СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РЕЦИДИВОВ И МЕТАСТАЗОВ РАКА Российский патент 1997 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и может быть использовано в лечении больных раком в онкологических учреждениях для ранней диагностики клинически бессимптомно развивающихся рецидивов и метастазов рака различной гистоструктуры и локализации процесса.

Известны традиционные способы клинической и инструментальной диагностики рецидивов и метастазов рака, включающие использование морфологического исследования, рентгендиагностики, ультразвука и многие другие (см. кн. "Онкология" Б.Е. Петерсон, М.М. 1980).

Однако известные приемы не обеспечивают доклинического выявления рецидивов и метастазов рака, имеют ограниченные возможности.

Целью изобретения является доклиническое выявление рецидивов и метастазов рака различной гистоструктуры и локализации с указанием конкретного органа, в котором возникнет или уже имеет место патологический процесс.

Постановленная цель достигается тем, что в сыворотке крови больных раком определяют СОД-активность P-белков, по факту которой судят о наличии или отсутствии у больного рецидива или метастазов, инкубируют затем эту сыворотку крови с обнаруженной патологией с тканями различных органов и при исчезновении СОД-активности P-белков после инкубации с одним или несколькими из образцов тканей идентифицируют данную ткань органа, как мишень для развития или наличия патологического процесса.

В отличие от известных способов клинической, инструментальной диагностики, биохимических исследований с целью выявления рецидивов и метастазов, в сыворотке крови больных раком различной гистоструктуры и локализации определяют СОД-активность P-белков, по факту которой судят о наличии или отсутствии у больного рецидивов или метастазов, инкубируют затем сыворотку крови с обнаруженной патологией с тканями различных органов и при исчезновении СОД-активности P-белков после инкубации с одним или несколькими из образцов тканей идентифицируют данную ткань органа как мишень для развития или наличия патологического процесса.

таким образом изобретение является новым, так как ни один из известных способов диагностики рецидивов и метастазов не обеспечивают доклинического их выявления, ограничены рамками одной локализации, могут диагностировать метастазы только в один орган, в то время как метастазирование происходит в различные органы. Все эти преимущества достигаются совершенно новым способом биохимического исследования, не требующего больших технических и материальных затрат.

Изобретение имеет изобретательский уровень, так как для специалиста-онколога явным образом не следует из уровня медицины при онкологической диагностике. Уровень медицины в области диагностики рецидивов и метастазов рака, включающий сведения общедоступные в мире до даты подачи нашей заявки, не представляет сведений относительно выявления СОД-активности P-белков в сыворотке крови больных раком различной гистоструктуры и локализации, по наличию или отсутствию которой авторы судят о наличии или отсутствии у больного рецидива или метастазов с точным указанием органа, где их ожидают или они уже возникли.

Изобретение является промышленно применимым, так как может быть использовано в здравоохранении, в частности в онкологических учреждениях для ранней, доклинической диагностики рецидивов и метастазов, независимо от структуры и локализации процесса и открывает возможности коррекции плана лечения.

Способ осуществляют следующим образом:
Сыворотку крови больного инкубировали с навесками различных тканей при 4^oC в течении 24 ч. Для этого использовали органы, извлеченные из трупа умерших от острой сердечной недостаточности не позднее, чем через 2,5 ч после смерти, и хранившиеся не менее 24 ч при температуре -20^oC. Навеску ткани (мозг, печень, почки, легкие, лимфоидная ткань и пр. органы) измельчали и несколько раз хорошо отмывали физиологическим раствором. Затем добавляли исследуемую сыворотку крови из расчета 1 мл сыворотки на 500 мг ткани, тщательно перемешивали и оставляли на 24 ч при + 4^oC, цетрифугировали. [Степаненко Е. М. Перекисное окисление липидов при нейроаллергии. Автореф. канд. биол. наук, Москва, 1985] Для выявления СОД-активности P-белков нативную сыворотку крови и образцы, инкубировали с различными тканями, исследовали с помощью диск-электрофореза с использованием трис-глицинового электродного буфера pH 8,3. После окончания диск-электрофореза (1,5 ч) полиакриламидные столбики окрашивали смесью, содержащей тетразолий нитросини - 10 мг, рибофлавин 0,5 мг, ТЕМЕД 0,1 мг в течение 30 мин по методике Beauchamp, Fridovich (1971). Полученное изображение пиков СОД-активности P-белков записывали на денситометре (см. схему опыта на фиг. 4).

