Средство, проявляющее антиоксидантную активность Советский патент 1993 года по МПК A61K37/38 

Изобретение ртносится к медицине и биологии и касается применения хорйо:ни- ческрго гонадотропина в качестве средства: для нормализации переписного окисления:, липйдов (П0Л). Об активности ПОЛ судили по количеству nep.BWMHidx продуктов - диё- новых конъюгатов в Ткани печени и сердца;

Цель изобретения заключается в.следуг ющем: 1, Стойкость эффекта нормализации ; ПОЛ, т.к. имеющийся в арсенале средств, снижающих ПОЛ, практически только один, препарат - альфа-тркрферол|:не дает стбй- когоэффекта нормализации ПОЛ; 2, предлагается использовать в качестве средства для нормализации ПОЛ лечебный препар ат; 3; , отсутствие осложнений при л рименении го- -надотропина хорионйческогр в качестве- средства для нормализации ПОЛ; 4. просгр- та и доступность проведения курса лечения гонадотропином хорионическим; в т ом числе и амбулаторно. .-.; .

Указанная цель достигается применением отечественного коммерческого препарата хорионического гонадотропина - гонадотропина хорйоничекского. .

Сущность предлагаемого средства заключается в применении гонадотропйна хо- рирнйч скогр для нормализации актйвнЬстйПОЛ. Гормон применялся следу- ющим образом...-„ ;. / .

S самцов белых беспородных кры:с получающих CCI4 в количестве 20-ти инъекций ;й5 самцов белых беспородных крыс, пол-, уча1щих CC.I/t вдеченйе 5-ти месяцев, через , день после отмены CCJ4 получали гонадот- ррпин хорионический под кожу 1 раз в день в дозе от 75 БД до 85 ЕД на 100,0 массы тела животного в 1.2,3,9, ID, 11 дни после начала .лечения, ti крые, получавших 20. инъекций CCI4 и 6 kptae, получавших С Си в течение/ 5-ти месяцев после отмены CCI4 не лёчилиеь йслужилй нелеченым контролем. В качестве йнтактного контроля использовали 20 самцов белых беспородных крыс такого же возраста, как и:жиBOTHые, получившие СС14 и.

гор м о н; : :..: . . . :. : - .

Для нормализации ПО/ крысам через день после окончания введения СС14 как в: количестве 20-ти инъекций, так и в течение 5-ти месяцев-в виде 65% растроря в расти тельном масле в количестве 0,3 мл под кожу

сх к

is:

Т

no 4 раза в неделю, вводят гонадотропин хррионический двумя курсами по 3 инъекии один раз в день под кожу в 1, 2, 3, 9, 10 и 11 сутки после начала его применения в дозе от 75 ЕД до 85 ЕД на 100,0 массы тела. Указанная доза гормона выбрана потому, что она оказывает биологическое действие на Организм. Курс в 3 инъекции был выбран потому, что через 48 часов после, двух инъекций гормона было установлено достоверно по сравнению С контролем снижение дионовых крнъюгатов в тканях, а третья инъекция была выполнена для закрепления эффекта двух первых инъекций/ 5-ти дневный перерыв между курсами введений препарата делали для того, чтобы дать организму передышку от действия гормона. Повторно 3-х дневный курс введения препарата делали для того, чтобы закрепить эффект действия первого курса.

; Через 2 и ТО суток у крыс, получавших 20 инъекций четырххлбристого углерода, после начала введения гормона брали на исследование ткань печени, У крыс, получивших четыреххлористый углерод в тече ни.е 5 мес. .Брали для исследования ткань , печени и сердца через 45 сут после начала , введения гормона. В соответствующйе сро-;ки брали ткань печени иЪёрдца на мссщ едо- вание у контрольных нелеченых, животных,

а также у животных.одмовозрэстного контроля:/ /... :. . .. ,::.: s .; : -.

. . Диеновыеконъюгаты определялиrf Me-:.. тоду И .Д.Стальной следующим обрз з ом ..

