимущественно составляет от 1/1 до 200/1, в частности от 1/1 до 60/1.

Композиция согласно изобретению, предназначенная для человека, преимущественно содержит такое количество экстракта Olea europaea, которое позволяет вводить по меньшей мере 0,00001 г, в частности от 0,00001 г до 0,60 г, экстракта Olea europaea на кг массы тела человека, которому вводят композицию, в сутки.

Предпочтительно экстракт Olea europaea содержит по меньшей мере одну молекулу, выбранную из олеуропеина и гидрокситирозола или их аналогов.

Для целей изобретения термин «смесь» означает комбинацию веществ (экстрактов и/или молекул) в твердой, жидкой или газообразной форме, которые могут или не могут взаимодействовать химически.

Смесь экстрактов согласно изобретению получают любым способом, известным специалистам в данной области техники. Она может быть получена путем простого смешивания составных частей.

Предпочтительно, отношение экстракт Chrysanthellum indicum/экстракт Cynara scolymus/экстракт Vaccinium myrtillus/пиперин в смеси составляет от 0,01/0,01/0,01/0,0001 до 10/10/10/10.

Согласно одному варианту в дополнение к смеси, состоящей из нескольких экстрактов растений, или вместо смеси, состоящей из нескольких экстрактов растений, смесь молекул композиции согласно изобретению может содержать по меньшей мере:

- единый экстракт, полученный из смеси по меньшей мере двух растений, выбранных из Chrysanthellum indicum, Cynara scolymus и Vaccinium myrtillus и Piper, и необязательно

- экстракт Chrysanthellum indicum, если смесь растений единого экстракта не содержит Chrysanthellum indicum,

- экстракт Cynara scolymus, если смесь растений единого экстракта не содержит Cynara scolymus,

- экстракт Vaccinium myrtillus, если смесь растений единого экстракта не содержит Vaccinium myrtillus,

- пиперин или экстракт Piper, если смесь растений единого экстракта не содержит Piper.

Преимущественно, когда композиция содержит единый экстракт, она содержит:

- единый экстракт, полученный из по меньшей мере Chrysanthellum indicum, Cynara scolymus и Vaccinium myrtillus и Piper, и/или

- пиперин и единый экстракт, полученный из по меньшей мере Chrysanthellum indicum, Cynara scolymus и Vaccinium myrtillus.

Для целей изобретения термин «единый экстракт, полученный из нескольких растений «X» или растительного сырья «X»» означает группу молекул, полученных из смеси по меньшей мере двух растений «X» любым подходящим способом. В частности, можно упомянуть водные экстракты (полученные с использованием водного растворителя), спиртовые экстракты (полученные с использованием спиртового растворителя), либо полученные с использованием органического растворителя или с использованием натурального жирного вещества или смеси натуральных жирных веществ, особенно растительного масла или смеси растительных масел. Термин «водный растворитель» означает любой растворитель, состоящий полностью или частично из воды. Таким образом, можно упомянуть саму воду, водно-спиртовые растворители в любых соотношениях или растворители, состоящие из воды и соединения, такого как глицерин или пропиленгликоль, в любых соотношениях. Среди спиртовых растворителей можно особо упомянуть этанол.

Для целей изобретения термин «растение или растительное сырье» означает целое растение или часть растения, включая культуры клеток, еще не прошедшие специальную обработку, и предназначенные для включения в производство растительного препарата.

Единый экстракт смеси растений «X» может быть получен посредством любого подходящего способа, например, посредством способа, включающего следующие стадии:

- экстракция твердого вещества жидкостью

- разделение/прессование

- фильтрование

- выпаривание

- сушка

- необязательное введение добавок

- гомогенизация

- кондиционирование.

Предпочтительно, в качестве растительного сырья для получения единого экстракта применяют целое растение или надземные части Chrysanthellum indicum. Единый экстракт преимущественно готовят из по меньшей мере 0,1 масс. % целого растения или надземных частей Chrysanthellum indicum относительно общей массы смеси растений, используемой для получения единого экстракта.

Предпочтительно, в качестве растительного сырья для получения единого экстракта применяют целое растение или надземные части Cynara scolymus. Единый экстракт преимущественно готовят из по меньшей мере 0,1 масс. % целого растения или надземных частей Cynara scolymus относительно общей массы смеси растений, используемой для получения единого экстракта.

Предпочтительно, в качестве растительного сырья для получения единого экстракта применяют плоды или листья Vaccinium myrtillus. Единый экстракт преимущественно готовят из по меньшей мере 0,1 масс. % плодов или листьев Vaccinium myrtillus относительно общей массы смеси растений, используемой для получения единого экстракта.

Если единый экстракт получают из смеси растений, содержащей Piper, в качестве растительного сырья для получения единого экстракта преимущественно используют плоды или листья Piper nigrum, Piper aduncum и/или Piper longum. Единый экстракт преимущественно готовят из по меньшей мере 0,0001 масс. % плодов или листьев Piper nigrum и/или Piper aduncum и/или Piper longum относительно общей массы смеси растений, используемой для получения единого экстракта.

Единый экстракт может, таким образом, содержать в дополнение к другим молекулам по меньшей мере олеуропеин, гидрокситирозол и/или по меньшей мере пиперин.

Предпочтительно, единый экстракт содержит:

- по меньшей мере одну молекулу, выбранную из апигенин-7-O-глюкуронида, хризантеллина А, хризантеллина В, кофейной кислоты, лютеолина, маритиметина, эриодиктиола, изооканина, апигенина, лютеолин-7-О-глюкозида, маритимеина, мареина, эриодиктиол-7-О-глюкозида, флавомареина, апигенин-8-С-α-L-арабинозид-6-С-β-D-глюкозида (шафтозида), апигенин-6,8-С-ди-β-D-глюкопиранозида (виценина-2) или их аналогов, преимущественно апигенин-7-O-глюкуронида, и

- по меньшей мере одну молекулу, выбранную из дикофеилхинной кислоты, сульфомонокофеилхинной кислоты, лютеолина, лютеолин-7-O-глюкозида, лютеолин-7-О-глюкуронида, апигенин-7-О-глюкозида, цинаропикрина или их аналогов, преимущественно диофеилхинной кислоты, и

- по меньшей мере одну молекулу, выбранную из монокофеилхинной кислоты, дельфинидин-3-галактозида, дельфинидин-3-глюкозида, цианидин-3-галактозида, дельфинидин-3-арабинозида, цианидин-3-глюкозида, петунидин-3-галактозида, цианидин-3-арабинозида, петунидин-3-глюкозида, пеонидин-3-галактозида, петунидин-3-арабинозида, пеонидин-3-глюкозида, мальвидин-3-галактозида, мальвидин-3-глюкозида, мальвидин-3-арабинозида или их аналогов, предпочтительно по меньшей мере одной монокофеилхинной кислоты.

- пиперин.

В дополнение к Chrysanthellum indicum, Cynara scolymus и Vaccinium myrtillus единый экстракт композиции согласно изобретению может быть также преимущественно получен из Olea europaea. Предпочтительно, в качестве растительного сырья для получения единого экстракта применяют листья или плоды Olea europaea. Единый экстракт преимущественно готовят из по меньшей мере 0,1 масс. % листьев или плодов Olea europaea относительно общей массы смеси растений, используемой для получения единого экстракта.

Особенно подходящее воплощение изобретения представляет собой композицию, содержащую единый экстракт, полученный из Chrysanthellum indicum, Cynara scolymus, Vaccinium myrtillus, Piper и Olea europaea.

Композиция согласно изобретению, содержащая единый экстракт, предназначенная для человека, преимущественно содержит такое количество единого экстракта, которое соответствует введению по меньшей мере 0,0001 г, в частности от 0,00001 г до 60 г, единого экстракта на кг массы тела человека, которому вводят композицию, в сутки.

Композиция согласно изобретению, содержащая экстракты растений и/или один или более единых экстрактов, таким образом содержит:

- по меньшей мере одну молекулу, выбранную из апигенин-7-O-глюкуронида, хризантеллина А, хризантеллина В, кофейной кислоты, лютеолина, маритиметина, эриодиктиола, изооканина, апигенина, лютеолин-7-О-глюкозида, маритимеина, мареина, эриодиктиол-7-О-глюкозида, флавомареина, апигенин-8-С-α-L-арабинозид-6-С-β-D-глюкозида (шафтозида), апигени-6,8-С-ди-β-D-глюкопиранозида (виценина-2) или их аналогов, преимущественно апигенин-7-O-глюкуронида, и

- из дикофеилхинной кислоты, сульфомонокофеилхинной кислоты, лютеолина, лютеолин-7-О-глюкозида, лютеолин-7-О-глюкуронида, апигенин-7-O-глюкозида, цинаропикрина или их аналогов, преимущественно дикофеилхинной кислоты, и

- по меньшей мере одну молекулу, выбранную из монокофеилхинной кислоты, дельфинидин-3-галактозида, дельфинидин-3-глюкозида, цианидин-3-галактозида, дельфинидин-3-арабинозида, цианидин-3-глюкозида, петунидин-3-галактозида, цианидин-3-арабинозида, петунидин-3-глюкозида, пеонидин-3-галактозида, петунидин-3-арабинозида, пеонидин-3-глюкозида, мальвидин-3-галактозида, мальвидин-3-глюкозида, мальвидин-3-арабинозида или их аналогов, предпочтительно по меньшей мере одной монокофеилхинной кислоты, и

- по меньшей мере пиперин,

- и необязательно преимущественно по меньшей мере одну молекулу, выбранную из олеуропеина, гидрокситирозола или их аналогов.

Согласно другому аспекту изобретение также относится к композиции, содержащей смесь по меньшей мере четырех молекул, где эти молекулы возможно представляют собой синтетические молекулы и/или натуральные молекулы, особенно молекулы, выделенные из растительного сырья:

- по меньшей мере одну молекулу, выбранную из апигенин-7-O-глюкуронида, хризантеллина А, хризантеллина В, кофейной кислоты, лютеолина, маритиметина, эриодиктиола, изооканина, апигенина, лютеолин-7-О-глюкозида, маритимеина, мареина, эриодиктиол-7-О-глюкозида, флавомареина, апигенин-8-С-α-L-арабинозид-6-С-β-D-глюкозида (шафтозида), апигенин-6,8-С-ди-β-D-глюкопиранозида (виценина-2) или их аналогов, и

- по меньшей мере одну молекулу, выбранную из дикофеилхинной кислоты, сульфомонокофеилхинной кислоты, лютеолина, лютеолин-7-O-глюкозида, лютеолин-7-О-глюкуронида, апигенин-7-О-глюкозида, цинаропикрина или их аналогов, и

- по меньшей мере одну молекулу, выбранную из монокофеилхинной кислоты, дельфинидин-3-галактозида, дельфинидин-3-глюкозида, цианидин-3-галактозида, дельфинидин-3-арабинозида, цианидин-3-глюкозида, петунидин-3-галактозида, цианидин-3-арабинозида, петунидин-3-глюкозида, пеонидин-3-галактозида, петунидин-3-арабинозида, пеонидин-3-глюкозида, мальвидин-3-галактозида, мальвидин-3-глюкозида, мальвидин-3-арабинозида или их аналогов, и

- по меньшей мере пиперин.

По меньшей мере одна из первых трех молекул представляет собой синтетическую молекулу. Действительно, независимо от пиперина, который может быть синтетическим или натуральным, по меньшей мере одна из других молекул представляет собой синтетическую молекулу.

В дополнение к этим по меньшей мере четырем молекулам смесь может также содержать по меньшей мере одну молекулу, выбранную из олеуропеина, гидрокситирозола или их аналогов, где эти молекулы возможно представляют собой синтетические или натуральные молекулы.

Согласно особенно подходящему варианту смесь содержит по меньшей мере одну дикофеилхинную кислоту, апигенин-7-О-глюкуронид, монокофеилхинную кислоту, пиперин и олеуропеин. Смесь молекул композиции согласно изобретению может состоять исключительно из дикафеилхинной кислоты, апигенин-7-О-глюкуронида, монокофеилхинной кислоты, пиперина и олеуропеина.

Согласно другим вариантам композиции согласно изобретению могут содержать смесь экстракта(-ов) и молекулы (молекул), представляющих интерес, представленных в настоящей заявке (например, экстракта Chrysanthellum indicum и по меньшей мере одной молекулы, выбранной из дикофеилхинной кислоты, сульфомонокофеилхинной кислоты, лютеолина, лютеолин-7-О-глюкозида, лютеолин-7-О-глюкуронида, апигенин-7-О-глюкозида, цинаропикрина или их аналогов, и по меньшей мере одной молекулы, выбранной из монокофеилхинной кислоты, дельфинидин-3-галактозида, дельфинидин-3-глюкозида, цианидин-3-галактозида, дельфинидин-3-арабинозида, цианидин-3-глюкозида, петунидин-3-галактозида, цианидин-3-арабинозида, петунидин-3-глюкозида, пеонидин-3-галактозида, петунидин-3-арабинозида, пеонидин-3-глюкозида, мальвидин-3-галактозида, мальвидин-3-глюкозида, мальвидин-3-арабинозида или их аналогов, и по меньшей мере пиперина и т.д.).

