СРЕДСТВО "ЧАЙ БАЙКАЛЬСКИЙ-6", ОБЛАДАЮЩЕЕ ДИУРЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2004 года по МПК A61K35/78 A61P13/00 

Изобретение относится к области фармации и касается создания средства на растительной основе, обладающего диуретической активностью и способа получения средства.

Известен сбор урологический (патент РФ №2103003 от 27.01.1998), содержащий лист толокнянки или брусники, плоды укропа, корневище и корни элеутероккока или левзеи, лист мяты и цветки календулы.

Известно использование листьев брусники обыкновенной в качестве диуретического средства (Полный справочник лекарственных растений. - М., 2001, с.906).

Указанные средства обладают недостаточной терапевтической активностью.

Известен способ получения отвара из сбора мочегонного №2, состоящего из листьев толокнянки обыкновенной - 40 г, плодов можжевельника обыкновенного - 40 г, корней солодки уральской - 20 г (РЛС, 2002, вып.4. С.876).

Для приготовления отвара измельченный сбор в соотношении 1:20 заливают водой комнатной температуры, взятой с учетом коэффициента водопоглощения, в соответствующей емкости и настаивают на кипящей водяной бане при частом помешивании в течение 30 мин. Процеживают и прибавляют воду до требуемого объема извлечения (ГФ XI, вып.2. С.147-148).

Известен способ получения суммы экстрактивных веществ, обладающей диуретической активностью, включающий экстракцию растительного сырья этиловым спиртом в соотношении сырье:экстрагент 1:(10-14) трижды по 60 мин с последующим упариванием объединенных извлечений, сепарированием и сушкой (патент РФ №1737797 от 30.11.1994).

Недостатком известных источников является низкий выход экстрактивных и действующих веществ.

Задачей настоящего изобретения является повышение диуретической активности средства за счет создания многокомпонентной растительной композиции и за счет повышения выхода экстрактивных и действующих веществ (суммы фенольных соединений) предложенным способом.

Предложено средство, обладающее диуретической активностью, включающее листья брусники обыкновенной, траву горца птичьего, листья толокнянки обыкновенной, листья крапивы двудомной, цветки календулы лекарственной при следующем соотношении компонентов, мас.%:

листья брусники обыкновенной 20

трава горца птичьего 30

листья толокнянки обыкновенной 20

листья крапивы двудомной 15

цветки календулы лекарственной 15,

при этом средство может быть выполнено в виде сбора, сухого экстракта, капсул, таблеток.

Предложен также способ получения средства, обладающего диуретической активностью, заключающийся в том, что вышеуказанное сырье экстрагируют при температуре 80-90°С очищенной водой при соотношении сырье:экстрагент 1:(10-12) с учетом коэффициента водопоглощения, при этом первое экстрагирование проводят в течение 120 мин, а второе - в течение 60 мин, затем объединенные извлечения упаривают, сепарируют и сушат в вакуумной сушилке с последующим измельчением, при этом извлечения упаривают до 1/5 первоначального объема и сушат при температуре 55±5°С в течение 5 ч.

Предложенный способ позволяет получить конечный продукт, представляющий собой аморфный порошок от коричневого до темновато-коричневого цвета со специфическим запахом и горьковатым вкусом. Потеря в массе при высушивании - 3,7-4,2%.

Определение подлинности и количественного содержания действующих веществ экстракта чая Байкальского-6 сухого изучено современными физико-химическими методами.

Разделение фенольных соединений проводили двумерной хроматографией на бумаге марки “Filtrak" FN-16 в системах: 1. 15% уксусная кислота, 2. н-бутанол-уксусная кислота-вода (БУВ) 4:1:2.

Флавоноидные соединения обнаруживали по их собственной флуоресценции в УФ-свете (зоны адсорбции от бледно-желтого до коричневого цвета). После проявления хроматограмм 3%-ным спиртовым раствором алюминия хлорида и нагревания в сушильном шкафу при температуре 100°С в течение 2-3 мин флуоресценция зон усиливалась и зоны флавоноидного характера приобретали ярко-желтый, зеленовато-желтый цвет. В УФ-свете зоны адсорбции фенолкарбоновых кислот имеют голубую флуоресценцию. После обработки хроматограмм в парах аммиака окраска зон становится ярко-голубой.

Идентификацию веществ проводили со стандартными образцами. Использовали 0,05%-ные растворы государственных стандартных образцов (ГСО): рутина, кверцетина, мирицетина, гиперозида, лютеолина, а также арбутина, галловой, хлорогеновой, кофейной кислот. Установлено наличие кверцетина - Rf~0,05 (I), Rf~0,71 (II); рутина - Rf~0,57 (I), Rf~0,32 (II); лютеолина - Rf~0,50 (I), Rf~0,65 (II); мирицетина - Rf~0,05 (I), Rf~0,35 (II); гиперозида - Rf~0,45 (I), Rf~0,55 (II); кофейной кислоты - Rf~0,34 (I), Rf~0,79 (II); галловой кислоты - Rf~0,63 (I), Rf~0,57 (II); хлорогеновой кислоты - Rf~0,48 (I), Rf~0,75 (II).

