БИОСТИМУЛЯТОР РОСТА РАСТЕНИЙ СИМБИОНТ-УНИВЕРСАЛ И СООБЩЕСТВО МИКРООРГАНИЗМОВ Российский патент 1998 года по МПК A01N63/00 C12P39/00 

Изобретение относится к сельскому хозяйству и касается продуктов микроорганизмов, стимулирующих развитие и повышающих урожайность сельскохозяйственных растений.

Известны стимуляторы роста растений, получаемые из чистых культур грибов-эндофитов (симбионтных грибов), выделенных из корней растений, таких как, например, облепиха, мать-и-мачеха, земляника и др.[1-4]
Известен биостимулятор роста и развития растений Симбионт-1, представляющий собой спиртовой экстракт природных биологически активных соединений, накапливаемых в культуре цилиндрокарпового гриба Cylindrocarpon radicicala Woll, выделяемый из биомассы микромицета, который получают из корней женьшеня [5]
Предлагаемый биостимулятор роста и развития растений Симбионт-Универсал представляет собой спиртовой экстракт природных биологически активных веществ, которые продуцируются микробным сообществом, также выделенным из корней женьшеня, но состоящим из пяти компонентов, принадлежащих к двум царствам микроорганизмов эвкариотам и прокариотам. Эвкариотный компонент представлен тремя видами несовершенных грибов: мицелиальным организмом Acremonium panaxeorum ИНМИ F-160 и двумя дрожжами Candida muscorum ИНМИ Y- 41 и Rhodotorula glutinus ИНМИ Y-42; прокариотный компонент двумя бактериями - Azomonas macrocytogenes ИНМИ В-28 и Xantobakter sp. ИНМИ В-29. В сообществе доминирует мицелиальный гриб, дрожжи и бактерии являются дополняющими компонентами. Однако роль этих компонентов важна, а все они вместе образуют устойчивое микробное сообщество, продуцирующее физиологически активные вещества, получившие название Симбионт-Универсал. Компонентный состав данного сообщества стабилен при длительном культивировании. Соотношение компонентов (гриба, бактерий и дрожжей) в зрелом сообществе ко времени извлечения физиологически активных веществ, являющихся действующим началом препарата Симбионт-Универсал составляет: (94-98.5):(4-1):(2-0.5). Соотношение разных видов среди дрожжей и бактерий ≈1:1.

Выделенная из корней женьшеня природная смешанная культура микроорганизмов культивируется при температуре 22-25^oC на искусственной питательной среде следующего состава, г/л глюкоза 8-10, KH₂PO₄ 0.9, K₂HPO₄ 0.3, MgSO₄ 0.2, K₂SO₄ 0.1, аспарагин 0.02, MnSO₄, Fe₂(SO₄)₃, CuSO₄ следы. pH среды 6,5. Продуцируемые микробным сообществом биологически активные вещества, составляющие действующее начало препарата Симбионт-Универсал, извлекают из среды в две стадии: адсорбцией стерильным активированным углем и экстрагированием с угля 70%-ным этиловым спиртом.

Препарат Симбионт-Универсал, так же как и известный препарат Симбионт-1, эффективен при применении на зерновых и картофеле в ничтожно малых дозах (при обработке семенного материала 1 мл/т, вегетирующих растений 1 мл/га). Вместе с тем Симбионт-Универсал стимулирует развитие крупяных (гречиха, просо), бобовых (горох), овощных (огурец, перец, баклажаны, капуста, лук, морковь, редис), плодовых (яблоня, вишня), ягодных (земляника, смородина, облепиха, крыжовник), цветочных (астра) культур. При этом за счет улучшения роста и развития растений повышается их устойчивость к болезням и вредителям. Симбионт-Универсал легко включается в технологии защиты сельскохозяйственных культур от вредных организмов и перспективен для использования в практике возделывания культур как открытого, так и защищенного грунта. Препарат можно применять в композиции с микроэлементами, например, медным купоросом или другими солями, а также при необходимости одновременно с пестицидами. При применении Симбионта-Универсал на зерновых культурах прибавка урожая озимой пшеницы (обработка по вегетации) достигала 17 ц/га, яровой пшеницы (обработка семян) 4,5-5,4 ц/га, ярового ячменя (обработка семян) 3.6 ц/га.

Описание и идентификация микроорганизмов, составляющих микробное сообщество, продуцирующее препарат Симбионт-Универсал.

Методы исследований.

Среды. Мицелиальный гриб Acremonium panaxeorum изолировали из сообщества и поддерживали на стандартной агаризованной среде Чапека с 2% сахарозы и сусло-агаре. Предварительно среды подкисляли с помощью молочной кислоты до pH 4-5.