Композиции согласно изобретению в их различных вариантах могут состоять исключительно из описанных элементов (экстрактов растений и/или единого(-ых) экстракта(-ов)) и/или смеси по меньшей мере четырех молекул) или могут также содержать по меньшей мере один дополнительный элемент (продукты, молекулы, экстракты, активные вещества, вспомогательные вещества и т.д.), добавляемый в дополнение к экстрактам растений и/или единому(-ым) экстракту(-ам) или к смеси по меньшей мере четырех молекул, где указанный дополнительный элемент возможно выбран из:

- следующих витаминов: В1, В2, В3, В5, В6, В8, В9, В12, С, A, D, Е, K1 и K2;

- следующих соединений: обетихолевой кислоты, коросолиевой кислоты, полиненасыщенных жирных кислоты семейства омега-6 и/или омега-3, оротовой кислоты, пангамовой кислоты, пара-аминобензойной кислоты, амигдалина, бета-глюканов, карнитина, диметилглицина, имеглимина, изофлавонов, L-аргинина, окситоцина, пектина, пиридоксамина, ресвератрола, виниферина, L-цитруллина;

- следующих микроэлементов и минералов: мышьяка, бора, кальция, меди, железа, фтора, йода, лития, марганца, магния, молибдена, никеля, фосфора, селена, ванадия, цинка;

- следующих микрокомпонентов заменимой природы: конъюгированной линоленовой кислоты, липоевой кислоты, каротиноидов, карнитина, холина, коэнзима Q10, фитостеринов, полифенолов семейства таннинов и лигнанов, таурина;

- фруктоолигосахаридов, галактоолигосахаридов;

- бактерий, сбраживающих молочную кислоту;

- дрожжей, например красных рисовых дрожжей (Monascus purpureus);

- грибов, например грифолы курчавой;

- продуктов, выделенных из насекомых, которые совместимы с пищевым и фармацевтическим сектором;

- марихуаны и гашиша;

- покрывающих веществ: например гипромеллозы, микрокристаллической целлюлозы, стеариновой кислоты, талька, сахарозы, шеллака, повидона, пчелиного воска;

- вкусоароматических добавок: например натуральной черничной вкусоароматической добавки или натуральной земляничной вкусоароматической добавки;

- подкислителей, таких как яблочная кислота;

- веществ, препятствующих агломерации: например диоксида кремния или стеарата магния;

- загустителей, таких как ксантановая камедь, коллоидный диоксид кремния, моно- и диглицериды жирных кислот;

- стабилизаторов, таких как фосфат кальция;

- эмульгаторов, таких как лецитин сои;

- наполнителей, таких как кукурузный крахмал;

- вспомогательных веществ, например, микрокристаллической целлюлозы, стеарата магния или дикальция фосфата.

Композиции согласно изобретению могут также содержать один или более экстрактов по меньшей мере одного из следующих видов растительного сырья, и/или одну или более молекул, содержащихся по меньшей мере в одном из следующих видов растительного сырья, и/или единый экстракт может быть также получен из по меньшей мере одного из следующих видов растительного сырья: Abelmoschus esculentus, Abies alba, Abies balsamea, Abies sibirica, Acacia nilotica, Acacia senegal, Achillea millefollium, Achyranthes bidentata, Acmella oleracea, Actaea racemosa, Actinidia chinensis, Actinidia deliciosa, Adansonia digitata, Adiantum capillus-veneris, Aesculus hippocastanum, Afromomum melegueta, Agathosma betulina, Agathosma crenulata, Agathosma serratifolia, Agrimonia eupatoria, Ajuga reptans, Albizia julibrissin, Alchemilla vulgaris, Alliara petiolata, Allium ampeloprasum, Allium сера, Allium sativum, Allium schoenoprasum, Allium ursinum, Alnus glutinosa, Aloe ferox, Aloe vera, Aloysia citriodora, Alpinia galanga, Alpinia hainanensis, Alpinia officinarum, Alpinia oxyphylla, Althaea officinalis, Ammi visnaga, Amorphophallus konjac, Ananas comosus, Andographis paniculata, Anemarrhena asphodeloides, Anethum graveolens, Angelica archangelica, Angelica dahurica, Angelica pubescens, Angelica sinensis, Antennaria diocia, Anthriscus cerefolium, Anthyllis vulneraria, Aphanizomenon flos-aquae Ralfs, Apium graveolens, Arachis hypogaea, Aralia elata, Arctium lappa, Arctium minus, Argania spinosa, Armorica rustanica, Artemisia dracunculus, Artemesia vulgaris, Ascophyllum nodosum, Aspalathus linearis, Asparagus officinalis, Astragalus membranaceus, Atractylodes lancea, Atractylodes macrocephala, Auracaria columnaris, Avena sativa, Аяуаска, Baccharis genistelloides, Bacopa monnierri, Ballota nigra, Bambusa bambos, Bellis perennis, Berberis vulgaris, Beta vulgaris, Betula alleghaniensis, Betula pendula, Betula pubescens, Bixa orellana, Borago officnalis, Boswellia serrata, Brassica napus, Brassica nigra, Brassica oleracea, Brassica rapa, Bupleurum chinense, Calendula officinalis, Calluna vulgaris, Camellia sinsensis, Capsella bursa-pastohs, Capsicum annuum, Carex arenaria, Carica papaya, Carlina acaulis, Carphephorus odoratissmus, Carpinus betulus, Carthamus tinctorius, Carum carvi, Cassia fistula, Castanea sativa, Centaurea centaurium, Centaurea cyanus, Centaurium erythraea, Centella asiatica, Cerasus vulgaris, Ceratonia silliqua, Chaenomelum nobile, Chlorella vulgaris, Chondrus crispus, Chrysanthellum indicum, Cichorium intybus, Cinchona officinalis, cinchona pubescens, Cinnamomum camphora, Cinnamomum cassia, Cinnamomum verum, Cistanche salsa, Cistus incanus, Citrus aurantium, Citrus limon, Citrus maxima, Citrus medica, Citrus myrtifolia, Citrus reticulata blanco, Citrus sinsensis, Citrus paradisi, Clinopodium vulgare, Cnicus benedictus, Cochlearia officinalis, Cocos nucifera, Codonopsis pilosula, Coffea canephora, Coix lacryma-jobi var. mayyuen Stapf, Cola acuminata, Cola ballayi cornu, Cola nitida, Combretum micranthum, Commiphora mukul, Conyza canadensis, Coriandrum sativum, Cornus officinalis, Corylus avellana, Corymbia citriodora, Crataegus laevigata, Craetegus monogyna, Crithmum maritimum, Crocus sativus, Cucumis melo, Cucurbita pepo, Cuminum cyminum, Cupressus sempervirens, Cuscuta chinensis, Cyamopsis tetragonoloba, Cyathula officinalis, Cyclanthera pedata, Cydonia oblonga, Cymbopogon martini, Cymbopogon nardus, Cymbopogon winterianus, Cynara cardunculus, Cyperus rotundus, Daucus carota, Dendranthema grandiflorum, Desmodium adscendens, Dimocarpus longan, Dioscorea oppostifolia, Dioscorea villosa, Diospyros kaki Thunb., Dunaliella saliena, Echinacea augustifolia, Echinacea pallida, Echinacea purpurea, Elaegnus rhamnoides, Alettaria cardamomum, Eleutherococcus senticosus, Elymus repens, Epiobium augustifolium, Epilobium parviflorum, Equisetum arvense, Erica cinerea, Erica tetralix, Eriobotrya japonica, Eriodictyon californicum, Erodium cicutarium, Eryngium campestre, Eschscholzia californica, Eucalyptus dives Schauer, Eucalyptus globulus, Eucalyptus radiata, Eucalyptus smithii F. Muell, Eucommia ulmoides, Eugenia uniflora, Eugenia jambolana, Euphrasia stricta D. Wolff, Euterpe oleracea, Fagopyrum esculentum Moench, Follopia japonica, Ferula assa-foetida, Ficus carica, Filipendula ulmaria, Foeniculum vulgare Mill., Forsythia suspensa, Fragaria dodonei Ard., Frangula purshiana Cooper, Fraxinus excelsior, Fraxinus ortus, Fucus serratus, Fucus vesiculosus, Fumaria officinalis, Galeopsis segetum Neck., Galium odotarum, Galium verum, Gardenia jasminoides J. Ellis, Gastrodia elata Blume, Gelidium corneum J.V. Lamouroux, Gentiana lutea, Geranium robertianum, Geum urbanum, Ginkgo biloba, Glycine max, Glycyrrhiza glabra, Glycyrrhiza uralensis, Gracilaria gracilis, Grindelia camporum Greene, Grindelia robusta Nutt., Grindelia squarrosa Dunal, Gymnema sylvestris, Haematococcus pluvialis, Hamamemis virginiana, Harpagophytum procumbens, Harpagophytum zeyheh Decne., Hedeoma pluegioides Pers., Helianthus annuus, Helienthus tuberosus, Helichrysum arenarium, Helichrysum stoechas, Herniara glabra, Hibiscus sabdariffa, Hieracium pilosella, Himanthalia elongata, Hordeum vulgare, Houttuynia cordata Thunb., Huperzia serrata, Hyssopus officinalis, Ilex paraguariensis A. St.-Hill, Illicum verum, Impatients balsamina, Inula britannica, Inula helenium, Jasminum grandiflorum, Jasmium officinale, Juniperus communis, Justicia adhatoda, Kavalama urens, Krameria lappacea, Lagerstroemia speciosa, Laminaria digitata, Laminaria hyperborea, Lamium album, Larix decidua, Larix occidentalis, Laurus nobilis, Lavandula augustofolia, Lavandula latifolia, Ledum palustre, Leonurus cardiaca, Lepidium meyenii Walp., Lepidium sativum, Lespedeza capitata, Levisticum officinale, Lindera aggregate, Linus usitatissimum, Liquidambar styraciflua, Lotus corniculatus, Lycium chinense, Lycium barbarum, Lycopersicon esculentum, Lycopodium clavatum, Lycopus europaeus, Lythrum salicaria, Macadamia ternifolia F. muell, Macrocystis pyrifera, Magnolia officinalis, Malpighia glabra, Malus pumila, Malus domestica, Malus sylvestris, Malva sylvestris, Mangifera indica, Maranta arundinacea, Marrubium vulgare, Marsdenia cundurango, Marsdenia sylvestris, Mastocarpus stellatus, Matricaria chamomilla, Medicago sativa, Melaleuca alternifolia, Melaleuca cajuputi Powell, Melaleuca leucadendra, Melaleuca quinquenrvia, Melaleuca viridiflora, Melilotus altissimus Thuill., Melilotus officinalis, Mentha arvensis, Mentha x piperita, Menyanthes trifoliata, Mesembryanthemum crystallinum, Monarda didyma, Morinda citrifolia, Morinda officinalis, Morus alba, Morus nigra, Murraya koenigii, Musa x paradisiaca, Myrciaria dubia, Myristica flagrans Houtt., Myroxylon balsamum, Myrtus communis, Nardostachys jatamansi, Nasturtium officinale R. Br., Nelumbo nucifera Gaertn., Nepeta cataria, Nepeta tenuifolia Benth., Nigella sativa, Ocimum basilicum, Oenothera biennis, Ononis spinosa, ophiopogon japonicus, Opuntia ficus-indica, Origanum compactum Benth., Origanum majorana, Origanum vulgare, Orthosiphon aristatus, Oryza sativa, Paeonia lactiflora, Paeonia x suffruticosa Andrews, Palmaria palmata, Panax ginseng, Panax quinquefolius, Panicum miliacium, Papaver rhoeas, Parietaria officinalis, Passiflora edulis Sims, Pastinaca sativa, Paullinia cupana Kunth, Pelargonium graveolens, Perilla frutescens, Persea americana, Persicaria bistorta, Persicaria maculosa Gray, Petroselinum crispum, Peucadanum ostruthium, Peumus boldus Molina, Phaseolus vulgaris, Phellodendron amurense, Photinia melancarpa, Phyllanthus emblica, Physalis alkekengi, Phymatolithon calcareum, Picea abies, Pimenta dioca, Pimenta racemosa, Pimpinella anisum, Pimpinella major, Pimpinella saxfraga, Pinus mugo Turra, Pinus pinaster Aiton, Pinus sylvestris, Pistacia lentiscus, Plantago arenaria, Plantago lanceolata, Plantago major, Plantago ovata, Platycodon grandiflorus, Plectranthus barbatus Andrews, Pogostemom cablin, Polygala senega, Polygala sibirica, Polygala tenuifolia Willd., Polygonum aviculare, Populus nigra, Populus tremula, Populus tremuloides, Porphyra umbilicalis, Portulaca oleracea, Potentilla erecta, Primula veris, Prunella vulgaris, Prunus africana, Prunus armeniaca, Ribes nigrum, Ribes uva-crispa, Rosa canina, Rosa gallica, Rosa moschata, Rosa rubiginosa, Rosmarinus officinalis, Rubus caesius, Rubus fruticosus, Rubus idaeus, Rumex actetosa, Rumex acetosella, Rumex crispus, Rumex patienta, Ruscus aculeatus, Sachharina japonica, Saccharina latissima, Salix alba, Salix fragilis, Salix pentandra, Salix purpurea, Salvia officinalis L., Salvia officinalis subsp. lavandulifolia Gams, Salvia sclarea, Sambucus nigra, Sanguisorba officinalis, Sanicula elata Buch.-Ham. Ex D. Don, Santalum album, Santolina chamaecyparissus, Saposhnikovia divaricata, Sargassum fusiforme, Satureja hortensis, Satureja montana, Saussurea costus, Scrophularia ningpoensis Helmsl., Scutellaria baicalensis Georgi, Secale cereale, Sedum acre, Sedum roseum, Senna alexandrina Mill., Senna obustifolia, Smilax cordifolia Humb. & Bonpl, Smilax glabra Roxb., Smilax officinalis Kunth, Smilax purhampuy Ruiz, Smilax purhampuy Ruiz, Smilax regelli Killip & С.V. Morton, Smilax vanillidora Apt, Solanum melongena, Solanum tuberosum, Solidago virgaurea, Sorbus aucuparia, Spatholobus suberctus Dunn., Spinacia oleracea, Spirulina major , Spirulina maxima Geitler, Spirulina platensis Geitler, Stavhys officinalis, Stemmacantha carthamoides Dittrich, Stypholobium japonicum, Syzgium aromaticum, Tagetes erecta, Tamarindus indica, Tanacetum parthemium, Terminalia chebula Retz., Theobroma cacao, Thymus saturejoides Coss., Thymus serpyllum, Thymus vulgaris, Thymus zygis, Tilia cordata Mill., Tilia platyphyllos Scop., Tilia tomentosa Moench, Tilia euopaea, Tribulus terrestris, Trichosanthes kirilowii Maxim., Trifolium arvense, Trifolium campestre Schreb., Trifolium pratense, Trifolium repens, Trigonella caerulea, Trigonella foenum-graecum, Tricitum aestivum, Tricitum durum Desf, Tricitum spelta L., Tricitum turgidum, Tropaeolum majus, Turnera diffusa Willd., Ulmus glabra Huds., Ulmus glabra Huds., Ulmus pumila, Ulmus rubra Muhl., Ulva lactuca, Uncaria gambir Roxb., Uncaria rhynchophylla Miq., Uncaria tomentosa DC, Undaria pinnatifida Suringar, Urtica dioca, Urtica urens, Vaccinium macrocarpon, Vaccinium oxycoccos, Vaccinium vitis-idae, Valeriana jatamansi Jones, Valeriana officinalis, Vanilla planifolia Jacks, Verbascum densiflorum Bertol., Verbascum thapsus, Verbena officinalis, Veronica officinalis, Viburnum opulus, Vigna angularis Ohwi & H. Ohashi, Vinca major, Vinca minor, Viola palustris, Viola tricolor, Vitex agnus-castus, Vitex trifolia, Vitis vinifera, Zea mays, Zingiber officinale Roscoe, Ziziphus jujuba Mill.

