СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПОАЛЛЕРГЕННОГО ЛИШАЙНИКОВОГО МАСЛА Российский патент 1997 года по МПК A61K35/78 

Изобретение касается способа получения гипоаллергенных лишайниковых масел и самих масел.

Известен способ получения гипоаллергенных лишайниковых масел путем удаления из них аллергенных веществ хроматографией, экстракцией растворителями, разделением противотоком и отделением на мембране, с последующим каталитическим гидрированием и/или щелочной обработкой. Удаленными таким образом аллергенами являются альдегиды (EP N 202647, кл. C 12 N B/02, 1986).

Способ согласно изобретению заключается в удалении некоторых аллергенных веществ, например этилгематоммата 1, этилхлоргематоммата 2, атранорина 3, хлорантранорина 4, атранола 5, хлоратранола 6


присутствующих в большинстве лишайниковых масел, причем все указанные вещества характеризуются проявлением альдегидных функций.

Способ заключается во взаимодействии исходного (то есть необработанного) лишайникового масла, его твердого экстракта (конкрет) или абсолютизированной формы (абсолю) с одной (по меньшей мере) аминокислотой при гомогенных условиях в растворе, предпочтительно в спиртовом растворе, и выделении нерастворимых аллергенных веществ.

Лишайниковые масла, полученные экстракцией растворителями из лишайников, включают, в частности, масло "дубового лишайника" (Evernia prunastri L.) и масло "древесного лишайника" (Evernia furfuracea L.).

Известно (S, Ohta et al. Chem. Pharm. Bull. 28 (1980), 1917), что альдегиды в водных и органических растворах могут быть обработаны водными растворами натриевой соли некоторых аминокислот с целью выделения альдегидов в виде реакционных продуктов-оснований Шиффа. Однако операция выделения в данном случае затруднена, потому что при данных условиях образуются эмульсии, которые могут быть разделены лишь с большими трудностями (при использовании обычных средств для предотвращения и/или разрушения таких эмульсий).

Новый способ свободен от таких недостатков, так как исходный материал растворяется только в органических растворителях, а аминокислота только в водных растворах. Кроме того, было найдено, что новый способ органолептически не ухудшает лишайниковое масло, другими словами никакие органолептически активные соединения не удаляются из лишайникового масла.

В контексте настоящего изобретения концентрации указанных выше альдегидов 1-6 считаются аллергенными при значениях, указанных в табл.1, и считаются гипоаллергенными при уровнях ниже указанных в табл.1.

Предпочтительные аминокислоты, используемые в настоящем способе, представлены общей формулой:

где R¹ H, NH₂;
R² H, CH₃;
R³ H, C₁-C₃-алкил, C₁-C₃-алкиламино, фенил и по меньшей мере в R¹ или R³ присутствует одна аминогруппа.

Преимущественно используются природные аминокислоты (или соответствующие, идентичные природным). Кроме того, предпочтительными являются аминокислоты, у которых изоэлектрическая точка P₁ находится в пределах 5,5-10, например, лизин, лейцин, фенилаланин, а также аланин, глицин, изолейцин и другие.

Предпочтительными являются природные аминокислоты.

Условия монофоазной среды достигаются проведением процесса, преимущественно в чистом (≥95%) спирте, например алканольном растворителе, таком как метанол, этанол, изопропанол и другие.

Концентрация аминокислот в воде: лучше концентрированные, например 30 - 80% (мас./мас.).

Количество используемой аминокислоты 0,02 0,3 г, предпочтительно 0,04 - 0,1 г на 1 г лишайникового масла.

Когда используют аминокислоту в виде моногалоидводорода (например, хлорида), добавляют один моль-эквивалент основания, например, NaOH или KOH.

pH реакционной среды находится в пределах, зависящих от P₁.

Реакцию проводят при температуре 20 80^oC, преимущественно при 70 - 80^oC. При практическом осуществлении способа предпочитают горячий органический раствор исходного лишайникового масла добавляют к горячему раствору аминокислоты.

Рекомендуемые концентрации исходных материалов в спиртовых растворах:
из конкрет: 5 40% предпочтительно 10 15% (мас./мас.) в спирте;
из абсолю: 5 40% предпочтительно 10 15% (мас./мас.) в спирте.

Полученный продукт выделяют простой фильтрацией от избытка аминокислот(ы) и основания Шиффа.

Ниже приведены примеры конкретного осуществления способа.

Измерение аллергенности.

Присутствие или отсутствие аллергии в каждом случае определялось условно, известными способами, то есть:
MT (Maximization Test), используя морских свинок;
OET (Open Epicutaneous Test), используя морских свинок; и
RIPT (Repeated Insult Patch Test) на людях.

Полученные опытные данные подтверждают данные табл.1.

Концентрации продуктов 1, 2, 5 и 6 измеряются газовохроматографическим анализом (ГХ), например, с внутренним образцом при следующих условиях:
неподвижная фаза: (силиконовая основа) CPSIL 5 CB;
газ-носитель: гелий, 2 мл/мин;
программа: 100/270^oC/мин.

