СПОСОБ УМЕНЬШЕНИЯ ТОКСИЧЕСКОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ ПЕЧЕНИ Российский патент 2008 года по МПК A61K31/198 A61K31/232 A61P1/16 

Изобретение относится к медицине, в частности к гепатологии и фармакотерапии.

Повреждение печени возникает при токсическом воздействии различных фаторов, таких как фтор-, хлорорганических веществ, алкоголя, что приводит к хроническим диффузным заболеваниям печени (ХДЗП) - обширной группе заболеваний, включающей в себя хронические гепатиты (ХГ) и циррозы печени.

Современное лечение заболеваний печени, в частности хронических гепатитов, предусматривает воздействие на основные механизмы повреждения печени. Прежде всего, это этиотропная - противовирусная терапия. С этой целью применяется целый ряд препаратов, а именно иммуносупрессивного воздействия: преднизолон, азатиоприн, внутривенного введения аминокислотных смесей посредством назначения гепатостерила и аминостерила, назначение препаратов, нормализующих функцию гепатоцитов, антивирусных препаратов, иммунодепрессантов, иммуномодуляторов (1, 2).

Недостатками такого способа лечения больных хроническим гепатитом являются: указанные медикаментозные препараты ведут к восстановлению функции клеток печени, не восстанавливая ее структуру, они не способны воздействовать на этиологический фактор, вирусы гепатита В, С, Д, Е, в то же время лечение ими сопровождается большим количеством побочных эффектов.

В настоящее время в терапии патологии печени значительную роль отводят препаратам, защищающим печень от повреждения - гепатопротекорам: /эссенциале, легален, гептрал, аминостерил, гепатостерил/, назначение препаратов, улучшающих микроциркуляцию тканей печени /солкосерил, актовегин, пентоксифиллин/, назначение иммуносупрессивных фармакологических препаратов /преднизолон, делигил, азатиоприн/ для снижения количества иммуноциркулирующих комплексов (3).

Недостатками такого способа лечения больных хроническим гепатитом являются: осуществление воздействия не на этиологический фактор заболевания, назначение лекарственных препаратов в данном способе не способно восстановить структуру печени, следовательно, такой способ лечения не достаточно эффективен.

Однако ни одно из средств традиционной терапии не обладает одновременным воздействием на все звенья патогенетической цепи ХДЗП, поэтому стандартные схемы лечения используют несколько препаратов в комплексе. Неудовлетворенность результатами применения средств традиционной терапии для уменьшения токсического повреждения печени, а также зачастую высокая стоимость лечения придают особую актуальность проблеме поиска новых способов терапии данной категории больных.

В качестве прототипа по наиболее близкой технической сущности нами выбран способ уменьшения токсического повреждения печени, заключающийся в комплексной терапии, включающей препарат полиен.

Полиен представляет собой биологически активную добавку (БАД) с концентрацией эйкозопентаеновой и докозогексаеновой кислот не менее 25% (ОАО «Полярис» г.Мурманск), где полиненасыщенные кислоты содержатся в нативном состоянии. Применение полиена (3,6 г в течение 30 дней) при ХГ приводит к улучшению самочувствия, снижению проявления болевого, астеновегетативного синдромов, восстановлению активности антиоксидантной системы, снижению цитолиза, нормализации показателей иммунной системы в более ранние сроки, чем при традиционной терапии (4, 5).

Техническим результатом изобретения является расширение арсенала средств, используемых для снижения токсического повреждения печени.

Технический результат достигается путем внутрижелудочного введения в организм комбинации полиена 1,0 мл/кг и нейрозима 250 мг/кг.

Нейрозим (биотон) - вещество, свойства которого изучаются в последние 10 лет (6, 7, 8, 9). Нейрозим представляет собой смесь аминокислот и низших пептидов. Получают путем переработки пекарских дрожжей с использованием автолитической деструкции, ионообменной хроматографии, упаривания и усушки.

Внешний вид - аморфный порошок белого или кремового цвета;

- растворимость в воде (5 г /100 мл, 20°С) - не менее 99%;

- рН 5% водного раствора - 6,0-7,4;

- содержание аминокислот, % - 78±15;

- влажность (потеря в массе при высушивании), % - не более 10;

- содержание тяжелых металлов, % - не более 0,001;

- зольность (остаток после прокаливания в виде сульфатов) % - не более 1,0.

Препарат не содержит белки, липиды, нуклеиновые кислоты и их фрагменты (табл.1).

Известно, что нейрозим оказывает выраженное стрессопротекторное (7, 8), гепатопротекторное (6, 9) действия.

Однако в доступной литературе отсутствуют сведения о наличии антиоксидантных и иммуномодулирующих свойств у этого вещества. Как показал проведенный анализ имеющейся научной и патентной информации, сведений, относящихся к использованию для уменьшения токсического повреждения печени комбинации полиена и нейрозима, не обнаружено.