Для выращивания дрожжей использовали подкисленное до pH 4-5 агаризованное сусло. При их идентификации использовали стандартную синтетическую среду следующего состава, г/л: (NH₄)₂S)₄ 3,5; K₂HPO₄ 0.15; KH₂PO₄ 0.85; MgSO₄ 0.5; NaCl 0,1; CaCl₂ 0,1. Вода-дистиллированная.

Бактерии выращивали на разбавленном дистиллированной водой 1:5 МПБ (МПА) или минеральной среде, рекомендуемой для выращивания сообщества, с добавлением источника азота и доведением pH до нейтральной реакции [4]
Микроскопирование культур микроорганизмов осуществляли с помощью фазовоконтрастного микроскопа, МБС-10 и электронного трансмиссионного микроскопа JEM 100 С. В последнем случае препараты клеток контрастировали с помощью 1% -ного раствора уранилацетата.

Идентификацию чистых культур микроорганизмов проводили в соответствии со стандартными методиками, применяемыми при этих процедурах [6-8,10,11] и использованием соответствующих определителей [6,9,12,13-18]
Количественное соотношение микроорганизмов в сообществе определяли по количеству биомассы каждого компонента. Биомассу гриба, дрожжей и бактерий определяли по общепринятым методикам [11]
Описание и идентификация микромицета. Мицелиальный гриб, изолированный из микробного сообщества, продуцирующего физиологически активные вещества, составляющие препарат Симбионт-Универсал, должен быть отнесен к классу Deuteromycetes (Fungy imperfecti), порядка Hyphomycetales (Moniliales), семейства Moniliaceae, рода Acremonium (Link ex Fr.), Acremonium panoxeorum [9,12,17,18]
Микромицет Acremonium panoxeorum имеет следующие признаки: 12-суточная культура представлена белыми распростертыми колониями, скорость роста - умеренная. Мицелий обильный, ватообразный, плохо снимается с агара. С возрастом обратная сторона колонии на среде Чапека становится коричневой, мицелий септированный со множеством тяжей. Конидиеносцы образуются на воздушном мицелии. Конидиеносцы одиночные, иногда в мутовках. Микромицет не образует из конидиеносцев каких-либо агрегатов типа коремий, спородохий или пионнот. Конидии образуются на вершине конидиеносцев, одиночные и/или в ложных головках. Конидии бесцветные, как правило, цилиндрические с закругленными концами. Размеры конидий: длина до 17 мкм, толщина до 5 мкм. Некоторые конидиеспоры иногда имеют перегородку. Наряду с большими цилиндрическими конидиями имеются мелкие конидии, от яйцеподобных до шаровидных. При выращивании микромицета в жидкой культуре наблюдается образование хламидоспор. Предпочтительная температура роста -20^oC.

В настоящее время род Acremonium включает более 70 видов. Виды этого рода разнесены в три секции; Simplex, Gleomastix и Necrioidee [13] По совокупности выявленных признаков микромицет Acremonium sp. соответствует секции Simplex. В секции Simplex описано 38 видов [18] С учетом источника выделения этого микромицета установленные признаки не соответствуют ни одному из известных видов, и, следовательно, организм подлежит описанию в качестве нового вида. В связи с тем что источником выделения Acremonium sp, были корни женьшеня, в качестве видового названия может быть предложено Acremonium panaxeorum sp. nov. Акремониум женьшеневый. Культура хранится в коллекции культур лаборатории почвенной микробиологии Института микробиологии РАН под номером F-160. (Acremonium panaxeorum ИНМИ F-160).

Описание и идентификация дрожжей. Культуры дрожжей, изолированные из микробного сообщества, продуцирующего физиологически активные вещества, составляющие препарат Симбионт-Универсал были отнесены к несовершенным аспарогенным дрожжам родов Candida, Candida muscorum и Rhodotorula, Rhodotorula glutinis [6,7,13,15,16] Исследуемые дрожжи имеют следующие признаки:
Candida muscorum. Колонии беловатые, с возрастом принимающие кремовый оттенок. Размер колоний от 1-2 до нескольких мм. Колонии округлые, край колонии неровный, центр выпуклый, смещенный к одному боку. Поверхность колонии матовая, с возрастом покрывающаяся радиальными бороздками. Культура образует псевдомицелий, дифференцирующийся на псевдогифы и бластоспоры. В месячной культуре штрих желтовато-кремового цвета с матовой поверхностью и волнистым краем, пастообразной консистенции. Клетки Candida muscorum овальной и продолговатой формы размером 2.2-4.5 х 4.0-8.0 мкм. Размножаются почкованием. Используют органические и неорганические (нитрат) формы азота. При проверке способности организма к ассимиляции некоторых веществ в качестве единственного источника углерода и энергии были выявлены следующие свойства: глюкоза (+), сахароза (+), мальтоза (-), целлобиоза (±), лактоза (-), мелибиоза (-), раффиноза (+), инулин (-), растворимый крахмал (-), L-арабиноза (±), D-ксилоза (-), L-рамноза (-), этанол (+), глицерин (+), маннит (-), метанол (-), лактат (-), цитрат (-), сукцинат (-).

