ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ КАМПИЛОБАКТЕРИЙ Российский патент 1997 года по МПК C12N1/20 C12Q1/04 

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для обнаружения в молоке микроорганизмов рода Campylobacter с целью диагностики мастита и при ветеринарно-санитарной экспертизе молока в случае расследования пищевых токсикоинфекций молочного происхождения.

Молоко, являясь по своему составу высокопитательной средой для развития микроорганизмов, требует индивидуального подхода при исследовании. Это непрозрачная среда, содержащая белки, жиры и обильную постороннюю микрофлору. Поэтому единственным доказательством наличия микроорганизмов рода Campylobacter в молоке является создание высокочувствительной селективной среды. До настоящего времени специальной среды для выделения кампилобактерий из молока не существует.

Известна питательная среда для выделения кампилобактерий, содержащая кампилобактер-агар, ингибитор и воду, используемая при исследовании фекалий человека в медицинской практике. Среда выпускается НПО "Питательные среды", г. Махачкала. В качестве ингибитора сопутствующей микрофлоры известная среда содержит смесь антибиотиков: иолимиксин B 2 мг/л, рифампицин 10 мг/л, амфотерицин B 3 мг/л, ристомицин 10 мг/л, фузидин 2 мг/л. Также для обогащения в среду вносят 5% дефибринированной крови или эритроцитарной массы.

Целью изобретения является повышение чувствительности селективной среды для выделения кампилобактерий из молока.

Цель достигается в питательной среде для выделения кампилобактерий, содержащий кампилобактер-агар, ингибитор и воду, тем, что дополнительно содержит активированный уголь и аминопептид при следующем соотношении компонентов, мас.

Кампилобактер-агар 3,7-3,8
Ингибитор 0,8-1,2
Активированный уголь 0,4-0,6
Аминопептид 4,8-5,2
Вода До 100
Причем ингибитор представляет собой смесь сульфонола и рифампицина при массовом соотношении 50-20:1.

Активированный уголь адсорбирующее средство. Применяют внутрь для адсорбции ядов типа алкалоидов, гликозидов, солей тяжелых металлов, а также для адсорбции токсинов в пищеварительном тракте (Мозгов И.Е. Фармакология. Изд. 6-е, доп. М. "Колос", 1974).

Сульфонол (алкиларилсульфонат) поверхностно-активное вещество с длинноцепочечными радикалами. В настоящее время широко применяют в бактериологии: добавляют в качестве детергента к растворам красителей, а также с целью дезинфекции для обработки поверхностей (Справочник. Поверхностно-активные вещества. Под ред. д.т.н. А.А. Амбрамзона и к.т.н. Г.М. Гаевского. Ленинград. "Химия", 1979).

Аминопептид препарат, получаемый путем ферментативного гидролиза белков крови крупного рогатого скота. Применяют для парентэрального белкового питания. (М. Д. Машковский. Лекарственные средства. Ч.2, изд. "Медицина", 1977).

Рифампицин полусинтетический антибиотик. Спектр действия включает грамположительные микроорганизмы, минимальная подавляющая концентрация 0,002-0,5 мкг/мл; грамотрицательные бактерии с пределом колебания чувствительности 1-50 мкг/мл (Навашин С.М. Фомина И.П. Справочник по антибиотикам. Москва, "Медицина", 1974).

В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения поставленной цели, аналогичные заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию изобретения "новизна".

Повышение чувствительности выделения кампилобактерий на заявляемой питательной среде очевидно не следует из свойств составляющих среду компонентов, следовательно, предложение соответствует критерию "изобретательский уровень".

Пример 1. К навеске кампилобактер-агара 3,7 г добавить ингибитор 0,8 г (сульфонол 7,843 и рифампицин 0,0157 г), активированный уголь 0,4 г и воду до 100 мл. Полученную смесь тщательно размешать в воде и кипятить 2-3 мин. Охладить до 48-50^oC и внести аминопептид 4,8 г. Перемешать и разлить в стерильные чашки Петри по 15-20 мл. После застывания агара чашки с питательной средой подсушить в термостате при температуре 37^oC в течение 4-5 ч.