Композиции согласно изобретению могут находиться в любой форме, особенно в форме порошка, геля, эмульсии или в форме жидкости, в частности в форме таблеток, облаток, желатиновых капсул, палочек, саше, флаконов, капельниц или в форме для инъекций.

Композиции согласно изобретению можно применять в качестве пищевых продуктов или оздоровительных продуктов, в частности, в качестве лекарственных средств.

Термин «пищевой продукт» означает продукт, обладающий питательным и/или физиологическим эффектом, он в особенности включает в себя пищевые добавки, продукты питания, диетические продукты и т.д. Эти продукты можно, в частности, вводить пероральным, внутрижелудочным или внутривенным путем.

Термин «оздоровительный продукт» означает любой продукт, оказывающий полезное действие на состояние здоровья при профилактике или лечении независимо от того, является ли это действие физиологическим или фармакологическим, особенно лекарственные средства, фармацевтические препараты. Эти продукты можно, в частности, вводить пероральным, внутрижелудочным, внутривенным или подкожным путем.

Композиции согласно изобретению можно применять для профилактики и/или для борьбы с расстройствами метаболизма углеводов и/или жиров у человека или животных.

Они особенно подходят для профилактики и/или борьбы с сахарным диабетом 2-го типа у человека или животных. В частности, они дают возможность предотвратить развитие хронической гипергликемии, снизить гликемию натощак и уровень гликировнного гемоглобина, циркулирующих и печеночных триглицеридов, массу тела и массу жировой ткани, повысить уровень холестерина липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) («полезного холестерина») и повысить толерантность к принимаемым внутрь углеводам и чувствительность к инсулину. Их можно применять профилактически при лечении сахарного диабета 2-го типа и в качестве терапии первой линии, в процессе принятия ГДМ, что, таким образом, позволяет отложить применение обычных пероральных противодиабетических молекул. Они также, в частности, подходят для лечения сахарного диабета 2-го типа и его осложнений, в особенности неалкогольного стеатогепатита (НАСГ), в качестве монотерапии или в комбинации с другими фармакологическими препаратами.

Композиции согласно изобретению можно также применять для профилактики и/или борьбы с сахарным диабетом 1-го типа и/или неалкогольных жировых заболеваний печени, в частности, неалкогольного стеатогепатита (НАСГ), и/или сердечно-сосудистых патологий, в частности, коронарных кардиопатий, цереброваскулярных заболеваний, периферических артериопатий, тромбоза глубоких вен и/или патологий, обусловленных инсулинорезистентностью, например, болезни Альцгеймера (Bedse G et al. Front Neurosci 2015; 9: 204).

Для таких применений композиции согласно изобретению можно применять в комбинации с по меньшей мере одним противодиабетическим терапевтическим средством, выбранным из бигуанидов, включающих метформин, ингибиторов дипептидилпептидазы-IV (DPP-IV), аналогов глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1), тиазолидиндионов (TZD), сульфонилмочевин, инсулинов короткого действия и длительного действия, ингибиторов глюкозидазы (акарбозы, миглитола, воглибозы), натрий-зависимого котранспортера глюкозы-2 (SGLT2), молекул семейства фибранора, таких как элафибранор, или молекул, нацеленных на ядерные рецепторы, и в особенности на рецепторы ROR (α, β, γ) и рецепторы Rev-Erb (α, β).

Композиции согласно изобретению можно также применять для воздействия на другие факторы риска сердечно-сосудистых заболеваний или метаболического синдрома.

В частности, композиции согласно изобретению можно применять для профилактики и/или для борьбы с дислипидемией. Они, в особенности, обладают гипохолестеринемическим эффектом и позволяют снизить общий уровень холестерина, уровень холестерина липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), циркулирующих триглицеридов и печеночных триглицеридов. Они также обладают ингибирующей активностью в отношении 3-гидрокси-3-метилглутарил-коэнзим А редуктазы (ГМГ-КоА).

Для таких применений композиции согласно изобретению можно применять в комбинации с гиполипидемическим терапевтическим средством, выбранным из: статинов, фибратов, никотиновой кислоты, ионообменных смол, ингибиторов всасывания холестерина, омега-3-полиненасыщенных жирных кислот, тиаденола и агонистов ядерного фарнезоидного рецептора X (FXR).

Наконец, композиции согласно изобретению можно применять, в частности, для профилактики или для борьбы с ожирением и избыточной массой тела, и/или метаболическим синдромом, и/или проблемами патологического артериального давления.

Теперь изобретение будет проиллюстрировано примерами экстрактов и композиций, а также результатами тестов, демонстрирующих эффективность композиций согласно изобретению, при этом эти примеры и тесты не являются ограничивающими.

I. Примеры

Пример 1: пример сухого экстракта Chrysanthellum indicum

Надземные части свежего или высушенного растения подвергают механическому измельчению до получения крупнодисперсного порошка. Затем этот порошок подвергают стадии мацерации в течение от 10 до 24 часов при комнатной температуре в смеси 70/10 вода/этанол, в затем полученную смесь подвергают непрерывному выщелачиванию при 50°С в перколяторе со смесью 70/10 вода/этанол, при этом отношение растение/экстракт составляет 3/1. Затем полученный экстракт подвергают жидкостно-жидкостным промываниям, используя неполярный органический растворитель, такой как дихлорметан или трихлорметан. После концентрирования путем выпаривания при низком давлении при 35°С получают жидкость, которая после лиофилизации в течение 24 часов образует порошок бежевого цвета, который растворим в смеси вода/спирт. Этот порошок (сухой экстракт) можно применять непосредственно или смешивать в подходящем растворителе перед применением.

Пример 2: пример сухого экстракта Vaccinium myrtillus

Чернику в форме порошка, полученного из плодов Vaccinium myrtillus, подвергают стадии мацерации в течение от 10 до 24 часов при комнатной температуре в смеси 30/50 вода/этанол, а затем полученную смесь подвергают непрерывному выщелачиванию при 50°С в перколяторе со смесью 30/50 вода/этанол, при этом отношение растение/экстракт составляет 10/1. Затем полученный экстракт подвергают жидкостно-жидкостным промываниям, используя неполярный органический растворитель, такой как дихлорметан или трихлорметан. После концентрирования путем выпаривания при низком давлении при 35°С получают жидкость, которая после лиофилизации в течение 24 часов образует порошок фиолетового цвета, который растворим в смеси вода/спирт.

Пример 3: пример сухого экстракта Cynara scolymus

Артишок в форме порошка, полученного из листьев Cynara scolymus, подвергают стадии мацерации в течение от 10 до 24 часов при комнатной температуре в воде, в затем полученную смесь подвергают непрерывному выщелачиванию при 50°С в перколяторе с водой, при этом отношение растение/экстракт составляет 2/1. Затем полученный экстракт подвергают жидкостно-жидкостным промываниям, используя неполярный органический растворитель, такой как дихлорметан или трихлорметан. После концентрирования путем выпаривания при низком давлении при 35°С получают жидкость, которая после лиофилизации в течение 24 часов образует порошок бежевого цвета, который растворим в смеси вода/спирт.

Пример 4: пример сухого экстракта Olea europaea

Высушенные на воздухе целые листья оливкового дерева измельчают при -80°С, используя ножевую мельницу, с получением мелкодисперсного и однородного порошка. Затем полученный порошок подвергают стадии мацерации в течение от 10 до 24 в смеси 70/30 вода/этанол. Эту стадию выполняют в закрытой системе с барботажем азотом при комнатной температуре, либо в микроволновом реакторе при мощности 800 Ватт, либо при ультразвуковой частоте 20 кГц в течение 2×3 мин. Затем полученную смесь подвергают непрерывному выщелачиванию при 50°С в перколяторе со смесью 70/30 вода/этанол, где отношение растение/экстракт составляет 10/1. Затем полученный экстракт подвергают жидкостно-жидкостным промываниям, используя неполярный органический растворитель, такой как дихлорметан или трихлорметан. После концентрирования путем выпаривания при низком давлении при 35°С получают жидкость, которая после лиофилизации в течение 24 часов образует порошок зеленого цвета, который растворим в смеси вода/спирт.

Пример 5: примеры единого экстракта

Хризантему в форме порошка, полученного из надземных частей Chrysanthellum indicum, артишок в форме порошка, полученного из листьев Cynara scolymus, чернику в форме порошка, полученного из плодов Vaccinium myrtillus, порошка плодов Piper nigrum и оливкового дерева в форме порошка, полученного из листьев Olea europaea, подвергают стадии мацерации в течение от 10 до 24 часов при комнатной температуре в смеси 40/60 вода/этанол, а затем полученную смесь подвергают непрерывному выщелачиванию при 50°С в перколяторе со смесью 40/60 вода/этанол, где отношение растения/единый экстракт составляет от 4 до 6/1. Затем полученный экстракт подвергают жидкостно-жидкостным промываниям, используя неполярный органический растворитель, такой как дихлорметан или трихлорметан. После концентрирования путем выпаривания при низком давлении при 35°С получают жидкость, которая после лиофилизации в течение 24 часов образует порошок фиолетового цвета, который растворим в смеси вода/спирт.

