СПОСОБ ИНАКТИВАЦИИ ВИРУСА СПИДА Российский патент 1997 года по МПК C12N7/04 

Изобретение относится к вирусологии, в частности к средствам лучевой нейтрализации вируса СПИДа.

Известен способ инактивации вируса СПИДа путем облучения его светом на длине волны 636,2 нм в течение 30 60 мин [1]
Недостатком указанного способа является низкая инактивация вируса СПИДа.

Задачей изобретения является большая инактивация ферментной системы вируса.

Известно, что в качестве генетического материала вируса СПИД является молекула РНК, содержащая, как известно, пять атомов магния. Молекула РНК будет выполнять свои функции только в случае надежной ее защиты от возмущающего действия света на электронных переходах атома магния.

Известно также, что процесс обратной транскрипции в вирусе СПИДа, как и в других ретровирусах, осуществляется с помощью фермента обратной транскриптазы (ревертазы), которая функционирует с участием атомов цинка. Успешное протекание этого процесса будет только в том случае, когда электронная оболочка атома цинка также (как и атом магния) будет надежно защищена от света, соответствующего длине волны 636,2 нм. В этой связи можно полагать, что при воздействии света на вирус СПИДа на электронных переходах атомов магния (516,7; 517,2; 518,2 нм) и электронных переходах атомов цинка (636,2 нм) могут затрагиваться как нуклеиновые кислоты, так и фермент обратной транскриптазы, что значительно понизит активность вируса.

В этой связи был выполнен специальный эксперимент, заключающийся в следующем.

На модели клеточных лимфобластоидных клеточных линий СЕМ и МТ-4, инфицированных вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) штамм ВИЧ-1/B RU (острая инфекция), исследована возможность лучевой нейтрализации вируса.

Материалы и методы. Клетки. Клетки МТ-4 выращивали в виде суспензии в среде PPMI 1640 с 15% фетальной сыворотки телят, 100 мкг/мл гентамицина в концентрации 300000 500000 клеток в 1 мл.

Вирус. Штамм ВИЧ-1/B RU получен из музея штаммов института вирусологии РАМН.

Оценку противовирусного действия монохроматического света проводили по ингибированию вирусиндуцированного синцитиеобразования, а также накоплению вирусного антигена в культуральной жидкости, регистрируемого методом иммуноферментного анализа.

Результаты и обсуждения. Перед инфицированием чувствительных к ВИЧ-1 клеток вирусный материал облучали в видимой области спектра на линиях магния (516,7; 517,2; 518,2 нм) и линиях цинка (636,2 нм) отдельно и в комбинации, при полезной мощности света менее 0,1 Вт с экспозицией 30 и 60 мин.

После получения проб вируса монохроматическим светом материал вносили в лунки с клеточными культурами. В качестве положительного контроля использовали необлученный вирус (множественность инфекции 0,1 lg ТЦД/50 клетка), отрицательного незараженные клетки.

Инфицированные культуры инкубировали в течение 4 7 сут в атмосфере с 5% CO₂ и 98% влажности при 37^o. Результаты экспериментов представлены в таблице.

Полученные данные показывают, что в случае облучения вируса СПИД комбинированным светом, соответствующим электронным переходам атомов магния и цинка, снижается образование вирусиндуцированных синцитиев на 57,7 и 30,8% соответственно. При этом отмечено заметное снижение уровня накопления вирусного антигена в культуральной жидкости клеток, зараженных вирусом.

Комбинированное применение монохроматического света, соответствующего электронным переходам в атомах магния и цинка, вызвало аддитивное уменьшение числа вирусиндуцированных синцитиев и уровня вирусного антигена. Использование излучения в видимой области спектра, очевидно, не затрагивает наружной оболочки препарата с уникальными биологическими свойствами.

Сравнительный эксперимент по облучению вируса СПИД производился следующим образом.

Сначала вирусный материал облучался поочередно светом на длинах волн (516,7; 517,2; 518,2 нм), а затем этот же вирусный материал с разрывом во времени 15 20 мин облучали светом с длиной волны 636,2 нм. В результате этого эксперимента оказалось, что инактивация вируса происходит, но не выше, чем если бы мы светили только одним каким-либо светом.

И только тогда, когда вирусный материал был облучен комбинированным светом одновременно (без какого-либо разрыва во времени), инактивация его повысилась существенным образом.

Список литературы.

Федченко П. П. Носик Д. Н. Симонов В. С. Константинов Н. В. Способ инактивации вируса СПИДа. Патент N 2031945 от 27.03.1995.

Использование: способ инактивации вируса СПИДа относится к вирусологии, в частности к средствам лучевой нейтрализации вируса СПИД. Сущность изобретения: вирусный материал облучают комбинированным светом, соответствующим электронным переходам атомов магния 516,7; 517,2; 518,2 нм и атомов цинка 636,2 нм в течение 30 - 60 мин, в результате чего у вируса СПИДа происходят существенные изменения как в нуклеиновых кислотах, так и в ферменте обратной транскриптазы, что приводит к инактивации вируса. 1 табл.

Способ инактивации вируса СПИДа, включающий воздействие света с длиной волны 636,2 нм в течение 30 60 мин, отличающийся тем, что воздействие светом осуществляют в комбинации со световым потоком с длинами волн 516,7 нм, 517,2 нм, 518,2 нм.