Концентрации альдегидов 3 и 4 измеряются хроматографией с высоким выходом с внешним стандартом при следующих условиях:
неподвижная фаза: RP18 (обратная фаза), размер частиц 7 мкм;
колонка: 250 х 4,6 мм;
подвижная фаза A: H₂O, pH 2,8 (H₃PO₄);
подвижная фаза B: ацетонитрил;
градиент 30 мин от 80% A до 5% A, 10 мин 5% A;
определение УФ при 260 нм.

Пример 1. Получение гипоаллергенного абсолютизированного "дубового лишайникового" масла из коммерчески доступного "дубового лишайникового" абсолютизированного масла
а). В трехгорлую круглодонную колбу загружают этанол 96^o (1,24 л) и при комнатной температуре при перемешивании добавляют раствор лизингидрохлорида (6,25 г) и один моль-эквивалент гидроксида натрия (1,4 г) в 10 мл дистиллированной воды, а затем добавляют лейцин (6,25 г) в этаноле 96^o (625 мл). После дополнительного перемешивания при комнатной температуре в течение 30 мин добавляют раствор расплавленного абсолитизированного "дубового лишайникового" масла (0250 г, т.пл. около 70^oC) в этаноле 96^o (625 мл) и общую смесь нагревают с обратным холодильником в течение часа. После охлаждения до комнатной температуры и дальнейшего перемешивания в течение 30 мин реакционную смесь фильтруют при комнатной температуре через воронку Бюхнера (на бумажном фильтре). Этанол удаляют дистилляцией при пониженном давлении (с водяной баней), не превышая температуру 65^oC. В табл.2 приведены результаты аналитического определения, полученного в результате гипоаллергенного абсолютизированного "дубового лишайникового масла (240 г, выход 95%).

б). Аналогичные результаты получают в том случае, когда лизингидрохлорид используют в виде обычной кислоты, однако в двойном количестве по сравнению с примером 1,а).

В обоих примерах 1,а) и 1,б) среда реакции остается моноосновной в течение всей реакции, то есть не наблюдается разделение на фазы.

Пример 2. Получение гипоаллергенного абсолютизированного "дубового лишайникового" из твердого экстракта "дубового лишайникового" масла.

В трехгорлую круглодонную колбу помещают этанол 96^o (900 мл) и расплавленный твердый экстракт "дубового лишайникового" масла (150 г, т.пл. около 70^oC). Смесь охлаждают до 30^oC и при перемешивании при комнатной температуре добавляют раствор лизингидрохлорида (3,75 г), нейтрализованный с одним моль-эквивалентом гидроксида калия (85%) (1,35 г) в 6 мл дистиллированной воды и лейцин (3,75 г). После дополнительного перемешивания в течение 30 мин всю смесь нагревают с обратным холодильником в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры и дальнейшего перемешивания (30 мин) реакционную смесь охлаждают до 15^oC и фильтруют через бумажный фильтр. Этанол удаляют дистилляцией при пониженном давлении (на водяной бане) при температуре не выше 65^oC. В табл. 3 приведены результаты анализа полученного гипоаллергенного абсолютизированного "дубового лишайникового" масла (110 г, выход 73% /конкрет).

Пример 3. Получение гиппоаллергенного абсолютизированного "древесного лишайникового" из коммерчески доступного абсолютизированного "древесного лишайникового" масла.

Операции аналогичны описанным в примере 1 с учетом использования "древесного лишайникового абсолютизированного" вместо "дубового лишайникового абсолютизированного". В табл.4 приведены результаты анализа полученного гипоаллергенного абсолютизированного "древесного лишайникового" (250 г, выход около 100% абсолю).

Предлагается способ очистки гипоаллергенных лишайниковых масел от аллергенов, заключающийся во взаимодействии лишайникового масла (неочищенного или очищенного) с аминокислотой (по меньшей мере одной) при гомогенных условиях в растворе и отделение нерастворенных аллергенных веществ. 2 с.п. ф-лы, 4 табл.

1. Способ получения гипоаллергенного лишайникового масла путем удаления из лишайникового масла аллергенных веществ, отличающийся тем, что при 70 - 80^oС осуществляют обработку лишайникового масла его твердого экстракта или абсолютированной формы по меньшей мере одной аминокислотой лейцином или лизином в монофазной среде, содержащей этанол, реакционную смесь охлаждают, отделяют нерастворимые аллергенные альдегиды путем фильтрации, а этанол удаляют упариванием. 2. Гипоаллергенное лишайниковое масло, содержащее пониженное количество аллергенных альдегидов, отличающееся тем, что оно представляет собой гипоаллергенное лишайниковое масло, полученное обработкой лишайникового масла его твердого экстракта или абсолютизированной формы по меньшей мере одной аминокислотой лейцином или лизином в монофазной среде в присутствии этанола при нагревании, содержащее аллергенные альдегиды: этилгематоммат 1, этилгематтомат 2, атранорины 3+4, атранол 5, хлоратранол 6 при следующем их содержании,
Этилгематоммат 1 1
Этилхлоргематоммат 2 0,05
Атранорины 3+4 0,15
Атранол 5 0,2
Хлоратранол 6 0,2к