Пример 6: пример композиции согласно изобретению в форме таблеток, содержащей четыре экстракта растений

Композиция Примера 6 находится в форме таблеток, которые можно вводить перорально. Она содержит в масс. % относительно общей массы композиции 30,1% сухого экстракта надземных частей Chrysanthellum indicum, 30,1% сухого экстракта листьев Cynara scolymus, 3,0% сухого экстракта плодов Vaccinium myrtillus и 0,3% сухого экстракта плодов Piper nigrum. Она также содержит вспомогательные вещества, в частности микрокристаллическую целлюлозу и стеарат магния.

Композиция для трех таблеток указана в Таблице 1 ниже.

Пример 7: пример композиции согласно изобретению в форме желатиновых капсул, содержащей пять экстрактов растений

Композиция Примера 7 находится в форме желатиновых капсул, которые можно вводить перорально. Она содержит в масс. % относительно общей массы композиции 37,0% сухого экстракта надземных частей Chrysanthellum indicum, 37,0% сухого экстракта листьев Cynara scolymus, 3,7% сухого экстракта плодов Vaccinium myrtillus, 0,004% сухого экстракта плодов Piper nigrum и 22,2% сухого экстракта листьев Olea europaea.

Композиция для трех желатиновых капсул указана в Таблице 2 ниже.

Пример 8: пример композиции согласно изобретению в форме таблеток, содержащей пять экстрактов растений

Композиция Примера 8 находится в форме таблеток, которые можно вводить перорально. Она содержит в масс. % относительно общей массы композиции 22,0% сухого экстракта надземных частей Chrysanthellum indicum, 22,0% сухого экстракта листьев Cynara scolymus, 2,2% сухого экстракта плодов Vaccinium myrtillus, 13,2% сухого экстракта плодов Olea europaea и 0,2% сухого экстракта листьев Piper nigrum. Композиция также содержит дополнительно к смеси цинк, витамины В9, РР, В5, Н, В12, D, В6, В2, В2 и хром. Она также содержит вспомогательные вещества, в частности дикальция фосфат, микрокристаллическую целлюлозу и стеарат магния.

Композиция для одной таблетки указана в Таблице 3 ниже.

Пример 9: пример композиции согласно изобретению в форме таблеток, содержащей четыре экстракта растений

Композиция Примера 9 находится в форме таблеток, которые можно вводить перорально. Она содержит в масс. % относительно общей массы композиции 23,9% сухого экстракта целых растений Chrysanthellum indicum, 23,9% сухого экстракта листьев Cynara scolymus, 23,9% сухого экстракта плодов Vaccinium myrtillus и 0,2% сухого экстракта плодов Piper nigrum. Композиция также содержит витамин В1, витамин В3, пантотеновую кислоту (витамин В5), цинк и хром. В качестве вспомогательных веществ она содержит микрокристаллическую целлюлозу и дикальция фосфат. В качестве покрывающих веществ она содержит цинк, сахар, шеллак, повидон и пчелиный воск.

Композиция для трех таблеток указана в Таблице 4 ниже.

Пример 10: пример композиции согласно изобретению в форме порошка для разведения в воде, кондиционированного в форме палочек, содержащей четыре экстракта растений

Композиция Примера 10 находится в форме порошка для разведения в воде, кондиционированного в форме палочек, которую можно вводить перорально. Она содержит в масс. % относительно общей массы композиции 36,3% сухого экстракта целых растений Chrysanthellum indicum, 24,2% сухого экстракта корней Cynara scolymus, 36,3% сухого экстракта плодов Vaccinium myrtillus и 2,4% сухого экстракта плодов Piper longum. Композиция также содержит витамин В1, витамин В3, пантотеновую кислоту (витамин В5), цинк и хром. В качестве вкусоароматической добавки она содержит натуральную черничную вкусоароматическую добавку. В качестве подкислителя она содержит яблочную кислоту. В качестве вещества, препятствующего агломерации, она содержит диоксид кремния, в качестве загустителя - ксантановую камедь и в качестве стабилизатора - фосфат кальция.

Эта композиция указана в Таблице 5 ниже.

Пример 11: пример композиции согласно изобретению в форме порошка для разведения в воде, кондиционированного в форме палочек

Композиция Примера 11 находится в форме порошка для разведения в воде, кондиционированного в форме палочек, которую можно вводить перорально. Она содержит в масс. % относительно общей массы композиции 37,0% сухого экстракта надземных частей Chrysanthellum indicum, 37,0% сухого экстракта листьев Cynara scolymus, 3,7% сухого экстракта плодов Vaccinium myrtillus, 0,2% сухого экстракта плодов Piper nigrum и 22,2% сухого экстракта листьев Olea europaea. Композиция также содержит витамин В12 и хром. В качестве вкусоароматической добавки она содержит натуральную земляничную вкусоароматическую добавку. В качестве вещества, препятствующего агломерации, она содержит диоксид кремния. Данная композиция не содержит какого-либо вещества, препятствующего агломерации, и загустителя.

Композиция такого продукта указана в Таблице 6 ниже.

Пример 12: пример композиции согласно изобретению в форме желатиновых капсул

Композиция Примера 12 находится в форме желатиновых капсул, которые можно вводить перорально. Она содержит в масс. % относительно общей массы композиции 31,6% сухого экстракта надземных частей Chrysanthellum indicum, 47,4% сухого экстракта листьев Cynara scolymus, 15,8% сухого экстракта плодов Vaccinium myrtillus и 2,6% пиперина. Композиция также содержит витамин В3 и цинк. В качестве эмульгатора она содержит лецитин сои, полученный из продукции, не содержащей ГМО, в качестве загустителей - коллоидный диоксид кремния и моно- и диглицериды жирных кислот. Капсула представляет собой рыбный желатин с глицерином и красителем - оксидом железа красным.

Композиция такого продукта указана в Таблице 7 ниже.

Пример 13: пример композиции согласно изобретению в форме желатиновых капсул

Композиция Примера 13 находится в форме желатиновых капсул, которые можно вводить перорально. Она содержит в масс. % относительно общей массы композиции 10,4% сухого экстракта целых растений Chrysanthellum indicum, 20,7% сухого экстракта корней Cynara scolymus, 62,1% сухого экстракта плодов Vaccinium myrtillus и 2,6% пиперина. В качестве наполнителя она содержит кукурузный крахмал. В качестве вещества, препятствующего агломерации, она содержит диоксид кремния и стеарат магния. Желатиновая капсула имеет растительное происхождение.

Композиция такого продукта указана в Таблице 8 ниже.

Пример 14: пример композиции согласно изобретению в форме желатиновых капсул, содержащей единый экстракт

Композиция Примера 14 находится в форме желатиновых капсул, которые можно вводить перорально. Она содержит единый водно-спиртовой экстракт порошкообразной смеси, полученной из надземных частей Chrysanthellum indicum, из листьев Cynara scolymus, из плодов Vaccinium myrtillus, из плодов Piper nigrum и из листьев Olea europaea. Соотношение между тремя растениями составляет 1/1/0,1/0,0001/0,6.

Единый экстракт смеси растений получают способом, включающим следующие стадии:

- экстракция твердого вещества жидкостью

- разделение/прессование

- фильтрование

- выпаривание

- сушка

- необязательное введение добавок

- гомогенизация

- кондиционирование.

Пример 15: пример композиции согласно изобретению в форме таблеток, содержащей синтетические молекулы или молекулы, полученные из растительного сырья

Композиция Примера 15 находится в форме таблеток, покрытых пленочной оболочкой, которые можно вводить перорально. Она содержит в качестве активного вещества на одну таблетку: 50 мг апигенин-7-О-глюкуронида, 50 мг дикофеилхинной кислоты, 100 мг монокофеилхинной кислоты, 10 мг пиперина и 250 мг олеуропеина. Другие компоненты, используемые в качестве вспомогательных веществ, представляют собой: прежелатинизированный крахмал, натрий карбоксиметилкрахмал (типа А), стеариновую кислоту, повидон K90, безводный коллоидный диоксид кремния.

Активные вещества могут быть синтетическими, либо полученными из растительного сырья, либо полученными из экстрактов растений путем очистки высокоэффективной жидкостной хроматографией.

II. Оценка эффективности композиции in vivo

Для демонстрации эффекта композиций согласно изобретению, в частности, на гликемию натощак, гликированный гемоглобин, толерантность к углеводам, чувствительность к инсулину, массу тела и массу жировой ткани и на циркулирующие и печеночные жиры были проведены эксперименты на мышах in vivo. Также проводили молекулярно-биологические оценки. Наконец, композиции сравнивали с референсными фармакологическими препаратами, уже имеющимися на рынке или проходящими разработку.

Эксперименты проводили на мышах db/db. Мыши db/db имеют мутацию рецепторов лептина, вызывающую нарушение клеточной передачи сигнала последних. Рецепторы лептина претерпевают высокую экспрессию в гипоталамусе. Мыши, имеющие мутацию этих рецепторов, неспособны к эффективной регуляции запасания энергии. Это приводит в результате к высокой инсулинемии с первых дней жизни (10-14 дней) и ожирению с 3 до 4 недель с повышением гликемии. Эти мыши характеризуются резистентностью к инсулину, гипертриглицеридемией и непереносимостью глюкозы. Они составляют правильно подобранную и прогностическую модель, особенно для исследования чувствительности к инсулину, триглицеридемии, сахарного диабета 2-го типа и одного из его осложнений, неалкогольного стеатогепатита (НАСГ) (Aileen JF King Br J Pharmacol 2012; 166(3): 877-894; Sanches SC et al. Biomed Res Int 2015).

II.1 Тесты A

Время эксперимента составляло девять недель с вступительным периодом в одну неделю с последующими восемью неделями введения добавки экстрактов растений и композиции X. В начале эксперимента возраст самцов мышей составлял десять недель.

Было протестировано девять композиций X. Эти композиции непосредственно включали в корм для грызунов, что дало возможность обеспечить их «многоцелевую» эффективность и широкомасштабное применение этой композиции, поскольку внутривенные или внутрибрюшинные инъекции ограничены небольшим числом людей, осуществляющих этот способ введения. Это также позволило избежать ежедневного принудительного кормления, которое изменяет различные физиологические процессы.

Тестируемые композиции были следующими:

С1: Chrysanthellum indicum (целое растение) плюс пиперин (1% и 0,1% корма соответственно);

С2: Cynara scolymus (листья) плюс пиперин (1% и 0,1% корма соответственно);

С3: Vaccinium myrtillus (плоды) плюс пиперин (1% и 0,1% корма соответственно);

С4: Chrysanthellum indicum (целое растение) плюс Cynara scolymus (листья) плюс Vaccinium myrtillus (плоды) плюс пиперин (1%, 1%, 1% и 0,1% корма соответственно);

С5: пиперин (0,1% корма соответственно);

С6: Chrysanthellum indicum (целое растение) плюс Cynara scolymus (листья) плюс Vaccinium myrtillus (плоды) плюс пиперин (1%, 1% и 1% корма соответственно);

С7: Chrysanthellum indicum (целое растение) плюс Cynara scolymus (листья) плюс Vaccinium myrtillus (плоды) плюс пиперин (1%, 1%, 1% и 0,001% корма соответственно);

С8: Olea europaea (листья) (0,6% корма соответственно);

С9: Chrysanthellum indicum (целое растение) плюс Cynara scolymus (листья) плюс Vaccinium myrtillus (плоды) плюс пиперин плюс Olea europaea (листья) (1%, 1%, 1%, 0,001%, 0,6% корма соответственно);

Термин «пиперин» означает либо синтетический пиперин, либо стандартизованный экстракт Piper, содержащий 95% пиперина. Что касается других растений, они представляют собой сухие экстракты, полученные из растительного сырья.

Эксперименты проводили в несколько стадий. В результате было создано несколько групп «контроля без ограничений». Результаты, полученные для этих групп, объединяли. Композиции С1, С2, С3, С4, С5, С8 и С9 вызывали сходное уменьшение потребления пищи. В результате была создана группа «контроля с одинаковым кормлением», т.е. группа, потребляющая такое же количество пищи в день, как и группы С1, С2, С3, С4, С5, С8 и С9, чтобы можно было сравнивать результаты эквивалентного потребления пищи.

Экспериментальные оценки, в частности, были сосредоточены на:

Измерении массы тела;

Измерении гликемии натощак;

Изменении гликемии во время перорального теста на толерантность к углеводам. После принудительного скармливания крахмала (3 г/кг) в состоянии натощак изменение гликемии в ответ на крахмал измеряли в хвосте путем биопсии непосредственно перед принудительным скармливанием (t0), а затем через 30, 60, 90 и 120 минут. Рассчитывали площадь под кривой (AUC). Увеличение AUC отражает непереносимость углеводов, снижение отражает улучшение толерантности к углеводам.

