СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИМИКРОБНЫМ, ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИМ, ЯЗВОЗАЖИВЛЯЮЩИМ И АНТИКОАГУЛЯТИВНЫМ СВОЙСТВАМИ Российский патент 1997 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к медицине и касается способа получения биологически активных веществ из растительного сырья, и может быть использовано для лечения рожистого воспаления, ЛОР-патологии, язвенных проктосигмоидитов, бактериальных экзем, инфекционной патологии.

Известен способ получения биологически активных веществ из листьев дуба /1/. Экстракцию проводят путем нагревания до 80^oC с последующим настаиванием в течение 24 ч при комнатной температуре и дальнейшем кипячении при 100^oС в течение 5-10 мин. Полученную смесь фильтруют и упаривают до образования ароматической массы.

Выход сухих экстрактивных веществ 21-24% от сухого сырья. Недостатком данного способа является:
1. листья дуба не разрешены Госфармакорией для применения как лекарственное сырье;
2. низкий и не стабильный выход дубильных веществ, процент которого авторами вообще не определяется;
3. не определен спектр действия вещества и патологии, при которой может применяться;
4. плохая растительность.

Известен также способ применения отвара коры дуба /2/. По способу 2 дес. ложки коры заливают одним стаканом воды, нагревают 30 мин на кипящей водяной бане, снимают и используют отвар для полоскания полости рта, при стоматитах, ангине, как вяжущие средство, при лечении ожогов.

Недостатком данного способа является:
1. низкая эффективность, связанная прежде всего с неизученным спектром антимикробного действия и применение зачастую при той микрофлоре, при которой препарат неэффективен, а порой и вреден;
2. не установлена дозировка и длительность цикла лечения при различных патологиях, что является антинаучным и вредным, так как может вести к привыканию микрофлоры к препарату и формированию устойчивости к данному препарату, а возможно к ряду подобных веществ (дубильных);
3. не установлен выход дубильных веществ, не устойчив при хранении, готовить препарат необходимо перед применением;
4. не разработан механизм лекарственного действия и возможность лечения передозировки.

Целью изобретения является получение суммы экстрактивных веществ из коры дуба с повышенной антимикробной, иммуномодулирующей, язвозаживляющей и антикоагулятивной активностями.

Указанная цель достигается тем, что кору дуба экстрагируют дистиллированной водой 1:12:15 мас.ч. троекратно при этом первую экстракцию проводят в течение 120 мин, а последующие в течение 60 мин, объединенное извлечение сепарируют, упаривая до 1/3, вновь сепарируют и сушат посредством распыления.

Сущность изобретения состоит в следующем: измельчение растительного сырья, экстракция измельченного сырья, фильтрование экстракта, концентрирование экстракта, очистка концентрированного экстракта сепарированием, сушка, фасовка и упаковка. Приводим разработанный технологический процесс с указанием аппаратуры и тех. нормативов для трех лекарственных форм препарата (сухое вещество, таблетки, мазь 1% и 5%).

ТП-1. Измельчение растительного сырья.

Кору дуба измельчают на универсальной кормовой дробилке КДУ (1) до размера частиц не более 10 мм. Перед началом измельчения проверяют мельницу на отсутствие остатков другого сырья после измельчения, а затем устанавливают на барабан машины сетку с диаметром отверстий.

Сырье вручную засыпают на транспортную ленту. Измельченное сырье поступает в мешок, укрепленный на выгруженном устройстве.

После измельчения 5,1 кг сырья, содержащего сумму дубильных веществ 7,076% получают 5,0 кг измельченного сырья, содержащего сумму дубильных веществ 7,076%
Потери сырья при измельчении составляют 0,1 кг.

Выход на стадии 98,34%
Выход от начала технологического процесса 98,08%
ТП-2. Экстракция измельченного сырья.

Перед началом работы проверяют аппарат на герметичность. Для этого через боковой люк на ложное дно экстрактора укладывают фильтрующий материал (серошинельное сукно), укрепляют его распорным кольцом, тщательно закрывают боковой люк, запорную арматуру и с помощью инертного газа (азот) создают давление 0, 07 МПа (0,7 кгс/см²) За 5 мин допускается падение давления не более чем на 0,02 МПа (0,2 кгс/см²). При более быстром спаде давления принимаются меры по ликвидации утечки.

