ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИЙ РОДА CLOSTRIDIUM Российский патент 1997 года по МПК C12Q1/04 C12N1/20 C12Q1/04 C12R1/145 

Изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано для обнаружения в молоке микроорганизмов рода Clostridium с целью получения высококачественных мягких и твердых сыров, молочных консервов и продуктов детского питания.

Известна питательная среда для выделения Clostridium, содержащая дрожжевой автолизат, соли железа и натрия, краситель, агар-агар и дистиллированную воду, причем в качестве красителя используют нейтральрот (Гудков А.В. Автореферат докт. дисс. Микробиологические аспекты управления качеством сычужных сыров. М. 1993, ВНИИМП).

Однако на среде учет бактерий рода Clostridium проводят через 72 ч, что делает ее малопригодной для использования в качестве контроля Clostridium в молочной промышленности.

Целью изобретения является ускорение выделения микроорганизмов рода Clostridium за счет ускорения роста колоний на специально разработанной авторами среде.

Поставленная цель достигается в питательной среде для выделения Clostridium, содержащей дрожжевой автолизат, соли железа и натрия, краситель, агар-агар и дистиллированную воду тем, что дополнительно содержит глюкозу, аспарагин, растворимый крахмал, аскорбиновую кислоту, в качестве солей железа и натрия используют натрий хлористый и фосфорнокислый двузамещенный и железо сернокислое, в качестве красителя бромкрезолпурпуровый при следующих соотношениях компонентов, г/л:
дрожжевой автолизат 40 55
глюкоза 0,5 1,0
аспарагин 1,5 3,0
растворимый крахмал 0,05 0,2
аскорбиновая кислота 0,03 0,07
MnSO₄ 1,0 4,0
KH₂PO₄ 8,0 12,0
NaCl 0,05 0,3
Na₂HPO₄ 0,05 0,2
краситель 0,004 0,006
агар-агар 15 20
дистиллированная вода до 1 л.

В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения поставленной цели, аналогичные заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию изобретения "Новизна".

Ускорение выделения Clostridium на заявляемой питательной среде очевидно не следует из свойств составляющих среду компонентов, следовательно, предложение отвечает критерию "Изобретательский уровень".

Все используемые компоненты заявляемой смеси выпускаются отечественной промышленностью, поэтому предложение "промышленно осуществимо".

Пример 1.

В 500 мл дистиллированной воды вносят MnSO₄ 1 г, KH₂PO₄ 8 г, NaCl 0,05 г, Na₂HPO₄ 0,05 г, глюкозы 0,5 г, дрожжевого автолизата 40 г, аспарагина 1,5 г, FeSO₄ 0,05 г, растворимого крахмала 0,05 г, аскорбиновой кислоты 0,03 г, бромкрезолпурпурового 0,004 г, pH=5,4. К среде добавляют 15 г агара, объем доводят дистиллированной водой до 1 л и кипятят на водяной бане 30 мин, разливают в пробирки по 5-6 см³.

Пример 2
В 500 мл дистиллированной воды вносят MnSO₄ 2 г, KH₂PO₄ 10 г, NaCl 0,1 г, Na₂HPO₄ 0,1 г, глюкозы 0,7 г, дрожжевого автолизата 50 г, аспарагина 2 г, FeSO₄ 0,1 г, растворимого крахмала 0,1 г, аскорбиновой кислоты 0,05 г, бромкрезолпурпурового 0,005 г. Все ингредиенты растворяют в воде, pH доводят до 5,5. Перед стерилизацией добавляют 18 г агара и объем доводят дистиллированной водой до 1 л. Среду стерилизуют в автоклаве при 1 атм в течение 15 мин и разливают в пробирки по 5-6 см³.

Пример 3
В 500 мл дистиллированной воды растворяют MnSO₄ 4 г, KH₂PO₄ 12 г, NaCl 0,3 г, Na₂HPO₄ 0,2 г, глюкозы 1 г, дрожжевого автолизата 55 г, аскорбиновой кислоты 0,07 г, бромкрезолпурпурового 0,006 г, аспарагина 3 г, FeSO₄ 0,2 г, растворимого крахмала 0,2 г. Все ингредиенты растворяют в воде, pH доводят до 5,5. Перед стерилизацией добавляют 20 г агара и объем доводят дистиллированной водой до 1 л. Среду стерилизуют в автоклаве при 1 атм в течение 15 мин и реализуют в пробирки по 5-6 см³.

Пример 4
Посевы производят пастеровской пипеткой под слой среды. Инкубируют пробы в термостате при 37^oC. Учет проводят через 24, 36 и 48 часов. При росте клостридий колонии заметны слабо, но происходит разрыв столбика среды.

Стандартные культуры в разведениях высевали на питательные среды как заявляемые (полученные согласно примерам 1-3), так и известную среду (пол прототипу). Результаты скорости роста Clostridium представлены в таблице.

Представленные в таблице данные свидетельствуют об ускорении выделения из молока бактерий рода Clostridium в 3 раза. Кроме того, при росте этих бактерий изменяется цвет среды с фиолетового в лазурный, что позволяет более точно идентифицировать исследуемую группу микроорганизмов.

Использование: ветеринария, биотехнология, обнаружение в молоке микроорганизмов рода Clostridium. Сущность изобретения: для ускорения выделения микроорганизмов питательная среда содержит дрожжевой автолизат, глюкозу, аспарагин, растворимый крахмал, аскорбиновую кислоту, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый двухзамещенный, железо сернокислое, марганец сернокислый, агар-агар, краситель и дистиллированную воду при определенном соотношении компонентов. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Питательная среда для выделения бактерий рода Clostridium, содержащая дрожжевой автолизат, соли железа и натрия, краситель, агар-агар и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что дополнительно содержит сернокислый марганец, фосфорнокислый однозамещенный калий, глюкозу, аспарагин, растворимый крахмал и аскорбиновую кислоту, в качестве солей железа и натрия содержит хлористый натрий, фосфорнокислый двузамещенный натрий и сернокислое железо при следующих соотношениях компонентов, г/л:
Дрожжевой автолизат 40 55
Глюкоза 0,5 1,0
Аспарагин 1,5 3,0
Растворимый крахмал 0,05 0,2
Аскорбиновая кислота 0,03 0,07
Сернокислый марганец 1,0 4,0
Фосфорнокислый однозамещенный калий 8,0 12,0
Фосфорнокислый двузамещенный натрий 0,05 0,2
Хлористый натрий 0,05 0,3
Сернокислое железо 0,05 0,2
Краситель 0,004 0,006
Агар-агар 15 20
Дистиллированная вода До 1 л
2. Среда по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве красителя содержит бромкрезолпурпуровый.