Для композиций С7-С9 также проводили тест на чувствительность к инсулину. Тест состоял во внутрибрюшинной инъекции инсулина (2 ед/кг) в состоянии натощак. Изменение гликемии в ответ на инъекцию инсулина измеряли в хвосте путем биопсии непосредственно перед инъекцией (t0), а затем через 30, 60, 90 и 120 минут. Рассчитывали площадь под кривой (AUC). Уменьшение AUC отражает лучший ответ на инъекцию инсулина и, таким образом, улучшение чувствительности к инсулину. Напротив, увеличение AUC отражает худшую чувствительность к инсулину и, следовательно, инсулинорезистентность.

Представленные оценки были проведены непосредственно перед введением добавки (t равно 0) и по окончании введения добавки (t равно 8 недель).

Полученные результаты представлены в таблицах:

Таблица 9 - эффект, оказываемый на чувствительность к инсулину через восемь недель введения,

Таблица 10 - эффект, оказываемый на гликемию натощак через восемь недель введения,

Таблица 11 - эффект, оказываемый на толерантность к углеводам через восемь недель введения,

Таблица 12 - эффект, оказываемый на массу тела через восемь недель введения.

Чувствительность к инсулину

Средние значения ±SEM. Контроль без ограничений, n равно 20; С7, n равно 11; С8, n равно 10; С9, n равно 9. Композиция по сравнению с контролем, t критерий Стьюдента для непарных данных, ^** р менее 0,01.

Результаты, представленные в Таблице 9, также проиллюстрированы на Фиг. 1. Эти результаты показывают в высокой степени статистически значимое и сильное воздействие композиций С7 и С9 на чувствительность к инсулину. Улучшение чувствительности к инсулину композициями С7 и С9 согласно изобретению обладает особым преимуществом при профилактике и лечении сахарного диабета 2-го типа и его осложнений. В частности, инсулинорезистентность является одном из основных механизмов прогрессирования сахарного диабета 2-го типа (Samuel VT et al. Cell 2012; 148: 852-71). Кроме того, посредством воздействия на данный показатель композиции С7 и С9 согласно изобретению, в частности, подходят при других патологиях, при которых одной из основных причин является инсулинорезистентность. В частности, это применимо для одного из осложнений сахарного диабета 2-го типа, неалкогольного стеатогепатита (НАСГ; Samuel VT et al. Cell 2012; 148: 852-71) и болезни Альцгеймера (Bedse G et al. Front Neurosci 2015; 9: 204).

Гликемия натощак

Средние значения ±SEM. контроль без ограничений, n равно 32; контроль одинакового кормления, n равно 10; С1, n равно 9; С2, n равно 9; С3, n равно 9; С4, n равно 8; С5, n равно 9; С6, n равно 14; С7, n равно 12; С8, n равно 12; С9, n равно 9. Композиция по сравнению с контролем, t критерий Стьюдента для непарных данных, ^* р менее 0,05, ^** р менее 0,01.

Композиции С1, С2, С3, С4, С5, С8 и С9 вызывали уменьшение потребления пищи. В результате была создана группа, потребляющая такое же количество пищи. Результаты показывают, что налагаемое на животных ограничение по количеству калорий не оказывало воздействия на гликемию натощак (сравнение контроля без ограничений с контролем одинакового кормления). Композиции С1, С3, С4 и С9 вызывали статистически значимое снижение гликемии натощак, при этом наиболее выраженное действие наблюдали при введении композиции С4 (1% Chrysanthellum indicum, 1% Cynara scolymus, 1% Vaccinium myrtillus, 0,1% пиперина) и C9 (1% Chrysanthellum indicum, 1% Cynara scolymus, 1% Vaccinium myrtillus, 0,001% пиперина, 0,6% Olea europaea).

Композиция C6 (1% Chrysanthellum indicum, 1% Cynara scolymus, 1% Vaccinium myrtillus) не оказывала воздействия на гликемию натощак. Добавление пиперина (0,1%), хотя он (С5) не вызывал статистически значимого снижения гликемии натощак, в комбинацию С6 с получением комбинации С4 неожиданно дало возможность статистически значимого и сильного снижения гликемии натощак. Подобным образом, добавление Olea europaea (0,6%; С8) в комбинацию С7 (1% Chrysanthellum indicum, 1% Cynara scolymus, 1% Vaccinium myrtillus, 0,001% пиперина) с получением композиции С9 также дало возможность сильного снижения гликемии до уровня, практически сходного с уровнем мышей без сахарного диабета.

Толерантность к углеводам

Средние значения ±SEM. контроль без ограничений, n равно 22; контроль одинакового потребления, n равно 10; С1, n равно 9; С2, n равно 8; С3, n равно 10; С4, n равно 8; С5, n равно 9; С6, n равно 14; С7, n равно 12; С8, n равно 10; С9, n равно 9. AUC: «площадь под кривой». Композиция по сравнению с контролем, t критерий Стьюдента для непарных данных,^* р менее 0,05, ^** р менее 0,01.

Композиции С1, С2, С3, С4, С5, С8 и С9 вызывали уменьшение потребления пищи. В результате была создана группа, потребляющая такое же количество пищи. Результаты показывают, что налагаемое на животных ограничение по количеству калорий не оказывало воздействия на толерантность к углеводам (сравнение контроля без ограничений с контролем одинакового потребления). Композиции С1, С2, С3, С4, С5, С8 и С9 вызывали статистически значимое уменьшение AUC, что отражает улучшение толерантности к углеводам. Наиболее выраженный эффект получен с комбинациями С4 и С9.

Масса тела

Средние значения ±SEM. контроль без ограничений, n равно 34; контроль в соответствии с приемом пищи, n равно 10; С1, n равно 9; С2, n равно 9; С3, n равно 9; С4, n равно 8; С5, n равно 9; С6, n равно 14; С7, n равно 12; С8, n равно 10; С9, n равно 9. Композиция по сравнению с контролем, t критерий Стьюдента для непарных данных, ^* р менее 0,05, ^** р менее 0,01, ^*** р менее 0,0001.

Композиции C1, C2, С3, C4, C5, C8 и C9 вызывали уменьшение потребления пищи. В реузльтате была создана группа, потребляющая такое же количество пищи. Результаты показывают, что налагаемое на животных ограничение по количеству калорий вызывало статистически значимое снижение массы тела (сравнение контроля без ограничений с контролем одинакового потребления, р менее 0,05). Композиции С1, С2, С3, С4, С5, С8 и С9 также вызывали статистически значимое уменьшение массы тела. Если комбинация С6 не оказывала воздействия на гликемию натощак, она вызывала сильное и статистически значимое снижение массы тела, что дает ей преимущество в профилактике и лечении ожирения. Комбинация С9 имеет наиболее выраженный эффект.

Синергический эффект

Дополнительно была проведена оценка синергического эффекта в соответствии со способом Colby SR, описанном в статье «Calculation of the synergistic and antagonistic responses of herbicide combinations» Weeds, 1967, 15: 20-22. Этот способ был, в частности, использован в патенте ЕР 03812880. Для каждой комбинации вычисляли коэффициент синергизма. Коэффициент более 1 указывает на наличие синергического эффекта. Коэффициент менее 1 указывает на наличие антагонизма. Вычисления проводили следующим образом:

Ожидаемая степень эффективности = А + В - (А * В/100)

Коэффициент синергизма (SF) = (1 * наблюдаемая степень эффективности

(%))/ожидаемая степень эффективности (%)

Вычисления относятся к следующим комбинациям: Вычисление SF для комбинации 1% Chrysanthellum indicum/1% Cynara scolymus/1% Vaccinium myrtillus/0,1% пиперина (композиция C4), в которой A представляет собой 1% Chrysanthellum indicum/1% Cynara scolymus/1% Vaccinium myrtillus (C6) и В представляет собой пиперин (С5);

Вычисление SF для комбинации 1% Chrysanthellum indicum/1% Cynara scolymus/1% Vaccinium myrtillus/0,001% пиперина/0,6% Olea europaea (композиция C9), в которой А представляет собой 1% Chrysanthellum indicum/1% Cynara scolymus/1% Vaccinium myrtillus/0,001% пиперина (композиция C7) и В представляет собой 0,6% Olea europaea (композиция С8).

В Таблице 13 ниже приведены результаты для С6+С5=С4.

Результаты, представленные в Таблице 13, также проиллюстрированы на Фиг. 2 и 3. Для композиции С4 согласно изобретению продемонстрировано наличие сильного синергического эффекта как в отношении гликемии натощак, так и в отношении толерантности к углеводам (AUC).

В Таблице 14 ниже приведены результаты для С7+С8=С9.

Результаты, представленные в Таблице 14, также проиллюстрированы на Фиг. 4, 5 и 6. Для композиции С9 согласно изобретению продемонстрировано наличие сильного синергического эффекта в отношении гликемии натощак, в отношении толерантности к углеводам (AUC), а также в отношении чувствительности к инсулину (AUC). Это происходит даже несмотря на то, что С7 уже обладает сильным и статистически значимым эффектом на улучшение чувствительности к инсулину.

II.2 Тесты В

Другая композиция, С10, была разработана и протестирована in vivo: Chrysanthellum indicum (надземная часть, сухой экстракт) плюс Cynara scolymus (листья, сухой экстракт) плюс Vaccinium myrtillus (плоды, сухой экстракт) плюс Piper nigrum (плоды, сухой экстракт) плюс Olea europaea (листья, сухой экстракт).

Более конкретно, композиция С10 была протестирована in vivo в сравнении с метформином, являющимся стандартной терапевтической молекулой при лечении сахарного диабета 2-го типа, на той же модели, как для тестов А (мыши db/db). С помощью этой прогностической модели мышей с сахарным диабетом и при включении композиции С10 непосредственно в корм для грызунов (1% Chrysanthellum indicum, 1% Cynara scolymus, 0,1% Vaccinium myrtillus, 0,001% Piper nigrum и 0,6% Olea europaea от корма) можно гарантировать «многоцелевую» эффективность и широкомасштабное применение этой композиции, поскольку внутривенные или внутрибрюшинные инъекции ограничены небольшим числом людей, осуществляющих этот способ введения.

Время эксперимента составляло семь недель с «вступительным» периодом, составляющим одну неделю, с последующими шестью неделями введения добавки композиции С10. Возраст самцов мышей в начале эксперимента составлял шесть недель. Оценки были проведены непосредственно перед введением добавки (t равно 0), раз в неделю для некоторых показателей и по окончании введения добавки (t равно 6 недель).

Экспериментальные оценки, в частности, относились к:

Измерению потребления пищи (недели t1, t2, t3, t4 и t5);

Измерению массы тела (недели t0, t1, t2, t3, t4, t5, t6);

Измерению массы жировой ткани и массы нежировых тканей с помощью МРТ (магнитно-резонансной томографии; недели t0 и t6);

Измерению гликемии натощак (недели t0, t1, t2, t3, t4, t5, t6);

Измерению уровня гликированного гемоглобина (HbA1c; неделя t6);

Чувствительности к инсулину (тест, идентичный проведенному в Тестах А; недели t0 и t6);

Толерантности к углеводам (тест, идентичный проведенному в Тестах А; недели t0 и t6);

Измерению уровня триглицеридов в печени и сыворотке крови (неделя t6);

Измерению уровня холестерина-ЛПВП в сыворотке крови (неделя t6).

Все эти оценки в целом знакомы специалистам в данной области техники.

Результаты представлены ниже в Таблице 15: Важно учитывать, что количество метформина, принимаемое мышами внутрь в сутки, было примерно на 26% больше, чем общее количество молекул, присутствующих в композиции С10 согласно изобретению. Иными словами, вводимая доза метформина превышала дозу суммарных молекул, присутствующих в композиции С10.

Средние значения ±SEM. Контроль, n равно 10; Метформин, n равно 11; С10, n равно 10. t критерий Стьюдента для непарных данных. ^а: С10 по сравнению с контролем, р менее 0,05. ^b: С10 по сравнению с метформином, р менее 0,05.

На Фиг. 7 более подробно проиллюстрированы эффекты метформина и композиции С12 согласно изобретению на чувствительность к инсулину.

Результаты, проиллюстрированные в Таблице 15, демонстрируют крайне обширный и неожиданный эффект композиции С10 согласно изобретению, оказываемый на группу факторов риска метаболического синдрома - избыточную массу тела, ожирение, сахарный диабет, неалкогольный стеатогепатит (НАСГ) и сердечно-сосудистые заболевания, а именно:

Снижение массы тела за счет уменьшения массы жировой ткани, не влияющее на нежировую ткань;

Снижение гликемии натощак и уровня гликированного гемоглобина;

Улучшение толерантности к углеводам;

Улучшение чувствительности к инсулину;

Снижение уровня триглицеридов в печени и сыворотке крови;

Повышение уровня холестерина-ЛПВП («полезного холестерина»).

