СПОСОБ РЕНТГЕНОДИАГНОСТИКИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ЛИМФОМ Российский патент 1994 года по МПК A61B6/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к рентгенологии, и может быть использовано в онкологии для рентгенодиагностики Т-иммунологического подварианта неходжскинских лимфом.

Злокачественные лимфомы - собирательное понятие для обозначения всех нелейкемических опухолей кроветворной и лимфоидной ткани. Среди злокачественных лимфом выделяют лимфогранулематоз и неходжскинские лимфомы (НХЛ).

НХЛ начинаются в виде одиночного опухолевого узла, но в последующем с быстрым лимфогематогенным распространением процесса, представляют клинически разнородную группу при сходной морфологии. Для более тонкой идентификации НХЛ особенно важна иммунодиагностика. Использование панели моноклональных антител (МКА) в комплексном обследовании взрослых больных НХЛ позволяет выявить Т-клеточный, В- и "нулевой" иммунологические подварианты заболевания, различающиеся по клиническому течению заболевания, прогнозу и ответу на терапию. (Итоговая научная конференция ВОНЦ АМН СССР. Диагностика злокачественных новообразований. И., 1988, с. 68. А.Ю.Барышников).

Совершенствование методов современной терапии НХЛ приводит к необходимости все более точного распознавания клеток. Диагностика НХЛ основывается на определении доминирующей популяции бластных клеток костного мозга у больных с помощью цитохимических и морфологических методов. Однако общепринятые цитоморфологичесие методы не могут определить все многообразие подвариантов НХЛ. Иммунологические методы позволяют выявить гетерогенность в пределах морфологически и цитохимически однородной популяции клеток. Для лимфопролиферативных заболеваний, таких как НХЛ, составляющих клинически разнородную группу при сходной морфологии, иммунодиагностика особенно важна. От идентификации вида клеток, уровня их дифференцировки зависит выбор терапии и результат воздействия на клеточную популяцию при лечении (Барышников А.Ю. и др., 1985).

При использовании методов, позволяющих выявить Т- и В-маркеры лимфоидных клеток по содержащимся на мембранах рецепторам, стало возможным выявить первоначально Т-, В- и ни Т-, ни В-иммунологические варианты НХЛ.

Материал и методы для иммунодиагностики НХЛ.

1. Суспензия лимфоцитов (2х10⁶ лф/мл), выделенных из исследуемой крови центрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографин.

2. Мононуклеарные клетки костного мозга.

3. Лимфоциты из лимфатических узлов (ЛУ).

4. Гранулоциты.

Приготовление суспензии клеток.

I. Выделение мононуклеаров периферической крови.

1. Наслоить лейкоциты или кровь, разведенную на 1/3 средой 199, на градиент плотности фиколл-верографин (9 объемов крови на 3 объема градиента).

2. Центрифугировать при 1700 об/мин в течение 40 мин при комнатной температуре.

3. Собрать мононуклеары пастеровской пипеткой из интерфазы.

4. Клетки трижды отмыть средой 199. При этом 1-й раз центрифугировать в течение 20 мин при 1200 об/мин. Чистоту популяции контролировать подсчетом лимфоцитов в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе.

II. Клетки костного мозга можно выделить двумя методами: седиментацией эритроцитов в 1%-ном желатине и путем лизирования эритроцитов.

Реагенты.

1. Синтетическая среда 199 на растворе Хенкса для культур тканей изготовленная НИИ полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР, г. Москва или вирусных инфекций МЗ РСФСР г. Свердловск.

2. Моноклональные антитела, производства НИИЭиМ, г. Горький.

3. Культуральная жидкость миеломных клеток РЗх63А_д 8.653.

4. Ксеногенные антисыворотки.

5. Смесь фикол-верографин: 9% фикол 400000, 34% верографин (Югославия). Смесь готовят из 12 частей 9% фиколла и 5 частей 34% верографина. Плотность смеси 1,076 г/см³.

6. Поли-Л-лизин с мол.м. 150000-300000.

7. Парафильм.

8. Азид натрия. Готовят 2,5%-ный раствор азида натрия на физиологическом растворе. В сыворотки добавляют азид натрия до конечной концентрации 0,25%.

9. 50%-ный глицерин на физиологическом растворе.

10. 10%-ный раствор желатина.

11. Поливалентная и моноспецифические антисыворотки против иммуноглобулинов человека производства НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи.

12. Физиологический раствор рН 7,0-7,2.

13. Ф(ав)₂-фрагменты из кроличьей сыворотки против глобулинов белой мыши.

Постановка непрямой реакции поверхностной иммунофлуоресценции на клетках, прикрепленных к стеклу с помощью поли-Л+лизина.

1. Прикрепить клетки к стеклу с помощью поли-Л-лизина (50 мкг/мл). На обезжиренное стекло прикрепить парафильм с проделанными в нем 12 отверстиями лунками. Нагреть стекло на пламени горелки для того, чтобы парафильм приклеился к стеклу и под него не подтекала сыворотка. Внести в лунки по 50 мкл поли-Л-лизина в концентрации 50 мкг/мл.