Для характеристики подлинности экстракта чая Байкальского-6 сухого использовали метод ТСХ на пластинках “Kieselgel 60 F-254" (Merck), в системе этилацетат - уксусная кислота-вода (5:1:1). Фронт прохождения растворителей 10 см. Наблюдение в УФ-свете (365 нм) до и после обработки 3%-ным спиртовым раствором алюминия хлорида, с последующим выдерживанием в сушильном шкафу при температуре (100-105)°С в течение 2-3 мин. Сравнив окраску и хроматографическую подвижность обнаруженных зон с таковой стандартами, идентифицированы: рутин - Rf~0,27; гиперозид - Rf~0,41; лютеолин - Rf~0,93; кверцетин - Rf~0,89.

Методом ТСХ на пластинке "Silufol" в системе хлороформ-этанол (7:3) с последующей обработкой хроматограммы 10%-ным водно-спиртовым раствором едкого натра, через 5-7 мин свежеприготовленным диазореактивом, идентифицирован арбутин: Rf~0,23, проявляется в виде ярко-красного пятна на уровне свидетеля.

Проведено изучение фенольных соединений методом ВЭЖХ. Анализ проведен на приборе фирмы “Gilson" с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы “Мультихром для Windows".

Условия элюирования: в качестве неподвижной фазы использована металлическая колонка Platinum EPS С-18 размером 4,6×250 мм LUNA С-18, в качестве подвижной фазы - метанол-вода-фосфорная кислота (40:60:0,5). Анализ проводили методом градиентного элюирования при комнатной температуре. Скорость подачи элюента 1 мл/мин. Продолжительность анализа 50,75 мин. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора при длине волны 254 нм.

Предлагаемый способ получения средства достаточно прост, не требует трудоемких затрат, позволяет получить продукт постоянного состава.

Для доказательства существенности предложенных признаков способа, а именно типа экстрагента, соотношения сырье-экстрагент, длительности и кратности процесса экстракции проведены серии экспериментов, данные которых представлены ниже.

Выбор оптимальных параметров экстракции контролировали по выходу экстрактивных веществ (ГФ XI, вып.1. С.295) и содержанию действующих веществ (суммы флавоноидов и фенологликозидов).

Для подбора типа экстрагента изучены процессы экстрагирования сырья водой и спиртом этиловым различной концентрации: 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 96%. Из результатов анализа (таблица 1) можно заключить, что оптимальным экстрагентом является спирт 30% и горячая вода, которая позволяет извлечь максимальное количество экстрактивных и действующих веществ. Также проведено скрининговое фармакологическое изучение экстрактов, полученных различными экстрагентами. Экстракт, полученный экстракцией горячей водой, обладает более выраженным диуретическим действием. В связи с этим предложено вести экстракцию горячей водой, что также выгодно с экономической точки зрения.

В растительную композицию входят растения различного морфолого-анатомического строения. Размер частиц измельченности сырья играет важную роль для интенсификации процесса. Проведено изучение степени измельчения каждого вида сырья.

Количественную оценку проводили по выходу экстрактивных веществ. Результаты анализа приведены в таблице 2.

Измельчение каждого вида сырья следует проводить отдельно, до размера частиц: для листьев толокнянки и брусники - 2 мм: травы горца птичьего, травы крапивы и цветков ноготков - 5 мм.

Изучена зависимость выхода суммы экстрагируемых веществ в различных соотношениях к количеству сырья. Экспериментальные данные, представленные в таблице 3, свидетельствуют о том, что подобрано оптимальное соотношение сырье-экстрагент 1:(10-12) для однократного залива сырья. Дальнейшее увеличение объема экстрагента нецелесообразно, так как не достигается эффективность экстрагирования, поскольку не наблюдается увеличение выхода действующих веществ.

С целью определения продолжительности и кратности числа экстракций изучено время наступления равновесной концентрации в системе “сырье-экстрагент”. По методике: массу навески растительного сырья заливали очищенной водой в соотношении 1:10 и настаивали при комнатной температуре и постоянном помешивании в течение 2 ч. Процесс повторяли трижды, заливая сырье новой порцией экстрагента в количестве, равном слитому извлечению. Через определенные промежутки времени каждого контакта фаз извлечения сливали и анализировали. Результаты анализов, представленные в таблице 4, показывают, что равновесное состояние при двух контактах фаз достигается через 3 ч. При 1 контакте фаз через 120 мин, при 2 - через 60 мин. Двукратная экстракция обеспечивает достаточно полное истощение сырья - извлекается до 94% действующих веществ.

