ИНАКТИВИРОВАННАЯ ЭМУЛЬСИН-ВАКЦИНА ПРОТИВ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА ТЕЛЯТ Российский патент 2000 года по МПК A61K39/112 C12N1/20 A61K39/39 C12N1/20 C12R1/42 

Предлагаемое изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к получению инактивированной вакцины против сальмонеллеза телят.

Сальмонеллез крупного рогатого скота - инфекционная болезнь, характеризующаяся явлениями бактериемии, токсемии, абортами или рождением нежизнеспособного молодняка. Наиболее подвержен заболеванию молодняк в возрасте 10-30 дней. У маточного поголовья болезнь проявляется абортами. При остром течении у молодняка процесс начинается с общего угнетения и отказа от корма. Одновременно повышается температура тела до 41^oC и выше, развивается адинамия и залеживание, парезы передних конечностей. При несвоевременном лечении смерть может наступить через 36-48 часов после появления клинических признаков. При затяжном течении болезни на 2-3-и сутки у телят появляется диаррея. Фекалии становятся серо-желтыми, с большим количеством слизи и прожилками крови, имеют неприятный запах. Заболевание распространяется по типу энзоотии, нарастает постепенно и длительное время держится на высоком уровне. При этом в неблагополучном хозяйстве нередко переболевает 80-90% телят при уровне летальности 20-80%. Ущерб складывается из затрат на лечение, гибели молодняка. Заболевание регистрируется во всех регионах страны. При использовании эффективных вакцин гибель молодняка крупного рогатого скота снижается.

Известна вакцина концентрированная формолквасцовая против сальмонеллеза телят, выпускаемая Краснодарской биофабрикой. Вакцина содержит серовары сальмонелл дублин и тифимуриум. Вакцину применяют для профилактики сальмонеллеза крупного рогатого скота в хозяйствах, неблагополучных по данному заболеванию. Стельным коровам вакцину вводят двукратно за 50-60 дней до отела, в дозах 10 и 15 мл с интервалом 8-10 дней. Телят иммунизируют, начиная с 1-2-дневного возраста, двукратно, с интервалом 3-5 дней в дозе 1-1,5 мл для первой и 1,5-2 мл для второй прививки. По достижении телятами 1,5-2 месячного возраста их ревакцинируют однократно в дозе 2 мл. Телят, полученных от вакцинированных коров, прививают с 17-20-дневного возраста, а телят от невакцинированных коров прививают в 8-10-дневном возрасте двукратно в дозе 1-2 мл с интервалом 8-10 дней.

В настоящее время применяют также вакцину против сальмонеллеза телят из аттенуированного штамма Сальмонеллы дублин; живую вакцину против сальмонеллеза молодняка /из штаммов Сальмонеллы тифимуриум N 3 и Сальмонеллы дублин N 6/. В неблагополучных по сальмонеллезу хозяйствах стельных коров иммунизируют концентрированной формолквасцовой вакциной, которую вводят согласно наставлению. Телят, полученных от вакцинированных коров, прививают живыми вакцинами в 17-20-дневном возрасте, от невакцинированных коров в 10-15-дневном возрасте однократно, в дозе 1 млрд живых м.т. при подкожном введении или же двукратно перорально с интервалом в 2 дня в дозе 100 млрд м.т., в случае применения вакцины против сальмонеллеза молодняка из штаммов Сальмонеллы тифимуриум N 3 и Сальмонеллы дублин N 6.

Задача наших исследований - получение инактивированной, ареактогенной вакцины против сальмонеллеза телят, обеспечивающей создание напряженного длительного иммунитета в организме животного, уменьшение кратности введения.

В предлагаемой вакцине в качестве антигенов использованы следующие штаммы сальмонелл: Сальмонелла дублин N 1449, выделенный из абортированных плодов в 1989 г. ; Сальмонелла тифимуриум N 159, полученный из музея типовых культур лаборатории Бактериологии Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко, Москва.

Помимо этого нами использован в качестве иммуностимулятора штамм Родококка екви N 2, выделенный от крупного рогатого скота из хозяйств Московской области в 1986 г.

