ИНАКТИВИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА ОВЕЦ Российский патент 1997 года по МПК A61K39/112 A61K39/39 C12N1/20 C12N1/20 C12R1/42 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности, к получению инактивированной вакцины против сальмонеллеза овец.

Сальмонеллез овец и коз (Паратиф, Паратифозный аборт), инфекционная болезнь, вызываемая бактериями паратифозной группы, и характеризуется абортами, септическими явлениями и рождением нежизнеспособного молодняка. Аборты могут наступать у 25-30 от суягных овцематок. Ущерб складывается из затрат на лечение, недополучения молодняка, гибели абортировавших овцематок. Заболевание регистрируется во всех районах страны с развитым овцеводством. При использовании эффективных вакцин количество абортов и гибель овцематок снижается в десятки раз с 25 до 2,5 и более.

Известна живая, авирулентная вакцина против сальмонеллеза овец, включающая антиген сальмонелл, серовара аборта овец из штамма N 17 HC, которую перед употребление разводят физиологическим раствором.

Для получения вакцины берут бактериальную массу живых сальмонелл вакционного штамма, концентрируют, добавляют криопротекторы, разливают в ампулы и лиофильно высушивают.

Вакцинируют овец за 1 мес до начала случной кампании в дозе 1 мл однократно в хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу овец. Продолжительность иммунитета 6 мес /1/.

Известна также вакцина концентрированная, формолтиомерсаловая против сальмонеллеза овец, выпускаемая Армавирской биофабрикой. Вакцина содержит антигены 3-х сероваров сальмонелл: аборта овец, мышиного тифа, дублин.

Вакцину применяют для профилактики сальмонеллеза овец в хозяйствах, неблагополучных по данному заболеванию, вводится двукратно: первый раз 3-4 мл, второй раз с интервалом 7-10 дней 4-5 мл внутримышечно /2/.

Задача наших исследований получение инактивированной, ареактогенной вакцины против сальмонеллеза овец, обеспечивающей создание напряженного, длительного иммунитета в организме животного, уменьшение дозы и кратности введения.

Нами выделены серовары сальмонелл Аборта овец N 876 и Дублин N 1149 из абортированных плодов овец в 1989 г. используемые в предлагаемой вакцине в качестве антигенов.

Кроме того, нами выделен штамм Rodococcus equi N 2 от крупного рогатого скота из хозяйства Московской области в 1986 г. который использован в предложенной вакцине как иммуностимулятор, на который одновременно подана заявка.

Помимо этих штаммов для получения вакцины против сальмонеллеза овец был использован ранее известный штамм Salmonella typhimurium N 159, полученный из Коллекции музея типовых культур лаборатории Бактериологии Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко, г. Москва, который обладает следующими свойствами.

Культурно-морфологические признаки. Грамотрицательные мелкие палочки, подвижные, формирующие выпуклые колонии 1-3 мм диаметром, прозрачные или беловатые. Хорошо растут на обычных питательных средах, на МПБ образует пленку и пристеночное кольцо.

Физиолого-биохимические свойства. Аэроб, способный расти в микроаэрофильных условиях. Оптимум рН 7,2-37 ^oC. Не изменяет молоко, не разжижает желатин, выделяет сероводород, не выделяет индол, не разлагает мочевину, сбраживает глюкозу, маннит, сорбит, арабинозу, мальтозу с образование кислоты, алктозу, сахарозу не сбраживает, имеет ферменты лизиндекарбоксилазу, орнитиндегидролазу. Агглютинируется диагностическими сальмонеллезными сыворотками 0-4, H i 1,2. Патогенна для белых мышей. ЛД₅₀ равна 10•10³ клеток. Предложенная вакцина включает антигены 3-х сероваров сальмонелл: аборта овец, мышиного тифа и дублин в физиологическом растворе с 0,4-0,5 (об/об) формалина, адъювант - маслоланолиновая взвесь клеток Родококка иммуностимулятора.

Штамм Salmonella abortusovis N 876 обладает следующими свойствами.

Культурно-морфологические признаки. Грамотрицательные мелкие палочки, спор и капсул не образующие, подвижные. На МПа образуют мелкие колонии диаметром до 1 мм, на МНБ не образуют пленки и пристеночного кольца, бульон равномерно мутнеет.