При установившемся режиме в реактор из мерника загружают обессоленную воду в количестве 55 л и через верхний люк с помощью вакуума загружают 5 кг измельченного сырья, отвешенного на весах, содержащего сумму дубильных веществ 7,076%
Общий объем экстрагента, подаваемого на сырье 55 л (соотношение сырья и экстрагента 1:10, 5 л с учетом ложного дна). Экстракцию суммы экстрактивных веществ из сырья ведут при температуре 80 ± 5^oC при постоянном перемещении в течение 2 ч. По окончании экстракции первое извлечение с помощью давления инертного газа передавливают в сборник. Аналогичным образом проводят еще две экстракции по 1 ч. подавая каждый раз в экстрактор обессоленную воду в количестве, равном объему слитого экстракта.

После трехкратной экстракции получают экстракт объемом 125 л (плотность 0,99), содержащий сумму дубильных веществ (0,281%).

Выход на стадии 84,87%
Выход от начала технологического процесса 83,25%
ТП-2.1. Фильтрование экстракта.

После окончания времени экстракции объединенное извлечение передавливают через друк-фильтр инертным газом в сборник, перед началом работы на перфорированную пластинку друк-фильтра укладывают фильтрующий материал (серошинельное сукно) и герметически закрывают крышку.

Получают экстракт в количестве 125 л, плотность 0,99.

ТП-3. Концентрирование экстракта.

Водный объединенный экстракт в количестве 125 л после фильтрования на друк-фильтре подают в циркуляционный вакуум-выпарной аппарат для упарки.

Упарку ведут при температуре 50 ± 5^oC, давление 0,01 кгс/см² (9,81 гПа) приблизительно до 1/20 первоначального объема. В результате упарки получают 5 л водного кубового остатка (плотность 1,083). Водный кубовой остаток, содержащий действующие вещества, сливают в сборник.

ТП-4. Сепарирование концентрированного экстракта.

Упаренный экстракт подвергают очистке от балластных веществ сепарированием. Сепаратор промывают 1 л дистиллированной воды. Получают очищенный экстракт в количестве 4,9 л, плотность 1,076. Осадок бластных веществ в количестве 0,0055 кг не используют. Очищенный экстракт сливают в емкость (П) и передают на следующую стадию технологического процесса.

Выход на стадии 92,14%
Выход на стадии от начала технологического процесса 78,92%
ТП-5. Сушка очищенного концентрированного экстракта.

Очищенный концентрированный экстракт сушат с помощью распылительной сушильной установки "Мовили-Минор" фирмы". Исходная жидкость попадается к распылителю дозирующим насосом и распыляется на мелкие капельки. Удаление влаги происходит за счет контакта с горячим воздухом, поступающим в камеру. Процесс испарения сопровождается эффектом охлаждения капель, что в сочетании с коротким периодом пребывания продукта в сушилке позволяет работать с термолабильными продуктами. Порошок вместе с воздухом поступает в циклон высокой производительности, где происходит отделение порошка от воздуха и сбор его в сборник. В процессе сушки задается режим сушки: температура воздуха на вход 180-210 ^oC, температура воздуха на выходе 85-90^oC; скорость подачи исходной смеси 2-2,5 л/ч, давление сжатого воздуха 5,2 кгс/см², получают сухой экстракт в количестве 0,685 кг, потеря в массе при высушивании 2,11% содержание суммы дубильных веществ 42,87%
Выход на стадии 93,16%
Выход на стадии от начала технологического процесса 71,77%
УМО-1. Фасовка Сухого экстракта.

Полученный сухой экстракт после его анализа на соответствие ВФС-42 расфасовывают по 1,0 кг в канки из стекломассы типа БВ 2000-90-ОС-1 по ОСТ 64-2-71-80 с навинчиваемыми пластмассовыми крышками типа 1.1-90 по ОСТ 64-2-87-81. Под крышку вкладывают уплотненную прокладку из картона марки "А" по ГОСТ 9347-87 или типа 2.1-63 по ОСТ 64-2-87 из полимерных материалов по ОСТ 64-2-248-84 или прокладку из картона с двусторонним полиэтиленовым покрытием по ТУ-2-269-73. Крышки обтягивают пергаментом по ГОСТ 1341-84, обвязывают нитками хлопчатобумажными швейными по ГОСТ 6309-80, концы которых подводят под этикетку и заливают парафином по ГОСТ 8273-75. На банки и бумагу наклеивают этикетки из бумаги этикеточной по ГОСТ 7625-86Е или бумаги писчей по ГОСТ 18510-73 Е.