Обозначения: "+" вещество используется; "-" вещество на используется; "±" обнаружен слабый рост.

Организм способен к росту на безвитаминной среде. Рост на 5%-ном глюкозо-дрожжевом автолизате отсутствует. Крахмалоподобных соединений не образует. Мочевину не гидролизует. Температурный диапазон роста 10-40^oC, температурный оптимум роста 15-28^oC.

По совокупности выявленных признаков изолят соответствует виду Candida mucrocorum (di Menna) [6,7,13,15,16] Штаммовые отличия заключаются в неспособности идентифицируемого штамма ассимилировать лактозу, мальтозу, ксилозу и лактат. Культура хранится в коллекции культур лаборатории почвенной микробиологии РАН под номером ИНМИ Y-41 (Candida mucrorum ИНМИ Y-41).

Rhodotorula glutinis. Колонии розовые, размером от 1-2 до 5 мм в диаметре. Колонии округлые, край ровный, центр колонии приподнят, может быть смещенным к одному боку. Поверхность колонии матовая, с возрастом с хорошо выраженными кольцевыми бороздками. Псевдомицелия не образует. Штрих ярко-розового цвета, гладкий, блестящий. Клетки Rhodotorula glutinis овальной и продолговатой формы размером 1.5-2.3 х 2.0-4.0 мкм. Размножаются почкованием. Используют органические и неорганические формы азота. При проверке способности организма к ассимиляции некоторых веществ в качестве единственного источника углерода и энергии были выявлены следующие свойства: глюкоза (+), сахароза (+), мальтоза (-), целлобиоза (+), лактоза (-), мелибиоза (-), раффиноза (+), инулин (-), растворимый крахмал (-), L-арабиноза (±), D-ксилоза (±), L-рамноза (-), этанол (+), глицерин(±), маннит (+), метанол (-), лактат (±), цитрат (-), сукцинат (+).

Обозначения:"+" вещество используется, "-" вещество на используется; "±" обнаружен слабый рост.

Организм способен к росту на безвитаминной среде. Рост на 5%-ном глюкозо-дрожжевом автолизате отсутствует. Температурный диапазон роста 10-40^oC, температурный оптимум роста 15-28^oC.

По совокупности выявленных признаков изолят соответствует виду Rhodotorula glutinus (Fres.) Harrison [6,7,13,15,16] Культура хранится в коллекции культур лаборатории почвенной микробиологии РАН под номером ИНМИ Y-42 (Rhodotorula glutinis ИНМИ Y-42).

Oписание и идентификация бактерий. Культуры бактерий, изолированные из микробного сообщества, продуцирующего биологически активные вещества, составляющие препарат Симбионт-Универсал, были отнесены к родам Azomonas, Azomonas macrocytogenes Xantobacter, Xantobacter sp.[14] Бактерии имеют следующие признаки.

Azomonas macrocytogenes после трех суток роста на МПА представлена мелкими колониями 1-2 мм в диаметре. Колонии круглые, выпуклые, слизистые, блестящие. Край колоний ровный, цвет прозрачно беловатый. Клетки трехдневной культуры представляют собой в основном подвижные, короткие и толстые палочки. Движение клеток кувыркающееся. При электронно-микроскопических исследованиях клеток было установлено, что жгутикование соответствует субполярному монотриху, культура довольно плеоморфна. Встречаются грушеподобные клетки, клетки с боковыми выростами и др. Размеры клеток: длина 1.5-1.8, толщина 0.57-0.85 мкм.

Способности к образованию каких-либо покоящихся форм не выявлено. Клетки грамотрицательные. Являются строгими аэробами. Оксидазо- и каталазоположительные. Температурные границы роста: 11-36^oC с оптимумом роста при 20-28^oC. Культура хорошо сохраняет жизнеспособность на МПА. Культура способна к азотфиксации (по ацетиленредуктазной реакции).

При выращивании чистой культуры с глюкозой на среде, рекомендованной для культивирования микробного сообщества [4] бактерия образует в значительных количествах экзополисахарид. При проверке способности бактерий к ассимиляции некоторых веществ в качестве единственного источника углерода и энергии были выявлены следующие свойства: глюкоза (+), маннитил (+), молонат (-), малат (+), глутамат (+), галактоза (+), сорбитол (+).

