СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ УГРОЗЫ НЕВЫНАШИВАНИЯ ПЛОДА В ПЕРВОМ ТРИМЕСТРЕ БЕРЕМЕННОСТИ Российский патент 1997 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для оценки состояния иммунной системы беременной женщины с целью прогнозирования осложнений беременности.

Известно, что по данным ВОЗ в I триместре прерывается до 25% беременностей. По данным литературы 50% случаев спонтанных абортов имеют в своей основе нарушения иммунных механизмов взаимодействия матери и плода [5]
Известен способ оценки имунной системы беременной женщины, позволяющий диагностировать угрозу прерывания с помощью определения в сыворотке крови трофобластического β₁-гликопротеина (ТБГ) [3] Однако данный способ имеет ряд существенных недостатков:
ТБГ определяется в очень незначительной концентрации в сыворотке крови у мужчин и женщин, что снижает его диагностическую ценность в ранние сроки, когда выкидыш встречается наиболее часто;
большие индивидуальные колебания протеина как в норме, так и при патологии;
необходимость дорогостоящего оборудования, специально оснащенной лаборатории;
способ является полуколичественным.

Наиболее близким по техническому решению к заявленному способу является способ диагностики угрозы невынашивания беременности по определению сенсибилизации лимфоцитов матери к эмбриональному антигену и наличию блокирующих антител в сыворотке крови женщин [2] Однако данный способ имеет ряд недостатков:
способ является менее точным 53,3 ± 13,3% поскольку блокирующиеантитела, определяемые данным способом, выявляются лишь в 50-67% случаев, т.е. у половины беременных женщин, в связи с чем способ нельзя использовать для оценки состояния имунной системы [2]
результаты реакции могут искажаться за счет изменения блокирующей способности сыворотки (20%) [2]
3) антигены, используемые в реакции, изготавливаются лабораторным путем и не являются стандартными, поэтому содержат большое количество неидентифицированных антигенных детерминант, снижающих специфичность метода;
наличие неспецифической адгезии;
не во всех случаях действие антигена проявляется в торможении прилипания лимфоцитов, но и в усилении прилипания лимфоцитов;
способ является менее специфически 62,5 ± 12,9% чувствительным 36,4 ± 12,9, чем заявляемый способ.

Целью заявляемого способа является оценка состояния иммунной системы беременной женщины в I триместре беременности и выбора последующей тактики ее ведения.

Цель достигается путем оценки способности к изменению экспрессии FcγR на поверхности Т-лимфоцитов под влиянием растворимых плацентарных факторов (АМГФ), и при снижении ее под воздействием АМГФ на 12 и более от исходного уровня Tγ-клеток определяется ослабление супрессорного потенциала Т-лимфоцитов, что позволяет оценить состояние беременной женщины как угрожающее невынашиванием.

Способ осуществляется следующим образом.

В пробе крови определяют содержание Т-лимфоцитов по методу Moretta L. [6] К обогащенной суспензии этой же порции Tγ-лимфоцитов добавляют АМГФ в концентрации 600 нг/мл. После 60 мин инкубации с этим препаратом оценивают уровень экспрессии FcγP на поверхности периферических Т-лимфоцитов по изменению количества FcγR позитивных Т-лимфоцитов и сравнивают с первоначальным уровнем Tγ-клеток. Процент изменения Tγ-клеток до и после инкубации с АМГФ вычисляют по формуле по общепринятой методике [1]
Tγ-клетки относятся к супрессорным клеткам, играющим важную роль при беременности. Существует несколько форм FcγR рецепторов: лабилбная FcγRI низкоавидная и связанная или встроенная, высокоавидная FcγRII форма [4] Различные стимулы индуцируют связывание FcγR и последующий переход из одной формы в другую. АМГФ относится к одному из основных белков фортильности, уровень которого отражает состояние фето-плацентарного комплекса и обусловливает характер течения беременности. Он обладает выраженным иммуномодулирующим действием. Взаимодействие АМГФ с Tγ-лимфоцитами изменяет уровень их супрессорной активности и тем самым состояние иммунной системы женщины. В связи с этим оценка влияния АМГФ на состояние рецепторного аппарата Т-лимфоцитов позволяет более точно оценить уровень их функциональной активности и происходящие в организме процессы иммунорегуляторного взаимодействия матери и плода.