Существенным признаком изобретения, совпадающим с признаком прототипа, является введение в организм препарата полиен.

Существенными отличительными признаками изобретения являются внутрижелудочное введение в организм комбинации веществ (полиена - 1,0 мл/кг и нейрозима 250 мг/кг) с целью изменения силы и выраженности фармакологического действия.

Полиненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК) участвуют в формировании клеточных мембран, регуляции водно-солевого баланса, уровня холестерина и триглицеридов, иммунных процессов и др. Применение комплекса аминокислот прежде всего связано с влиянием на пластический и энергетический обмены.

Выявлено одновременное комплексное нормализующее действие комбинации полиена и нейрозима на основные звенья патогенетической цепи возникновения и развития ХГ при их внутрижелудочном введении: детоксикационное, антиоксидантное, мембраностабилизирующее, иммуномодулирующее, регенерирующее при отсутствии побочного токсического воздействия:

- Детоксикационный эффект комбинации веществ связан с их влиянием на энергетический и пластический обмены гепатоцитов (нормализация антитоксической и экскреторной функций печени); снижением уровня продуктов перикисного окисления липидов (ПОЛ) как в плазме крови, так и в гепатоцитах.

- Антиоксидантный эффект комбинации веществ реализуется за счет повышения активности ферментов антиоксидантной системы (АОС) в крови и гепатоцитах, особенно при их исходно низких значениях, что подчеркивает физиологичность проводимой терапии.

- Мембраностабилизирующий эффект предложенной комбинации реализуется за счет снижения интенсивности процессов воспаления (за счет активного введения ω-3 ПНЖК и аминокислот, формирующих пул эйкозаноидов с иной функциональной активностью).

- Иммуномодулирующее действие комбинации веществ обусловлено их влиянием на специфические и неспецифические механизмы иммунного ответа при ХГ. Полиен в комбинации с нейрозимом нормализует число В-лимфоцитов, содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), в то же время увеличивают поглотительную и фагоцитарную активность макрофагов.

- Регенерирующий эффект изучаемой комбинации полиена и нейрозима реализуется в снижении процессов некробиоза и некроза (при токсическом повреждении печени) и формировании более ранних и выраженных адаптационных процессов. Полиен в комбинации с нейрозимом усиливают процессы естественной регенерации печени при частичной гепатэктомии (ЧГЭ).

Предложенная схема способствует улучшению функционального и морфологического состояния печени, обеспечивает более значительную положительную клиническую и биохимическую динамику по сравнению с прототипом, отсутствие побочных эффектов.

Сущность изобретения выражается в совокупности существенных признаков, достаточной для достижения обеспечиваемого изобретением технического результата.

Для раскрытия сущности изобретения ниже приведены результаты экспериментального изучения заявленного способа.

Оценка детоксикационного, антиоксидантного, мембраностабилизирующего, иммуномодулирующего, регенерирующего, мембранно- и гепатопротекторного действий комбинации полиена и нейрозима проведена в экспериментальных исследованиях на крысах на двух моделях: 1) повреждение печени, вызванное четыреххлористым углеродом, и 2) частичной гепатэктомии.

Защитное действие веществ на модели повреждения печени CCl₄ изучали при профилактическом и лечебном применении комбинации полиена и нейрозима. Эксперименты выполнены на 378 нелинейных белых крысах-самцах, массой 180-200 г.

Подострое токсическое поражение печени четыреххлористым углеродом формировали введением CCl₄ подкожно в дозе 2 мл/кг в смеси с подсолнечным маслом (1:1) 3 раза в неделю в течение месяца. Полиен и его комбинацию с нейрозимом вводили внутрижелудочно, в дозах: полиен - 1,0 мл/кг и нейрозима - 250 мг/кг, один раз в сутки. О действии комбинации полиена и нейрозима судили по выживаемости животных, состоянию антитоксической функции печени, о которой судили по продолжительности гексеналового наркоза (80 мг/кг) и экскреторной функции печени, которую оценивали с помощью бромсульфалеиновой пробы. Кроме того, в сыворотке крови определяли активность АсАТ, АлАТ, ЩФ, ГГТ; белковые фракции. В гепатоцитах определяли интенсивность протекания перекисного окисления липидов (ДК, ГПЛ, МДА) и активность антиоксидантной системы (каталаза, СОД). Состояние иммунной системы оценивали по содержанию ЦИК, активности комплемента, биоцидной и поглотительной активности макрофагов, содержанию АОК и РОК. Для гистологического исследования кусочки печени фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина и заливали в парафин. Серийные срезы окрашивали гематоксилином и эозином.

Модель частичной гепатэктомии

Эксперименты выполнены на 96 нелинейных крысах-самцах весом 250-270 г. Частичную гепатэктомию выполняли по известной методике A.M.Higgins and P.M.Anderson (1931) (10), удаляя левую боковую и центральную доли печени (2/3 части всей печени) под нембуталовым наркозом (70 мг/кг).

