СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПОЗИЦИИ, ОБЛАДАЮЩЕЙ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЙ И КАРДИОПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1996 года по МПК A61K31/05 A61K31/375 A61K47/00 

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, и касается способа получения устойчивого раствора смеси жиро- и водорастворимых антиоксидантов для использования в качестве новой лекарственной формы, а именно в качестве композиции, обладающей гепатопротекторной и кардиопротекторной активностью.

Несмотря на представленное разнообразие веществ, обладающих, антирадикальной активностью, не все они одинаково широко используются в качестве средств лечения и профилактики. Наибольшее предпочтение отдается синтетическим соединениям, в связи с меньшей стоимостью получения, малой токсичностью и отсутствием побочных эффектов, наиболее употребимым является синтетический жирорастворимый антиоксидат дибунол, обладающий противоопухолевым действием (М. Д. Машковский, Лекарственные средства, М. Медицина, 1985, 2 часть, стр. 450). С другой стороны среди водорастворимых малотоксичных антиоксидантов предпочтение отдается аскорбиновой и лимонной кислотам.

При этом следует отметить, что сочетанное применение водо- и жирорастворимых антиоксидантов в значительной степени повышает антиокислительный эффект, обусловленный проявлением активности как в водной, так и в липидной фазах. В то же время ограниченность способов введения жирорастворимых антиоксидантов в организм сдерживает комбинированное применение различных видов антиоксидантов (М.В. Беленко, Ишемические и реперфузионные повреждения органов, М. Медицина, 1989, 368 с.).

Таким образом, известны способы приготовления отдельных растворов водо- и жирорастворимых антиоксидантов.

Недостатками данных способов являются
для водорастворимых слабая биологическая активность в связи с отсутствием активности в липидной фазе, т.е. на биомембранах:
для жирорастворимых невозможность паpентерального (внутривенного введения) и отсутствие биологической активности в водной фазе. Поскольку препарат дибунол обладает противоопухолевым действием, а полученная смесь дибунола с водорастворимыми антиоксидантами обладает гепатопротекторной и кардио-протекторной активностью, в качестве наиболее близкого известного технического решения выбран способ получения витамина Е в масляной форме (М.Д. Машковский, Лекарственные средства, М. Медицина, 1985, часть 2, с. 38).

Целью изобретения является получение более активного вещества, обладающего указанными активностями.

Указанная цель достигается тем, что с целью получения устойчивого раствора смеси жиро- и водорастворимых антиоксидантов для медицинских целей жирорастворимый антиоксидант дибунол в соотношении от 5 до 10 мг/л растворяют путем встряхивания при 20 40^oС в 95%-ном этиловом спирте, а водорастворимые аскорбиновая кислота от 50 до 100 мг/л, лимонная кислота от 50 до 100 мг/л, и в качестве стабилизатора-гидрокарбонат натрия от 50 до 100 мг/л растворяются при 20 40^oC в дистиллированной воде, после чего оба раствора смешивают на магнитной мешалке при
20 40^oС в течение от 10 до 50 мин.

Приведенный диапазон доз (концентраций в мг/л и температурных режимов обусловлен с одной стороны пределами насыщения устойчивых растворов и прогнозируемой биологической активностью, а с другой предельно допустимыми температурными воздействиями на легко разрушаемые антиоксиданты.

Пример 1. Получение устойчивого раствора жиро- и водорастворимых антиоксидантов для медицинских целей заключается в том, что жирорастворимый антиоксидант дибунол в соотношении 5 мг/л растворяют путем встряхивания при 20^oС в 95% -ном этиловом спирте, а водорастворимые аскорбиновая кислота 50 мг/л, лимонная кислота 50 мг/л, и в качестве стабилизатора гидрокарбонат натрия 50 мг/л растворяются при 20^oC в дистиллированной воде, после чего оба раствора смешивают на магнитной мешалке при 20^oС в течение 10 мин.

Полученный указанным способом раствор оставался устойчивым в течение 30 суток наблюдения.

В качестве критериев устойчивости использованы
отсутствие видимых хлопьев, либо осадка;
изменение цвета (характерно для разложения аскорбиновой кислоты);
изменение оптической плотности на 0,5% (фотокалориметрия при длине волны 540 мн).