Физиолого-биохимические свойства. Аэробы, способные расти в микроаэробных условиях. Оптимум pH 7,2, t 37 ^oC. Не изменяют молоко, не разжижают желатин, выделяют сероводород, не выделяют индол, не разлагают мочевину, сбраживают глюкозу, маннит с образованием кислоты и очень слабо газа; лактозу, сахарозу, арабинозу, сорбит не сбраживают, имеют фермент лизиндекарбоксилазу. Агглютинируются диагностическими сальмонеллезными сыворотками 0-4, Н-с, 1,6. Патогенна для белых мышей. ЛД₅₀ 47•10⁶ клеток.

Штамм Salmonella dublin N 1449 обладает следующими свойствами.

Культурно-морфологические свойства. Грамотрицательные мелкие палочки, спор и капсул не образуют, подвижные, формируют выпуклые колонии 1-3 мм диаметром, прозрачные или беловатого цвета. Хорошо растут на обычных питательных средах: на МПБ образует пленку и пристеночное кольцо.

Физиолого-биохимические свойства. Аэробы, способные расти в микроаэробных условиях, оптимум pH 7,2, t 37 ^oC. Не изменяют молоко, не разжижают желатин, не выделяют индол, выделяют сероводород, не разлагают мочевину, сбраживают глюкозу, маннит, сорбит с образованием кислоты и газа; лактозу, сахарозу, инозит, арабинозу не сбраживают, имеют фермент лизиндекарбоксилазу. Агглютинируются сальмонеллезными диагностическими сыворотками: 0-9, H др, (первая фаза). Патогенна для белых мышей ЛД₅₀ равна 7•10³ клеток.

Штамм Rodococcus equi N 2 обладает следующими свойствами.

Культурально-морфологические признаки. Грамположительные, неподвижные, палочковидной и кокковидной формы бактерии, формирующие выпуклые колонии до 1 мм диаметром, серовато-желтого цвета. Для Rodococcus equi N 2 характерен медленный рост на простых питательных средах (3-4 сут), но при обогащении 10 сыворотки при 37 ^oC отмечается хороший рост через 24 ч. При выдерживании пробирок с культурой на свету колонии приобретают пигмент цвета семги.

Физиолого-биохимические свойства. Аэроб, способный расти в микроаэробных условиях. Оптимум pH 7,2, t 37 ^oC. В отношении углеводов, аминокислот, многоатомных спиртов неактивен. Сбраживает только глюкозу. Не образует индол и сероводород, не разжижает желатин, не лизирует эритроциты крови животных. Имеет ферменты каталазу и уреазу. Непатогенный при внутрибрюшинном введении белым мышам массой тела 8-20 г в дозе 10•10⁹ микробных клеток не вызывает их гибели в течение 14 сут.

Способ приготовления вакцины состоит в следующем.

Пример 1. Для приготовления 1 л вакцины берут смеси антигенов, приготовленных на физиологическом растворе с 0,4-0,5 формалина. Концентрация клеток в 1 мл взвеси 100 млрд.