Было установлено, что в сыворотке крови больных раком, вне зависимости от локализации и гистологической структуры регистрируется СОД-активность P-белков, тогда как в сыворотке крови здоровых доноров она отсутствует. После инкубации сыворотки крови больных с антигенами различных тканей СОД-активность P-белков исчезает в образцах, содержащих ткани именно тех органов, в которых в последующем будет выявлен рецидив или метастаз.

Предлагаемым способом было проведено исследование сывороток крови 32 больных раком различной локализации (легкое, шейка и тело матки, яичники, меланома, молочная железа, щитовидная железа и др.) и различной гистологической структуры, а также 30 здоровых доноров. У 26 из 32 (81%) больных полученные данные по СОД-активности P-белка о наличии рецидивов или метастазов, подтверждены методом спецдиагностики (ультразвуковая диагностика, рентгенография, морфологические исследования), при направленном клиническом обследовании.

У 4-х больных биохимические данные пока не находят своего подтверждения, а у 2-х больных были получены ложноотрицательные данные: при наличии рецидива опухоли с явными клиническими проявлениями, не обнаружена специфичность СОД-активности P-белка.

Примеры конкретного применения предлагаемого способа представляют выписки из историй болезни.

1. Больная М. 42 лет (Ист. болезни N 13291-ю) поступила в РНИОИ с диагнозом рак шейки матки Т₃N_xM_o, гистологический анализ N 20122-24 от 5.10.90 г. плоскоколеточный умеренно дифференцированный рак. Больная получала сочетанное лучевое лечение с традиционным чередованием доз от наружного и внутриполостного облучения. Лечение закончено с первичным клиническим излечением. СОД-активность P-белков в сыворотке крове при выписке не зарегистрирована (Фиг. 1). При повторной явке на осмотр в январе 1992 г на фоне отсутствия жалоб данных бимануального обследования, свидетельствующих о продолжении роста опухоли, обнаружена СОД-активность P-белков, специфичная в отношении ткани шейки матки (Фиг, 1в). В сентябре 1992 г появились клинические признаки рецидива опухоли первичного очага, подтвержденные данными цитологического исследования N 27013/3 от 23.09.92 плоскоклеточный рак.

В данном случае, показания СОД-активности P-белков опережали клинические данные на 9 месяцев.

2. Больной Ф. 50 лет (ист. болезни N 10904/я), в противотуберкулезном диспансере от 28.08.91 г. по поводу предполагаемой туберкулемы верхней доли правого легкого была произведена клиновидная резекция, гистологический анализ N 4167-72 папилярная аденокарцинома. Больной был направлен в РНИОИ, где с 14.10.91 г ему была проведена лучевая терапия в послеоперационном режиме, включая зону регионарного метастазирования. Выписан из отделения в удовлетворительном состоянии. Однако, в сыворотке крови при окончании лечения и при контрольной явке в декабре 1991 г, по-прежнему, регистрировалась СОД-активность P-белков, исчезающая после инкубации с тканью легкого и лимфоидной тканью (Фиг. 2). При этом клинических, цитологических и рентгенологических данных за рецидив первичной опухоли, наличия отдаленных и регионарных метастазов, не было. Лишь в апреле 1992 г рентгенологически (ФЛО N 15 от 22.04.91 г) были выявлены метастазы в лимфатические узлы средостения и легочную ткань обоих легких. Проведено несколько курсов системной полихимиотерапии, однако, больной погиб от генерализации процесса.

