СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВАРИАНТА ТЕЧЕНИЯ НЕХОДЖКИНСКИХ ЛИМФОМ Российский патент 1997 года по МПК G01N33/483 

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и может быть использовано для определения варианта течения неходжкинских лимфом (НХЛ).

Известен способ определения прогноза НХЛ, заключающийся в том, что лимфоидные клетки, извлеченные из периферической крови больного, инкубируют с Н³-тимидином, покрывают фотоэмульсией, экспонируют, затем в препаратах-радиавтографах определяют содержание меченых клеток. Если процентное содержание таких клеток более 2% определяется высокая степень злокачественности лимфомы (быстропрогрессирующий вариант), если таких клеток менее 2% то определяется низкая степень злокачественности (медленнопрогрессирующий вариант) [1]
Однако для этого способа характерна недостаточная точность прогнозирования, поскольку не учитываются факторы, влияющие на включение Н³-тимидина в пролиферирующие клетки. Эти факторы изучены в специальных исследованиях по применению Н³ -тимидина и описаны в обзоре В.М. Котельникова [2] где указывается, что истинный уровень пролиферативной активности может искажаться по следующим причинам.

1. Изменение соотношения основного и запасного пути биосинтеза тимидинтрифосфата при злокачественной трансформации.

2. Снижение активности тимидинкиназы в опухолевых клетках.

3. Наличие свободного тимидина в опухолевых клетках.

4. Неравномерность включения Н³ -тимидина на протяжении S-фазы.

Наиболее близким к изобретению является способ определения варианта НХЛ по уровню активации нуклеолярного аппарата в лимфоидных клетках и по наличию клеток S/G2 в периферической крови больных [3]
Уровень активности нуклеолярного аппарата проводится на первом этапе исследования и заключается в том, что стандартные мазки крови окрашиваются азотно-кислым серебром, а затем на системе текстурного анализатора изображения ("TAS", "Leitz", ФРГ) определяется площадью Ag-содержащих зон. Площади зон менее 0,4 мкм соответствовала низкая степень злокачественности лимфомы и медленнопрогрессирующий вариант, более 0,6 мкм высокая степень злокачественности и быстропрогрессирующий вариант заболевания. Определение доли клеток в S/G2 стадиях клеточного цикла проводится на втором этапе исследования, согласно которому стандартные мазки крови окрашивают по Фельгену и на цитофотометре определяют долю клеток в S/G2, при наличии таких клеток определяют быстропрегрессирующий вариант, при отсутствии - медленнопрогрессирующий вариант.

Недостатком данного способа является сложность реализации в связи с использованием импортной техники системы текстурного анализа изображения "TAS".

Суть изобретения заключается в упрощении метода при сохранении точности прогнозирования характера течения НХЛ.

Предложенный способ осуществляется следующим образом.

Из периферической крови больного стандартным способом приготовляются мазки. Затем исследование осуществляется в два этапа.

1. Определение уровня активации нуклеолярного аппарата с помощью НЛК-теста. Мазок окрашивается 0,1%-ным раствором бензо[а]пирена в кофеине по известной методике [4] затем с помощью люминесцентного микроскопа ЛЮМАМ-ИЗ определяется доля клеток с флуоресциирующими ядрышками (НЛК-позитивных клеток). Если в 100 исследованных лимфоидных клетках больного не обнаруживаются клетки с флуоресциирующими ядрышками, то определяется безрецидивный вариант течения НХЛ с наиболее благоприятным прогнозом. Если НЛК-позитивные клетки выявлены, то проводится второй этап исследования.

2. Исследование кинетических параметров лимфоидных клеток. Мазок фиксируется смесью метанола, ледяной уксусной кислоты (3:1) и 40% формалина при конечной концентрации его 2% по методике [5] Затем с помощью цитофотометра [5] определяется доля лимфоидных клеток в стадиях S/G2 клеточного цикла. Если таких клеток не обнаружено, то определяется медленнопрогрессирующий вариант НХЛ с рецидивирующим характером заболевания. В том случае, когда такие клетки обнаруживаются, определяется быстропрогрессирующий вариант развития НХЛ.

Ниже приводятся примеры прогнозирования процесса у трех больных НХЛ с различными вариантами течения заболевания.

Пример 1. Больной З. 58 лет, болен с января 1989 г. У больного установлен лимфобластный вариант НХЛ, диффузный характер роста опухоли, 2 стадия заболевания. При клиническом обследовании до лечения обнаружено увеличение шейных, надключичных и подмышечных лимфоузлов до 2-5 см, лейкоцитоз и лимфоцитоз в периферической крови не выявлены. В 1989 г проведено 6 курсов по программе СОР и телегамматерапия. В настоящее время больной находится пятый год под наблюдением гематолога. В течение первых 3 лет лечения проходил противорецидивные курсы полихимиотерапии, с 1989 г полная клиническая ремиссия.

До лечения больной обследован по описанной выше методике, НЛК-тест дал отрицательный результат, пролиферирующих клеток в S/G2 стадии клеточного цикла в периферической крови не выявлено.