.: Навеску ткани замораживали в жидком. азоте и тщательно размельчал.и в охлажденной фарфоровой ступке/ Затем 0,3 г ка ткани печени и сердца растирали с 2,,мд экстрагирующей смеси гептана с:из6пропйл.овым спиртом в объемном-отношении 1:1. Полученную суспензию помещали в поли-, этиленовые пробирки,плотно закрывали пробками. Пробы центрифугировали 10 мин при4000 д. Надосадочную фракцию перейо еилй в градуированные пробирки и добавляли Т/ТО объема дистиллированной воды. После Двукратного встряхивания и расслаи--.

вания фаз отсасыв.али 0,5 мл гептановой фазы. К равным объемам по. 0,5 мл добавляли этиловый спирт в объемном отношении

1:5. Оптическую плотность проб измеряли на спектрофотометре СФ-26 при 233 нм в кв арцевых кюветах. . . Содержание .диеновых ко.нъютатов .в; пробе рассчитывали с учетом коэффициента экстинции; равного:2,2-Ю5 .

Под влиянием гонадотропина хориони- ческого через 48 ч после начала введения

его животным, получившим 20 инъекций

ССЦ по 0,3 мл 65% раствора CCI.i а расти,-.

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

тельном масле, к рличество диеновых конъ- югатов в печени снижается достоверно. (Р меньше 0,01} до 227,0±7,8 в сравнении с содержанием диеновых конъюгатов в печени нелеченых животных (451,8±72,0), без достоверной разницы (Р больше0,9) всрав- нении с интактными животными - 23Т,5±37,0, табл,1. Через 10 дней после начала лечения гормоном количество диеновых конъюгатов в .п.ечени крыс, получавших CCI4 в количестве 20 инъекций, было равно .282,1 ±13,7, при Р больше 0,3 в сравнении с нормой (231,5±37.р). , :: л ; ; : : .

У животных, получавших ССЦ в течение: 5 мае, в печени через 45 сут после й$чала введения гормона количество диеновых конъюгатов составило 508, при Р меньше 0,01 в сравнении с нелечеными животными - 84б,0±89,4 при Р больше. 0,5. в. сравнении содержанием диеновых конъю-; ; гатов в печени животных одновозрасткого интактного контроля - 453,0±32,5, табл.2.. V- У крыс, получавших ССЦ указанным курсом в течение 5 мёс, в сердце количество1: ;... диеновых конъюгатов. достоверно (Р ме н.ь- ше 0,01) увеличилось (636,5±116,5) по сравнению с нормой (278,6±28,98). Через 45 сут : после начала введения гонадотропина хори- ;

- омического количество :диеновых конъюга-; тов оказалось нормальным (355,9±28,3) при:...; Р меньше 0,05 в сравнении с н ёяё ч е н ьЫй ,

животным. и при Р больше 6,05 Ё сравнении :с интактными одновозрастными жйвотны- .. ;

ми, табл.З.-;;.. х ;;,;..: ;4 v,v ::V::v ...- V : П р им е р 1. Крыса Kk 80 получала под ч- кожу 20 инъекций по 0,3 мл 65% раствора : ССМ в растительном масле по.4 инъекции в неделю. Через день после отмены ССГ4КРЫ- ; са № 8б получала 2 дня подряд по Т инъекций в день гонадотропин хорионический в :. дозе 75 ЕД на 100,0 массы тела. Через 48 ч после начала введения гормона и через 72 часа после отмены CCU y крысы №80 брали . на исследовв ниётк.анй пецёйи и определяли в; ней количество диеновых конъюгатов еле- : дующим образом: навеску ткани заморажи- ; .- вали в жидком азоте и. тщательно размельчали в охлажденной фарфоровой ; ступке. Затем 0,3 г порошка ткани печени растирали с 2,7 мл экстрагирующей смеси гептана с изопропиловым спиртом в объемном отношении 1:1. Полученную суспензию помещали в полиэтиленовые пробирки, : плотно закрывали пробками. Пробу центрифугировали 10 мин при 4000 д. Надрса- дочную фракцию переносили а градуированные пробирки и добавляли 1/10 объема дистиллированной воды. После : двукратного встряхивания и расслаивания

фаз отсасывали 0,5 мл гептановой фазы. К равным объемам по 0,5 мл добавляли этиловый спирт в объемном отношении 1:5. Оптическую плотность пробы измеряли на спектрофотометре СФ-26 при 233 нм в кварцевых кюветах. Содержание диеновых конъю.гзтов рассчитывали с учетом коэффициента экстинкции, равного 2 2«105

. .. .- .. :, .. . ; ; :-.