Полиен и его комбинацию с нейрозимом вводили внутрь в дозе 1,0 мл/кг; 250 мг/кг на следующий день после операции и затем ежедневно однократно в течение 7 дней, так как максимальный прирост массы печени у крыс наблюдается именно в первые 7 суток после частичной гепатэктомии (11).

Для количественной оценки процессов регенерации в печени рассчитывали коэффициент полноты регенерации, предложенный Е.Б.Шустовым, В.В.Гайворонской и соавт. (12).

Функциональную активность печени оценивали по продолжительности гексеналового сна, отражающего состояние микросомальной системы, метобилизирующей ксенобиотики, в частности гексенал. Гексенал вводили внутрибрюшинно в дозе 80 мг/кг.

Кроме того, в сыворотке крови определяли уровень общего белка и белковых фракций, активность ферментов.

Морфологические методы использовались при оценке интенсивности репаративных процессов. Срезы окрашивали гематоксилинэозином по Ван-Гизону.

В ходе экспериментов было установлено, что введение комбинации полиена и нейрозима способствовало увеличению выживаемости животных при отравлении CCl₄ в большей степени по сравнению с нейрозимом и полиеном при их применении в отдельности (табл.2).

Применение комбинации указанных средств способствовало восстановлению антитоксической и экскреторной функций печени, что характеризовалось сокращением продолжительности гексеналового сна (на 78,1% по сравнению с контролем) и нормализацией секреции бромсульфина (табл.3).

Применение комбинации полиена и нейрозима как в профилактических, так и в лечебных целях оказывало гепатопротекторное действие, что сказалось на уменьшении эффекта цитолиза (мембраностабилизирующее) и снижении активности ферментов в сыворотке крови. Следует отметить, что активность АсАТ снижалась в 2,7 раза, АлАТ - в 3,9 раза по сравнению с контролем, а активность ЩФ и ГГТ при применении комбинации полиена и нейрозима соответствовала показателям интактных животных (табл.4).

В эксперименте было установлено, что комбинация полиена и нейрозима еще в большей степени, чем указанные вещества в отдельности способствует восстановлению белковообразовательной функции печени. Так, при введении комбинации веществ происходило увеличение концентрации общего белка в сыворотке крови до 75,5±0,06 г/л при 54,40±0,24 г/л в контроле; нормализовалось соотношение между альбуминами и глобулинами и альбуминово-глобулиновый коэффициент соответствовал таковому у интактных животных (табл.5).

Изучение влияния комбинации полиена и нейрозима на интенсивность ПОЛ и активность АОС в гепатоцитах показало, что при введении вышеуказанной комбинации веществ интенсивность ПОЛ значительно снижается во все сроки исследования (табл.6), что говорит о выраженном антиоксидантном действии.

В то же время полиен в комбинации с нейрозимом в большей степени, чем вещества в отдельности способствовал нормализации активности ферментов антиоксидантной системы, особенно к 21 дню исследования. Эффект комбинации веществ был сравним с эффектом токоферола в дозе 100 мг/кг (табл.6).

О влиянии полиена в комбинации с нейрозимом на активность иммунной системы при хроническом подостром токсическом гепатите судили по уровню Т- и В-лимфоцитов, титру комплемента, концентрации циркулирующих иммунных комплексов. Кроме того, вычисляли индекс селезенки (отношение массы селезенки к массе тела × 1000). Также проводили определение числа антителообразующих (АОК) и розеткообразующих (РОК) клеток селезенки и фагоцитарную и биоцидную активность макрофагов перитонеального экссудата.

В ходе исследования было установлено, что при токсическом гепатите, вызванном CCl₄, количество В-лимфоцитов в крови снижалось в 1,8 раза (с 46,0±0,5 до 24,7±0,3%), при этом число АОК в селезенке увеличивалось в 1,3 раза по сравнению с интактными животными. Уровень ЦИК увеличивался на 74,2%, биоцидная и поглотительная активность макрофагов снижалась на 71,6% и 93,4% соответственно (табл.7).

Ежедневное применение комбинации веществ в течение месяца приводило к нормализации числа В-лимфоцитов, снижению ЦИК практически до показателей интактных животных. В то же время фагоцитарная (поглотительная) активность макрофагов увеличилась во все сроки исследования, достигала значения интактных животных и составила 0,1247±0,0002 (на 200 тыс.клеток) к 21 дню применения комбинации средств (табл.7). Следует отметить, что применение комбинации средств вызывало достоверное увеличение АОК и РОК в селезенке.

Таким образом, можно предположить, что полиен в комбинации с нейрозимом при терапевтическом использовании обладают иммуномодулирующим эффектом.

Морфологическое исследование печени при экспериментальном токсическом повреждении четыреххлористым углеродом с профилактическим и лечебным введением комбинации полиена и нейрозима проводили в следующих сериях опытов:

1. Интактные животные.