Таким образом, получают состав 1 при следующем соотношении компонентов, мас.

Кампилобактер-агар 3,7
Ингибитор 0,8
Активированный уголь 0,4
Аминопептид 4,8
Вода До 100
Причем ингибитор представляет собой смесь сульфонола и рифампицина, взятых при массовом соотношении 50:1.

Пример 2. К навеске кампилобактер-агара 3,75 г добавить ингибитор 1,0 г (сульфонол 0,973 г и рифампицин 0,027 г), активированный уголь 0,5 г и воду до 100 мл. Полученную смесь тщательно размешать в воде, кипятить 2-3 мин. Охладить до 48-50^oC и внести аминопептид 5,0 г. Перемешать и разлить в стерильные чашки Петри по 15-20 мл. После застывания агара чашки с питательной средой подсушить в термостате при температуре 37^oC в течение 4-5 ч.

Таким образом, получают состав 2 при следующем соотношении компонентов, мас.

Кампилобактер-агар 3,75
Ингибитор 1,0
Активированный уголь 0,5
Аминопептид 5,0
Вода До 100
Причем ингибитор представляет собой смесь сульфонола и рифампицина, взятых при массовом соотношении 35:1.

Пример 3. К навеске кампилобактер-агара 3,8 г добавить ингибитор 1,2 г (сульфонол 1,143 г и рифампицин 0,057 г), активированный уголь 0,6 г и воду до 100 мл. Полученную смесь тщательно размешать в воде и кипятить 2-3 мин. Охладить до 48-50^oC и внести аминопептид 5,2 г. Перемешать и разлить в стерильные чашки Петри по 15-20 мл. После застывания агара чашки с питательной средой подсушить в термостате при температуре 37^oC в течение 4-5 ч.

Таким образом, получают состав 3 при следующем соотношении компонентов, мас.

Кампилобактер-агар 3,8
Ингибитор 1,2
Активированный уголь 0,6
Аминопептид 5,2
Вода До 100
Причем ингибитор представляет собой смесь сульфонола и рифампицина, взятых при массовом соотношении 20:1.

Пример 4. Посевы молока производить микропипеткой в количестве 0,5 мл на поверхность среды. Тщательно растереть стеклянным стерильным шпателем. Инкубируют пробы в атмосфере 5% кислорода, 10% CO₂ и 85% азота или в эксикаторе с атмосферой "сгоревшей свечи" в термостате при температуре 42±1^oC. Учет проводить через 24, 36 и 48 ч. Кампилобактерии растут на среде в виде характерных серебристо-серых колоний с ровными краями диаметром 1-2 мм.

Стандартные культуры в разведениях высевали на питательные среды как заявляемые (полученные согласно примерам 1-3), так и известную среду (по прототипу). Результаты чувствительности, скорости роста и селективности среды приведены в таблице.

Представленные в таблице данные свидетельствуют о высокой чувствительности модифицированной среды по выделению кампилобактерий из молока, простоте приготовления и не уступающей по селективным свойствам известной среде.

Использование: биотехнология, питательная среда для выделения кампилобактерий, обнаружение в молоке микроорганизмов рода Campylobacter, диагностика мастита. Сущность изобретения: среда для выделения кампилобактерий содержит кампилобактер-агар, ингибитор, активированный уголь, аминопептид и воду при определенных соотношениях компонентов, причем в качестве ингибитора используют сульфанол и рифампицин при массовом соотношении 50-20:1. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Питательная среда для выделения кампилобактерий, содержащая кампилобактер-агар, ингибитор из смеси антибиотиков и воду, отличающаяся тем, что дополнительно содержит активированный уголь и аминопептид при следующих соотношениях компонентов, мас.

Кампилобактер-агар 3,7-3,8
Ингибитор 0,8-1,2
Активированный уголь 0,4-0,6
Аминопептид 4,8-5,2
Вода До 100
2. Питательная среда по п.1, отличающаяся тем, что в качестве ингибитора содержит сульфонол и рифампицин при массовом соотношении компонентов 50-20: 1.