СПОСОБ ИНАКТИВАЦИИ ВИРУСА СПИДА Российский патент 1995 года по МПК C12N7/04 A61K39/12 

Изобретение относится к вирусологии, в частности к средствам инактивации вируса СПИДа.

Известен способ инактивации вируса СПИДа. Этот способ заключается в облучении вирусного материала светом с длиной волны 516,7; 517,2 и 518,2 нм в течение 40-90 мин (авт. св. N 1639061, кл. С 12 N 7/04, 1990).

Недостатком этого способа является низкая инактивация вируса СПИДа.

Целью изобретения является более высокая инактивация ферментной системы вируса СПИДа.

Известно, что процесс обратной транскрипции в вирусе СПИДа, как и в других ретровирусах, осуществляется с помощью фермента обратной транскриптазы (ревертазы), которая функционирует с участием атомов цинка. Понятно, что успешное протекание этого процесса возможно только в том случае, когда электронная оболочка атома цинка будет надежно защищена от внешних возмущающих факторов. Одним из таких факторов может быть свет, возмущающий электронную орбиту атома цинка.

В этой связи мы предполагаем, что при действии света с длиной волны, соответствующей электронным переходам в атомах цинка, у вируса СПИДа могут происходить изменения как в нуклеиновых кислотах, так и в ферменте обратной транскриптазы, что приведет к инактивации вируса.

Для исследования действия света с длиной волны, соответствующей электронному переходу в атомах цинка (636,2 нм), на вирус СПИДа использовали следующий материал.

Культура клеток. Линия клетки МТ-4 выращивали в виде суспензии в среде RPMI 1640 с 15% фетальной сыворотки телят и 100 мкг/мл гентамицина в концентрации 300000-500000 клеток в 1 мл.

Вирус. Использовали штамм ВИЧ-1 /BRU, полученный из института Пастера (Париж).

Оценку противовирусного действия монохроматического света проводили по ингибированию вирусиндуцированного синцитеобразования, а также по накоплению вирусного антигена в культуральной жидкости, регистрируемого методом иммуноферментного анализа.

Перед инфицированием чувствительных к ВИЧ-1 клеток вирусный материал облучали светом с длиной волны 636,2 нм при полезной мощности света не менее 0,1 Вт с экспозицией 30-60 мин. Для контроля проводили облучение клеток светом, соответствующим электронным переходам в атомах магния (516,7; 517,2; 518,2).

После облучения пробы вируса вносили в лунки панелей с клеточными культурами. В качестве положительного контроля использовали необлученный вирус (множественность инфекции 0,1lg ТЦД (50) клетка), отрицательного - незараженные клетки.

Инфицированные культуры инкубировали в течение 4-7 суток в атмосфере с 5% СО₂ и 98% влажности при температуре 37^оС. Результаты экспериментов представлены в таблице.

Полученные данные показывают, что клетки, облученные монохроматическим светом с длиной волны 636,2 нм в течение 30 мин, на 37% снижали образование вирусиндуцированных синцитиев, а при 60 мин - на 66%. При этом отмечено заметное снижение уровня накопления вирусного антигена в культуральной жидкости. Инактивирующий эффект света с длиной волны 636,2 нм был более выражен, чем аналогичный эффект у света с длиной волны 516,7; 517,2; 518,2 нм магния.

Таким образом, излучение с длиной волны 636,2 нм существенным образом инактивирует вирус СПИД.

Использование: изобретение относится к вирусологии, в частности к средствам лучевой нейтрализации вируса СПИД. Сущность изобретения состоит в том, что светом, соответствующим длине 636,2 нм, облучают в течение 30 - 60 мин материал. В результате этого у вируса СПИДа происходят существленные изменения как в нуклеиновых кислотах, так и в ферменте обратной транскриптазы, что приводит к инактивации вируса. 1 табл.

СПОСОБ ИНАКТИВАЦИИ ВИРУСА СПИДА, включающий воздействие света на вирусный материал, отличающийся тем, что вирусный материал облучают светом с длиной волны 636,2 нм в течение 30 - 60 мин.