2. Контрольные - введение CCl₄ в течение 4-х дней.

3. Профилактическое введение комбинации (полиен - 1 мл/кг, нейрозим - 250 мг/кг) в течение 7 дней до введения CCl₄. Введение CCl₄ производилось в течение 4-х дней (1 раз в день по 0,4 мл). Ткань печени для исследования брали на 7 сутки опыта.

4. Лечебное введение комбинации (полиен - 1 мл/кг, нейрозим - 250 мг/кг) в течение 21 дня после введения CCl₄. Ткань печени для исследования брали на 7, 14 и 21 день. Все группы, включая контрольные, представлены одинаковым числом животных - шесть особей.

В интактной группе животных при исследовании ткани печени определяли четкое дольковое строение с радиальным расположением балок, четкими их границами, хорошо выраженными синусами. Гепатоциты - с эозинофильной цитоплазмой, мономорфными ядрами. Встречалось небольшое количество клеток с крупнокапельной жировой дистрофией, гиперхромными ядрами. Портальные тракты были тонкие с полнокровными сосудами, единичными лимфоцитами (фиг.1, А. Профилактическое применение комбинации полиена и нейрозима при токсическом повреждении печени крыс).

В контрольной группе (введение CCl₄ в течение 4-х дней) в печени наблюдалась картина острого, токсического, агрессивного гепатита. Дольки были значительно увеличены, не имели четких границ, синусы были сдавлены увеличенными в размерах гепатоцитами. Имелось субтотальное повреждение гепатоцитов с явлениями мелкокапельной жировой гидропической баллонной дистрофии. На этом фоне отмечались участки некробиоза и некроза гепатоцитов. В участках небольшой протяженности с менее выраженным повреждением имелись гепатоциты с полиморфизмом и гипертрофией ядер. Портальные тракты были с лимфоидными инфильтратами, интенсивность лимфоидной инфильтрации варьировала (фиг.1, Б. Профилактическое применение комбинации полиена и нейрозима при токсическом повреждении печени крыс).

При введении комбинации полиена и нейрозима с профилактической целью, морфологические изменения варьировали и, несмотря на это, имелась однотипность морфологической картины. Интенсивность и распространенность повреждения паренхимы имела существенные отличия от контрольной группы. Отмечалось снижение интенсивности и распространенности гидропической дистрофии, редко наблюдалась баллонная дистрофия. Некробиотические и некротические изменения были непостоянны и имели мелкоочаговый характер. Была выражена тенденция к восстановлению радиального расположения балок, отмечалось увеличение числа гепатоцитов с гиперхромными и полиморфными ядрами. Лимфоидная инфильтрация была нерегулярна и менее выражена (фиг.1, В. Профилактическое применение комбинации полиена и нейрозима при токсическом повреждении печени крыс).

На 7-е сутки исследования в подопытной группе животных, получавших комбинацию с лечебной целью, в большинстве случаев наблюдались тенденция к восстановлению балочного строения благодаря снижению набухания, гидропической дистрофии гепатоцитов. У 70% животных процессы повреждения имели очаговый характер. Во многих дольках в перипортальных и промежуточных зонах отмечалось увеличение числа гепатоцитов с полиморфными ядрами, двуядерных клеток. Портальные тракты были с нерегулярной инфильтрацией (фиг.2, Б Лечебное введение комбинации веществ при повреждении печени крыс четыреххлористым углеродом, 7 сутки).

На 14-е сутки исследования в контрольной группе при отчетливом снижении интенсивности и распространенности процессов повреждения нарастали инфильтративно-склеротические изменения в портальных трактах.

Они характеризовались удлинением, расширением междольковых структур, их лимфоплазмоцитарной инфильтрацией. Соотношение склероза и инфильтрации, так же как и степень выраженности этих процессов широко варьировала. В отдельных участках имелось сближение трактов между собой (фиг.3, А. Лечебное введение комбинации средств при повреждении печени четыреххлористым углеродом, 14 сутки).

Применение комбинации полиена и нейрозима с лечебной целью в те же сроки исследования выявило отчетливое, нарастающее восстановление радиального расположения балок и их взаимоотношений с синусами. Проявления гидропической, жировой дистрофии были непостоянны и слабо выражены, носили очаговый характер. В большинстве долек имелось большое число двуядерных клеток, клеток с гипертрофией ядер. Лимфоплазмоцитарная инфильтрация портальных трактов была нерегулярна, слабо выражена (фиг.3, Б. Лечебное введение комбинации средств при повреждении печени четыреххлористым углеродом, 14 сутки).

На 21-е сутки исследования в контрольной группе определялись четко выраженные проявления хронизации патологического процесса: портальные тракты удлинены, расширены с тенденцией к ампулярности. Склероз нередко сочетался с лимфоплазмоцитарной инфильтрацией, выходящей за пределы портальных трактов. В 40% случаях прогрессирование склеротических и инфильтративных процессов сочеталось с нарастанием повреждения гепатоцитов. В участках выраженной гидропической дистрофии появлялись очаги баллонной дистрофии и очаговые некрозы гепатоцитов. Компенсаторно-приспособительные ядерные изменения были нерегулярны и слабо выражены (фиг.4, А Лечебное введение комбинации средств при повреждении печени четырехлористым углеродом, 21 сутки).