Обозначения: "+" вещество используется, "-" вещество не используется.

Согласно девятому изданию определителя бактерий Берги род Azomonas (семейство Azotobacteraceac) представлен тремя видами: A.agilis, A.insignis и A.macrocytogenes [14] Для первых двух видов основным природным источником обитания является вода. А.macrocytogenes является типично почвенным обитателем.

По совокупности выявленных признаков штамм Azomonas sp. может быть отнесен к виду Azomonas macrocytogenes (ex. Baillie, Hodgkiss and Norris) [14] Отличия от типового вида заключаются в том, что идентифицируемый штамм способен ассимилировать глутамат и нитратный азот.

Культура хранится в коллекции культур лаборатории почвенной микробиологии РАН под номером ИНМИ В-28 (Azomonas macrocytogenes ИНМИ В-28).

Xantobacter sp. после трех суток роста на МПА представлена колониями до 2 мм в диаметре. Колонии круглые, выпуклые, сильнослизистые (вязкие), блестящие. Край колоний ровный, цвет в молодой культуре бледно-желтый, с возрастом и при обильном росте ярко-желтый. Окружающий агар не пигментирует.

Клетки трехдневной культуры Xantobacter sp. представлены палочками, от умеренных до очень длинных. Последние, по-видимому, представляют собой цепочки неотделившихся клеток. Наиболее характерные размеры клеток: 1.7-3.7 х 0.5 мкм. Клетки, выращенные на твердой среде, неподвижные. Однако в некоторых случаях при микроскопировании культуры с жидких сред наблюдалась способность к движению. При электронно-микроскопических исследованиях клеток были выявлены жгутики, а их прикрепление соответствует монотрихальному типу. Многие клетки содержат слегка флуоресцирующие включения, напоминающие свечение гранул полиоксибутирата. Способности к образованию каких-либо покоящихся форм не выявлено. Клетки грамотрицательные. Бактерия является строгим аэробом, оксидазоотрицательная, каталазоположительная. Температурные границы роста 11-37^oC. Оптимальный температурный диапазон роста 22-28^oC. При крайних значениях температур рост очень слабый. Культура способна к азотфиксации (по ацетиленредуктазной реакции). Исследован рост на: глюкозе (+), пропионате (±), молонате (-), аспарагине (±), метаноле (±), целлобиозе (+), арабинозе (+), рамнозе (+) и галактозе (+).

Обозначения: "+" вещество используется; "-" вещество не используется; "±" реакция слабовыраженная.

Из особенностей организма следует отметить его "капризностъ", в частности, довольно быструю потерю жизнедеятельности при хранении на МПА при комнатной температуре. Однако при пониженной температуре (в холодильнике) может сохраняться длительное время.

Результаты проведенных исследований показывают, что бактерия обладает многими признаками, свойственными представителям рода Xantobacter. Ключевым сходством с представителями рода Xantobacter является способность бактерии к азотфиксации, а также способность к образованию запасных веществ в клетке, размеры клеток, спектр ключевых потребляемых субстратов и др. Штамм прототрофен и не нуждается в биотине.

В роде Xantobacter в настоящее время узаконено два вида: X. autotrophicus и X. flavus [14] Изолированный и описанный организм не соответствует ни одному из этих видов и, по-видимому, претендует на новый вид. Однако в связи с тем, что в настоящее время характеристики представителей рода уточняются и он активно пополняется новыми видами (Reding H.K. Croes G.L.M. Dijkhuizen L. Wiegel J. Emendant of Xantobacter flavus as a monile species. Персональное сообщение.), целесообразно сохранить за описанным организмом название Xantobacter sp.

Культура хранится в коллекции культур лаборатории почвенной микробиологии РАН под номером НИМИ В-29 (Xantobacter sp. ИНМИ В-29).

Определение соотношения микроорганизмов в сообществе. Строгое определение количественного соотношения разных микроорганизмов, составляющих сообщество, продуцирующее физиологически активные вещества препарата Симбионт-Универсал затруднено, так как в нем имеются как одноклеточные организмы, бактерии и дрожжи, так и многоклеточные морфологически гетерогенный мицелиальный гриб. В связи с этим определение соотношения микроорганизмов проводили по косвенному критерию площади проективного покрытия поля зрения в микроскопе [11] Соотношение гриба, бактерий и дрожжей в зрелом сообществе (ко времени извлечения физиологически активных веществ, входящих в состав препарата Симбионт-Универсал составляет: (94-98.5):(4-1):(2-0.5). Соотношение разных видов среди дрожжей принято ≈1:1.

