СПОСОБ ВОССТАНОВЛЕНИЯ ПАРЕНХИМЫ ПАТОЛОГИЧЕСКИ ИЗМЕНЕННОЙ ПЕЧЕНИ КРЫС Российский патент 1997 года по МПК G09B23/28 

Предлагаемое изобретение относится к области биологии и медицины, касается восстановления паренхимы печени крыс с хроническим гепатитом, вызванным введением тетрахлорметана (ССl₄) и связано со стимуляцией регенерации и ускорением обратимости патологических изменений в печени при ее хроническом поражении.

Вопрос этот актуальный, т.к. остановить прогрессирование хронического патологического процесса и добиться обратимости хронических патологических изменений в печени известными способами в настоящее время в мировой практике средствами очень трудно, в результате чего и лечение хронических болезней печени известными официально разрешенными способами, мало эффективно.

Актуальность вопроса возрастает еще в связи с тем, что хронические болезни печени занимают значительное место в структуре гастроэнтерологических заболеваний и количество их продолжает увеличиваться.

Другие работы, выполненные на модели хронического гепатита крыс, используемой в настоящей заявке, т.е. с введением 50-ти инъекций CCl₄ в течение 3-х месяцев, с морфометрической оценкой состояния паренхимы печени через 30 суток после начала введения стимуляторов регенерации нам неизвестны.

Целью изобретения является усиление обратимости патологических изменений и восстановления паренхимы печени крыс с хроническим гепатитом, вызванным подкожным введением самцам белых беспородных крыс 50-ти инъекций CCl₄.

О восстановлении паренхимы печени судили по величине коэффициента нормализации паренхимы (КНП), который представляет собой отношение количества нормальных гепатоцитов к количеству дегенерирующих и является суммарным показателем динамики процесса восстановления паренхимы патологически измененной печени.

Поставленная цель достигается применением гонадотропина хорионического (отечественный препарат хорионического гонадотропина) в комплексе с гидролизатом из мидий пищевым (МИГИ-К), последний разрешен в качестве пищевой добавки, что согласовано с Министерством здравоохранения СССР (N 143-5/109-12 от 15.09.89).

Ранее гонадотропин хорионический, прелагаемый в настоящей заявке в комплексе с МИГИ-К для восстановления структуры патологически измененной печени, применялся для лечения эндокринной патологии. Его применяют (М.Д. Машковский, Лекарственные средства, М. 1985, с. 536 537) при понижении функции половых желез, обусловленное нарушением деятельности гипоталамуса и гипофиза. Препарат показан у больных с межуточно-гипофизарной недостаточностью (Б-нь Симондса, синдром Шиена, пангипопитуитаризм любой этиологии, адипозогенитальная дистрофия, гипофизарная карликовость с явлениями полового инфантилизма, гипогонадотропный гипогонадизм с явлениями евнухоидизма), ановуляторной дисфункцией яичников и связанным с нею бесплодием, поздним половым развитием, при привычном и угрожающем аборте в 1 триместре беременности, при дисфункциональных маточных кровотечениях у женщин в детородным возрасте, при двустороннем крипторхизме после оперативного лечения при наличии признаков евнухоидизма. Препарат применяют с целью дифференциальной диагностики первичного и вторичного гипогонадизма у мужчин.

ГХ и МИГИ-К начинали вводить через 5 суток после отмены CCl₄.

Через 30 дней после начала введения гонадотропина хорионического в комплексе с МИГИ-К стандартно брали на исследование кусочки печени, которые фиксировали в 10% нейтральном формалине и заливали в парафин с последующим приготовлением срезом толщиной 5 6 микрон, которые окрашивали гематоксилином с последующим докрашиванием эозином. Морфометрию нормальных и дегенерирующих гепатоцитов проводили до заданной достоверности (Р=0,05) с использованием таблиц Стрелкова (Стрелков Р.Б. Метод вычисления стандартной ошибки и доверительных интервалов средних арифметических величин с помощью таблиц. Сухуми, Алаширо, 1966, с. 26) с последующим вычислением КНП. В каждой группе животных для получения достоверно значимых величин количества нормальных и дегенерирующих гепатоцитов считали в среднем 118 полей зрения. Достоверность разницы величины КНП между группами определяли по Стьюденту.

Оказалось, что величина КНП у крыс через месяц после начала введения ГХ в комплексе с МИГИ-К оказалась равной 2,18±0,13, что достовернор Меньше 0,01) отличалось от величины КНП у нелеченых животных (0,75±0,04), а также от величины КНП у крыс, получавших ГХ (1,48±0,16 и у крыс, получавших МИГИ-К (1,45±0,18), табл. 1.