Через 48 ч после введения двух инъекций гормона в ткани пе чени, крысы № 80 количество диеновых конъюгатов оказалось равным 208.8;нмоль/мг. Г:.:

П р и м е р 2, Крыса № 72 получала под кожу 20 инъекций по 0,3 мл 65% раствора CCU в растительном масле по 4 инъекции в неделю. Через 72 часапосле отмены СС14 у крысы № 72 .забирали для исследования ткань печени, в которой определяли количество диеновых конъюгатоБ следующим образом: навеску ткани замораживали в жидком азоте и тщательно размельчали в охлажденной фарфоровой ступке. Затем 0,3 г порошка ткани печени растирали с 2,7 мл; экстрагирующей смеси гептана.с изопррпи- ловым спиртом в. объемном отношении 1:1.. Подученную суспензию помещали в полиэтиленовые пробирки, плотно закрывала пробкой, Пробу центрифугировали при .4000 g на центрифуге. Надрсадочную ф ра к ц и ю п е рен о с и л и в г р а дуй р о ва ни ы е пробирки и добавляли 1 /10 объема дистиллированной воды; После двукратного встряхивания и расслоения фазЪтсасывалй 0,5 мл- гептановой фазы. К равным объемампо 0,5 мл добавляли этиловый сп ирт в объемном отношений 1:5. Оптическую плотность про-; бы измеряли на спектрофотометре при.233. нм в кварцевых кюветах. Содержа- ние диеновых конъюгатОё рассчитывали с учетом коэффициента экстинкции, равного 2,2ЧО -см4М 1. . . . ..- ;Ч л, .Через 72 часа после отмены CCI4, в тка--. ни печени крысы №72 количествгодйенов мх конъюгатов оказалось ра в и ы м 998,8 нмоль/мг.. . . : ...,; .:..

Приме р 3. Крыса М 106 получала 20 инъекций по 0,3 мл 65% раствора СС1з в растительном масле 4 раза в.неделю. Через день после отм.енььСС 4 эта крыса получила гонадотро.пин хорйонйчёский под кожу в до1- зе75 ЕД на 100,0 массы тела один раз вдень в 1, 2, 3 и 9 сутки после начала лечения. Через 1.0 суток после начала введения гормона у крыс № 106 брали на исслёдрвёййе ткань печени и определяли в ней количеств.о диеновых конъюгатов следующим образом: навё.ску ткани замораживали в жидком азо- те и тщательно размельчали в охлажденной фарфоровой ступке. Затем 0,3 г порошка

ткани печени растирали с 2,7 мл экстрагиру- ющей смеси гептана с изопропиловым спиртом в объемном отношении 1:1. Полученную суспензию помещали в полиэтиленовые 5 пробирки, плотно закрывали пробкой. Пробу центрифугировали 10 мин при 4000 g на центрифуге. Надосадочную фракцию переносили в градуированные пробирки и добавляли .1/1-0 объема дистиллированной 10 воды. После двукратного встряхивания и расслоения фаз отсасывали 0,5 мл гептановой фаэ-ы.; . :( -. ...: . , : . К равным объемам по 0,5 мл добавляли aTHrioffbiifi спирт в рбьемнрм отношении 1:5. 15 Оптическую плотнрсть пробы измеряли на ; спектрофотометре СФ-26 при 233 нм в кварцевыхкюветах. Содержание диеновых конъюгатов в пробе рассчитывали с учетом коэффициента экстинкции, равного 2,2-105

2о.см 1м 1.л:. / ; .,:;-, .-.-, .-. .