Пример 1. Получение биостимулятора Симбионт-Универсал. 1 г корешков женьшеня отмывают от почвы и стерилизуют в течение 2-3 мин в спирте, многократно промывают стерильной водой, растирают в стерильной агатовой ступке, переносят в колбы со стерильной питательной средой следующего состава, г/л: глюкоза 8-10; K₂HPO₄-0.3; KH₂PO₄- 0.9; MgSO₄- 0.2; K₂SO₄- 0.1; аспарагин 0.01-0,02, FeSO₄- 7 капель 2%-ного раствора/л; CuSO₄- 7 капель 2%-ного раствора/л; гиббереллин (стандартный спиртовой раствор)-1 мл, MnSO₄ - следы и оставляют для прорастания на 5-12 сут. Выросшее микробное сообщество пересевают на питательную среду того же состава, но без добавления гиббереллина и культивируют в течение 30 сут при температуре 22-25^oC. По окончании добавляют в колбы стерильный активированный уголь из расчета 0.5% от массы жидкости. Выдерживают 2-4 ч и отфильтровывают осадок на стерильный фильтр. Остаток с фильтра помещают в стерильную колбу, добавляют 100 мл 70%-ного этилового спирта, выдерживают 8-10 ч и фильтруют. Фильтрат разливают в стерильные емкости. Из 300 мл культуры получают 90 мл спиртового раствора биостимулятора. Интегральным показателем активности биостимулятора является его влияние на рост и развитие тест-растений (пшеница, кресс-салат).

Пример 2. Влияние разных концентраций препарата Симбионт-Универсал на всхожесть семян, рост корней и стеблей пшеницы.

Семена пшеницы в количестве 35 шт. раскладывают в чашке Петри на стерильной фильтровальной бумаге и смачивают препаратом в разведении 10^-1, 10^-3, 10^-4. Эталон семена, обработанные питательной средой, используемой для выращивания сообщества, в таких же разведениях. Контроль семена, обработанные отстоянной в течение суток водой. Чашки Петри закрывают крышками и инкубируют в термостате в течение 5 суток при 25^oC. По истечении этого времени определяют процент прорастания семян, длину корней и проростков. Результаты приведены в табл.1.

Приведенные в табл. 1 результаты показывают устойчивое положительное влияние низких концентраций Симбионта-Универсал на рост корней и стеблей пшеницы.

Пример 3. Стимулирующее действие Симбионта-Универсал на рост и развитие гречихи.

Опыт проводили в производственных условиях. Схема опыта включала два варианта: 1 обработка семян Симбионтом-Универсал из расчета 1 мл/т на машине ПС-10 (26.6.94 г. ); 2 контроль без обработки. В период вегетации дважды в фазу бутонизации (11.07.94 г.) и в фазу цветения (1.08.94 г.) измеряли длину растения и определяли массу надземной части гречихи. Установлено, что применение Симбионта-Универсал оказало стимулирующее действие на развитие растений гречихи. Результаты опыта приведены в табл.2.

Для анализа структуры урожая с каждого варианта опыта отбирали по пять пробных снопов по 100 растений в каждом. Данные структуры урожая показали, что при обработке семян Симбионтом-Универсал имеет место повышение продуктивности растений. Результаты приведены в табл.3.

Учет хозяйственной эффективности показал, что урожайность гречихи в варианте с предпосевной обработкой Симбионтом-Универсал выше на 1.2-2.2 ц/га по сравнению с необработанным контролем.

Пример 4. Действие Симбионта-Универсал на развитие и урожай проса.

Опыт проводили в пoлевых условиях на делянках 13.5 м².

Повторность пятикратная. Семена обрабатывали Симбионтом-Универсал за 3 ч до посева в дозах 1.0; 1.5; 2 мл/т. Норма высева 5.5 млн всхожих семян на 1 га. Эталон семена обработанные водой. Контроль необработанные семена. Результаты представлены в табл. 4.

Результаты опыта свидетельствуют о том, что под влиянием Симбионта-Универсал усиливаются ростовые процессы, приводящие к повышению урожайности проса.

Пример 5. Испытания Симбионта-Универсал на горохе.

Семена продовольственного гороха сорта "Орловчанин" обрабатывали Симбионтом-Универсал из расчета 1 мл на 1 т семян. Площадь учетных делянок - 0.5 га. Повторность двукратная. Контроль необработанные семена. В период вегетации дважды измеряли высоту растений, определяли массу наземной части гороха, подсчитывали количество азотфиксирующих клубеньков, а также учитывали поврежденность гороха клубеньковыми долгоносиками. Результаты представлены в табл.5.