Технологическая схема получения средства диуретического действия отработана на оборудовании экспериментального завода НПО “ВИЛАР”: н/ст экстрактор вместимостью 50 л, с мешалкой лопастного типа при 60 об/мин, с подогревом и охлаждением (Волго-Вятского СНХ); вакуум-выпарной аппарат (ЧССР), производительностью 20 л/ч (упарку ведут при температуре не выше 40-70°С и остаточном давлении 0,1 кгс/см² или 9,8 кПа); сепаратор; шкаф вакуум-сушильный (Польша) с рабочим давлением 1,0-1,5 кгс/см².

Перед началом работы проводят осмотр и проверку запорной арматуры. На ложное дно экстрактора помещают серошинельное сукно и два слоя бязи (при сливе извлечение одновременно фильтруется) и закрепляют его распорным кольцом. Через боковой люк в экстрактор загружают сырье, а из мерника с помощью вакуума подают экстрагент сверху. Все тщательно проверяется на герметичность.

Примеры способа получения конечного продукта.

Пример 1

300 г травы горца птичьего, 150 г листьев крапивы двудомной, 150 г цветков календулы лекарственной измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 5 мм (сито №50 ГОСТ 214-83), 200 г листьев толокнянки обыкновенной и 200 г листьев брусники обыкновенной измельчают до размера частиц диаметром 2 мм (сито №20 ГОСТ 214-83). Далее фасуют в пакеты и в случае назначения заваривают, как чай, крутым кипятком.

Пример 2

Измельченное сырье по примеру 1 загружают в экстрактор с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 14 л очищенной воды в соотношении сырье-экстрагент 1:10 с учетом коэффициента водопоглощения 1:3 и ложного дна экстрактора. Экстрагируют при температуре (80-90)°С в течение 2 ч при постоянном помешивании. Извлечение фильтруют через друкк-фильтр в сборник. Аналогичным способом проводят вторую экстракцию в течение 1 ч, подавая в экстрактор очищенную воду в количестве, равном объему слитого извлечения. 1 слив - 10,3 л, 2 слив - 10,1 л. Объединенные извлечения упаривают до 1/5 первоначального объема и очищают сепарированием. Концентрированный экстракт доупаривают до густовато-вязкого состояния массы, сушат в вакуум-сушильном шкафу при температуре (55±5)°С в течение 5 ч и измельчают.

Получают 276 г готового продукта, что составляет 27,6% от массы исходного сырья.

Диуретическую активность готового продукта оценивали в соответствии с “Методическими рекомендациями...” (1989). Опыты проведены на белых крысах обоего пола линии Wistar массой 190-200 г. Экстракт чая Байкальского-6 сухого в виде водного раствора вводили однократно внутрижелудочно в дозе 40 мг/кг (1/15 ЛД₅₀) - определение оптимальной условно-терапевтической дозы было проведено в предварительных экспериментах - в объеме 1 мл/100 г за 30 мин до водной нагрузки, составляющей 2,5% от массы тела. Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме. В качестве препарата сравнения использовали “мочегонный сбор №2” (многокомпонентный сбор), приготовленный по ГФ XI в объеме 1 мл/100 г, представляющий собой отвар из смеси листьев толокнянки, корней солодки, плодов можжевельника. Сбор мочи осуществляли в обменных клетках в течение 4 ч после водной нагрузки. Измеряли объем выделенной мочи, а также определяли содержание ионов калия и натрия методом пламенной фотометрии на приборе “Flapho-4” (Германия).

Полученные результаты представлены в таблице 5.

Как следует из данных, приведенных в таблице 5, однократное введение сухого экстракта в указанной дозе оказывало выраженное стимулирующее действие на экскрецию воды и ионов натрия у белых крыс. При этом диуретическая активность испытуемого средства превосходила таковую на 10% у препарата сравнения.

В следующей серии экспериментов оценивали мочегонное действие сухого экстракта на модели токсического повреждения почек, которое вызывали однократным внутрибрюшинным введением раствора сулемы (HgCl₂) в дозе 2 мг/кг (Соколова и соавт., 1975). Опыты проведены на 24 белых крысах обоего пола линии Wistar массой 160-180 г. Животным опытной группы внутрижелудочно вводили водный раствор сухого экстракта в дозе 40 мг/кг (1/15 ЛД₅₀) в обьеме 1 мл/100 г - определение оптимальной условно-терапевтической дозы проведено в предварительных экспериментах. Первое введение испытуемого средства осуществляли за 1 ч до введения сулемы, а затем 1 раз в день в течение 7 суток. Препаратом сравнения служил “мочегонный сбор №2”, приготовленный по ГФ XI, который водили в объеме 1 мл/100 г массы, который вводили по аналогичной схеме. Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды.

