СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ПОСЛЕ ЭКСТРАКЦИИ КАТАРАКТЫ Российский патент 1997 года по МПК G01N33/53 A61F9/00 

Изобретение относится к медицине, в частности офтальмологии, и предназначено для предоперационной диагностики возможности воспалительных осложнений после экстракции катаракты.

Известен способ прогнозирования воспалительных осложнений (авт. св. N 1649442 от 15.05.91), взятый нами за прототип, заключающийся в определении в слезной жидкости больных с увеальной катарактой до операции уровня S-антител. Обнаружение S-антител в концентрации 1:32 и более является неблагоприятным фактором, который обусловливает высокий риск воспалительных осложнений после экстракции катаракты. Однако, в случаях катаракты другой этиологии (глаукомы, диабет) при отсутствии S-антител в слезной жидкости больных до операции отмечается высокий процент воспалительных осложнений, что отражает недостаточную информативность способа.

Частота воспалительных осложнений после экстракции осложненной катаракты при сочетанной патологии глаза (диабет, глаукома, пигментная дистрофия сетчатки) по данным литературы сохраняется на высоком уровне 3-12% Доказана значительная роль цитокинов в регуляции иммунного ответа и развитии послеоперационных осложнений.

Целью изобретения является отбор до операции больных с высоким риском воспалительных послеоперационных осложнений и определение тактики предоперационной противовоспалительной терапии для снижения риска осложнений; повышение точности способа иммунологического обследования больных.

Цель достигается тем, что в способе прогнозирования воспалительных осложнений после экстракции катаракты проводят иммунологическое исследование слезной жидкости с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) на наличие одного из цитокинов фактора некроза опухолей α человека ФНО_α и при обнаружении в концентрации не менее 4,8 нг/мл прогнозируют развитие воспалительного осложнения.

Способ осуществляют следующим образом.

Забор слезной жидкости проводится меланжером за 1 сут до операции. Постановка реакции осуществляется на стандартном планшете из 96 микрокювет с помощью иммуноферментного набора на основе моноклональных антител к ФНОa человека (ВНИИ особо чистых препаратов, г. Санкт-Петербург). В начале на стенки полистероловых кювет наносят 1-е антитела к ФНО_α в разведении 1:100 и фиксируют их с помощью буфера для иммобилизации антител в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем удаляют из ячеек жидкость путем отсасывания и промывают плату отмывочным буфером. Исследуемые образцы слезной жидкости вносят в лунки планшетов в разведении 1:100 и 1:200 (не менее 2-х параллелей) в объеме 50 мкл. В ячейки A₂ A₁₀ и B₂ B₁₀ вносят по 50 мкл стандарта ФНО_α, раститрованного кратно двум в буфере набора, начиная с концентрации 4 нг/мл. Инкубируют микроплату 1 ч при комнатной температуре и непрерывном встряхивании, после чего вновь отмывают буферным раствором.

Затем в каждую ячейку вносят по 50 мкл 2-ых антител к ФНО_α в разведении 1:100, лечебным ферментом (пероксидаза хрена) и вновь инкубируют 1 ч при комнатной температуре и встряхивании. Отмывают микроплату и дважды промывают планшету дистиллятом.

Готовят раствор ОРД (ортофенил диалина) и 3% H₂O₂ и вносят по 50 мкл этого раствора в каждую ячейку. Инкубируют 10-15 мин в темноте при комнатной температуре. Реакцию останавливают 1-молярным раствором H₂SO₄, внеся в ячейку по 50 мкл. Определяют оптическую плотность раствора при длине волне 490 нм на любом автоматическом считывателе, установив O поглощения по ячейке A. Составляют калибровочную кривую по стандарту ФНО_α и рассчитывают по ней концентрацию монокина в образце.

Обоснованием для предлагаемого способа являются результаты, полученные при обследовании 50 больных с осложненной катарактой на фоне глаукомы, диабета и др.

По известному способу (определение уровней S-антител в слезной жидкости) неблагоприятный прогноз воспалительных осложнений был отменен у 4-х больных (8%) из 50.

После неосложненной экстракции катаракты у 50 больных в 13 случаях (26%) отмечены воспалительные осложнения в виде экссудативной реакции с появлением феномена Тиндаля и нитей фибрина во влаге передней камеры.

Анализ результатов исследования уровня ФНО_α в слезной жидкости больных до операции, что у 11 (85%) больных из 13 с воспалительными осложнениями в слезной жидкости обнаруживался ФНО_α в концентрации не менее 4,8 нг/мл.

У 37 больных без воспалительных осложнений ФНО_α в слезной жидкости либо не определен, либо концентрация была ниже 4,8 нг/мл, достоверно меньше, чем у больных с воспалительным осложнениями (P<0,05).

Пример 1. Больная К. Диагноз: сахарный диабет II типа, осложненная катаракта ОД. До операции острота зрения ОД 0,01 н/к.

До операции показатели в слезе: концентрация ФНО_α 5 нг/мл. Проведена неосложненная экстракция катаракты с имплантацией ИОЛ (Т26).

В послеоперационном периоде диффузный отек роговицы, десцеметит, нити фибрина во влаге п/камеры. Таким образом высокая концентрация (2,0 нг/мл) ФНО_α до операции отражала высокий риск развития воспалительных осложнений после экстракции катаракты.

Пример 2. Больная П. Диагноз: оперированная глаукома, осложненная катаракта OS. До операции острота зрения OS 0,04 н/к. До операции показатели в слезе: концентрация ФНО_α 0,5 нг/мл. Проведена неосложненная экстракция катаракты с имплантацией ИОЛ (Т26). С первого дня после операции - арреактивное течение, острота зрения через 7 дней после операции 0,4 сф - 1,5 0,8.

Таким образом при концентрации ФНО_α менее 4,8 нг/мл, а именно 0,5 нг/мл, имело место арреактивное течение п/о периода.

Способ позволяет осуществить предоперационную иммунодиагностику риска развития воспалительных осложнений после экстракции катаракты. Это имеет важное значение для предоперационной подготовки и выборе метода экстракции катаракты.

Положительный эффект от предлагаемого способа заключается в повышении точности прогноза воспалительных осложнений. Так, по данным способа, взятого за прототип, прогноз осложнений составил 31% (из 13 больных с воспалительными осложнениями у 4 отмечено повышенное содержание S-антител), в то время как при определении уровня ФНО_α в указанной концентрации прогноз развития осложнений составил 85% (у 11 больных из 13 с послеоперационными осложнениями).

Сущность изобретения заключается в том, что с целью прогноза воспалительных осложнений определяют до операции в слезной жидкости больных уровень фактора некроза опухолей α человека и при его концентрации не менее 4,8 нг/мл прогнозируют развитие воспалительных осложнений после операции. Цель изобретения - определение до операции больных с высоким риском воспалительных осложнений для проведения специальной предоперационной подготовки, снижающей возможность послеоперационного воспаления. Техническим результатом является повышение точности способа иммунологического прогноза.

Способ прогнозирования воспалительных осложнений после экстракции катаракты, предусматривающий иммунологическое исследование, отличающийся тем, что определяют в слезной жидкости содержание фактора некроза опухолей α человека и при его концентрации не менее 4,8 нг/мл прогнозируют развитие воспалительных осложнений.