Композиция согласно изобретению не только приводит к снижению всей группы факторов риска, но, более того, к их коррекции до уровня, практически эквивалентного уровню у мышей без сахарного диабета (здоровых мышей). Иными словами, изобретение позволяет предупредить установление и прогрессирование сахарного диабета 2-го типа.

На Фиг. 8 и 9 проиллюстрированы эффекты композиции С10 согласно изобретению, оказываемые на изменение массы тела и не гликемию натощак по сравнению с контрольной группой. Композиция С10 приводит к устойчивому ограничению прироста массы тела и предотвращает развитие гликемии.

Кроме того, ее эффекты намного превосходят эффект метформина, являющегося основным противодиабетическим лекарственным средством (Ferrannini Е et al. Eur Heart J 2015; Jun 10; пример: GLUCOPHAGE®), и продемонстрировано отсутствие побочных эффектов на циркулирующие жиры в отличие от ОХК (обетихолевой кислоты, агониста фарнезоидного рецептора X (FXR), предназначенной для лечения сахарного диабета 2-го типа и НАСГ (неалкогольного стеатогепатита)), разработанной компанией INTERCEPT, которая приводит к резкому снижению уровня циркулирующего холестерина-ЛПВП («полезного холестерина») (-0,2 г/л, р менее 0,01). Как раз наоборот, композиция согласно изобретению приводит к повышению уровня холестерина-ЛПВП на 50,3%.

Кроме того, эффект композиции согласно изобретению превышает эффект лекарственного средства-кандидата, разработанного компанией GENFIT, GFT 505 (Элафибранора), на уровень гликированного гемоглобина (HbA1c), основной диагностический индикатор сахарного диабета 2-го типа и его патологических осложнений: композиция С10, HbA1c составляет 4% по сравнению с GFT 505, HbA1c составляет 6% для самой высокой дозы (та же модель db/db и сходное построение эксперимента; Hanf R et al. Diab Vasc Dis Res 2014; 11: 440-7). Дополнительное снижение HbA1c на 1% уменьшает риск инфаркта на 14%, сердечно-сосудистых заболеваний на 37% и ампутаций на 43%.

Кроме того, композиция согласно изобретению приводит к задержке или даже прекращению дегенерации бета-клеток поджелудочной железы, которые представляют собой клетки, отвечающие за секрецию инсулина в ответ на возрастание гликемии. В частности, сахарный диабет 2-го типа вызывает постепенную деградацию бета-клеток поджелудочной железы, отчасти обусловленную хронической гипергликемией. Это отражается повышением секреции инсулина на первых стадиях заболевания для снижения гликемии (повышение инсулинемии) с последующим постепенным снижением его секреции (пониженной циркулирующей инсулинемии) вследствие постепенного разрушения бета-клеток (Leahy JL et al. J Clin Invest 1985; 77: 908-915). Полученные результаты надежно подтверждают эффект композиции С10 на бета-клетки поджелудочной железы. В частности, после шести недель введения добавки инсулинемия в группе, которой вводили добавку композиции С10 согласно изобретению, была выше по сравнению с контролем (27,40±4,11 по сравнению с 9,64±2,53 нг/мл, р менее 0,01, соответственно), что отражает значительно отличающуюся стадию прогрессирования сахарного диабета: прогрессировавший сахарный диабет с разрушением бета-клеток в контрольной группе (низкая инсулинемия, высокая гликемия натощак, высокий уровень HbA1c) и лишь незначительно прогрессировавший сахарный диабет или даже отсутствие сахарного диабета в группе с функциональными бета-клетками, которой давали композицию С10 согласно изобретению (высокая инсулинемия, низкая гликемия, низкий уровень HbA1c).

Таким образом, изобретение полностью удовлетворяет потребность в новых профилактических мерах и терапевтических решениях с учетом многофакторной природы кардио-метаболических расстройств. Данное изобретение представляет собой огромный прогресс в значительном устранении развития метаболических заболеваний и их патологической природы.

Были также проведены молекулярно-биологические измерения показателей печени. Эти оценки проводили через шесть недель введения и после умерщвления животных. В частности, определяли количества печеночной АМФ-активируемой протеинкиназы (АМФК) с помощью Вестерн-блоттинга. АМФК считают метаболическим сенсором. АМРК, являющаяся универсальным ферментом, участвует в координированной регуляции энергетического метаболизма, потребления пищи и чувствительности тканей к ответу на различные метаболические и гормональные сигналы. Эти свойства, таким образом, обеспечивают ее роль в качестве ведущей фармакологической мишени в области применения для лечения метаболических заболеваний (сахарного диабета, инсулинорезистентности, ожирения) и в области кардиологии (ишемическая болезнь сердца, осложнения, обусловленные сахарным диабетом) (Coughlan KA et al. Diabetes Metab Syndr Obes 2014; 7: 241-53). Увеличение количеств АМФК составляет стратегию первичного интереса в идентификации и валидации видов терапии сахарного диабета 2-го типа и его осложнений (в особенности, неалкогольного стеатогепатита) и в более глобальном аспекте - патологий, относящихся к метаболическим расстройствам.

Результаты исследований печени показывают, что композиция С10 согласно изобретению индуцирует значительное увеличение количества АМФК (контроль n равно 9, 1,00±0,22 по сравнению с С10 n равно 9, 1,96±0,73, р менее 0,001, U критерий Манна-Уитни). Эти результаты проиллюстрированы методом вестерн-блоттинга и отржены на Фиг. 10.

Экспериментальный протокол, который может быть выполнен любым специалистом в данной области техники, приведен ниже.

АМФК

Выделение белка

50 мг замороженной ткани (печени) помещали в 20 объемов буфера NP-40 (50 мМ Трис HCl, рН: 7,4, 150 мМ NaCl, 1 мМ NaF, 1 мМ Na₃VO₄, 1% Нонидет Р-40, 0,25% дезоксихолат натрия) в присутствии 1 мкл смеси ингибиторов протеаз (Р8340, Sigma-Aldrich) и таблеток ингибиторов фосфатаз (#88667 Thermo Fisher Scientific, США). Ткани гомогенизировали во льду с использованием стеклянного гомогенизатора Поттера, а затем центрифугировали при 14000 g в течение 10 минут при 4°С, после чего отделяли супернатант. Содержание белка супернатанта количественно определяли с помощью набора Bio-Rad DC (Bio-Rad, США), а затем все исследуемые образцы приводили к одинаковой стандартной концентрации, после чего разводили второй раз в 2Х буфере Лэммли и нагревали при 90°С в течение 3 минут.

Блоттинг

Для каждого теста шкалу молекулярной массы и внутренний контроль наносили рядом с 15 мкг каждого исследуемого образца на полиакриламидный градиентный гель (гель 4-15% Mini-PROTEAN® TGX Stain-Free™, BioRad, США). Затем гели подвергали действию электрического тока 300 В в течение от 18 до 20 минут в буфере для электрофореза (25 мМ Трис, 192 мМ глицин, 0,1% додецилсульфат натрия (SDS)), а затем белки переносили на мембрану из поливинилиденфторида (PVDF) с помощью полужидкостной системы переноса (Transblot, Bio-Rad, США) при постоянном электрическом токе 25 В и 2,5 А в течение 7 минут. Затем мембраны инкубировали в буферном физиологическом растворе с Твин и Трис (TTBS: 50 мМ Трис основание рН: 7,5, 150 мМ NaCl и 0,01% Твин 20) с добавлением 5% бычьего сывороточного альбумина (BSA) в течение 1 часа при комнатной температуре. Затем мембраны промывали TTBS, после чего инкубировали в течение ночи при 4°С с антителами к АМФКα (D63G4, Cell Signaling, США). После инкубации мембраны снова промывали TTBS, после чего подвергали воздействию вторичного антикроличьего антитела, конъюгированного с пероксидазой хрена, в концентрации 1:3000 в течение одного часа при комнатной температуре. Затем мембраны промывали три раза TTBS, после чего подвергали воздействию хемилюминесцентного раствора (Clarity Western ECL; Bio-Rad, США) в течение одной минуты. Затем мембраны сканировали на системе Bio-Rad Chemidoc, и интенсивность полос измеряли с помощью программного обеспечения для анализа изображений (ImageLab V4.1, Bio-Rad, США).

II.3 Тест С

Одним из основных недостатков многих терапевтических молекул, имеющихся в настоящее время в продаже, является их острый гипогликемический эффект с высоким риском гипогликемии. Для тестирования острого гипогликемического эффекта композиции С10 согласно изобретению композицию вводили путем принудительного кормления (400 мг/кг) шести здоровым мышам C57BL/6N. Гликемию измеряли путем биопсии хвоста до и после принудительного кормления (минуты t0, t15, минута t30). Кроме того, согласно перекрестному протоколу, те же мыши получали путем принудительного кормления физиологический раствор с измерениями гликемии (минуты t0, t15, минута t30). Результаты, представленные на Фиг. 11, демонстрируют отсутствие острого гипогликемического эффекта композиции С10 согласно изобретению.

II.4 Тест D

Композицию С11 единого экстракта (водно-спиртового сухого экстракта), полученного из порошка надземных частей Chrysanthellum Indicum, листьев Cynara scolymus, плодов Vaccinium myrtillus, плодов Piper nigrum и листьев Olea europaea (отношение 1/1/0,1/0,0001/0,6) тестировали на той же модели мышей с сахарным диабетом, которую использовали в тестах А и В.

Время эксперимента составляло 6 недель с «вступительным» периодом, составляющим одну неделю, с последующими пятью неделями введения добавки композиции С11. Возраст самцов мышей в начале эксперимента составлял шесть недель. Оценка была сосредоточена, в основном, на изменении массы тела. Измерения проводили непосредственно перед введением добавки (t равно 0), раз в неделю для некоторых показателей и по окончании введения добавки (t равно 5 недель). Композицию включали в корм для грызунов, и ее доля составляла 2,7% корма (такое же количество, как для композиции С10).

На Фиг. 12 проиллюстрированы эффекты композиции С11 согласно изобретению, оказываемые на изменение массы тела по сравнению с контрольной группой. Композиция С11 согласно изобретению приводит к значительному ограничению прироста массы тела.

III. Оценка эффективности композиции in vitro

Для демонстрации эффектов композиций С10 и С11 согласно изобретению также проводили эксперименты in vitro. Также было проведено тестирование композиции С12 комбинации молекул согласно изобретению: дикофеилхинная кислота плюс апигенин-7-О-глюкуронид плюс монокофеилхинная кислота плюс олеуропеин плюс пиперин (отношение 1/1/1/1/0,001).

Различные тесты на ферментативную активность были проведены, чтобы определить, ингибируют ли композиции согласно изобретению стратегические ферменты метаболизма углеводов и жиров: альфа-глюкозидазу, дипептидилпептидазу-IV (DPP-IV) и 3-гидрокси-3-метилглутарил-коэнзим А редуктазу (ГМГ-КоА). Воздействие на все эти стратегические мишени позволяет оказывать глобальную медицинскую помощь при сахарном диабете 2-го типа и его осложнениях (диабетической стопе, ретинопатии, потере зрения, нефропатии, сердечно-сосудистых эпизодах, неалкогольном стеатогепатите, или НАСГ).

Редуктаза ГМГ-КоА

Для контроля циркулирующих жиров необходимо снижение концентрации холестерина в сыворотке крови путем в основном таргетирования ингибирования биосинтеза холестерина (ингибирования 3-гидрокси-3-метилглутарил-коэнзим А редуктазы или ГМГ-КоА редуктазы). Правастатин является одной из референсных молекул для снижения уровней холестерина-ЛПНП и общего холестерина. В частности, он имеется в продаже под названиями ELISOR®, ПРАВАСТАТИН МИЛАН, VASTEN®, ПРАВАСТАТИН ТЕВА.

альфа-Глюкозидаза

альфа-Глюкозидаза представляет собой фермент, который катализирует конечную стадию в процессе расщепления углеводов. Ингибиторы альфа-глюкозидазы (примеры лекарственных препаратов, включенных в данную категорию: GLUCOR®, DIASTABOL®) применяют для снижения постпрандиальной гликемии, которую рассматривают как фактор риска, независимый от макрососудистых осложнений сахарного диабета (Kim JS et al. Biosci Biotechnol Biochem 2000: 64: 2458-61).