Пример 2. Получение устойчивого раствора жиро- и водорастворимых антиоксидантов для медицинских целей заключается в том, что
жирорастворимый антиоксидант дибунол в соотношении 7,5 мг/л растворяют путем встряхивания при 30^oС в 95%-ном этиловом спирте, а водорастворимые - аскорбиновая кислота 75 мг/л, лимонная кислота 75 мг/л, и в качестве стабилизатора гидрокарбонат натрия 75 мг/л растворяются при 30^oС в дистиллированной воде, после чего оба раствора смешивают на магнитной мешалке при 30^oC в течение 25 мин.

Полученный указанным способом раствор оставался устойчивым в течение 30 суток наблюдения.

В качестве критериев устойчивости использованы
отсутствие видимых хлопьев либо осадка;
изменение цвета (характерно для разложения аскорбиновой кислоты);
изменение оптической плотности на 0,5% (фотокалориметрия при длине волны 540 нм).

Пример 3. Получение устойчивого раствора жиро- и водорастворимых антиоксидантов для медицинских целей заключается в том, что жирорастворимый антиоксидант дибунол в соотношении 10 мг/л растворяют путем встряхивания при 40^oС в 95%-ном этиловом спирте, а водорастворимые аскорбиновая кислота 100 мг/л, лимонная кислота 100 мг/л и в качестве стабилизатора гидрокарбонат натрия 100 мг/л растворяются при 40^oС в дистиллированной воде, после чего оба раствора смешивают на магнитной мешалке при 40^oC в течение 50 мин.

Полученный указанным способом раствор оставался устойчивым в течение 30 суток наблюдения.

В качестве критериев устойчивости использованы
отсутствие видимых хлопьев либо осадка;
изменение цвета (характерно для разложения аскорбиновой кислоты);
изменение оптической плотности на 0,5% (фотокалориметрия при длине волны 540 нм).

Пример 4. Полученный устойчивый раствор антиоксидантной композиции исследован в экспериментах на лабораторных животных в следующих сериях.

А. Исследование гепатопротекторного действия при моделировании транзисторной окклюзии печеночно-двенадцатиперстной связки (ПДС).

Методика. Эксперименты выполнены на 48 наркотизированных кроликах весов 2500 3000 г. Моделирование транзисторной окклюзии печеночно-двенадцатиперстной связки (ПДС) в течение 20 50 мин осуществляется с помощью специально разработанного зажима. О функциональном состоянии печени судили по физиологическим (частота сердечных сокращений, частота дыхания, портальное давление, ЭКГ, артериальное давление), биохимическим (активность АСат и АваТ, содержание билирубина, мочевины, малонового диальдегида и диеновых конъюгатов) и гистологическим критериям проводимым общепринятыми методами.

Полученные результаты. В контрольных экспериментах моделирование ПДС приводило к развитию ишемических и реперфузионных повреждений печеночной ткани, что выразилось увеличением мощности трансаминаз, содержанием продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ), а также развитием явлений портального
застоя в непарных органах брюшной полости. Тяжесть нарушений определялась длительностью окклюзии сосудов ПДС.

Профилактическое внутривенное введение антиоксидантной композиции (АОК) в виде 10% спиртово-водного раствора в дозе 100 мг/кг увеличивало безопасные сроки обескровливания печени до 40 мин, вызываемость животных и улучшало метаболические и тканевые показатели функционального состояния печени.

Так, выживаемость животных с профилактическим введением АОК увеличивалась на 100, 78 и 55% по сравнению с контрольными экспериментами соответственно при сроках окклюзии 30, 40 и 50 мин.

Полученные результаты подтверждались биохимическими и гистологическими исследованиями. Было установлено, что введение АОК снижало активность аминотрансфераз сыворотки крови и уменьшало содержание продуктов ПОЛ в гомогенате ткани печени. При гистологическом исследовании установлено медленное расходование запасов гликогена в гепатоцитах, отсутствие участков некроза.

Заключение. АОК при профилактическом введении в дозе 100 мг/кг (в виде 10% спиртово-водного раствора) обладает выраженным антиоксидантным и антигипоксическим эффектом: с одной стороны уменьшает количество продуктов ПОЛ, а с другой стабилизирует клеточные мембраны и снижает расходование гликогена в гепатоцитах.

Б. Исследование кардиопротективного действия на модели гипо- и реперфузионных повреждений миокарда крыс.