Новизна заявленного способа заключается в способе оценки состояния иммунной системы по способности к изменению экспрессии FcgR, что дает возможность определить одномоментно и количественно супрессорный потенциал Т-супрессоров в I триместре беременности.

Способ основан на впервые установленной авторами закономерности изменения экспрессии FcγR на поверхности периферических Т-лимфоцитов при неосложненной и осложненной угрозой невынашивания беременности. При увеличении экспрессии FcγR cостояние иммунной cистемы оценивается как нормальное, способствующее сохранению беременности. При снижении экспрессии FcγR на 12 и более от исходного уровня Tγ-лимфоцитов состояние беременной оценивается как угрожающее невынашиванием. Как впервые установили авторы, точность заявленного способа намного выше известного (93%). Ранее способ с указанной целью не использовался.

Преимуществами заявляемого способа от прототипа являются:
высокая точность 93 ± 4,58% специфичность -88 ± 5,83% чувствительность 93 ± 4,58%
возможность своевременно, до появления клинической симптоматики, диагностировать развитие угрозы невынашивания беременности, что дает возможность правильного ведения беременной женщины;
простота в исполнении, метод не требует дорогостоящих реактивов и оборудования.

Существенные отличия заявляемого способа:
1. В заявленном способе оценивается способность к изменению экспрессии FcγR на поверхности периферических Т-лимфоцитов под влиянием белка беременности АМГФ;
2. Установление динамики изменения экспрессии FcγR на поверхности периферических Т-лимфоцитов позволяет оценивать состояние иммунной системы беременной женщины и благодаря этому прогнозировать развитие угрозы невынашивания в I триместре беременности;
3. Данный способ учитывает состояние мембраны Т-лимфоцитов и влияние на экспрессию FcγR плацентарных факторов (АМГФ).

Пример 1. Беременная К. 22 года, беременность 6 недель, первобеременная. Менструальная функция беременной с 13 лет, по 3-4 дня, через 28 дней. Нарушений менструальной функции в анамнезе нет. Гинекологическую и соматическую патологию отрицает. На учете по беременности с 6 недель беременности. Обследована при взятии на учет. При объективном осмотре размеры матки соответствуют гестационному сроку беременности. При объективном обследовании патологии не выявлено. Содержание ТБГ, экстриола, прогестерона в крови в пределах нормы. При исследовании иммунного статуса выявлено: 1. Способ-прототип. Показатель сенсибилизации к эмбриональному антигену 63% блокирующие антитела 6% т.е. сенсибилизация к эмбриональному антигену, блокирующая способность сыворотки крови находится в пределах нормы. Состояние иммунной системы без изменений. Заключение: беременность будет протекать без осложнений. 2. Заявляемый способ. Содержание Tγ-лимфоцитов 39% После инкубации с АМГФ 24% Заключение: отмечается снижение экспрессии FcγR на 62% от исходного уровня. По данным заявляемого способа состояние иммунной системы оценивается как нарушенное, что свидетельствует о развитии угрозы невынашивания в I триместре. Беременность закончилась самопроизвольным выкидышем в сроке 12 недель.

Пример 2. Беременная Н. 24 года. Встала на учет по беременности в сроке 10 недель. В анамнезе -1-е своевременные роды, 1-й медицинский аборт без осложнений. Менструальная функция не нарушена. Муж здоров. При объективном обследовании: матка увеличена до 10 недель беременности. Обследована. Соматической патологии не выявлено, изменений в клинических анализах нет. Содержание половых гормонов на уровне нормы. Содержание ХГ в моче соответствует сроку беременности. Исследование иммунного статуса беременной показало: 1. Cпособ-прототип. Показатель сенсибилизации к эмбриональному антигену 85% блокирующая способность сыворотки 11% Заключение: cостояние иммунной системы соответствует сроку гестации. Беременность протекает без осложнений. 2. Заявляемый способ. Содержание Tγ-лимфоцитов -35% после воздействия АМГФ 31% т.е. экспрессия FcγR уменьшилась на 12% Заключение: состояние иммунной системы нарушено, что свидетельствует о снижении невынашивания в I триместре. В сроке 11 недель беременная Н. госпитализирована с симптоматикой угрозы невынашивания. Самопроизвольный выкидыш в 1-е сутки госпитализации.

