СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПЕРВИЧНОГО ОЧАГА ЗЛОКАЧЕСТВЕННОЙ ОПУХОЛИ Российский патент 2000 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано в онкологических учреждениях для диагностики и лечения бессимптомно развивающихся злокачественных опухолей различной гистоструктуры и локализации.

Известны традиционные способы клинической и инструментальной диагностики первичного очага рака, включающие использование морфологических, рентгенологических, ультразвуковых исследований и многое другое /Петерсон Б.Е. Онкология. - М.: Медицина, 1980, с. 191 - 244/.

Однако известные приемы не обеспечивают выявление бессимптомно протекающих, т.н. "малых", раков и имеют ограниченные возможности.

Известен способ диагностики рака различной локализации, включающий исследование мочи, которую подвергают кислотному гидролизу, и после дальнейшей обработки и спектрофотометрирования диагносцируют рак /Сидоренко Ю.C., Шматко В.А., Чернявская Г.Я. Способ диагностики рака, авт.св. 1475332/. Принцип метода заключается в том, что из суточного объема мочи берут пробу в количестве 170 мл, добавляют 25 мл концентрированной HCl, доводят смесь до кипения и кипятят в течение 1 часа. Затем смесь охлаждают, добавляют 140 мл этилового эфира, взбалтывают, выдерживают до расслоения, берут верхний слой /нижний слой отбрасывают/ добавляют к нему 10 мл 8%-ного Na₂CO₃ и 5 мл 8%-ного NaOH, взбалтывают. После повторного расслоения отбрасывают нижний слой, а к верхнему добавляют 25 мл 8%-ного NaOH, взбалтывают, снова дожидаются расслоения, отбрасывают нижний слой, а к верхнему слою добавляют 35 мл 8%-ного NaHCO₃, взбалтывают, дожидаются расслоения, отбрасывают нижний слой. Верхний слой дважды отмывают дистиллированной водой, каждый раз отбрасывая нижний слой, выпаривают верхний эфирный слой досуха, к сухому остатку добавляют 1 мл спирта и 8,5 мл петролейного эфира, 8,5 мл бензола и 150 мл дистиллированной воды, взбалтывают, расслаивают. Затем определяют оптическую плотность верхнего слоя на спектрофотометре, и при наличии максимума поглощения, превышающего 0,1 ед. оптической плотности, диагностируют рак.

Однако применение известного способа ограничивают такие его недостатки, как невозможность указания конкретного органа, в котором имеет место злокачественная опухоль, а также использование для анализа большого количества токсичных органических соединений, что предполагает наличие специально оборудованной лаборатории.

Целью изобретения является выявление злокачественной опухоли различной гистоструктуры с указанием конкретного органа первичной ее локализации.

Поставленная цель достигается тем, что в сыворотке крови больных определяют супероксидустраняющую активность, затем исследуют эту сыворотку крови методом иммуносорбции в условиях дискэлектрофореза.

В отличие от известных способов клинической, инструментальной диагностики и биохимических исследований, сыворотку крови больных раком различной гистоструктуры изучают электрофоретически с использованием полиакриламидных гелей, содержащих антигены различных органов человека, и по факту исчезновения супероксидустраняющей активности сыворотки крови в одном из образцов тканей идентифицируют данный орган как мишень для локализации злокачественной опухоли.

Таким образом, изобретение является новым, так как ни один из известных способов диагностики не обеспечивает доклиническое выявление бессимптомно протекающих "малых" раков, они могут указывать на наличие в организме злокачественного процесса, но без указания конкретного органа. Эти преимущества достигаются совершенно новым способом биохимического исследования, не требующего больших технических и материальных затрат, а также работы с токсическими веществами.

Изобретение имеет изобретательский уровень, так как для специалиста-онколога явным образом не следует из уровня медицины при диагностике злокачественных опухолей. Уровень медицины в области диагностики бессимптомно протекающих раков, включающий сведения общедоступные в мире до даты подачи нашей заявки, не представляет сведений относительно выявления супероксидустраняющей активности сыворотки крови больных раком различной гистоструктуры с указанием конкретного органа локализации опухоли.

Изобретение является промышленно применимым, так как может быть использовано в здравоохранении, в частности, в онкологических учреждениях для диагностики рака различной гистоструктуры и локализации, и открывает возможности своевременного целенаправленного лечения.

Способ осуществляется следующим образом.

Готовят иммуносорбент на основе полиакриламида в присутствии гомогенатов тканей органов, извлеченных из трупов лиц, умерших от острой сердечной недостаточности не позднее чем через 2,5 ч после смерти, и хранящиеся не менее 24 ч при -20^oC. Приготовленный иммуносорбент /Логунова Н.Н., Николаева А.И. Иммуносорбция в условиях электрофореза. Иммунология, 1986, N 5, с. 75-76/ содержит акриламид и бисакриламид, растворенные в веронал-мединаловом буфере pH 8,6, гомогенизированные ткани органов в концентрации 1 мг/мл, тиосульфат аммония в конечной концентрации 0,02% и ТЕМЕД. Смесь полимеризуют в стеклянных трубочках, затем проводят электрофорез на веронал-мединаловом буфере в течение 2 - 2,5 ч при градиенте потенциала 5-7 В/см. Сыворотку наносят в количестве 0,02 мл на столбик. После окончания электрофореза извлеченные полиакриламидные гелевые столбики окрашивают смесью, содержащей тетразолий нитросиний - 10 мг, рибофлавин - 0,5 мг, ТЕМЕД - 0,1 мг в течение 30 мин по методике Beauchamp, Fridovich /1971/. Полученное изображение супероксидустраняющей активности сыворотки крови записывают на денситометре.