2. Поместить стекло в термостат при 37^оС на 30 мин.

3. Отмыть стекло 2 раза в среде 199.

4. Внести в каждую лунку по 50 мкл -х10⁶ кл/мл исследуемых клеток.

5. Инкубировать клетки в течение 45 мин при 37^оС.

6. Отобрать среду из лунок. Внести в лунки по 50 мкл тестируемые антисыворотки или моноклональные антитела и инкубировать 30 мин при 4^оС.

7. Отмыть клетки в гистологических стаканчиках 5 раз в растворе Хенкса или средой 199.

8. Нанести на клетки по 50 м/л люминесцирующих сывороток против глобулинов МКА или глобулинов ксеногенных антисывороток или Ф(ав)₂-фрагменты.

9. Инкубировать клетки 30 мин при 0^оС.

10. Отмыть клетки средой 199 5 раз.

11. Внести в лунки 50%-ный глицерин. Закрыть лунки покровным стеклом.

12. Учитывать свечение на флюоресцентном микроскопе при увеличении объектива х 90-х 100, окуляра 2,5-10 под масляной иммерсией.

В препарате просчитывать 200-300 клеток.

К недостаткам известного способа относится следующее.

1. Необходимость создания специальной лаборатории и специально обученного штата лаборантов врачей.

2. Трудоемкость, сложность метода иммунодиагностики.

3. Длительность постановки реакции (в течение всего рабочего дня).

4. Дорогой метод (использование дорогостоящих, в том числе, импортных препаратов).

5. Травматичность (для постановки реакции необходимо получить исследуемый материал: биопсия лимфатического узла, органа, пункция костного мозга, в/в забор крови).

Способ, выбранный в качестве прототипа, заключается в том, что при рентгенографии пучок рентгеновского излучения, проходя через органы грудной клетки, поглощается ими не в одинаковой степени и на выходе становится неоднородным. Такой пучок, попадая на рентгенографическую пленку, обусловливает возникновение теневого рентгеновского изображения исследуемых органов грудной клетки.

Фиксированное изображение характеризует внутреннее строение и состоит из светлых и более темных участков. Интенсивные тени на экране соответствуют плотным органам и тканям, поглотившим значительное количество излучения, а более светлые тени относятся к менее плотным образованиям или органам, содержащим газ, т.е. изображение является позитивным. На рентгенограммах соотношение затемнений и просветлений обратное (негативное изображение).

Недостатками способа является:
1. Статичность изображения.

2. Плоскостное изображение.

3. Длительность обработки пленки (15 мин).

4. Невозможность постановки точного диагноза Т-подварианта неходжкинских лимфом. Точность рентгенографии грудной клетки составляет 68,5%.

Целью изобретения является повышение точности диагностики Т-иммунологического подварианта неходжкинских лимфом.

Поставленная цель достигается тем, что в способе включающем рентгенографию органов грудной клетки, исследуют гематогенный путь распространения заболевания: при наличии одновременно одиночных или множественных очаговых теней в легких, усилении и деформации легочного рисунка, увеличении внутригрудных лимфатических узлов и при наличии плеврита диагностируют Т-иммунологический подвариант неходжкинских лимфом.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом: больному с увеличенными периферическими лимфатическими узлами после биопсии гистологически устанавливают морфологический вариант неходжкинской лимфомы в соответствии с "Гистологической и цитологической классификацией опухолевых заболеваний кроветворной и лимфоидной ткани", принятой ВОЗ в 1976 году (Краевский Н. А. и Смольянников А.В. "Патолого-анатомическая диагностика опухолей человека).

Проводят рентгенографию органов грудной клетки, и при наличии теней увеличенных внутригрудных лимфатических узлов, одиночных или множественных теней в легких, усилении и деформации легочного рисунка, плеврита, диагностируют Т-иммунологический подвариант НХЛ.

Состояние органов грудной клетки изучалось рентгенографическим методом с использованием современных и доступных методов исследования: рентгенография в двух стандартных проекциях (прямая и боковая), а при необходимости томографии.

Это позволило выявить поражение лимфатических узлов средостения, которое проявляется в расширении срединной тени и определяется при таких заболеваниях, как злокачественные лимфомы, бронхогенный рак, но имеет ряд отличительных рентгенологических признаков (Л.С.Розенштраух и др. Рентгенодиагностика заболеваний органов дыхания, с. 504).

Легочные изменения характеризуются инфильтративным или (и) очаговым поражением легочной ткани.

Инфильтративная форма поражения легких развивается в результате распространения опухоли из смежных тканей (бронхо-пульмональных лимфатических узлов, л/у средостения).

К очаговой форме отнесены изменения в виде гомогенных очаговых или узловых уплотнений от единичных до множественных, с четкими очертаниями встречающиеся при острых очаговых пневмониях, туберкулезе, пневмокониозах, при венозном застое в легких, коллагенозах, метастазах злокачественных опухолей (Л.Д.Линденбратен, Л.Б.Наумов. Медицинская рентгенология. 1974, с. 191-198).