Таким образом, применение Симбионта-Универсал оказало стимулирующее действие на рост и развитие гороха, а также повысило толерантность гороха клубеньковым долгоносикам.

Пример 6. Испытания Симбионта-Универсал на луке-севке.

Полевой опыт на луке-севке сорта "Мячковский" закладывали на естественном фоне. Схема опыта включала два варианта: 1 замачивание луковиц в Симбионте-Универсал (5-7 капель на 0.5 л воды) в течение 30 мин, 2 - замачивание луковиц в Симбионте-Универсал (5-7 капель на 0,5 л воды) в течение 30 мин + опрыскивание вегетирующих растений при норме расхода препарата 1 мл/га. В контрольном варианте луковицы замачивали в воде. Результаты опыта представлены в табл.6 и 7.

Результаты опыта свидетельствуют о том, что применение Симбионта-Универсал способствует лучшему развитию растений, снижению поврежденности луковой молью, пораженности пероноспрозом и повышению урожайности.

Пример 7. Испытания Симбионта-Универсал на товарных посевах огурца.

Полевой опыт закладывали на огурцах сорта "Электрон". Схема опыта включала два варианта: 1 замачивание семян в Симбионте-Универсал (1 мл на 1 т семян) в течение 30 мин, 2 замачивание семян в Симбионте-Универсал (1 мл на 1 т семян) в течение 30 мин + опрыскивание вегетирующих растений при норме расхода препарата 1 мл/га в фазу 1-2 и 4-5 настоящих листьев. Расход рабочей жидкости -100 л/га. В контрольном варианте семена замачивали в воде. Результаты опыта представлены в табл.8.

Пример 8. Испытания Симбионта-Универсал на капусте.

Опыт закладывали на Семенах капусты сорта "Трансфер" в условиях открытого грунта. Технология выращивания капусты общепринятая в условиях Московской области. На первом этапе семена высевали в обогреваемую теплицу. Схема опыта в теплице включала три варианта: 1 замачивание семян в Симбионте-Универсал из расчета 1 мл/т семян (5-7 капель на 0.5 л воды) в течение 30 мин; 2 - замачивание семян в Симбионте-Универсал из расчета 1 мл/т семян (5-7 капель на 0.5 л воды) в течение 30 мин + опрыскивание вегетирующих растений при норме расхода препарата 1 мл/га и расходе рабочей жидкости 100 л/га; 3 - опрыскивание вегетирующих растений при норме расхода препарата 1 мл/га и расходе рабочей жидкости 100 л/га. Контроль без обработки. Результаты опыта представлены в табл.9 и 10.

Из табл.9 видно, что обработка Симбионтом-Универсал незначительно повлияла на выход рассады, вместе с тем качество рассады было значительно лучше, а пораженность "черной ножкой" снизилась более чем в 2 раза.

Второй этап высадка рассады в поле. Через три недели после высадки рассады в варианте 3 было проведено дополнительное опрыскивание растений при норме расхода 1 мл/га и расходе рабочей жидкости 500 л/га. Во всех вариантах с применением Симбионта-Универсал отмечено снижение поврежденности капусты листогрызущими вредителями, а также более ранее (на 7 дней) созревание урожая.

Пример 9. Испытания Симбионта-Универсал на моркови.

Опыт закладывали в полевых условиях на моркови сорта Нантская-4. Посев моркови проводили на гряды в три ряда. Длина делянки 4 м. Схема опыта включала три варианта: 1 замачивание семян в Симбионте-Универсал из расчета 1 мл/т семян (5-7 капель на 0.5 л воды) в течение 30 мин; 2 замачивание семян в Симбионте-Универсал из расчета 1 мл/т семян (5-7 капель на 0.5 л воды) в течение 30 мин + опрыскивание вегетирующих растений при норме расхода препарата 1 мл/га и расходе рабочей жидкости 100 л/га; 3 опрыскивание вегетирующих растений при норме расхода препарата 1 мл/га и расходе рабочей жидкости 100 л/га. Контроль без обработки. Результаты опыта представлены в табл.11.

Результаты опыта показали, что во всех вариантах с применением Симбионта-Универсал урожайность выше, чем в контроле.

Пример 10. Испытания Симбионта-Универсал на плодоносящей смородине.

Испытания проводили на плодоносящей черной смородине сорта "Вологда" на плантации посадки 1987 г. Кусты смородины опрыскивали 0.001%-ным раствором Симбионта-Универсал с добавлением 0,0002% медного купороса. Обработку проводили дважды: в начале распускания почек и в период цветения. Котроль - без обработки. Расход рабочей жидкости 0.125 л на куст. Повторность опыта - четырехкратная. В каждой повторности обработано 10 кустов. Урожай ягод с каждого обработанного куста составляет в среднем 1.72 кг, в контроле 1.17 кг.