Пример 3. Беременная Л. 28 лет. Повторнобеременная, первородящая. В анамнезе 2 медицинских аборта, 1 самопроизвольный выкидыш в сроке беременности 12 недель. Данная беременность -4-я. На учете по беременности состоит со срока 7 недель. В настоящее время срок беременности 8 недель. Субъективно чувствует себя хорошо. Обследована: отклонений в общеклиническом статусе не выявлено. Исследование экстриола мочи, прегнадиола на уровне нормы. Содержание ТБГ, ПЛ в сыворотке крови снижено. Исследование иммунного статуса: 1. Способ-прототип. Показатель сенсибилизации 12% блокирующая способность сыворотки 20% Заключение: отмечается снижение сенсибилизации к эмбриональному антигену, блокирующие антитела в сыворотке крови отсутствуют, что свидетельствует об отклонениях в состоянии иммунной системы, которые ведут к развитию угрозы невынашивания. 2. Заявляемый способ. Исходное содержание Tγ-клеток 25% после инкубации с АМГФ 37% т.е. экспрессия FcγR усилилась на 48% Заключение: наблюдается усиление экспресии FcγR под влиянием АМГФ, что свидетельствует о нормальном состоянии иммунной системы соответственно гестационному сроку. Беременность в I триместре будет протекать без осложнений. Беременная Л. госпитализирована в клинику для наблюдения. В сроке 16 недель выписана из стационара в удовлетворительном состоянии.

Данным способом оценка иммунной системы беременной женщины была проведена у 32 женщин. Сравнительный анализ точности, специфичности и чувствительности заявляемого способа и способа-прототипа представлен в таблице. По заявляемому способу точность составила 93 ± 4,58% чувствительность 98 ± 4,58% специфичность 88 ± 5,83% По способу-прототипу точность составила 53,3 ± 13,3% чувствительность 36,4 ± 12,9% специфичность 62,5 ± 12,9%
Таким образом, предлагаемый способ обладает более высокой точностью, специфичностью, чувствительностью, чем способ-прототип, что дает возможность более точно оценивать состояние иммунной системы беременной женщины и благодаря этому прогнозировать развитие угрозы невынашивания беременности в I триместре до появления клинической симпоматики.

Источники информации
1. Власов В.В. Эффективность диагностических исследований. М. Медицина, 1988.

2. Говалло В.И. Иммунология репродукции. М. Медицина, 1987.

3. Татаринов Ю.С. Масюкевич В.Н. Иммунохимическая идентификация нового BI-глобулина в сыворотке крови беременных женщин //Бюл. эксп. биол. 1970, N 6.

4. Gergeley G. Erdel A. Saudeor M. Sarmay G. Ulur F. The Fc-Receptor model of membrane cytoplasmic signalling //Mol. Immunol. 1982, V. 19, N 10, p. 1223-1228.

5. Gill T.J. Immunological and Genetic factors influencing pregnancy and development //Amer. J. Reprod. Immunol. Microbiol. 1986, V. 10, N 3, p. 120.

6. Moretta L. Webb S.R. Lydyard F.W. Cooper M.D. Functional analysis of two numan T-cell subpopulation help and suppression of B-cell bearing receptors for IgM or IgG //J. Exp. Med. 1977, N 1, p. 184-200.

Использование: в медицине, для оценки состояния иммунной системы беременной женщины. Сущность изобретения: определяют содержание периферических Tγ-лимфоцитов до и после инкубации с АМГФ, и при снижении экспрессии FcγR на поверхности Т-лимфоцитов на 12 и более % по отношению к исходному уровню оценивают состояние иммунной системы как патологическое и угрожающее развитием угрозы невынашивания. Предлагаемый способ позволяет с высокой точностью прогнозировать развитие угрозы невынашивания плода в I триместре беременности до появления клинической симптоматики, что дает возможность правильного ведения беременной женщины, позволяет провести комплекс профилактических мероприятий, направленных на предотвращение развития угрозы невынашивания. 1 табл.

Способ диагностики угрозы невынашивания плода в первом триместре беременности, включающий исследование крови и определение состояния иммунной системы пациента, отличающийся тем, что определяют уровень T_γ-лимфоцитов из периферической крови до и после инкубации их с растворимыми плацентарными факторами (АМГФ) и при снижении экспрессии F_cγR на поверхности T_γ-лимфоцитов на 12 и более процентов по отношению к исходному уровню диагностируют угрозу невынашивания плода.