Антигены Salmonella abortusovis N 876 200 мл
Антигены Salmonella typhimurium N 159 100 мл
Антигены Salmonella dublin N 149 100 мл
Взвесь клеток Rodococcus equi N 2 на физиологическом р-ре, содержащая в 1 мл 150 млрд мт 100 мл
Легкое минеральное масло и безводный ланолин в соотношении 83-87:17-13 - Остальное
После перемешивания всех компонентов концентрация формалина составит 0,2-0,25
Применяют вакцину однократно в дозе 1,0 мл с профилактической и лечебной целью в овцеводческих хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу овец. Эффективность от применения вакцины в экспериментальных условиях (с применением тройной заражающей дозы) составила 80
Пример 2. Вакцину готовят аналогично примеру 1, но берут смеси антигенов, приготовленных на физиологическом растворе, содержащем 0,4-0,5 формалина (в 1 мл бактериальной взвеси содержится 100 млрд м.т.) в следующих количествах:
Антиген Salm.abortusovis N 876 190 мл
Антиген Salm.typhimurium N 159 95 мл
Антиген Salm.dublin N 1449 95 мл
Взвесь клеток Rodococcus equi N 2 на физиологич. растворе, содержащем в 1 мл 150 млрд. м.т 95 мл
Масло-ланолиновый адъювант в соотношении 83-87:17-13 Остальное
Пример 3. Вакцину готовят аналогично примеру 1, но берут смеси антигенов, приготовленных на физиологическом р-ре, содержащем 0,4-0,5 формалина (в 1 мл антигена содержится 100 млрд. м.т.)
Антиген Salmonella abortusovis N 876 210 мл
Антиген Sakm.typhimurium N 159 105 мл
Антиген Salmonella dublin N 1449 105 мл
Взвесь клеток Rodococcus equi N 2 (концентрация 150 млрд в 1 мл) 150 мл
Масло-ланолиновая смесь в соотношении 83-87:17-13 Остальное
Поименованные в одном из примеров 1, 2, 3 компоненты вакцины помещают в гомогенизатор и по истечении 10-15 мин гомогенизации вакцину фасуют во флаконы.

Как видно из примеров, предложенная вакцина является ареактогенной, обеспечивает создание в организме животного длительного и напряженного иммунитета против сальмонеллеза овец при однократном введении в дозе 1,0 мл.

Вакцину в указанных дозах можно применять с лечебной целью.

Вакцина апробирована с положительным результатом на 47 тыс. овец в Александровском и Левокумском районах Ставропольского края в 1992-1994 гг.

Вакцина найдет применение в овцеводческих хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу овец.

Источники информации:
1. Наставление по применению вакцины против сальмонеллеза овец из штамма N 17 НС, 1991 г.

2. Поливалентная формол-тиомерсаловая вакцина против сальмонеллеза овец. В справочнике: Ветеринарные препараты, 1986 г. Киев, Урожай, с.236.

Использование: ветеринарная микробиология, инактивированная вакцина против сальмонеллеза овец. Сущность изобретения: вакцина включает формалинизированную суспензию клеток штаммов Salmonella abortusovis ВИЭВ N 876, Salmonella typhimurium ВИЭВ N 159, Salmonella dublin ВИЭВ N 1449 в физиологическом растворе, адъювант - масло-ланолиновую смесь и иммуностимулятор - взвесь клеток Rodococcus equi ВИЭВ N 2. Вакцина ареактогенна, обеспечивает создание в организме животного длительный и напряженный иммунитет против сальмонеллеза овец при однократном введении в дозе 1,0 мл. Вакцина найдет применение в хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу овец.

Инактивированная вакцина против сальмонеллеза овец, содержащая формалинизированную суспензию клеток штаммов из сероваров Salmonella abortusovis, Salmonella typhimurium, Salmonella dublin в физиологическом растворе и адъювант, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит иммуностимулятор в виде суспензии клеток штамма Rodococcus equi ВИЭВ N 2 в физиологическом растворе с концентрацией 150 млрд м.кл./мл, из адъювантов - маслоланолиновую смесь в соотношении 83 87 17 13, из штаммов серовара Salmonella abortusovis штамм Salmonella abortusovis ВИЭВ N876, из штаммов серовара Salmonella typhimurium штамм Salmonella typhimurium ВИЭВ N159, из штаммов серовара Salmonella dublin штамм Salmonella dublin ВИЭВ N1449, при следующем соотношении компонентов, мл/л:
Формалинизированная суспензия клеток штамма Salmonella abortusovis ВИЭВ N876 с концентрацией 100 млрд.м.кл./мл 190 210
Формалинизированная суспензия клеток штамма Salmonella typhimurium ВИЭВ N159 с концентрацией 100 млрд.м.кл./мл 95 105
Формалинизированная суспензия клеток штамма Salmonella dublin ВИЭВ N1449 с концентрацией 100 млрд.м.кл./мл 95 100
Суспензия клеток штамма Rodococcus equi ВИЭВ N2 с концентрацией 150 млрд.м.кл./мл 95 105
Маслоланолиновая смесь в соотношении 83 87 17 13 Остальноеж