Таким образом, предлагаемое изобретение отвечает критериям "новизна" и "существенные отличия", т.к. найдено новое ранее неизвестное применение комплекса препаратов ГХ с МИГИ-К, причем новая область использования комплекса этих препаратов с очевидностью не вытекает из ранее известных свойств МИГИ-К и комплекса его с гонадотропином хорионическим и основано на новом, установленном авторами этой заявке свойства комплекса этих препаратов.

В работе использовано 25 самцов белых беспородных крыс с хроническим токсическим гепатитом, который вызывался введением 0,3 мл 65% раствора CCl₄ в растительном масле по 4 инъекции в неделю в течение 3-х месяцев. Всего для развития хронического гепатита крысы получали 50 инъекций CCl₄.

Животные были разделены на 4 группы: 1 группа 6 нелеченых крыс, которые после отмены CCl₄ не подвергались никаким воздействиям; 2 группа 6 крыс, которые через 5 дней после отмены CCl₄ получали подкожно ГХ один раз в день в дозе 75 Ед 85 ЕД на 100,0 массы тела в 1, 2, 3, 9, 10 и 11 день после начала введения; 3 группа 7 крыс, которым через 5 дней после отмены CCl₄ вводили каждой крысе через зонд в желудок один раз в день по 3 мл водного раствора МИГИ-К (1 мл МИГИ-К растворяли в 2 мл воды) из расчета 5 мл МИГИ-К на 1 кг массы тела животного следующим курсом: 4 дня подряд, потом 2 дня перерыв. Такой курс введения МИГИ-К повторяли 3 раза. Перерыв в 2 дня между введениями МИГИ-К делали для того, чтобы избежать послабляющего действия МИГИ-К на кишечник; 4 группа 6 крыс, получавших через 5 дней после отмены CCl₄ гонадотропин хорионический и МИГИ-К одновременно в тех же дозах и тем же курсом, как и животные 2 и 3 групп. Первые инъекции ГХ и МИГИ-К делали в один день, а именно, через 5 суток после отмены CCl₄. Гибели животных после введения препаратов не было.

ГХ вводят в дозе 75 ЕД 85 ЕД на 100,0 массы тела потому, что такая доза гормона дает биологический эффект (А.С. СССР N 1081466. Н.Л.Иванова, И.М. Солопаева, С.Б.Блинов. Способ определения регенерационного процесса в печени). Введение ГХ в течение 3-х дней подряд обусловлено тем, что этот гормон в указанных дозах за этот срок обеспечивает деление большинства готовых к делению гепатоцитов (Н.Л.Иванова. Действие хорионического гонадотропина человека на печень крыс с хроническим токсическим гепатитом. Дисс. канд. биол. наук. М. 1983). Перерыв между курсами введения ГХ делали потому, чтобы дать передышку организму от действия гормона, повторение трехдневного курса введения ГХ делали для того, чтобы закрепить эффект действия ГХ.

Способ восстановления паренхимы печени патологически измененной с помощью комплекса ГХ с МИГИ-К осуществляется следующим образом.

Животным с хроническим гепатитом через 5 суток после отмены CCl₄ вводили одновременно ГХ под кожу в дозе 75 ЕД 85 ЕД на 100,0 массы тела и сразу же после этого вводили в желудок через зонд 1 мл МИГИ-К разведенного в 2 мл воды, т.е. всего животное в желудок получало 3 мл водного раствора МИГИ-К. ГХ вводили в 1, 2, 3, 9, 10 и 11 дни после начала введения, а МИГИ-К 4 дня подряд, потом перерыв 2 дня с 3-х кратным повторением этого курса. Через 30 суток после начала введения ГХ и МИГИ-К у животных всех групп стандартно брали для исследования кусочки печени, которые фиксировали в 10% формалине, после чего готовили парафиновые срезы толщиной 5 6 микрон и окрашивали их гематоксилином в докрашиванием эозином. При увеличении светового микроскопа 90 х 1,5 х 10 на тест-площадь препарата подсчитывали количества нормальных и дегенерирующих гепатоцитов с заданной степенью достоверности при О=0,05 с использованием таблиц Стрелкова. На основании полученных данных определяли величину КНП.