При применении комбинации веществ в те же сроки исследования в большинстве наблюдений отмечались непостоянные, очаговые проявления повреждения паренхимы в сочетании со значительно выраженными проявлениями ядерного полиморфизма, гиперхроматоза, гипертрофии ядер. В 20% наблюдений они имели распространенный характер. Несмотря на отчетливое и значительное снижение интенсивности повреждения, наблюдалось постоянство склеротических и инфильтративных изменений, которые ограничивались портальными трактами (фиг.4, Б Лечебное введение комбинации средств при повреждении печени четыреххлористым углеродом, 21 сутки).

Таким образом, проведенное морфологическое исследование ткани печени при токсическом повреждении, вызванным введением CCl₄ и профилактическим и лечебным введением комбинации веществ, показало вариабельность течения патологического процесса и вместе с тем возможность выявить основные тенденции их развития.

Так в контрольной группе животных имелась картина острого, агрессивного токсического гепатита с субтотальным поражением печени. Повреждение паренхимы преобладало над стромальными и компенсаторно-приспособительными процессами.

При профилактическом введении комбинации полиена и нейрозима наблюдалось отчетливое снижение интенсивности и распространенности повреждения паренхимы, нерегулярность некробиотических и, особенно, некротических изменений, снижение клеточной инфильтрации в строме и паренхиме. У животных этой группы обнаружены наименее выраженные проявления токсического повреждения печени. Эти изменения имели характер острого гепатита с умеренной активностью.

При оценке лечебного эффекта комбинации веществ обнаружилась отчетливая положительная динамика морфологических процессов уже на 7 сутки опыта. Отмечалось снижение интенсивности и распространенности дистрофических процессов, наличие редких некротических изменений, нарастание компенсаторно-приспособительных морфологических проявлений, которые коррелировали со снижением инфильтрации портальных трактов клетками лимфоплазмоцитарного ряда.

На 14 сутки, так же как и в контрольной группе, при тенденции к дальнейшему снижению интенсивности и распространенности повреждения становились более выраженными процессы хронизации. В соответствии с этим были постоянными и выраженными склеротические и инфильтративные изменения в пределах портальных трактов. В контрольной группе хронизация была наиболее выражена. В этом сроке опыта процесс приобретал характеристику хронического гепатита с умеренной активностью.

К концу эксперимента отмечались (21 сутки) более выраженные различия между контрольной и опытной группами животных. В контроле усиливалась тенденция к хронизации и анулярности роста соединительной ткани. На этом фоне имелись проявления активизации процессов повреждения с развитием портальных и внутридольковых клеточных инфильтратов. Процесс приобретал морфологические особенности хронического гепатита в активной фазе течения.

В опытной группе, при наличии умеренных склеротических процессов в портальных трактах, у большей части животных имелась четкая тенденция к значительному снижению процессов повреждения и нарастанию компенсаторно-приспособительных процессов в паренхиме с восстановлением паренхиматозно-стромальных отношений. В связи с выраженной положительной динамикой у большей части животных процесс имел морфологические особенности свойственные хроническому гепатиту с низкой степенью активности.

Выявление лечебных свойств комбинации полиена и нейрозима при частичной резекции печени.

Результаты исследований показали, что на 7-е сутки после частичной гепатэктомии в группе животных, получавших комбинацию веществ, коэффициент полноты регенерации печени на 19% превосходил таковой у контрольных крыс; препарат сравнения карсил не оказывал эффекта (фиг.5, Влияние полиена в комбинации с нейрозимом на продолжительность гексеналового сна (мин) и коэффициент полноты регенерации (%) при частичной гепатэктомии (ЧГЭ)).

Кроме того, в исследованиях установлено, что регенерация печени сопровождалась восстановлением ее антитоксической функции. Так, продолжительность гексеналового сна у животных опытной группы в результате терапии комбинацией веществ составляла 177,8%, тогда как у крыс контрольной группы (без лечения) - 278,5%. (фиг.5. Влияние полиена в комбинации с нейрозимом на продолжительность гексеналового сна (мин) и коэффициент полноты регенерации (%) при частичной гепатэктомии (ЧГЭ)).

Полученные данные указывают на способность тестируемой комбинации полиена и нейрозима стимулировать естественную регенерационную способность гепатоцитов (регенерирующая) и восстанавливать антитоксическую (детоксикационная) функцию печени. Карсил на модели частичной гепатэктомии не оказывал влияния на продолжительность гексеналового сна и регенерацию печени. Обнаруженное нами достоверное усиление процессов регенерации в печени после ЧГЭ при терапии комбинацией средств по сравнению с естественной регенерационной способностью печени, наблюдаемой в группе животных, получавших физиологический раствор (2 группа), по-видимому, связано со способностью препаратов стимулировать синтез белка.