В процессе разработки "Способа" было установлено, что в сыворотке крови больных раком различной гистоструктуры и локализации выявляется супероксидустраняющая активность, тогда как в сыворотке крови здоровых доноров она отсутствует. После иммуносорбции в условиях электрофореза, проведенной с использованием гелей, содержащих ткани различных органов, супероксидустраняющая активность исчезала в образцах, содержащих ткани именно тех органов, в которых локализовалась злокачественная опухоль.

Предлагаемым способом было проведено исследование сывороток крови 25 больных, 18 из которых обратились с рядом жалоб на открытый прием в РНИОИ и 7 больных, которые находились в клинике РНИОИ без выясненного первичного очага, а также 30 здоровых доноров.

У 21 из 25 /84%/ больных результаты, полученные при исследовании супероксидустраняющей активности сыворотки крови и указавшие локализацию первичного очага злокачественных опухолей, подтверждены методами спецдиагностики - пункционная биопсия с последующим гистологическим исследованием, ультразвуковая и др.; при дополнительном клиническом обследовании.

У 4 больных не удалось подтвердить наличие злокачественной опухоли в указанном органе в связи с ограниченными возможностями методов спецдиагностики и невозможностью проведения открытой биопсии органа в силу тяжелого состояния больных.

Примеры конкретного применения предлагаемого способа представляют следующие выписки из истории болезни.

1. Больной С., 56 лет /ист. бол. N 3448/, обратился в районную поликлинику с жалобами на боли в эпигастральной области, слабость, потерю массы тела. Участковым врачом на основании методов спецдиагностики /рентгенография, УЗИ-исследование органов брюшной полости, ФГДС, клинико-биохимические показатели крови и др./ был выставлен клинический диагноз: микробный гастрит, гастродуоденит, обострение хронического холецистопанкреатита. Массивная противовоспалительная терапия в течение 1,5 месяцев оказалась без эффекта. Больной самостоятельно обратился на открытый прием в РНИОИ. При исследовании сыворотки крови была обнаружена супероксидустраняющая активность, свидетельствующая о наличии в организме больного злокачественного процесса и исчезающая после иммуносорбции с тканью поджелудочной железы. Т.е. биохимическое исследование сыворотки крови по предлагаемому способу указывало на наличие злокачественной опухоли в поджелудочной железе. Направленное УЗИ-исследование онкологической патологии в поджелудочной железе не обнаружило. Был назначен повторный курс противовоспалительной терапии, снова без эффекта. В связи с нарастающим ухудшением общего состояния больного была выполнена лечебно-диагностическая лапаротомия. На операции при ревизии органов брюшной полости в хвостовом отделе поджелудочной железы было обнаружено опухолевидное образование размером около 2 см в диаметре. Гистологическое исследование N 364785 от 25.11.97 г. - умеренно дифференцированная аденокарцинома. Больному была выполнена радикальная операция с последующим специфическим противоопухолевым лечением.

2. Больная А. , /ист. болезни N 12742/е поступила в РНИОИ с диагнозом разрушение 4-го грудного позвонка. При рентгенологическом исследовании и радиоизотопном сканировании костей диагноз был подтвержден. Общее состояние больной ухудшалось, усиливалась слабость, сонливость, периодическое повышение температуры до субфебрильной. Это вызывало тревогу. Была взята сыворотка крови больной по разработанному способу. В сыворотке крови больной зарегистрирована супероксидустраняющая активность, исчезающая после иммуносорбции с тканью молочной железы. После повторного направленного клинико-инструментального обследования с последующим морфологическим исследованием был поставлен диагноз: инфильтративно-протоковый рак правой молочной железы. Больной назначено специфическое противоопухолевое лечение.

Таким образом, из приведенных нами случаев клинического применения очевидна необходимость учета факта супероксидустраняющей активности сыворотки крови для выявления бессимптомно развивающегося первичного очага злокачественной опухоли независимо от его гистоструктуры и локализации. Идентификация органа-мишени при исследовании супероксидустраняющей активности сыворотки крови больных открывает возможности выбора и/или коррекции плана лечения.

Технико-экономический результат от использования предлагаемого "Способа диагностики первичного очага злокачественной опухоли" по сравнению с известными позволяет:
- указать орган, в котором локализуется злокачественная опухоль при невозможности ее обнаружения методами клинической и инструментальной спецдиагностики;
- определение супероксидустраняющей активности сыворотки крови просто в исполнении, доступно в осуществлении в биохимических лабораториях учреждений практического здравоохранения;
- не требует использования токсических органических растворителей, специального оборудования, дополнительных материальных затрат;
- может быть использован для коррекции плана лечения больного.

Способ может быть использован в медицине, а именно в онкологии для диагностики и лечения бессимптомно развивающейся злокачественной опухоли различных гистоструктуры и локализации. Исследуют супероксидустраняющую активность в сыворотке крови пациента и при ее обнаружении проводят иммуносорбцию с тканями различных органов. Исчезновение супероксидустраняющей активности в процессе иммуносорбции показывает тот орган, который является местом локализации опухоли. Способ позволяет обнаружить первичный очаг поражения и его локализацию в тех случаях, когда известные способы клинической и инструментальной диагностики не дают эффекта.

Способ диагностики первичного очага злокачественной опухоли, включающий обследование пациента, отличающийся тем, что обследование пациента включает исследование сыворотки крови, в которой определяют супероксидустраняющую активность, при выявлении ее проводят иммуносорбцию с тканями различных органов и при исчезновении супероксидустраняющей активности в одном из образцов идентифицируют данную ткань органа как мишень для локализации раковой опухоли.