Таким образом, полученные результаты показывают, что через 30 суток после одновременного введения ГХ и МИГИ-К в указанных дозах и указанным курсом животным с хроническим гепатитом, вызванным введение 50-ти инъекций CCl₄, достигается по сравнению со спонтанной регенерацией у нелеченых животных и по сравнению с другими воздействиями (введение Гх или МИГИ-К раздельно) увеличение величины коэффициента нормализации паренхимы патологически измененной печени, что можно использовать для усиления обратимости патологических изменений и восстановления паренхимы патологически измененной печени.

Пример 1. У крысы N 42 с хроническим гепатитом через 35 дней после отмены CCl₄ брали кусочек печени для исследования, из которого приготавливали парафиновые срезы толщиной 5 6 микрон, которые окрашивали гематоксилином с докрашиванием эозином. С помощью светового микроскопа при увеличении 90 х 1,5 х 10 на тест-площадь препарата подсчитывали количество нормальных и дегенерирующих гепатоцитов, на основании чего определяли величину КНП, которая у крысы N 42 равнялась 0,68.

Пример 2. У крысы N 51 с хроническим гепатитом через 30 суток после введения ГХ подкожно один раз в день в дозе 75 ЕД 85 ЕД на 100,0 массы тела в 1, 2, 3, 9, 10 и 11 дни после начала введения гормона (ГХ начинали вводить через 5 суток после окончания введения CCl₄) стандартно брали кусочек печени для исследования. Приготавливали парафиновые срезы толщиной 5 6 микрон, которые окрашивали гематоксилином с докрашиванием эозином. С помощью светового микроскопа при увеличении 90 х 1,5 х 10 на тест-площадь препарата подсчитывали количество нормальных и дегенерирующих гепатоцитов, на основании чего определяли величину КНП, которая у крысы N 51 равнялась 1,48.

Пример 3. У крысы N 54 с хроническим гепатитом через 30 суток после начала введения МИГИ-К через зонд в желудок один раз в день по 0,3 мл 33 (раствора) начинали вводить через 5 суток после отмены CCl₄) 4 дня подряд, 2 дня перерыв с 3-х кратным повторением этого курса, у крыс стандартно брали кусочек печени для исследования. Приготавливали парафиновые срезы толщиной 5 6 микрон, которые окрашивали гематоксилином с докрашиванием эозином. С помощью светового микроскопа при увеличении 90 х 1,5 х 10 на тест-площадь препарата подсчитывали количество нормальных и дегенерирующих гепатоцитов, на основании чего определяли величину КНП, которая у крысы N 54 равнялась 1,34.

Пример 4. Крысе N 63 с хроническим гепатитом через 5 дней после отмены CCl₄ в один день начинали вводить ГХ подкожно один раз в день в дозе 75 ЕД на 100,0 массы тела в 1, 2, 3, 9, 10 и 11 дни после начала введения ГХ и МИГИ-К через зонд в желудок один раз в день по 0,3 мл 33% водного раствора 4 дня подряд, 2 дня переpыв с 3-х кратным повторением курса. Через 30 суток после начала введения препаратов у крыс стандартно брали кусочек печени для исследования. Приготавливали парафиновые срезы толщиной 5 6 микрон, которые окрашивали гематоксилином с докрашиванием эозином. С помощью светового микроскопа при увеличении 90 х 1,5 х 10 на тест-площадь препарата подсчитывали количество нормальных и дегенерирующих гепатоцитов, на основании чего определяли величину КНП, которая у крысы N 63 равнялась 3,20.

Изобретение относится к области медицины. Сущность изобретения сводится к тому, что способ восстановления паренхимы паталогически измененной печени крыс путем введения гонадотропина хронического, отличается тем, что одновременно вводят мидийный гидролизат пищевой при этом, гонадотропин хорионический вводят один раз в день в дозе 75 ЕД - 85 ЕД на 100,0 массы тела в 1, 2, 3, 9, 10 и 11 дни после начала введения, введение осуществляют через зонд в желудок по 3 мл 33% водного раствора один раз в день 4 дня подряд, потом 2 дня перерыв о трехкратным повторением этого куроа. 2 з.п.ф-лы, 1 табл.

1 1. Способ восстановления паренхимы патологически измененной печени крыс путем введения гонадотропина хорионического, отличающийся тем, что одновременно вводят мидийный гидролизат пищевой.2 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что гонадотропин хорионический вводят один раз в день в дозе 75 85 ЕД на 100,0 массы тела в 1, 2, 3, 9, 10 и 11 дни после начала введения.2 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что мидийный гидролизат пищевой вводят через зонд в желудок по 3 мл 33%-ного водного раствора один раз в день 4 дня подряд, потом 2 дня перерыв с трехкратным повторением этого курса.