Пример 11. Испытания Симбионта-Универсал на зеленых черенках облепихи.

Для опыта отобрали 100 зеленых черенков с маточных кустов сорта "Подарок сада". Обработку проводили 28 июня 1994 г. Черенки погружали на 30 мин в 0.01% -ный раствор Симбионта-Универсал с добавлением 0.002% медного купороса и сразу же высаживали в грунт каркасной пленочной теплицы с туманообразующей установкой. Высаженные черенки поливали 0,001%-ным раствором Симбионта-Универсал с добавлением 0.0002% медного купороса из расчета 1 л на 1 растение. Контрольные растения замачивали в воде. Во второй декаде сентября оценивали в пятикратной повторности по 8 растений в каждой окореняемость и рост растений. Результаты представлены в табл.12.

Пример 12. Испытания Симбионта-Универсал на зеленых черенках вишни.

Обработку и выращивание черенков вишни сорта "Владимирская" проводили так же, как в опыте с облепихой. Повторность опыта четырехкратная с 10 растениями в каждой. Контролем служили растения, замоченные на 12 ч в растворе индолилмасляной кислоты (ИМК) 50 мг/л. Обработка Симбионтом-Универсал существенно отразилась на количестве образовавшихся корней (в 3.5 раза больше, чем при стандартной обработке), максимальной длине корней и выходе товарных саженцев. Результаты приведены в табл.13.

Пример 13. Испытания Симбионта-Универсал на зеленых черенках крыжовника.

Опыт проводили в двух вариантах на черенках крыжовника сорта "Садко". В первом варианте черенки обрабатывали раствором Симбионта-Универсал в таких же условиях, как и при испытаниях препарата на облепихе. Повторность четырехкратная, по 15 черенков в каждой. Во втором варианте необработанные черенки высаживали в субстрат, пропитанный 0.01%-ным раствором Симбионта-Универсал + 0.002% медного купороса из расчета 10 л раствора на 1 м² субстрата. В контрольном варианте субстрат поливали водой. Оценка результатов проведена во второй декаде сентября. Результаты представлены в табл.14.

Из табл. 14 видно, что влияние Симбионта-Универсал на приживаемость черенков крыжовника зависит от способа его применения. При пропитке почвы препаратом достоверно увеличивает этот показатель в 1.5 раза.

Пример 14. Испытания Симбионта-Универсал на баклажанах защищенного грунта.

Опыт закладывали в пленочной необогреваемой теплице на баклажанах сорта "Универсал-6". Схема опыта включала два варианта; 1 замачивание семян в 0.01%-ном растворе Симбионта-Универсал с добавлением медного купороса (0.2 г на 10 л воды) в течение 1 ч; 2 замачивание семян в Симбионте-Универсал в тех же условиях + опрыскивание вегетирующих растений 0,001%-ным раствором Симбионта-Универсал с добавлением медного купороса (0.2 г на 100 л воды) при норме расхода препарата 1 мл/га в фазу цветения. Расход рабочей жидкости 100 л/га. В контрольном варианте семена замачивали в воде. Подготовленные согласно схеме опыта семена баклажан высевали в торфоперегнойные горшочки. Рассаду высаживали в пленочную теплицу по схеме: (80+60)/20 х 30 см.

Результаты опыта приведены в табл.15.

Из табл.15 видно, что в вариантах с применением Симбионта-Универсал урожайность выше, чем в контроле.

Пример 15. Испытания Симбионта-Универсал на цветочных культурах.

Опыт закладывали в условиях открытого грунта на астрах сорта "Юбилейная белая". Схема опыта включала два варианта: 1 семена замачивали в Симбионте-Универсал в 0.01% -ном растворе (5-7 капель на 0.5 л воды) в течение 30 мин, высушивали до сыпучего состояния и высевали в размещенные на светоустановке ящики (15 апреля 1994 г). В фазе 3-4 листьев рассаду высаживали в открытый грунт и проводили учет здоровых растений и количество растений пораженных "черной ножкой"; 2 замачивание семян в 0.001%-ном растворе Симбионта-Универсал (5-7 капель на 0.5 л воды) в течение 30 мин + опрыскивание вегетирующих растений 0.01% -ным раствором при расходе рабочей жидкости 500 л/га. Контроль без обработки. Результаты опыта показали, что замачивание семян в 0.01%-ном растворе препарата повышает энергию прорастания и всхожесть на 10-12% по сравнению с контролем. Выход здоровой рассады был выше, чем в контроле, а процент пораженных растений "черной ножкой" в 2.5 раза меньше. Результаты представлены в табл.16.

