ИНАКТИВИРОВАННАЯ ЭМУЛЬСИН-ВАКЦИНА ПРОТИВ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА ПОРОСЯТ Российский патент 2001 года по МПК A61K39/112 C12N1/20 A61K39/39 C12N1/20 C12R1/42 

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к получению инактивированной вакцины против сальмонеллеза поросят.

Сальмонеллез свиней представляет собой инфекционное заболевание, вызываемое бактериями, относящимися к группе паратифа С. При остром течении в возрасте до 45 дней поросята отказываются от корма, угнетены, лежат, температура тела повышается до 41-42^oC, отмечается покраснение конъюнктивы с синюшным оттенком и расстройством деятельности желудочно-кишечного тракта, постепенно наступает истощение. При несвоевременном лечении поросята погибают через 2-7 дней в 70-80% случаев. Ущерб складывается из затрат на лечение, гибели молодняка. Заболевание регистрируется во всех регионах страны. При использовании эффективных вакцин гибель поросят снижается.

Известна сухая живая вакцина из штамма ТС-177. Она представляет собой инактивированную бульонную культуру аттенуированного штамма Salmonella choleraesuis ТС-177, высушенную методом сублимации. Вакцину применяют с профилактической целью в неблагополучных по сальмонеллезу свиней хозяйствах, где возбудителем установлена Salmonella choleraesuis. Прививают всех клинически здоровых животных с 2-недельного возраста. Вакцину вводят двукратно подкожно.

В настоящее время применяют также формолвакцину. Ее готовят из трех штаммов сальмонелл: Salmonella choleraesuis - 50%, Salmonella typhimurium - 25%, Salmonella dublin - 25%. Вакцину применяют с профилактической целью в хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу поросят. Если в хозяйстве нет больных животных, то прививают всех поросят сосунов и отъемышей, достигших 20-30-дневного возраста. Вакцину вводят двукратно под кожу по 4-5 мл с интервалом 5-8 дней. Поросятам старше 2-месячного возраста вводят по 5 мл вакцины. В хозяйствах, где есть больные поросята, вакцинируют только клинически здоровых трехкратно: сначала 3 мл, через 5-8 дней - 4-5 мл и через 10-20 дней после второй прививки - 5 мл.

Задача наших исследований - получение инактивированной, ареактогенной вакцины против сальмонеллезы поросят, обеспечивающей создание напряженного длительного иммунитета в организме животного, уменьшение дозы, кратности введения.

Нами выделен серовар сальмонелла холера суис N 8, выделенный из павшего поросенка, используемый в вакцине в качестве антигена.

Кроме того, нами использован в качестве иммуностимулятора штамм Rodococcus equi N 2, выделенный из крупного рогатого скота из хозяйств Московской области в 1986 году.

Помимо этих штаммов для получения вакцины против сальмонеллеза поросят был использован ранее известный штамм сальмонелл мышиного тифа N 159, полученный из коллекции музея типовых культур лаборатории Бактериологии Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко, Москва, который обладает следующими свойствами:
Культурально-морфологические признаки.

Грамотрицательные, мелкие, слегка изогнутые палочки, подвижные, формирующие выпуклые колонии 1-3 мм диаметром, прозрачные или беловатого цвета. Хорошо растут на обычных питательных средах; на МПБ образует пленку и пристеночное кольцо.

Физиолого-биохимические свойства.

Аэроб, способный расти в микроанаэробных условиях. Оптимум pH - 7,2, температура - 37^oC.

Не изменяет молоко, не разжижает желатин, выделяет сероводород, не выделяет индол, не разлагает мочевину; сбраживает глюкозу, маннит, сорбит, арабинозу, инозит, мальтозу с образованием кислоты; лактозу, сахарозу не сбраживает; имеет ферменты: лизиндекарбоксилазу, орнитиндегидрогеназу. Агглютинируется сальмонелезными сыворотками - O - 1, 4, 5, 12; H - i; 1,2.

Патогенна для белых мышей, LD₅₀ равна 5 · 10³ клеток при внутрибрюшинном заражении.

Предложенная вакцина включает антигены 2-х сероваров сальмонелл: холера суис и тифимуриум в физиологическим растворе с 0,4 - 0,5% формалина, адъювант - маслоланолиновая смесь, содержащая взвесь клеток родококка (иммуностимулятор).

Штамм сальмонелла холера суис N 8 обладает следующими свойствами:
Культурально-морфологические признаки.

Подвижные грамотрицательные палочки с закругленными концами, спор и капсул не образуют.

На МПА - колонии мелкие, полупрозрачные, выпуклые, при старении становятся мутными. На МПБ не образует пленки и пристеночного кольца, бульон равномерно мутнеет.

Физиолого-биохимические свойства.

Аэробы, способные расти в микроанаэробных условиях. Оптимум pH - 7,2, температура - 37^oC.

Не изменяет молоко, не разжижает желатин, не выделяет индол, не разлагает мочевину; расщепляет глюкозу (с образованием кислоты и газа), маннит, ксилозу; лактозу, сахарозу, инозит, арабинозу, дульцит не сбраживает; имеет ферменты: лизиндекарбоксилазу, орнитиндегидрогеназу.

Агглютинируется сальмонеллезными сыворотками: O - 6,7, H - c; 1,5.

Патогенна для белых мышей, LD₅₀ равна 16 клеток при внутрибрюшинном заражении.

Штамм Rodococcus equi N 2 обладает следующими свойствами:
Культурально-морфологические признаки.

Грамположительные, неподвижные палочковидной и кокковидной формы бактерии, формирующие выпуклые колонии до 1 мм диаметром серовато-желтого цвета.