DPP-IV (дипептидилпептидаза-IV)

Ингибиторы DPP-IV рассматривают как одну из наиболее перспективных стратегий медицинской помощи при сахарном диабете 2-го типа (von Geldern TW et al. Drug Development Research 2006; 67: 627-42). DPP-IV быстро инактивирует гормоны GLP-1 (глюкагоноподобный пептид-1) и GIP (глюкозозависимый инсулинотропный полипептид), также известные как инкретины. Ингибирование DPP-IV позволяет, в частности, усилить действие GLP-1 и GIP, таким образом, предоставляя возможность физиологической стимуляции секреции инсулина и ингибирования секреции глюкагона поджелудочной железой, и, следовательно, снижения гликемии. Кроме того, ингибирование DPP-IV способствует опорожнению желудка и вызывает центральный анорексигенный эффект. Таким образом, ингибирование DPP-IV предоставляет возможность для лучшего регулирования уровня углеводов в случае индивидов, страдающих сахарным диабетом. В клинических исследованиях, кроме того, показано, что ингибиторы DPP-IV обладают высокой эффективностью с хорошей переносимости при лечении гипергликемии в случае индивидов, страдающих сахарным диабетом 2-го типа, при этом не вызывая явлений прибавления массы тела и гипогликемии (Green BD et al. Diabetes Vasc Dis Res 2006; 3: 159-65). Одним из стандартных ингибиторов является дипротин А.

Для оценки ингибиторного потенциала композиций С10, С11 и С12 использовали следующий экспериментальный протокол:

Получение экстрактов, смесей экстрактов и смеси чистых синтетических молекул

Для тестов на ингибирование ГМГ-КоА редуктазы и глюкозидаз экстракты растений разводили в смесях сверхчистая вода/этанол, доли которых варьировали в зависимости от типа экстракта таким образом, чтобы получить гомогенные растворы.

После гомогенизации исследуемые образцы центрифугировали при 4000 об/мин в течение 10 минут и отделяли супернатанты (центрифуга 1-15 Fisher Bioblock Scientif, Sigma-Aldrich®). Молекулы разводили либо в смеси 90/10 (об./об.) сверхчистая вода/ДМСО, либо в смеси 50/50 (об./об.) сверхчистая вода/этанол.

Смеси нескольких экстрактов растений разводили в смеси 50/50 (об./об.) вода/этанол, а затем обрабатывали ультразвуком в течение 15 минут таким образом, чтобы гомогенизировать среду (использовали ультразвуковой датчик UP50H Hielscher® при максимальной мощности). Наконец, их центрифугировали при 4000 об/мин в течение 10 минут и отделяли супернатанты (центрифуга 1-15 Fisher Bioblock Scientif, Sigma-Aldrich®).

В случае тестирования DPP-IV исследуемые образцы разводили либо в буфере Тризма-HCl (рН 8,0; 100 мМ), либо в смеси 90/10 (об./об.) сверхчистая вода/ДМСО.

Тест на ингибирование ГМГ-КоА редуктазы

Этот тест позволяет измерять эффективность ингибирования ферментативной активности на основании снижения поглощения со временем при λ равной 340 нм. Механизм реакции является следующим:

ГМГ-КоА + 2НАДФ-Н + 2Н⁺ → мевалонат + 2НАДФ⁺ + KoA-SH

Таким образом, отслеживают исчезновение субстрата НАДФ-Н (поглощение при 340 нм). Об ингибировании фермента свидетельствует уменьшение изменения поглощения при 340 нм со временем относительно контрольной реакции без ингибитора (100% активность).

На первом этапе необходимо приготовить растворы из набора Sigma®:

поставляемый в наборе 5× буфер необходимо развести до концентрации 1× в сверхчистой воде;

НАДФ-Н растворяют путем добавлением 1× буфера, а затем распределяют в пробирки по 100 мкл;

исходный раствор фермента распределяют в аликвотах по 25 мкл.

Буфер и НАДФ-Н хранили при -20°С, а аликвоты фермента хранили при -80°С до момента использования.

Действия осуществляли непосредственно в 96-луночных микропланшетах (NUNC96 или SARSTEDT96). Буферы, субстраты, ингибиторы и фермент добавляли в определенном порядке (см. ниже). Для каждого микропланшета было необходимо приготовить холостую пробу, контроль и различные исследуемые образцы. Каждый элемент готовили в двух повторностях (или даже в трех):

приготовление холостой пробы: 24 мкл растворителя, используемого для образцов, 12 мкл ГМГ-КоА, 158 мкл 1× буфера, 4 мкл НАДФ-Н; инкубация при 37°С, от 3 до 5 мин;

приготовление отрицательного контроля: 24 мкл растворителя, используемого для образцов, 12 мкл ГМГ-КоА, 158 мкл 1× буфера, 4 мкл НАДФ-Н; инкубация при 37°С, от 3 до 5 мин; добавление 2 мкл фермента;

приготовление исследуемого образца: 24 мкл образца потенциального ингибитора, 12 мкл ГМГ-КоА, 158 мкл 1× буфера, 4 мкл НАДФ-Н; инкубация при 37°С, от 3 до 5 мин; добавление 2 мкл фермента.

После подготовки планшета отслеживали кинетику реакции в считывающем устройстве для микропланшетов (BMG Labtech) в течение 16 минут, 25 секунд, при этом значения считывали каждые 25 секунд при А равной 340 нм, т.е. всего 40 циклов. На основании этих значений можно вычислить процент ингибирования.

Тест на ингибирование α-глюкозидаз

Тесты на ингибирование α-глюкозидазы выполняли путем мониторинга методом спектрофотометрии при λ равной 405 нм образования продукта желтого цвета пара-нитрофенола (PNP) из синтетического субстрата: пара-нитрофенил-α-D-глюкопиранозида (PNPg) в соответствии со следующей реакцией гидролиза, катализируемой α-глюкозидазами:

PNPg + H₂O → PNP + глюкоза

Об ингибировании фермента свидетельствует уменьшение изменения поглощения при 405 нм со временем относительно контрольной реакции без ингибитора (100% активность).

Рекомбинантный фермент человека, продуцируемый в Saccharomyces cerevisiae (мальтаза) (Sigma-Aldrich ®, G0660), разводили в фосфатном буфере (0,1 М, рН 6,8) для перенесения из исходного концентрированного раствора, теоретически содержащего 120 ед/мл, в раствор с активностью 1,6 ед/мл, используемый для тестов.

Во время тестов на ингибирование α-глюкозидазы действия осуществляли непосредственно в 96-луночных микропланшетах (NUNC96 или SARSTEDT96). Буферы, субстраты, ингибиторы и фермент добавляли в определенном порядке (см. ниже). Для каждого подготовленного микропланшета готовят холостую пробу, контроль и различные исследуемые образцы. Каждый элемент готовят в двух повторностях (или даже в трех):

приготовление холостой пробы: 100 мкл фосфатного буфера (0,1 М, рН 6,8), 20 мкл растворителя, используемого для образцов, инкубация при 37°С от 10 до 15 мин с последующим добавлением 20 мкл PNPg в концентрации 2,5 мМ (растворенный в фосфатном буфера);

приготовление отрицательного контроля: 100 мкл фосфатного буфера (0,1 М, рН 6,8), 20 мкл растворителя, используемого для образцов, 20 мкл фермента в концентрации 1,6 ед/мл, инкубация при 37°С от 10 до 15 мин с последующим добавлением 20 мкл PNPg в концентрации 2,5 мМ (растворенного в фосфатном буфере);

приготовление исследуемого образца: 100 мкл фосфатного буфера (0,1 М, рН 6,8), 20 мкл образца потенциального ингибитора, 20 мкл фермента в концентрации 1,6 ед/мл, инкубация при 37°С от 10 до 15 мин с последующим добавлением 20 мкл PNPg в концентрации 2,5 мМ (растворенного в фосфатном буфере).

После подготовки планшета отслеживали кинетику реакции в считывающем устройстве для микропланшетов (BMG Labtech) в течение 30 минут, при этом значения считывали каждые 2 секунды при λ равной 405 нм, т.е. всего 16 циклов. На основании этих значений можно вычислить процент ингибирования.

Тест на ингибирование DPP-IV

Тесты на ингибирование DPP-IV выполняют путем мониторинга методом спектрофотометрии при 385 нм образования продукта пара-нитроанилина из синтетического субстрата: Gly-L-Pro-пара-нитроанилида в соответствии со следующей реакцией гидролиза, катализируемой DPP-IV:

Gly-L-Pro-пара-нитроанилид + H₂O → пара-нитроанилин + Gly-L-pro

Об ингибировании фермента свидетельствует уменьшение изменения поглощения при 385 нм со временем относительно контрольной реакции без ингибитора (100% активность).

Концентрация используемого фермента составляла 0,045 ед/мл (где ед представляет собой мкмоль/мин), и, следовательно, его необходимо разводить. Поскольку разведение было большим, было необходимо проводить два последовательных разведения.

Первое разведение (получение раствора, содержащего 5×10^-4 ед/мл): (Vконечный: 450 мкл; V(исходный концентрированный раствор фермента)=5 мкл)

Второе разведение (получение раствора, содержащего 5×10^-6 ед/мл) (Vконечный: 1000 мкл; V(D1)=10 мкл); рабочий раствор представлял собой раствор D2.

Действия осуществляли непосредственно в 96-луночных микропланшетах (NUNC96 или SARSTEDT96). Буферы, субстраты, ингибиторы и фермент добавляли в определенном порядке (см. ниже). Для каждого подготовленного микропланшета готовили холостую пробу, контроль и различные исследуемые образцы. Каждый элемент готовили в двух повторностях (или даже в трех):

приготовление холостой пробы: 25 мкл образца, 25 мкл субстрата (Gly-L-pro-пара-нитроанилида, растворенного в буфере Трис-HCl (100 мМ, рН 8,0) в концентрации 1,6 мМ);

приготовление отрицательного контроля: 25 мкл разбавителя, используемого для образца, 25 мкл субстрата, инкубация при 37°С, 10 мин, 50 мкл фермента в концентрации 5×10^-6 ед/мл (приготовленного в буфере 100 мМ Трис HCl, рН 8,0);

приготовление исследуемого образца: 25 мкл образца потенциального ингибитора, 25 мкл субстрата, инкубация при 37°С, 10 мин, 50 мкл фермента в концентрации 5×10^-6 ед/мл.

После подготовки планшета отслеживали кинетику реакции в считывающем устройстве для микропланшетов (BMG Labtech) в течение 30 минут, при этом значения считывали каждую минуту при А равной 385 нм, т.е. всего 31 цикл. На основании этих значений можно вычислить процент ингибирования.

Расчет процента ингибирования

Как правило, независимо от теста для данной концентрации ингибитора строили кривую уравнения: поглощение = f (время) (в минутах). Подобным образом систематически строили кривую для контролей (без ингибитора) и холостых проб (без ферментов).

На различных полученных кривых сохраняли только линейные участки в начале кинетики, поскольку они соответствовали условиям для определения начальных скоростей. Таким образом, наклон поглощение/минута был пропорционален скорости появления продукта (глюкуронидаза и DPP-IV) или исчезновения субстрата (ГМГ-КоА редуктаза, отрицательный наклон).

В зависимости от типов тестов процент ингибирования различных ферментов рассчитывали различными способами:

для тестов на ингибирование ГМГ-КоА редуктазы и α-глюкозидаз формула для расчета идентична: .

для теста на ингибирование DPP4 формула несколько отличается, поскольку учитывают холостые пробы:

.

Наконец, для каждой концентрации ингибитора рассчитывали среднее значение процента ингибирования, а также стандартное отклонение каждого значения. Если значения стандартного отклонения превышали 10%, выполняли новые тесты в двух повторностях до тех пор, пока не получали значения менее 10%.

Сводные результаты, полученные на трех ферментах, для композиций С10 и С11 согласно изобретению приведены ниже в Таблице 16.

^а IC 50: концентрация ингибирования, для которой фермент обладает только 50% его активности. ^b Концентрация исследуемого образца, установленная как 1,25 мг/мл. ^с Концентрация исследуемого образца, установленная как 60 мкг/мл.

Сводные результаты, полученные на трех ферментах, для комбинации молекул (композиция С12 согласно изобретению) приведены ниже в Таблице 17.

^а IC 50: концентрация ингибирования, для которой фермент обладает только 50% его активности. ^b Концентрация исследуемого образца, установленная как 250 мкг/мл. ^c Концентрация исследуемого образца, установленная как 60 мкг/мл.

Обнаружено, что в отличие от стандартных ингибиторных молекул для каждого фермента [акарбоза (лекарственное средство), дипротин А (референсный ингибитор), правастатин (лекарственное средство), соответственно] только композиции С10, С11 и С12 согласно изобретению неожиданно ингибировали три фермента.