Предложенная вакцина включает антигены двух сероваров сальмонелл: дублин и тифимуриум в физиологическом растворе с 0,4-0,5% формалина, адъювант - масло-ланолиновая смесь, содержащая взвесь клеток родококка - иммуностимулятора.

Штамм Сальмонелла дублин N 1449 обладает следующими свойствами:
Культурально-морфологические признаки
Грамотрицательные мелкие палочки с закругленными концами, длиной 1-6 мкм, шириной 0,4-0,6 мкм, подвижные. Хорошо растет на обычных питательных средах, на бульоне образует осадок, равномерное помутнение среды, пленку и пристеночное кольцо. На полужидком агаре растет по всему столбику среды.

Физиолого-биохимические свойства
Аэроб, способный расти в микроанаэробных условиях. Оптимум pH 7,2, температуры 37^oC.

Не расщепляет мочевину, индол не образует, выделяет сероводород, ферментирует глюкозу, сорбит, арабинозу, мальтозу, утилизирует цитрат, малонат натрия, цитрат натрия с глюкозой; имеет ферменты лизиндекарбоксилазу и орнитиндекарболазу.

Агглютинируется сальмонеллезными сыворотками: 0 - 1,9,12; Н - g, p, --.

Патогенна для белых мышей: ЛД₅₀ равна 5 • 10⁴ клеток при внутрибрюшинном заражении.

Штамм Сальмонелла тифимуриум N 159 обладает следующими свойствами:
Культурально-морфологические признаки
Грамотрицательные, подвижные, мелкие, слегка изогнутые палочки, формирующие на МПА выпуклые колонии 1-3 мм в диаметре, прозрачные или беловатого цвета. Хорошо растут на обычных питательных средах, на МПБ образуют пленку и пристеночное кольцо.

Физиолого-биохимические свойства
Аэроб, способный расти в микроанаэробных условиях. Оптимум pH 7,2, температуры 37^oC.

Не изменяет молоко, не разжижает желатин, не выделяет индол, не разлагает мочевину; выделяет сероводород, сбраживает глюкозу, маннит, сорбит, арабинозу, инозит, мальтозу с образованием кислоты; лактозу и сахарозу не сбраживает; имеет ферменты лизиндекарбоксилазу и орнитиндекарболазу.

Агглютинируется сальмонеллезными сыворотками: 0 - 1,4,5,12; H - i; 1,2.

Патогенна для белых мышей: ЛД₅₀ составляет 5 • 10³ клеток при внутрибрюшинном заражении.

Штамм Родококка екви N 2 обладает следующими свойствами:
Культурально-морфологические признаки
Грамположительные, неподвижные палочковидной и кокковидной формы бактерии, формирующие выпуклые колонии до 1 мм диаметром, серовато-желтого цвета.

Характерен медленный рост на обычных питательных средах /до 4-9 суток/, но при обогащении 10% сыворотки при 37^oC отмечается хороший рост через 24 часа.

Физиолого-биохимические свойства
Аэроб, оптимум pH 7,2-7,4, температуры 30^oC.

В отношении углеводов, аминокислот, многоатомных спиртов не активен, но сбраживает глюкозу. Не образует индол, сероводород, не разлагает желатин, не лизирует эритроциты крови животных. Имеет ферменты: каталазу, уреазу. Непатогенный - при внутрибрюшинном введении белым мышам массой 18-20 г в дозе 10 • 10⁹ микробных тел не вызывает их гибели в течение 14 суток.

Способ приготовления вакцины состоит в следующем:
Пример 1. Для приготовления 1 литра вакцины берут смеси антигенов, приготовленных на физиологическом растворе с 0,4-0,5% формалина. Концентрация клеток в 1 мл взвеси 90 млрд м.т.

Антигены: Salmonella dublin - 300
Salmonella typhimurium - 100
Взвесь клеток Rodococcus equi на физиологическом растворе, содержащая в 1 мл 200 млрд микробных клеток - 100.