Экспериментальное исследование показало, что комбинация полиена и нейрозима оказывает защитное действие на печень при ее повреждении CCl₄ и частичной резекции:

- восстанавливает антитоксическую функцию;

- нормализует экскреторную функцию;

- снижает интенсивность ПОЛ и повышают активность АОС гепатоцитов;

- благоприятно влияет на белковообразовательную функцию;

- обладают иммуномодулирующим эффектом;

- гистологические исследования позволяют заключить, что комбинация полиена и нейрозима защищает гепатоциты от повреждающего воздействия гепатотропного яда, проявляющееся в снижении процессов некробиоза и некроза и более отчетливой выраженности адаптационных процессов.

Защитное и лечебное действия комбинации нарастают при повторном введении и достигают пика к концу 3-й недели применения.

Таким образом, выявлено одновременное комплексное нормализующее действие комбинации полиена и нейрозима на основные звенья патогенетической цепи возникновения и развития ХГ при их внутрижелудочном введении: детоксикационное, антиоксидантное, мембраностабилизирующее, иммуномодулирующее, регенерирующее при отсутствии побочного токсического воздействия. Использование комбинации полиена и нейрозима расширяет арсенал средств, используемых для уменьшения токсического повреждения печени.

Таблица 1
АМИНОКИСЛОТНЫЙ СОСТАВ ВЕЩЕСТВА НЕЙРОЗИМ№АминокислотаСодержание, %1.Аспарагиновая кислота6,2±0,92.Треонин3,2±0,53.Серин2,9±0,44.Глутаминовая кислота7,5±1,15.Пролин3,9±0,66.Глицин3,5±0,57.Аланин7,7±1,18.Цистеин7,7±1,19.Валин5,6±0,810.Метионин0,7±0,111.Изолейцин4,6±0,712.Лейцин7,4±1,113.Тирозин0,9±0,114.Фенилаланин3,5±0,515.Лизин8,5±1,216.Гистидин1,5±0,217.Аргинин0,9±0,318.Гамма-аминомасляная кислота4,9±0,719.Орнитин2,9±0,420.Низшие пептиды 

Таблица 2
Выживаемость крыс с подострым поражением печени CCl₄ и лечением полиеном, нейрозимом и их комбинациейСерия опытов и дозыЧисло крыс в серии, принятое за 100%Из них выжилоЧислоВ процентахИнтактные2020100CCl₄ 2 мл/кг через день в течение месяца201155CCl₄ 2 мл/кг по схеме + нейрозим 250 мг/кг ежедневно в течение месяца201890CCl₄ 2 мл/кг по схеме + полиен 1 мл/кг ежедневно в течение месяца201785CCl₄ 2 мл/кг по схеме + полиен и нейрозим ежедневно в течение месяца201995CCl₄ 2 мл/кг по схеме + розанол 30 мг/кг ежедневно в течение месяца201575Таблица 3
Влияние полиена, нейрозима, их комбинации и розанола на продолжительность гексеналового сна и бромсульфалиеновую пробу у крыс после введения CCl₄ в течение месяцаСерии опытовГексеналовый сон (мин)Бромсульфалиеновая пробаИнтактные15,8±0,28,17±0,27CCl₄ 2 мл/кг через день в течение месяца83,5±1,1*23,44±0,25*CCl₄ 2 мл/кг через день в течение месяца + полиен 1,0 мл/кг27,2±1,3*^a13,28±0,31*^aCCl₄ 2 мл/кг через день в течение месяца + нейрозим 250 мг/кг32±1,5*^a15,23±0,23*^aCCl₄ 2 мл/кг через день в течение месяца + комбинация полиена и нейрозима18,32±0,4*^а11,41±1,07*^aCCl₄ 2 мл/кг через день в течение месяца + розанол 30 мг/кг45,2±0,1*^a17,12±0,53*^aПримечание: * - р≤0,05 по отношению к интактным животным;^а - р<0,05 по отношению к контрольной группе.