Оценка общего состояния растений по вариантам опыта проводилась по пятибальной системе в период бутонизации и цветения. Хорошее состояние оценивалось более высоким баллом. Наилучшее состояние растений "4.65 балла" было во 2-м варианте, в контроле "4.5 балла". При этом соцветия на главном стебле распустились на целую неделю раньше.

Список литературы
1. Авт. свид. N370932, Б.И. N12, кл. A 01 N 65/00, 1973.

2. Авт. свид. N921488, Б.И. N15, кл. A 01 N 65/00 1982.

3. Авт. свид. N1824148, Б.И. N24, кл. A 01 N 65/00 1993.

4. Гельцер Ф. Ю. Симбиоз с микроорганизмами основа жизни растений. М. МСХА, 1990.

5.Симбионт-1. Технические условия ТУ 400ТО "А" 110.271-247-01-92.

6. Бабьева И.П. Голубев В.И. Методы выделения и идентификации дрожжей.- М. Пищ. пром-сть, 1979. -120 с.

7. Бабьева И.П. Чернов И.Ю. Биология дрожжей. М. Моск. унив. 1992.

8 Методы общей бактериологии/ Под ред. Герхарда Ф. М. Мир, т.1-3,1983.

9. Литвинов М.А. Определитель михроскопических почвенных грибов. Л. Наука, 1967. 303 с.

10. Литвинов М.А. Методы изучения почвенных микроскопических грибов. Л. Наука, 1969. 124 с.

11. Методы почвенной микробиологии и биохимии/ Под ред. проф. Д.Г. Звягинцева. М. Моск. унив. 1991. 304 с.

12. Пидопличко Н. М. Грибы паразиты культурных растений. Киев: Наукова думка, 1977, т.2, с.300.

13. Barrett H.L. Payne R.W. Yarrow D. A guide to identifying and classifying yeasts. Cambridge Univ. Press, 1991.

14. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology. Krieg N.R. Holt J.G. (Ed.-in chieff). 9-th ed. The Williams and Wilkins Co. Baltimore. 1984, v.1, p.219, 325.

15. The Yeasts. A taxonomik study. Sec. ed. by J. Lodder. Amsterdam-London, 1970, р.1385.

16. The Yeasts. A taxonomik study. Kreger van Rij N.J. (ed.) 3-d ed. Amsterdam:Elsivier, 1984.

17. Von Arx J. A. A. The genera of fungi sporulating in pure culture. Verlag. von J. grammer. Lthre, 1970. 788 p.

18. Von Gams W. Cephalosporuim-artige schimmelpize (Hyphomicetes) Gustav Fischer Verlag. Studgart. 1971. 252 р.

Использование: сельское хозяйство и касается нового биостимулятора роста растений. Сущность изобретения: биостимулятор роста растений Симбионт-Универсал представляет собой спиртовой экстракт биомассы сообщества микроорганизмов, состоящее из микромицета Acremonium panaxeorum ИНМИ F-160, двух видов дрожжей Candida muscorum ИНМИ Y-41 и Rhodotorula glutinis ИНМИ Y-42 и двух видов бактерий - Azomonas macrocytogenes ИНМИ B-28 и Xantobacter sp. ИНМИ В-29. Вышеуказанное сообщество выделено из корней женьшеня. Культивируют сообщество при температуре 20-25^oC на среде, содержащей, г/л: глюкозу - 8-10, KH₂PO₄- 0,9, K₂HPO₄- 0,3, MgSO₄- 0,2, K₂SO₄- 0,1, аспарагин - 0,02, MnSO₄, Fe₂(SO₄)₃ и CuSO₄ - следы. Препарат выделяют из среды в две стадии: адсорбцией активированным углем, затем экстрагированием с угля 70%-ным этиловым спиртом. 2 с.п. ф-лы, 16 табл.

1. Биостимулятор роста растений на основе микроорганизмов, отличающийся тем, что он содержит спиртовой экстракт биомассы сообщества микроорганизмов, состоящего из микромицета Acremonium panaxeorum ИНМИ F-160, двух видов дрожжей Candida muscorum ИНМИ У-41 и Rhodotorula glutinis ИНМИ У-42 и двух видов бактерий Azomonas macrocytogenes ИНМИ В-28 и Xantobacter sp. ИНМИ В-29. 2. Сообщество микроорганизмов, состоящее из микромицета Acremonium panaxeorum ИНМИ F-160, двух видов дрожжей Candida muscorum ИНМИ У-41 и Rhodotorula glutinis ИНМИ У-42 и двух видов бактерий Azomonas macrocytogenes ИНМИ В-28 и Xantobactep sp. ИНМИ В-29 для получения биостимулятора роста растений.