Методика. Гипо- и перфузионные повреждения изолированных по Лангердорфу сердец крыс моделировали путем уменьшения
(в 10 раз, сроков на 20 мин) объемной скорости перфузии. О функциональном состоянии изолированного сердца судили по частоте сердечных сокращений, давлению, развиваемому левым желудочком, а также перфузионному давлению коронарной системы. О метаболизме углеводов судили по динамике содержания глюкозы, лактата, пирулата и ОВП в оттекающем перфузате.

Полученные результаты. Введение антиоксидантной композиции (АОК) в перфузионный раствор (1,10 5 г/мл) не влияло на динамику исследованных параметров сократимости изолированного сердца в первой гипоперфузии. Напротив, к 20 мин реперфузии величина левожелудочкового давления (ЛДЖ) и интенсивность функционирования структур (ИФС) под влиянием АОК были достоверно выше, чем в контроле.

Так, если в контрольной серии экспериментов падение ЛДЖ и ИФС составило 50,0 11,3 и 56,2 9,0% то при перфузии с АОК 27,7 5,1 и 18,3 10,0% соответственно (Р < 0,05).

Протективное действие АОК проявлялось и в соотношении показателей метаболизма углеводов и период реперфузии.

Так, на 20 мин периода восстановления объемной скорости перфузии отмечено значительное снижение выделения молочной кислоты миокардом (+ 187 48% в опытной серии и +572 144% в контрольной). Это сочеталось с менее высоким уровнем потребления глюкозы (+53 14% в опытной серии и 120 23% в контрольной) на единицу функциональной активности на фоне более высоких значений ОВП системы лактат-пирулат (-12,1 1б5 мВ в опытной серии и 27,8 1,7 мВ в контрольной).

Заключение. АОК (1,10 5 г/мл) проявляет кардиопротективное действие при гипо- и реперфузионных повреждениях изолированного сердца крыс, выражающееся в предотвращении показателей сократимости миокарда, снижении выделения лактата и отрицательных сдвигов ОВП.

Таким образом, способ получения устойчивого раствора смеси жиро- и водорастворимых антиоксидантов для медицинских целей, где жирорастворимый антиоксидант дибунол в соотношении от 5 до 10 мг/л растворяют путем встряхивания при 20 40^oC в 95%-ном этиловом спирте, а водорастворимые - аскорбиновую кислоту от 50 до 100 мг/л, лимонная кислота от 50 до 100 мг/л, и в качестве стабилизатора гидрокарбонат натрия от 50 до 100 мг/л растворяют при 20 40^oС в дистиллированной воде, после чего оба раствора смешивают на магнитной мешалке при 20 40^oС в течение от 10 до 50 мин, позволяет получить устойчивый раствор водо- и жирорастворимых антиоксидантов для медицинских целей.

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, и касается способа получения композиции, обладающей гепатопротекторной и кардиопротекторной активностью. Целью изобретения является получение устойчивого раствора смеси жиро- и водорастворимых антиоксидантов для использования в качестве новой лекарственной формы. Способ получения устойчивого раствора смеси жиро- и водорастворимых антиоксидантов для медицинских целей, где жирорастворимый антиоксидант дибунол в соотношении от 5 до 10 мг/л растворяют путем встряхивания при 20 - 40^oC в 95%-ном этиловом спирте, а водорастворимые-аскорбиновую кислоту от 50 до 100 нг/л; лимонную кислоту от 50 до 100 мг/л и в качестве стабилизатора гидрокарбонат натрия от 50 до 100 мг/л растворяют при 20 - 40^oС в дистиллированной воде, после чего оба раствора смешивают на магнитной мешалке при 20 - 40^oС в течение от 10 до 50 мин.

Способ получения композиции, обладающей гепатопротекторной и кардиопротекторной активностью, путем смешивания лекарственного препарата, обладающего антиоксидантным действием, со вспомогательным веществом, отличающийся тем, что жирорастворимый антиоксидант дибунол в количестве от 5 до 10 мг растворяют в 1 л этилового спирта при температуре 20 40^oC при постоянном перемешивании, а водорастворимые антиоксиданты, аскорбиновую и лимонную кислоту и вспомогательное вещество гидрокарбонат натрия в качестве стабилизирующего агента растворяют в дистиллированной воде в количестве от 50 до 100 мг на 1 л для каждого вещества при температуре 20 40^oC и растворы смешивают при данной температуре в течение 10 50 мин при постоянном перемешивании.