Таблица 4
Влияние полиена, нейрозима, их комбинации и розанола на активность ферментов в сыворотке крови у крыс с подострым токсическим поражением печениСерия опытов и дозы в мг/кг массыАсАТ, мкмоль/лАлАТ, мкмоль/лЩФ, нмоль/с.л.ГГТ, нмоль/с.л.Интактные0,40±0,010,36±0,01547,48±0,39578,48±1,53CCl₄ 2 мл/кг через день в течение месяца2,32±0,04*2,13±0,03*1840,48±0,37*1591,12±4,40*CCl₄ 2 мл/кг по схеме + полиен 1 мл/кг ежедневно в течение месяца1,18±0,02*^аб0,98±0,02*^а933,87±1,14*^аб483,17±0,05*^абCCl₄ 2 мл/кг по схеме + нейрозим 250 мг/кг ежедневно в течение месяца1,27±0,02*^аб0,97±0,02* ^а940,15±0,09*^аб590,41±0,16*^абCCl₄ 2 мл/кг по схеме + комбинация полиен + нейрозим 21 день (лечебная серия)0,86±0,01*^аб0,54±0,01*^аб566,78±0,69*^аб581,0±1,17*^абCCl₄ 2 мл/кг по схеме + розанол 30 мг/кг ежедневно в течение месяца1,33±0,02* ^а1,13±0,01 *^а1008,17±0,31*^а516,17±0,40*^аПримечание: * - р0,05 по отношению к интактным животным;^а - р≤0,05 по отношению к контрольной группе;^б - р≤0,05 по отношению к животным, получавшим розанол

Таблица 5
Влияние полиена, нейрозима, их комбинации и розанола на белковообразовательную функцию печени у крыс с подострым токсическим поражением печени CCl₄Серия опытов и дозыОбщий белок, г/лАльбумины, %Глобулины, %А/ГАльфа₁Альфа₂БетаГаммаИнтактные64,9±1,5347,8±0,038,70±0,248,2±0,2316,3±0,0519,1±0,011,01±0,03CCl₄ 2 мл/кг через день в течение месяца54,4±0,24*40,4±0,35*10,0±0,03*11,7±0,19*20,3±0,65*40,4±0,35*0,68±0,01*CCl₄ 2 мл/кг по схеме + полиен 1 мл/кг ежедневно в течение месяца72,8±0,03*^аб48,0±0,05^аб8,7±0,04^аб9,0±0,03*^аб16,0±0,50^а18,2±0,01*^аб0,90±0,02*^абCCl₄ 2 мл/кг по схеме + нейрозим 250 мг/кг ежедневно в течение месяца71,9±0,03*^аб46,8±0,08*^аб8,1±0,01*^аб9,6±0,01*^аб16,5±0,03*^аб18,9±0,01*^аб0,90±0,02*^абCCl₄ 2 мл/кг по схеме + комбинация полиен + нейрозим 21 день (лечебная серия)75,5±0,55*^аб49,0±0,50^аб8,9±0,01*^аб10,6±0,21*^a16,2±0,17^аб18,4±0,05*^аб0,96±0,02^абCCl₄ 2 мл/кг по схеме + розанол 30 мг/кг ежедневно в течение месяца69,3±0,04*^а43,1±0,03*^а9,9±0,03*^а10,6±0,03*^а16,0±0,01^а20,1±0,2*^а0,75±0,02*^аПримечание: * - р≤0,05 по отношению к интактным животным;^а - р≤0,05 по отношению к контрольной группе;^б - р≤0,05 по отношению к животным, получавшим розанол.

Таблица 6
Влияние комбинации полиена и нейрозима на состояние ПОЛ и АОС гепатоцитов крыс с подострым поражением печениСерия опытов и дозыПоказатели ПОЛ, нмоль/гПоказатели АОСДКГПЛМДАКаталаза, мкмоль·г^-1c^-1СОД, УЕ на г тк/минИнтактные195,63±3,2142,93±0,406,40±0,1594,57±0,6724,74±0,14CCl₄ 2 мл/кг через день в течение месяца283,2±0,54*95,14±0,46*12,53±0,17*31,52±0,20*9,50±0,20*CCl₄ 2 мл/кг по схеме + комбинация полиен 1 мл/кг + нейрозим 250 мг/кг 7 дней (лечебная серия)220,00±1,83 *^аб80,55±0,33* ^аб6,85±0,10*^аб53,09±0,54*^аб17,04±0,75*^абCCl₄ 2 мл/кг по схеме + комбинация полиен 1 мл/кг + нейрозим 250 мг/кг 14 дней (лечебная серия)231,58±0,76 *^аб51,92±0,21*^аб5,30±0,05*^аб61,65±0,22*^аб19,05±0,06*^аCCl₄ 2 мл/кг по схеме + комбинация полиен 1 мл/кг + нейрозим 250 мг/кг 21 день (лечебная серия)196,93±0,30 *^аб50,63±0,20 *^аб5.46±0,23 *^аб84,95±0,48*^аб20,83±0,38*^абCCl₄ 2 мл/кг по схеме + токоферол 100 мг/кг257,09±0,34*^а34,09±0,66*^а7,18±0,25*^а87,23±0,97*^а19,98±0,29*^аПримечание: * - р≤0,05 по отношению к интактным животным;^а - р≤0,05 по отношению к контрольной группе;^б - р≤0,05 по отношению к животным, получавшим токоферол.