За счет одновременного действия на несколько регуляторных процессов композиции согласно изобретению представляют собой преимущественные профилактические средства и терапевтические средства для профилактики и лечения сахарного диабета, дислипидемий и их осложнений. Современные терапевтические стратегии состоят в комбинировании нескольких лекарственных средств в целях снижения различных факторов риска по отдельности. Тем не менее, комбинирование лекарственных средств может в некоторых случаях вызывать серьезные побочные реакции, например, одновременный прием фибратов и статинов повышает риск миопатии (Denke MA J Manag Care Pharm 2003; 9: 17-9). Таким образом, в настоящее время существует действительная потребность в профилактических мерах и лекарственных препаратах, «многоцелевой» механизм действия которых имеет преимущества в отношении соответствия, переносимости и эффективности. Таким образом, композиции согласно изобретению дают возможность снизить риск сердечно-сосудистых заболеваний, а также предупреждать и лечить каждую дисфункцию и/или ее последствия в отдельности.

Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно к композиции для профилактики или лечения расстройств метаболизма углеводов и/или жиров у человека или животных. Композиция для профилактики или лечения расстройств метаболизма углеводов и/или жиров у человека или животных, содержащая, по меньшей мере, смесь молекул, состоящую по меньшей мере из водно-спиртового экстракта Chrysanthellum indicum, полученного из целого растения и/или надземных частей Chrysanthellum indicum, и водного экстракта Cynara scolymus, полученного из листьев Cynara scolymus, и водно-спиртового экстракта Vaccinium myrtillus, полученного из плода Vaccinium myrtillus, водно-спиртового экстракта Olea europaea, полученного из листьев Olea europaea, и синтетического пиперина и/или экстракта Piper, содержащего пиперин, в определенном количестве. Композиция для профилактики или лечения расстройств метаболизма углеводов и/или жиров у человека или животных, содержащая, по меньшей мере, смесь дикофеилхинной кислоты, апигенин-7-O-глюкуронида, монокофеилхинной кислоты, пиперина и олеуропеина, где по меньшей мере одна из молекул, отличных от пиперина, представляет собой синтетическую молекулу. Способ профилактики или лечения патологических расстройств метаболизма углеводов и/или жиров у человека или животных, включающий введение композиции человеку или животному в качестве лекарственного средства или пищевого продукта. Вышеописанные композиции одновременно действуют на несколько регуляторных процессов, ингибируют три фермента, проявляют синергетический эффект при профилактике или лечении расстройств метаболизма углеводов и/или жиров у человека или животных. 3 н. и 22 з.п. ф-лы, 17 табл., 12 ил.

1. Композиция для профилактики или лечения расстройств метаболизма углеводов и/или жиров у человека или животных, содержащая по меньшей мере смесь молекул, состоящую, по меньшей мере, из

- водно-спиртового экстракта Chrysanthellum indicum, полученного из целого растения и/или надземных частей Chrysanthellum indicum, и

- водного экстракта Cynara scolymus, полученного из листьев Cynara scolymus, и

- водно-спиртового экстракта Vaccinium myrtillus, полученного из плода Vaccinium myrtillus,

- водно-спиртового экстракта Olea europaea, полученного из листьев Olea europaea, и

- синтетического пиперина и/или экстракта Piper, содержащего пиперин,

где композиция содержит такое количество соответствующего экстракта, которое позволяет вводить по меньшей мере 0,00001 г экстракта Chrysanthellum indicum, по меньшей мере 0,00001 г экстракта Cynara scolymus, по меньшей мере 0,00001 г экстракта Vaccinium myrtillus, по меньшей мере 0,001 мг пиперина и по меньшей мере 0,00001 г экстракта Olea europaea на кг массы тела человека, которому вводят композицию, в сутки.

2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что указанная смесь молекул содержит:

- по меньшей мере одно из апигенин-7-O-глюкуронида, хризантеллина A, хризантеллина B, кофейной кислоты, лютеолина, маритиметина, эриодиктиола, изооканина, апигенина, лютеолин-7-O-глюкозида, маритимеина, мареина, эриодиктиол-7-O-глюкозида, флавомареина, апигенин-8-C-α-L-арабинозид-6-C-β-D-глюкозида (шафтозида), апигенин-6,8-C-ди-β-D-глюкопиранозида (виценина-2), и

- по меньшей мере одно из дикофеилхинной кислоты, сульфомонокофеилхинной кислоты, лютеолина, лютеолин-7-O-глюкозида, лютеолин-7-O-глюкуронида, апигенин-7-O-глюкозида, цинаропикрина, и

- по меньшей мере одно из монокофеилхинной кислоты, дельфинидин-3-галактозида, дельфинидин-3-глюкозида, цианидин-3-галактозида, дельфинидин-3-арабинозида, цианидин-3-глюкозида, петунидин-3-галактозида, цианидин-3-арабинозида, петунидин-3-глюкозида, пеонидин-3-галактозида, петунидин-3-арабинозида, пеонидин-3-глюкозида, мальвидин-3-галактозида, мальвидин-3-глюкозида, мальвидин-3-арабинозида, и

- по меньшей мере пиперин.

3. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что Piper выбран из Piper nigrum, Piper aduncum и/или Piper longum.

4. Композиция по п. 2, отличающаяся тем, что композиция также содержит олеуропеин и гидрокситирозол.

5. Композиция для профилактики или лечения расстройств метаболизма углеводов и/или жиров у человека или животных, содержащая, по меньшей мере, смесь дикофеилхинной кислоты, апигенин-7-O-глюкуронида, монокофеилхинной кислоты, пиперина и олеуропеина,

где по меньшей мере одна из молекул, отличных от пиперина, представляет собой синтетическую молекулу.

6. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что смесь также содержит гидрокситирозол.

7. Композиция по п. 5 или 6, отличающаяся тем, что смесь также содержит:

- по меньшей мере одно из хризантеллина A, хризантеллина B, кофейной кислоты, лютеолина, маритиметина, эриодиктиола, изооканина, апигенина, лютеолин-7-O-глюкозида, маритимеина, мареина, эриодиктиол-7-O-глюкозида, флавомареина, апигенин-8-C-α-L-арабинозид-6-C-β-D-глюкозида (шафтозида), апигенин-6,8-C-ди-β-D-глюкопиранозида (виценина-2), и

- по меньшей мере одно из сульфомонокофеилхинной кислоты, лютеолина, лютеолин-7-O-глюкозида, лютеолин-7-O-глюкуронида, апигенин-7-O-глюкозида, цинаропикрина, и

- по меньшей мере одно из дельфинидин-3-галактозида, дельфинидин-3-глюкозида, цианидин-3-галактозида, дельфинидин-3-арабинозида, цианидин-3-глюкозида, петунидин-3-галактозида, цианидин-3-арабинозида, петунидин-3-глюкозида, пеонидин-3-галактозида, петунидин-3-арабинозида, пеонидин-3-глюкозида, мальвидин-3-галактозида, мальвидин-3-глюкозида, мальвидин-3-арабинозида,

где по меньшей мере одна из молекул представляет собой синтетическую молекулу.

8. Композиция по п. 1 или 7, отличающаяся тем, что она также содержит по меньшей мере один дополнительный элемент, добавляемый дополнительно к смеси молекул, где указанный дополнительный элемент выбран из

следующих витаминов: B1, B2, B3, B5, B6, B8, B9, B12, C, A, D, E, K1 и K2;

следующих соединений: обетихолевой кислоты, коросолиевой кислоты, полиненасыщенных жирных кислот семейства омега-6 и/или омега-3, оротовой кислоты, пангамовой кислоты, пара-аминобензойной кислоты, амигдалина, бета-глюканов, карнитина, диметилглицина, имеглимина, изофлавонов, L-аргинина, окситоцина, пектина, пиридоксамина, ресвератрола, виниферина, L-цитруллина;

следующих микроэлементов и минералов: мышьяка, бора, кальция, меди, железа, фтора, йода, лития, марганца, магния, молибдена, никеля, фосфора, селена, ванадия, цинка;

следующих микрокомпонентов заменимой природы: конъюгированной линоленовой кислоты, липоевой кислоты, каротиноидов, карнитина, холина, коэнзима Q10, фитостеринов, полифенолов семейства таннинов и лигнанов, таурина;

фруктоолигосахаридов, галактоолигосахаридов;

бактерий, сбраживающих молочную кислоту;

дрожжей, например красных рисовых дрожжей (Monascus purpureus);

грибов, например грифолы курчавой;

продуктов, выделенных из насекомых, которые совместимы с пищевым и фармацевтическим сектором;

покрывающих веществ: например гипромеллозы, микрокристаллической целлюлозы, стеариновой кислоты, талька, сахарозы, шеллака, повидона, пчелиного воска;

вкусоароматических добавок: например натуральной черничной вкусоароматической добавки или натуральной земляничной вкусоароматической добавки;

подкислителей, таких как яблочная кислота;

веществ, препятствующих агломерации: например диоксида кремния или стеарата магния;

загустителей, таких как ксантановая камедь, коллоидный диоксид кремния, моно- и диглицериды жирных кислот;

стабилизаторов, таких как фосфат кальция;

эмульгаторов, таких как лецитин сои;

наполнителей, таких как кукурузный крахмал;

вспомогательных веществ, например микрокристаллической целлюлозы, стеарата магния или дикальция фосфата.

9. Композиция по п. 1 или 7, отличающаяся тем, что она выполнена в форме порошка, геля, эмульсии или в форме жидкости.

10. Композиция по п. 1 или 7, отличающаяся тем, что она выполнена в форме таблеток, облаток, желатиновых капсул, палочек, саше, флаконов, капельниц или в форме для инъекций.

11. Композиция по п. 1 или 7, отличающаяся тем, что расстройства метаболизма углеводов и/или жиров у человека или животных выбраны из сахарного диабета 1-го и 2-го типа, неалкогольных жировых болезней печени, сердечно-сосудистых патологий, патологий, связанных с инсулинорезистентностью.

12. Композиция по п. 11, отличающаяся тем, что неалкогольная жировая болезнь печени представляет собой неалкогольный стеатогепатит.

13. Композиция по п. 11, отличающаяся тем, что сердечно-сосудистые патологии представляют собой коронарные кардиопатии, цереброваскулярные заболевания, периферические артериопатии, тромбозы глубоких вен.

14. Композиция по п. 11, отличающаяся тем, что патология, связанная с инсулинорезистентностью, представляет собой болезнь Альцгеймера.

15. Композиция по п. 1 или 7, отличающаяся тем, что расстройство метаболизма углеводов и/или жиров представляет собой дислипидемию.

16. Композиция по п. 1 или 7, отличающаяся тем, что расстройства метаболизма углеводов и/или жиров выбраны из ожирения, избыточной массы тела, метаболического синдрома и проблем, связанных с патологиями артериального давления.

17. Способ профилактики или лечения патологических расстройств метаболизма углеводов и/или жиров у человека или животных, включающий введение композиции по любому из пп. 1-16 человеку или животному в качестве лекарственного средства или пищевого продукта.

18. Способ по п. 17, отличающийся тем, что расстройство выбрано из сахарного диабета 1-го и 2-го типа, неалкогольных жировых болезней печени, сердечно-сосудистых патологий и патологий, связанных с инсулинорезистентностью.

19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что неалкогольная жировая болезнь печени представляет собой неалкогольный стеатогепатит.

20. Способ по п. 18, отличающийся тем, что сердечно-сосудистые патологии представляют собой коронарные кардиопатии, цереброваскулярные заболевания, периферические артериопатии, тромбозы глубоких вен.

21. Способ по п. 18, отличающийся тем, что патология, связанная с инсулинорезистентностью, представляет собой болезнь Альцгеймера.

22. Способ по любому из пп. 18-21, отличающийся тем, что композицию вводят в комбинации с по меньшей мере одним противодиабетическим терапевтическим средством, выбранным из бигуанидов, включающих метформин, ингибиторов дипептидилпептидазы-IV (DPP-IV), аналогов глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1), тиазолидиндионов (TZD), сульфонилмочевин, инсулинов короткого действия и длительного действия, ингибиторов натрийзависимого котранспортера глюкозы-2 (SGLT2), ингибиторов глюкозидазы (акарбозы, миглитола, воглибозы, пептидов, содержащих последовательность аланин-пролин или пролин-аланин), молекул семейства фибранора, таких как элафибранор, или молекул, нацеленных на ядерные рецепторы, и в особенности на рецепторы ROR (α, β, γ) и рецепторы Rev-Erb (α, β).

23. Способ по п. 17, отличающийся тем, что расстройство представляет собой дислипидемию.

24. Способ по п. 23, отличающийся тем, что композицию вводят в комбинации с гиполипидемическим терапевтическим средством, выбранным из статинов, фибратов, никотиновой кислоты, ионообменных смол, ингибиторов всасывания холестерина, омега-3-полиненасыщенных жирных кислот, тиаденола и агонистов ядерного фарнезоидного рецептора Х (FXR).

25. Способ по п. 17, отличающийся тем, что расстройство выбрано из ожирения, избыточной массы тела, метаболического синдрома и проблем, связанных с патологиями артериального давления.