По 1,0; 2,0 или 0,5 кг в двойные пакеты из пленки ПЦ-П, сорт пищевая по ОСТ 6-06-04-79. Для герметизации горловину пакетов запаивают сварным швом и выкладывают в банку из жести белой по ГОСТ 15580-70 или ГОСТ 13345-78. Банку закрывают плотно пригнанной крышкой с прокладкой из пергамента по ГОСТ 1341-84. Стык крышки с корпусом банки запаивают припоем по ГОСТ 21931-76. Банку обвязывают нитками хлопчатобумажными швейными по ГОСТ 6309-80, пломбируют, концы ниток подводят под этикетку. В каждую банку вкладывают, а на ее стенки наклеивают этикетку из бумаги этикеточной по ГОСТ 7625-86Е или бумаги писчей по ГОСТ 18510-73.

Маркировка. На этикетке указывается министерство, предприятие-изготовитель и его товарный знак, название препарата на латинском и русском языках, массу препарата в упаковке, условия хранения номер серии, регистрационный номер, срок годности, цену.

Транспортирование. В соответствии с ГОСТ 17768-80.

Хранение. В сухом, защищенном от света месте.

Срок годности. 1 год (предварительно).

По мнению заявителя признаки, отличающие предложенное техническое решение от прототипа являются существенными, поскольку аналоги при проведении патентных исследований не обнаружены.

Предложенный способ позволяет получить готовый продукт, представляющий собой порошок, хорошо растворимый в воде. На основании количественного анализа установлено наличие дубильных веществ: 45,87; 47,5; 46,48%
Заявляемый способ получения достаточно прост, не требует сложной схемы очистки и позволяет получить продукт постоянного состава. Технология получения может быть внедрена на предприятиях медпрома. Изучены различные факторы, влияющие на процесс экстрагирования, степень измельчения, соотношение сырье
эксрагент, температурный режим, продолжительность экстракции.

Количественная оценка на стадиях экстракции велась по ГФ-Х1 издания "Определение дубильных веществ" /2/.

Общеизвестно влияние степени измельченности растительного сырья, которое ведет к увеличению поверхности экстрагируемого материала за счет разрыва клеток, а вследствие увеличения контакта его к ускорению процесса экстракции. Для изучения влияния степени измельченности на выход суммы экстрактивных веществ на сырье подвергалось измельчению до диаметра частиц 0,5; 1,0; 3,0; 5,0; 7,0; 10, (табл. 1).

Экстрагент, действуя, как активный компонент системы, влияет на скорость, полноту и качество экстракции биологически активных веществ из растительного материала.

В качестве экстрагента был использован спирт различной крепости: 10, 20, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 96 ^o (табл. 2).

На основании экспериментальных данных установлено, что оптимальным экстрагентом является горячая вода 70-80 ^oC (табл. 3).

Подобрано соотношение сырье-экстрагент 1:10.

Дальнейшее увеличение экстрагента свыше 1:10-15 не целесообразно, т.к. не достигается эффективности экстрагирования.

Время достижения равноценной концентрации в системе сырье экстрагент устанавливали путем 3- часовой трехкратной экстракции горячей водой 70-80 ^oC на водяной бане с обратным холодильником до полноты экстракции. Во время каждого из 3-х контактов фаз через 15 мин отбирали по 25 мл извлечения для определения экстрактивных веществ в них (табл. 4).

Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что при 1 контакте фаз экстрагируется 70% экстрактивных веществ, II контакт фаз обеспечивает выход 20-25% III контакт 5-10% таким образом целесообразной является трехкратная экстракция.

Пример 1. 5 кг коры дуба измельчают на дробилке до размера частиц диаметром 7 мм (сито 70 ГОСТ 214-70). Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревом, заливают 55 л дистиллированной воды (с учетом коэффициентом водопоглащения), экстрагируют при температуре 70 ^oC при постоянном перемешивании в течении 120 мин. Извлечение фильтруют через серошинельное сукно в сборник. Заливают воды дистиллированной в количестве равном слитому м вновь экстрагируют. Операцию повторяют трижды: II экстракция 60 мин; III экстракции 60 мин, 1 слив 40 л; II слив 41 л; III слив 42 л, объединенные извлечения упаривают на вакуум-выпарном аппарате до 1/30 первоначального объема. Концентрированный водный экстракт сепарируют и сушат на растительной сушке. Получают 640 г готового продукта, что составляет экстрактивных веществ 12,4% дубильных веществ 45,87% от исходного сырья. Порошок коричневого цвета, растворим в воде.