В данной ситуации, постоянно регистрируемая СОД-активность P-белков свидетельствует о первично неизлеченном процессе, склонном к продолжению роста и метастазированию.

3. Больной М. 36 лет (ист. болезни N 10374-а) находится под наблюдением в РНИОИ с 25.09.91 г, с диагнозом меланома кожи поясничной области справа Т₁N_oM_o. Проведено комбинированное лечение, включающее облучение первичного очага, путей предполагаемого метастазирования справа и широкое оперативное иссечение первичного очага. Лимфаденэктомия не проводилась, поскольку клинических данных за регионарное метастазирование не было. После операции гистологический анализ N 31914-15 от 09.10.91. г - эпителиоклеточная меланома. Больной выписан практически здоровым (в III клинической группе). Однако, на этапах динамического наблюдения, как и при выписке, в сыворотке крови стойко определялась СОД-активность P-белков, исчезающая после инкубации с лимфоидной тканью (Фиг. 3). Клинически во всех группах периферических узлов, доступных для пальпации, и рентгенологически в органах средостения, признаков метастазирования не определялось. В октябре 1992 г, то-есть, через год после выписки, обнаружился бурный рост конгломерата лимфоузлов в левой подкрыльцовой области (перекрестное метастазирование). Пункционная биопсия образования N 20082-83 от 19.10.92 г. метастаз меланобластомы. Проведено комбинированное лечение, включающее подкрыльцово-подлапаточноую лимфаденэктомию слева, гистологический анализ N 345288 от 25.11.92 г эпителиоклеточная меланома.

В этом случае прогноз по СОД-активности P-белков относительно метастазированя процесса в арегионарную, клинически интактную зону лимфоузлов оказался верен за год до появления клинических признаков и генерализации.

Таким образом, из приведенных нами случаев клинического применения, очевидна необходимость учета факта регистрации СОД-активности P-белков для ранней диагностики клинически бессимптомно развивающихся рецидивов или метастазов рака, независимо от их гистоструктуры и локализации процесса. Идентификация органа-мишени при наличии СОД-активности P-белков в сыворотке крови больного открывает возможности коррекции плана лечения.

Технический результат от использования предлагаемого способа диагностики рецидивов и метастазов рака по сравнению с известными, позволяет:
задолго до появления клинических признаков, указать орган, в котором в последующем разовьется метастаз или рецидив, гистологическая структура и локализация первичного процесса при этом значения не имеют;
метод определения СОД-активности P-белков прост в исполнении, доступен в осуществлении в биохимической лаборатории учреждений практического здравоохранения;
не требует наличия вивария для содержания лабораторных животных;
может быть использован для контроля за эффективностью проведенного лечения и корректировать план тактику лечения больного на этапах динамического наблюдения.

Использование: медицина, онкология для ранней диагностики клинически бессимптомно развивающихся рецидивов и метастазов рака различной гистоструктуры и локализации процесса. Сущность изобретения: в сыворотке крови больных раком определяют СОД-активность Р-белков, по факту которой судят о наличии или отсутствии у больного рецидива или метастазов, инкубируют сыворотку крови с обнаруженной патологией с тканями различных органов и при изсчезновении СОД-активности Р-белков после инкубации с одним или несколькими из образцов тканей идентифицируют данную ткань органа, как мишень для развития или наличия патологического процесса. Технический результат от использования способа позволяет задолго до появления клинических признаков указать орган, в котором в последующем разовьется метастаз или рецидив, независимо от гистологии и локализации первичного процесса способ прост и доступен. 4 ил.

Способ диагностики рецидивов и метастазов рака, включающий обследование пациента, отличающийся тем, что обследование пациента включает исследование сыворотки крови, в которой определяют супероксид-дисмутазную активность (СОД) R-белков, при выявлении ее судят о наличии у пациента рецидива или метастазов рака, затем инкубируют сыворотку крови с тканями различных органов и при исчезновении СОД-активности R-белков после инкубации с одним или несколькими из образцов тканей идентифицируют данную ткань органа как мишень для развития или наличия патологического процесса.