Для родококков N 2 характерен медленный рост на простых питательных средах (4-9 суток), но при обогащении 10% сыворотки при 37^oC отмечается хороший рост через 24 часа. При выдерживании пробирок с культурой на свету - колонии приобретают пигмент цвета семги.

Физиолого-биохимические свойства.

Аэроб способный расти в микроанаэробных условиях. Оптимум pH 7,2 - 7,4, температура 30^oC.

В отношении углеводов, аминокислот, многоатомных спиртов неактивен. Сбраживает только глюкозу. Не образует индол и сероводород, не разлагает желатин, не лизирует эритроциты крови животных. Имеет ферменты: каталазу, уреазу. Непатогенный - при внутрибрюшинном введении белым мышам, массой тела 18-20 г в дозе 10 · 10⁹ микробных тел, не вызывает их гибели в течение 14 суток.

Способ приготовления вакцины состоит в следующем.

Пример 1. Для приготовления 1 литра вакцины берут смеси антигенов, приготовленных на физиологическом растворе с 0,4 - 0,5% формалина. Концентрация клеток в 1 мл взвеси - 40 млрд.

Антигены:
Salmonella choleraesuis - 300 мл
Salmonella typhimurium - 100 мл
Взвесь клеток Rodococcus equi на физиологическим растворе, содержащая в 1 мл 200 млрд микробных клеток - 100.

Легкое минеральное масло и ланолин безводный в соотношении 83-87:17-13 - остальное.

После перемешивания всех компонентов концентрация формалина составит 0,2 - 0,25%.

Применяют вакцину однократно в дозе 1,0 мл с профилактической целью в свиноводческих хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу поросят.

Эффективность от применения вакцины в экспериментальных условиях (с применением пятикратной заражающей дозы) составила - 100%.

Пример 2. Вакцину готовят аналогично примеру 1, но берут смеси антигенов, приготовленных на физиологическом растворе, содержащем 0,4 - 0,5% формалина (в 1 мл бактериальной взвеси содержится 40 млрд микробных клеток) в следующем количестве:
Антигены:
Salmonella choleraesuis - 315 мл
Salmonella typhimurium - 105 мл
Взвесь микробных клеток родококка (концентрация в 1 мл 200 млрд) - 105 мл.

Маслоланолиновая смесь в соотношении 83-87:17-13 - остальное.

Пример 3. Вакцину готовят аналогично примеру 1, но берут смеси антигенов, приготовленных на физиологическом растворе, содержащем 0,4 - 0,5% формалина (в 1 мл содержится 40 млрд микробных клеток).

Антигены:
Salmonella choleraesuis - 285 мл
Salmonella typhimurium - 95 мл
Взвесь клеток родококка на физиологическим растворе, содержащем в 1 мл 200 млрд микробных клеток - 95 мл.

Маслоланолиновый адъювант в соотношении 83-87:17-13 - остальное.

Поименованные в одном из примеров 1, 2, 3 компоненты вакцины помещают в гомогенизатор и по истечении 10-15 минут гомогенизации вакцину фасуют во флаконы.

Как видно из примеров, предложенная вакцина является ареактогенной, обеспечивает создание в организме животного длительного и напряженного иммунитета против сальмонеллеза поросят при однократном введении в дозе 1,0 мл.

Вакцина апробирована нами на 70 поросятах с положительным результатом в 1995-1996 г.

Вакцина найдет применение в свиноводческих хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу поросят.

Изобретение предназначено для специфической профилактики болезней животных. Инактивированная эмульсин-вакцина против сальмонеллеза поросят содержит смесь антигенов вирулентных, иммуногенных штаммов из сероваров Salmonella choleraеsuis, Salmonella typhimurium на физиологическом растворе, адъювант и консервант - 0,4 - 0,5% (об./об.) формалина. В качестве антигена серовара Salmonella choleraеsuis она содержит штамм Salmonella choleraеsuis N 8. В качестве антигена серовара Salmonella typhimurium - штамм Salmonella typhimurium N 159. В качестве иммуностимулятора используют взвесь клеток Rodococcus equi N 2 на физиологическом растворе. В качестве адъюванта - маслоланолиновую смесь. Вакцина обеспечит создание напряженного длительного иммунитета в организме поросят при уменьшенной дозе и кратности введения.

Инактивированная эмульсин-вакцина против сальмонеллеза поросят, включающая смесь антигенов вирулентных, иммуногенных штаммов из сероваров Salmonella choleraesuis, Salmonella tuphimurium на физиологическом растворе, адъювант, консервант 0,4 - 0,5% (об/об) формалина, отличающаяся тем, что в качестве антигенов серовара Salmonella choleraesuis содержит штамм Salmonella choleraesuis 8, в качестве антигена серовара Salmonella typhimurium содержит штамм Salmonella typhimurium 159, в качестве иммуностимулятора содержит взвесь клеток Rodococeus equi 2 в маслоланолиновой смеси, при этом компоненты, входящие в состав вакцины, берут в следующем соотношении из расчета на л: антигены на физ.растворе с добавлением 0,4 - 0,5% формалина и концентрацией микробных клеток в 1 мл - 40 млрд: антиген Salmonella choleraesuis 8 285 - 315 мл, антиген Salmonella typhimurium 159 95 - 105 мл, взвесь клеток Rodococcus equi 2 на физиологическом растворе, содержащая 200 млрд.микробных клеток в 1 мл 95 - 105 мл, адъювант - маслоланолиновая смесь в соотношении 83 - 87 : 17 - 13 - остальное.