Установлено, что курсовое введение сухого экстракта в дозе 40 мг/кг повышает диурез у белых крыс в 1,5-2 раза на фоне поражения почек сулемой (таблица 6). При этом активность испытуемого средства превосходила таковую у препарата сравнения.

Исследовали острую токсичность сухого экстракта по общепринятому методу Кербера (Требования..., 1984). Опыты проведены на 36 белых крысах обоего пола линии Wistar массой 160-180 г. Испытуемое средство в виде водного раствора вводили однократно внутрибрюшинно в дозах 300-800 мг/кг. Наблюдение проводили в течение 14 суток. Проведенные исследования показали, что ЛД₅₀ сухого экстракта составляет 550 мг/кг (470,1-629,9). Полученные результаты позволяют классифицировать испытуемое средство как малотоксичное по классификации Сидорова К.К. (1973).

Пример 3

300 г травы горца птичьего, 150 г листьев крапивы двудомной, 150 г цветков календулы лекарственной измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 5 мм (сито №50 ГОСТ 214-83), 200 г листьев толокнянки обыкновенной и 200 г листьев брусники обыкновенной измельчают до размера частиц диаметром 2 мм (сито №20 ГОСТ 214-83). Измельченное сырье загружают в экстрактор с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 16 л очищенной воды в соотношении сырье-экстрагент 1:12 с учетом коэффициента 1:3 и ложного дна экстрактора. Экстрагируют при температуре (80-90)°С в течение 2 ч при постоянном помешивании. Извлечение фильтруют через друкк-фильтр в сборник. Аналогичным способом проводят вторую экстракцию в течение 1 ч, подавая в экстрактор очищенную воду в количестве, равном объему слитого извлечения. 1 слив - 11,7 л, 2 слив - 11,4 л. Объединенные извлечения упаривают до 1/5 первоначального объема и очищают сепарированием. Концентрированный экстракт доупаривают до густовато-вязкого состояния массы, сушат в вакуум-сушильном шкафу при температуре (55±5)°С в течение 4 ч и измельчают.

Получают 284 г готового продукта, что составляет 28,4% от массы исходного сырья.

Диуретическую активность сухого экстракта оценивали по общепринятому методу с 2,5% водной нагрузкой на 18 белых крысах обоего пола линии Wistar массой 190-200 г. Описание схемы эксперимента см. в предыдущем разделе. Испытуемое средство вводили однократно внутрижелудочно в дозе 40 мг/кг. Полученные результаты приведены в таблице 7.

Как следует из данных приведенных в таблице 7, изменение условий экстракции практически не влияет на диуретическую активность испытуемого средства.

В следующей серии экспериментов оценивали мочегонное действие сухого экстракта на модели токсического повреждения почек, которое вызывали однократным внутрибрюшинным введением раствора сулемы (HgCl₂) в дозе 2 мг/кг (Соколова и соавт., 1975). Опыты проведены на 24 белых крысах обоего пола линии Wistar массой 160-180 г. Описание схемы эксперимента см. в предыдущем разделе. Испытуемое средство вводили однократно внутрижелудочно в дозе 40 мг/кг. Полученные результаты приведены в таблице 8.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается создания средства на растительной основе, обладающего диуретической активностью и способа его получения. Средство, обладающее диуретической активностью, включает листья брусники обыкновенной, траву горца птичьего, листья толокнянки обыкновенной, листья крапивы двудомной, цветки календулы лекарственной, взятые в определенном соотношении. Средство может быть выполнено в виде сбора, сухого экстракта, капсул, таблеток. Предложен также способ получения средства, обладающего диуретической активностью, заключающийся в том, что вышеуказанное сырье экстрагируют при температуре 80-90°С очищенной водой при соотношении сырье:экстрагент 1:(10-12) с учетом коэффициента водопоглощения, при этом первое экстрагирование проводят в течение 120 мин, а второе - в течение 60 мин, далее извлечения объединяют, сепарируют и сушат в вакуумной сушилке с последующим измельчением. Предложенный способ позволяет получить больший выход экстрактивных и действующих веществ, что обеспечивает более высокий терапевтический эффект. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 8 табл.

1. Средство, обладающее диуретической активностью, включающее листья брусники обыкновенной, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит траву горца птичьего, листья толокнянки обыкновенной, листья крапивы двудомной, цветки календулы лекарственной при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Листья брусники обыкновенной 20

Трава горца птичьего 30

Листья толокнянки обыкновенной 20

Листья крапивы двудомной 15

Цветки календулы лекарственной 15