.Через 45 сут после начала лечения в печени крысы N 106 диеновые конъюгаты оказались,--в количестбе 236-, 1 нмоль/мг. ; ..П р и м е р 4 . Крыса ГФ 126 получала по 25 0,3 мл 65% раствора ССЦ в растительном :: масле в течение 5 .мес. Через день после Отмены-ССГ4, крысе № 126 вводили подхожу по одному разу в день гонадотрх пйн хр р ир- . нический э дозе 85 ЕД на 100Л0 массы тела 30 в 1, 2, 3, 9,1,, 11 дни после начала лечения. Через 45 сут после начала применения гор- мона . у кры сь /№ 126.брали печень на исслб- дование и определяли в ней количество диеновых конъюгатов следующим образом: 5 щвеску гканн змаражйва и в жидком азоте :--.. -и тЩательйо рйзмелбчали в охлажденной фарфоровой ступке. Затем 0,3 г порошка ткани; печени растирали с 2,7 мл экстрагиру- ./: ющей смеси гептана с изопропиловым спир- 0. :томi в; объемном ртнощенйи 1:1. Полученную суспензию гтЬмещали в. полиэтиленовые пробирки, плотно закрывали пробкой. Про- .; бу центрифугировали 10 мин при 4000 g на центрифуге. Надоеадочну1о фракцию пере- 5 нрсияи в градуированные пробирки и до- .;.: бааляди 1 /10 объема дистиллирдванной . После двукратного встряхивания и . расслоений фаз отсасывали 0,5 мл гептано- в.ой фазы. К равным объёма по 0,5 мл до- 0 бавлялй этиловый- Спирт в объемном ртношении 1:5. Оптическую плотность про бй измеряли.на спектрофотЬметре СФ-26 при 233 нм в кварцевых кюветах. Содержание диеновых конъюгатра В;пр6бе рассчиты- 5 вали с учетом коэффициента экстинкции. равного 2, см 1 M V

Через45еутпоЬле начала введения гормона количество диеновых конъюгатов в тка ни печени крысы Kfe 126 равнялось 326,8 нмоль/мг.

S

Пример 5. Крыса № 46 получала 0,3 мл 65% раствора CCU в растительном масле в течение 5 мес. Через 45 дней после отмены ССМ у крысы №46 взяли ткань печени на исследование диеновых конъюгатов следующим образом: навеску ткани замораживали в жидком азоте и тщательно размельчали в охлажденной фарфоровой ступке. Затем 0,3 г порошка ткани печени растирали с 2,7 мл экстрагирующей смеси гептана с изопропиловым спиртом в объемном отношении 1:1. Полученную суспензию помещали в полиэтиленовые пробирки, плотно закрывали пробкой. Пробу центрифугировали 10 мин при 4000 д.на центрифуге. Надбеадочную фракцию переносили в гранулированные пробирки и добавляли 1/10 объема дистиллированной воды..После двукратного встряхивания и расслоения фаз отсасывали 0,5 м л гептановой фазы. К равным объемам по 0,5 мл добавляли этиловый спирт в объемном отношении 1:5. Оптическую плотн.ость пробы измеряли на спектрофотометре СФ-26 при 233 н,м в кварцевых кюветах. Содержание диеновых конъюгатов в пробе рассчитывали с учетом коэффициента, экстйнции равного 2,2-10 М 1..

Через 45 дней после отмены CCU у крысы ч № 46 в печени диеновые коныогаты были в количестве 1089,6 нмоль/мг.

Пример 6. Крыса № 127 получала 0,3 . мл 65% раствора С СЦ в растительном масле . в течение 5-ти месяцев. Через день после отмены ССЦ крыса № 127 получала гонадот- . ропин хорионический.в дозе 85 ЕД н.а .100,0 массы тела в 1,2, 3, 9, 10, 11 дни после начала лечения. Через 45 суто.к после начала применения гормона у крысы N 127 брали .сердце из исследование диеновых конъюгатов следующим образом: навеску ткани за-, мораживали в жидком азоте и тщательно размельчали в. охлажденной фарфоровой ступке. Затем 0,3 г порошка печени расти-. рзли с 2,7 мл экстрагирующей смеси гептана с изопропиловым спиртом в объемном отношении 1:1. Полученную суспензию помещали в полиэтиленовые пробирки, плотно закрывали пробкой. Пробу центрифугировали 10 мин при 4000 g на центрифуге. Нэдосадоч- н.ую фракцию переносили в градуированные

пробир н и добавляли 1/10 объема дистиллированной воды. После двукратного встряхивания и расслоения фаз отсасывали 0,5 мл гептановой фазы. К равным объемам по

0,5 мл добавляли этиловый спирт в объемном отношении 1:5. Оптическую плотность про.бы измеряли на спектрофотометре СФ- 26 при 233 н м в кварцевых кюветах. Содержание диеновых конъюгатов в пробе

рассчитывали с учетом коэффициента зкс- тинции равного 2,2 -105 см .