Пример 2. 5 кг коры дуба измельчают на дробилке до размера частиц диаметром 7 мм (сито 70 ГОСТ 214-70). Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревом, заливают 55 л дистиллированной воды (с учетом коэффициентом водопоглащения), экстрагируют при 80 ^oC при постоянном перемешивании в течении 2 ч. Извлечение фильтруют через серошинельное сукно в сборник. Заливают воды дистиллированной в количестве, равном слитому, и вновь экстрагируют. Операцию повторяют трижды. 1 слив 39 л; II слив 42 л; III слив 43 л; объединенные извлечения упаривают на вакуум-выпарном аппарате до 1/30 первоначального объема. Концентрированный водный экстракт сепарируют и сушат на растительной сушке. Получают 680,0 г готового продукта, что составляет экстрактивных веществ 13,6% дубильных веществ 47,5% от исходного сырья. Порошок светло-коричневого цвета, растворим в воде.

Преимущества заявляемого изобретения по сравнению с известными техническими решениями заключается в том, что:
БАК являются нетоксическими веществами, у которых отсутствуют мутагенное и тератогенное действия, что определено комплексом патоморфологических, иммунологических исследований, а также в опытах острой и хронической токсичности.

Установлено, что БАК обладают иммуномодулирующим действием, проявляющимся в способности в дозах 48-1200 мкг/кг повышать, а в дозе 2400 мкг/кг ингибировать величину показателей неспецифической резистентности макроорганизма на 21 день после введения.

Эффективность БАК в условиях целостного организма при экспериментальном заражении вирулентной культурой стафилококка и коклюшными микробами зависит от антимикробного, десенсибилизирующего и иммуномодулирующего действий одновременно.

Показано, что БАК не теряют антимикробной активности при длительном хранении, для которого не требуется особой упаковки и помещений. Удобны для точной дозировки и приготовления различных лекарственных форм /3/.

Биологически активные комплексы, приготовленные по разработанному способу, обладают более выраженной антимикробной активностью в отношении грамположительной и грамотрицательной микрофлоры, чем препараты, приготовленные согласно рекомендациям Государственной фармакопеи, и появления которой зависело от растительного сырья, концентрации, вида микроорганизмов и времени контакта с ним.

Установлено, что БАК являются растительными фенольными соединениями, содержащими флаваноиды, органические кислоты, альдегиды, дубильные вещества, микроэлементы, что и определяют их активность.

Расшифровка состава и действующих активных элементов позволяет грамотно назначать лечение с учетом микрофлоры больного, а в том случае передозировки, бороться с нею.

Используемая литература.

1. Сохин А. А. Бобырнев Н. В. Слободянюк И.В. Колесникова А.Г. а.с. 919184.

2. Машковский М.Д. Лекарственные средства 9-е изд. М.Медицина 1984, т.1.

3. Навашин С. М. Фомина И.П. Справочник по антибиотикам. М.Медицина, 1977.

4. Запрометов М.Н. Фенольные соединения и методы их исследования.- Биохимические методы в физиологии растений, М. 1971.

Использование: изобретение относится к медицине и касается способа получения лекарственных веществ. Целью изобретения является получение препарата обладающего антимикробными, иммуномодулирующим, язвозаживляющим и антикоагулятивным свойствами, путем обработки коры дуба водой. Сущность: кору дуба экстрагируют дистиллированной водой в массовом соотношении 1:12 -15 при 70-80^oС трехкратно, при этом первую экстракцию проводят в течении 120 мин, а последующие в течение 60 мин, объемные извлечения сепарируют, упаривают до 1/3, вновь сепарируют и сушат посредством и распыления. Предложенный способ позволяет получить готовый продукт, представляющий собой порошок, хорошо растворимый в воде. На основании хим. анализа установлено наличие дубильных веществ 47,5% микроэлементов, альдегидов, кетона, флаваниодов. Заявляемый способ получения достаточно прост, не требует сложной схемы очистки и позволяет получать продукт постоянного состава. 5 табл.

Способ получения средства, обладающего антимикробным, иммуномодулирующим, язвозаживляющим и антикоагулятивным свойствами, отличающийся тем, что кору дуба экстрагируют при соотношении 1 12 15 и 70 80^oС трехкратно, при этом первую экстракцию проводят в течение 120 мин, а последующие в течение 60 мин, далее извлечения объединяют, сепарируют, упаривают до 1/3 объема, вновь сепарируют и сушат посредством распыления.