Поражение плевры может проявляться наличием жидкости в плевральной полости и (или) узловыми формами поражения париетальной плевры (Р.И.Макарычева. Поражение легких и плевры у больных лимфогранулематозоми гематосаркомами. Автореферат дис. Д.М.Н., 1983., с. 24-30).

Все перечисленные признаки поражения органов грудной клетки могут определяться при различных заболеваниях, но в различных сочетаниях.

Выявление же сочетания поражения периферических л/у, л/у средостения, интерстициально-очаговых изменений легочного рисунка, экссудативного плеврита и (или) узлового поражения плевры у больных НХЛ может свидетельствовать о Т-иммунологическом подварианте.

Предлагаемый способ прошел клинические испытания на базе кафедры рентгенорадиологии с курсом онкологии ГМИ у 75 больных, из них выявлено 12 человек с сочетанным поражением внутригрудных лимфатических узлов, легких и плевры, из этих 12 больных Т-иммунологический подвариант диагностирован у 5 больных.

Положительный эффект предлагаемого способа заключается в следующем.

1. Способ позволяет диагностировать Т-подвариант НХЛ доступным методом - при помощи рентгенографии. При выявлении у больного увеличения периферических лимфатических узлов его дообследуют рентгенологически и если выявляют расширение средостения, интерстициально-очаговое поражение легких, плеврит, то устанавливают Т-иммунологический подвариант НХЛ.

2. Осуществление предлагаемого способа не занимает более 30 мин.

3. Способ очень прост в исполнении, дешевле по сравнению с известным способом диагностики Т-иммунологического подварианта, т.к. не требует дорогостоящих, в том числе импортных, препаратов и специально оснащенной лаборатории.

Примеры конкретного исполнения даны в виде выписок из историй болезни.

П р и м е р 1. Больной М., 69 лет, история болезни N 82/11738.

Болен с июля 1982 года, когда обнаружил увеличение всех групп периферических лимфатических узлов.

Гистологически 13.04.83 г. установлен диагноз: пролимфоцитарная лимфосаркома периферических л/у.

Рентгенологически 8.04.83 г. выявлено расширение тени средостения, увеличение бронхо-пульмональных л/у, справа экссудативный плеврит и узловое уплотнение париетальной плевры. В правом легком инфильтративная тень в нижней доле и множественные мелко очаговые тени от 0,5-0,9 см в диаметре по всем легочным полям, но больше справа.

Заключение: злокачественная лимфома-Т-подвариант НХЛ.

П р и м е р 2. Больной И., 26 лет, история болезни N 86/3525.

Болен с февраля 1986 года, когда появилась давящая боль за грудиной, повысилась температура. По месту жительства рентгенологически выявлено расширение средостения и с диагнозом злокачественная лимфома? направлен на дообследование.

27.03.86 г. рентгенологически определяется расширение средостения до 12 см за счет увеличения лимфатических узлов больше влево с инфильтрацией легочной ткани в прикорневых зонах, наличием мелкоочаговых теней до 0,5 см в диаметре и экссудативным плевритом.

Заключение: неходжкинская лимфома, Т-иммунологический подвариант.

10.04.86 г. цитологически подтвержден диагноз злокачественной лимфомы.

14.04.86 г. иммунологическое обследование установило Т-иммунологический подвариант.

П р и м е р 3. Больная Р., 34 года, история болезни N 82/180.

Обратилась с жалобами на пальпируемый узел в левой молочной железе, появившийся около 3 месяцев назад, похудание, сухой кашель, боли в груди.

Об-но: в левой молочной железе пальпируется узел 4,5х3,0 см., увеличение подмышечных и надключичных лимфатических узлов слева.

Гистология N 5365 - гематосаркома.

Рентгенологически 29.01.82 г. выявлено расширение средостения больше влево (8 см) с инфильтрацией легочной ткани слева и множественными очаговыми тенями справа, слева экссудативный плеврит.

Заключение: рентгенологическая картина соответствует Т-иммунологическому подварианту неходжкинских лимфом.

16.02.82 г. иммунологически установлен Т-подвариант НХЛ.

Изобретение относится к области медицины, а именно к рентгенологии, касается способа рентгенодиагностики злокачественных лимфом. Целью изобретения является повышение точности диагностики -иммунологического подварианта неходжкинских лимфом. Способ заключается в том, что проводят рентгенографию органов грудной клетки, исследуют гематогенный путь распространения заболевания и при наличии одновременно теней увеличенных внутригрудных лимфатических узлов, одиночных или множественных очаговых теней в легких, усиления и деформации легочного рисунка и при наличии плеврита диагностируют Т-иммунологический подвариант неходжкинских лимфом.

СПОСОБ РЕНТГЕНОДИАГНОСТИКИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ЛИМФОМ путем рентгенографии органов грудной клетки, отличающийся тем, что, с целью повышения точности диагностики Т-иммунологического подварианта неходжкинских лимфом, определяют на рентгенограммах наличие одновременно теней увеличенных внутригрудных лимфатических узлов, одиночных или множественных очаговых теней в легких, усиление и деформацию легочного рисунка и при их наличии диагностируют Т-иммунологический подвариант находжкинских лимфом.