Легкое минеральное масло и ланолин безводный в соотношении 83-87 : 17-13 - остальное.

После перемешивания всех компонентов концентрация формалина составит 0,2-0,25%.

Применяют вакцину однократно в дозе 2,0 мл коровам и 1,0 мл телятам с профилактической целью в животноводческих хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу телят.

Пример 2. Вакцину готовят аналогично примеру 1, но берут смеси антигенов, приготовленных на физиологическом растворе c 0,4-0,5% формалина /в 1 мл бактериальной взвеси содержится 90 млрд микробных клеток/ в следующем количестве: /мл/
Антигены: Salmonella dublin - 285
Salmonella typhimurium - 95
Взвесь клеток родококка на физиологическом растворе, содержащем в 1 мл 200 млрд микробных клеток - 95 мл.

Масло-ланолиновый адъювант в соотношении 83-87 : 17-13 - остальное.

Пример 3. Вакцину готовят аналогично примеру N 1, но берут смеси антигенов, приготовленных на физиологическом растворе, содержащем 0,4-0,5% формалина /в 1 мл содержится 90 млрд микробных клеток/.

Антигены: Salmonella dublin - 315
Salmonella tuphimurium - 105
Взвесь микробных клеток родококка /концентрация в 1 мл 200 млрд м.кл./ - 105 мл.

Масло-ланолиновая смесь в соотношении 83-87 : 17-13 - остальное.

Поименованные в одном из примеров 1,2,3 компоненты вакцины помещают в гомогенизатор и по истечении 10-15 минут гомогенизации вакцину фасуют во флаконы.

Как видно из примеров, предложенная вакцина является ареактогенной, обеспечивает создание в организме животного длительного и напряженного иммунитета против сальмонеллеза телят при однократном введении телятам 1,0 мл, коровам 2,0 мл за 50-60 дней до отела.

Вакцина апробирована нами на 105 телятах и 53 коровах с положительным результатом в 1995-1997 гг.

Вакцина найдет применение в животноводческих хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу телят.

Изобретение предназначено для специфической профилактики болезней животных. Инактивированная вакцина против сальмонеллеза телят содержит смесь антигенов вирулентных, иммуногенных штаммов из сероваров Salmonella dublin, Salmonella typhimurium на физиологическом растворе, адьювант и консервант - 0,4-0,5% /об./об./ формалина. В качестве антигенов серовара Salmonella dublin содержит штамм Salmonella dublin 1449. В качестве антигена серовара Salmonella typhimurium содержит штамм Salmonella typhimurium 159. В качестве иммуностимулятора - взвесь клеток Rodococcus equi 2 на физиологическом растворе. В качестве адьюванта - маслоланолиновую смесь. Вакцина обеспечит создание напряженного длительного иммунитета в организме телят при уменьшенной дозе и кратности введения.

Инактивированная эмульсин-вакцина против сальмонеллеза телят, включающая смесь антигенов вирулентных, иммуногенных штаммов из сероваров Salmonella dublin, Salmonella typhimurium на физиологическом растворе, адъювант, консервант 0,4 - 0,5% (об./об.) формалина, отличающаяся тем, что в качестве антигенов серовара Selmonella dublin содержит штамм Salmonella dublin N 1449, в качестве антигена серовара Salmonella typhimurium содержит штамм Salmonella typhimurium N 159, в качестве иммуностимулятора содержит взвесь клеток Rodococcus equi N 2 в маслоланолиновой смеси, при этом компоненты, входящие в состав вакцины, берут в следующем соотношении из расчета на литр: антигены на физиологическом растворе с добавлением 0,4 - 0,5% формалина и концентрацией микробных клеток в 1 мл - 90 млрд: антиген Salmonella dublin N 1449 285 - 315 мл, антиген Salmonella typhimurium N 159 95 - 105 мл, взвесь клеток Rodococcus equi N 2 на физиологическом растворе, содержащая 200 млрд. микробных клеток в 1 мл 95 - 105 мл; адъювант - маслоланолиновая смесь в соотношении 83 - 87 : 17 - 13 остальное.