Таблица 7
Влияние комбинации полнена и нейрозима на состояние иммунной системы при подостром токсическом поражении печениСерия опытовУровень Т-лимф. в селезенке (%)Уровень В-лимф. в селезенке (%)ЦИК (ед. опт. плотн.)Поглотительная акт-ть макрофагов (200 тыс.кл)Биоцидная Активность макрофаговЧисло АОК (*10^-6)Число РОК (%)базальнаястимулированнаяИнтактные44,1±2,746,0±0,50,62±0,0010,1257±0,00010,074±0,0030,084±0,005317,4±9,411,8±0,4CCl₄ 2 мл/кг через день (месяц)42,2±1,524,7±0,3*1,08±0,001*0,0083±0,0001*0,021±0,002*0,027±0,004*417,1±5,7*9,5±0,8*CCl₄ 2 мл/кг по схеме + комбинация в-в 7 дней43,4±2,345,1±0,3^а0,98±0,002*^a0,0956±0,0002*^a0,072±0,001^а0,082±0,003^a404,0±6,8*10,6±0,3*^aCCl₄ 2 мл/кг по схеме + комбинация в-в 14 дней44,1±2,5^а45,8±0,3^a0,89±0,002*^a0,1245±0,0001*0,084±0,001*^а0,092±0,005*^a911,0± 14,2*^a14,2±0,6*^aCCl₄ 2 мл/кг по схеме + комбинация в-в 21 день44,3±1,945,2±0,5^a0,71±0,001*^a0,1247±0,0002*0,091±0,002*^а0,091±0,002*^a961,0±15,4*^a11,6±0,5*^aПримечание: * - достоверно, по отношению к интактным животным, при р<0,05; ^а - достоверно, по отношению к контрольной группе (№2), при р<0,05

Литература

1. Недогода В.В. Фармакотерапия хронических диффузных заболеваний печени. Новые лекарства и новости фармакотерапии. 2000. 6. С.3-16.

2. Подымова С.Д. Болезни печени. // Руководство для врачей. - М.: Медицина, 1999. - 704 с.

3. Краткое руководство по гастроэнтерологии. / Под ред. Ивашкина В.Т., Комарова Ф.И., Рапопорта С.И. М.: 2001. С.161-164.

4. Бабак С.В. Полиен в лечении хронического гепатита. В монографии: Омега-3 полиненасыщенные жирные кислоты, фармакология, клиническое применение. / Под ред. Бурбелло А.Т. 2005. С.252-293.

5. Исаева Н.Р., Денисенко Н.П. Лечебное и профилактическое применение препаратов незаменимых ненасыщенных жирных кислот. // Клиническая фармакология и терапия. - М., 1997. - №9. - С.47-52.

6. Викленко С. В., Денисенко Н.П. Влияние нейрозима (биотона) на дегидрогеназную активность мозга при его ишемии. // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии: Материалы Всероссийской конференции с международным участием НИИ ЭМ РАМН. - СПб, 1999. - С.58-59.

7. Коссовский Э.А., Н.П. Денисенко. Влияние нейрозима на некоторые функции мозга. // Актуальные вопросы экспериментальной и клинической фармакологии: Материалы всероссийской конференции. -Смоленск, 1994. - С.37-38.

8. Коссовский Э.А., Денисенко Н.П. Препараты метаболитного действия (нерозим, полиен, дисперфер) - новые средства профилактики и лечения различных заболеваний. // Человек и лекарство: Материалы 2-го Российского Национального конгресса - М., 1995. - С.144.

9. Федорова Н.В., Денисенко П.П., Денисенко Н.П. и др. Влияние комбинированного назначения незаменимых аминокислот и незаменимых ненасыщенных жирных кислот на репаративные процессы. // Человек и лекарство: Материалы 3-го Всероссийского национального конгресса. - М., 1996. - С.107.

10. Higgins A.M. and Anderson P.M. Experimental patology of the liver. // Arch. patol. 31. v.12, p.188.

11. Салопаев Б.П. Регенерация, адаптация, гомеостаз. Горький, Волго-Вятское издательство, 1990. - 152 с.

12. Шустов Е.Б., Гайворонская В.В., Катков В.Ф. Расчетный способ определения массы печени живой крысы. // Сб. рац. Предложений Вме-дА им. С.М.Кирова. Л.: - 1990. - вып.21. - С.93.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к экспериментальной фармакотерапии, и касается профилактики токсического повреждения печени. Для этого в течение 7 дней до токсического повреждения печени внутрижелудочно вводят в организм полиен в дозе 1,0 мл/кг и нейрозим в дозе 250 мг/кг. Способ обеспечивает комплексное детоксикационное, антиоксидантное, мембраностабилизирующее, иммуномодулирующее, регенерирующее воздействие на паренхиму печени при отсутствии побочного токсического эффекта и, как следствие, минимизацию токсического повреждения. 7 табл., 5 ил.

Способ профилактики токсического повреждения печени в эксперименте, заключающийся в том, что в течение 7 дней до токсического повреждения внутрижелудочно вводят в организм полиен 1,0 мл/кг и нейрозим 250 мг/кг.