Через 45 сут после начала введения гормона количество диеновых конъюгатов в ткани сердца крысы № 127 составляло

299,64 нмоль/мг.; : П р и м е р 7. Крыса №47 получала 0,3 мл 65% раствора ССЦ- в растительном масле в течение 5 мес. Через 45 сут после отмены CCU у крысы № 47 брали сердце для

. исследований в нем количества диеновых .конъюгатов следующим образом: навеску ткани замораживали в жидком азоте и тщательно размельчали в охлажденной фарфоровой ступке. Затем 0,3 г.порошка ткани.

печени-растирзли с 2,7 мл экстрагирующей смеси гептана с изопропиловым спиртом в объемном отношении 1:1. Полученную суспензию помещали в полиэтиленовые пробирки, плотно закрывали пробкой. Пробу

центрифугир.оваяи 10 мин при 4000 g на центрифуге,.Надосэдочную фракцию переносили в градуированные пробирки и до-., бавляли. 1/10 объем.а дистиллированной воды..После двукратного встряхивания и

расслоения фаз отсасывали.0,5 мл г.ёптано-. вой фазы. К равным объемам по 0,5 мл добавляли этиловый спирт в объемном отношении 1:5. Оптическую плотность пробы измеряли на спектрофотометре СФ-26

при 233 .нм в кварцевых кювета х. Содержание диеновых конъюгатов рассчитывали с учетом коэффициента экстйнции, равного 2,2-105см 1 .:

Через 45 сут после отмены ССЦ у крысы № 47 в тканм сердца было 1021,5 нмоль/мг диеновых конъюгатов, Формула изобретения Применение .гонадотропина хориони- ческого в качестве средства, проявляющего

антиоксидантную активность.

91821219 10

Таблица 1

Количество диеновых конъюгатов (Д.К.) в ткани печени.крыс, получавших GCIif в количестве 20-ти инъекций (нмоль/мг)

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакотерапии нарушений вследствие активаций процессов перекис- ного окисления липйдов. Цель изобретения - повышение эффективности терапии. Для этЬго в организм вводят гонадотропин хори- онический в качестве средства, проявляющего антйоксидантную активность. 3 табл.

Группы животных

Сроки исследования

2 сутки крыс.

полуСС1цные)

72

73

7

75

76

62

63

64

65

66

67

1-tifm

Крысы,получавшие ХГ .после отмены СС1ц

Mlm

Интактные крысы (одновоз- растные)

Mtm

Р между 1 и 2 группами меньше 0,01 Р между 2 и 3 группами больше 0,9 Р между 1 и 3 группами меньше 0,02

Р между 3 и 2 группой на 10 сутки больше 0,3

10 сутки № крыс Д.К,

998,80 308,72 43ЬЗО 376,82 590,20 431,30 276,94 326,96 399,52 376,82 454,00

451,85172,04. ;-.

245,16- 106236., -0 8

236,08 107- 240,63

236,08 - 108, 295,10

208,84 .1.0927.2,40

208,84 . 88326,88

227,00±7, 79 89.286,02

90317,80

282,13±13,73

на 2-е сутки

. .Таблица 2

Количество диеновых КОНЪЮГВТОБ (Д.К.) в ткани печени крыс, полученных СС1ц в течение 5-ти месяцев . (нмоль/мг)

При м е .ч а н ие. Р между 1 и 2 группами 0,

Р между 2 и 3 группами 0,5;

. :Р между I и 3 группами 0,01

Количество диеновыхкрнъюгатов (Д.К.) в ткани сердца крыс, получавших СС1ц в течение пяти месяцев нмо ль/мг) .....

Т а б л и ц а 3