Пример 2. Больная Н. 54 лет, больна с февраля 1991 г. У больной установлен пролимфоцитарный вариант НХЛ, диффузный характер роста опухоли, 2 стадия заболевания. При клиническом обследовании обнаружено увеличение лимфоузлов брюшной полости и паховых лимфоузлов до 3-4 см, лейкоцитоз и лимфоцитоз в периферической крови не выявлены. В 1991 г больной проведено 6 курсов по программе СОР, после чего установлено состояние клинической ремиссии, однако в мае 1992 г отмечен первый рецидив заболевания. В настоящее время у больной наблюдается рецидивирующий характер развития заболевания.

До лечения больная обследована по описанной выше методике прогнозирования, НЛК-тест дал положительный результат 6% НЛК-позитивных лимфоидных клеток, пролиферирующих клеток в периферической крови не выявлено.

Пример 3. Больная Ч. 25 лет, больна с августа 1990 г. У больной установлен лимфоцитарный вариант НХЛ, диффузный характер роста опухоли, 2 стадия. При клиническом обследовании у больной обнаружено увеличение подчелюстных и шейных лимфоузлов до 3 см и образование на коже головы опухолевой природы. Лейкоцитоз и лимфоцитоз в периферической крови не выявлены, но обнаружены пролимфоциты 7% В апреле 1991 г после 7 курсов ПХТ (СОР, АСОР, АСОР-bleo) и телегамматерапии у больной наблюдается прогрессия опухолевого заболевания, увеличение подчелюстных, подмышечных, шейных лимфоузлов, лейкемизация процесса. Проводимые курсы интенсивной полихимиотерапии оказываются неэффективными и в мае 1991 г больная скончалась.

До лечения больная обследована по предлагаемой методике прогнозирования, НЛК-тест дал положительный результат 23% НЛК-позитивных клеток, кроме того в периферической крови больной обнаружены клетки в стадиях S/G2 клеточного цикла.

Литературные источники, принятые во внимание
1. Соболева Т.Н. Морозова В.Т. Касаткина В.В. и др. Авторадиографическое изучение лимфоидных клеток крови в злокачественных лимфомах. Лабораторное дело, 1988, N 12, с. 27-33.

2. Котельников В.М. Факторы, влияющие на заключение Н³-тимидина в клетки, синтезирующие ДНК. Экспериментальная онкология, 1986, N 6.

3. Погорелов В.М. Даровский В.М. Котельников В.М. и др. Морфометрическая характеристика аргентофильных структур нуклеол лимфоидных клеток периферической крови больных неходжкинскими лимфомами и хроническим лимфолейкозом. -Экспериментальная онкология, 1987, N 3, с. 43-47.

4. Э. Пирс. Гистохимия.

5. Козинец Г.И. Котельников В.М. Гольдберг В.Е. Цитофотометрия гемопоэтических клеток. Томск: Издательство Томского ун-та, 1986. 223 с.

Использование: в медицине, в частности в гематологии, и может применяться для определения варианта течения неходжкинских лимфом (НХЛ). Сущность изобретения: в периферической крови больного определяют процентное содержание лимфоидных клеток с повышенным уровнем активности нуклеолярного аппарата и находящихся в стадии S/G2 клеточного цикла, причем определение уровня активности нуклеолярного аппарата лимфоидных клеток крови осуществляют по наличию в ядрышках этих клеток нуклеолярного липидного компонента, при этом стандартные мазки крови окрашивают бензо[а]пиреном по известной методике и подсчитывают процентное содержание клеток с флуоресциирующими ядрышками, при отсутствии таких клеток определяют первый вариант течения неходжкинских лимфом (безрецидивный); при обнаружении лимфоидных клеток с флуоресциирующими ядрышками проводят второй этап исследования, при котором другой мазок крови больного окрашивают по Фельгену и определяют долю клеток в стадиях S/G2 клеточного цикла; при отрицательном значении этого теста определяют второй вариант (рецидивирующее медленнопрогрессирующее течение), при положительном - третий вариант (быстропрогрессирующее течение). Способ позволяет упростить метод при сохранении точности прогнозирования характера течения НХЛ.

Способ прогнозирования варианта течения неходжкинских лимфом (НХЛ) путем определения в периферической крови больного процентного содержания лимфоидных клеток с повышенным уровнем активности нуклеолярного аппарата и находящихся в стадии S/G2 клеточного цикла, отличающийся тем, что стандартные мазки крови окрашивают бензо[а]пиреном по известной методике и с помощью люминесцентного микроскопа определяют наличие клеток с флуоресцирующими ядрышками, при отсутствии которых прогнозируют первый вариант течения НХЛ (безрецидивный), а при их обнаружении проводят второй этап исследования, при котором другой мазок крови больного окрашивают по Фельгену и определяют долю клеток в стадиях S/G2 клеточного цикла, причем при отрицательном значении теста прогнозируют второй вариант (рецидивирующее медленнопрогрессирующее течение), при положительном - третий вариант (быстропрогрессирующее течение).