СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ НЕВЫНАШИВАНИЯ БЕРЕМЕННОСТИ Российский патент 1998 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и позволяет оценить эффективность лечения невынашивания беременности поздних сроков (20-28 недель).

Прерывание беременности на поздних сроках не имеет тенденции к снижению и составляет от 10 до 50% к числу беременностей. Одной из причин высокого уровня данной патологии является отсутствие достаточно точных способов оценки эффективности проводимого лечения. Этим определяется актуальность предлагаемого способа.

Известен способ оценки эффективности лечения невынашивания беременности путем исследования содержания в крови плацентарного лактогена и эстриола. По изменению этих показателей оценивают эффективность лечения привычного невынашивания беременности в срок гестации 20-36 недель с точностью 60%.

Недостаток данного способа - низкая точность способа.

Известен способ оценки эффективности лечения невынашивания беременности путем исследования содержания в крови T-,B-,T₂-лимфоцитов, иммуноглобулинов основных классов (G, M, A). По изменению этих показателей оценивают эффективность лечения привычного невынашивания беременности.

Недостаток данного способа - применяется для оценки эффективности лечения невынашивания только ранних сроков.

Наиболее близким по техническому решению является способ оценки эффективности лечения невынашивания беременности путем исследования в крови уровня гормонов эстриола, эстрадиола, прогестерона [1]. Изменение в крови беременной уровня эстриола с 79,2±5,4 нг/мл до лечения, 122,2±11,2 нг/мл после лечения, эстрадиола с 26,3±1,8 нг/мл до лечения, 41,1±3,11 нг/мл после лечения, прогестерона с 247,7±11,9 нг/мл до лечения, 503,8±15,6 нг/мл после лечения оценивают как нормализацию функции фетоплацентарного комплекса с точностью 60% (Камаев А.Н. Респ. сб. научных трудов "Прогнозирование и профилактика нарушений здоровья матери и ребенка".-М.: 1988, с. 77-80).

Способ имеет существенные недостатки:
1. Точность способа составляет 60%;
2. Точность методов определения уровня гормонов в крови не превышает 60% в связи с достаточно большим диапазоном индивидуальных физиологических колебаний показателей и зависимости их от суточных, сезонных биоритмов (эстриол -норма - 39-53 нг/мл, эстрадиол 20-130 нг/мл, прогестерон 243-1167 нг/мл);
3. Для получения достоверных результатов требуется неоднократное определение содержания гормонов в крови в течение дня, что невозможно и экономически невыгодно в стационарных и амбулаторных условиях;
4. Исследование содержания гормонов в крови РИМ или ИФА проводится на специальном дорогостоящем оборудовании, требующем подготовки персонала;
5. В предлагаемом способе оценка эффективности проводимого лечения не подтверждается состоянием ребенка при рождении.

Цель изобретения - повышение точности оценки эффективности лечения невынашивания беременности поздних сроков (20-28 недель) путем определения содержания лактата, малонового диальдегида (МДА) и антиоксидантной активности (АОА) в крови беременных до лечения и после него независимо от его способа.

Указанная цель достигается тем, что оценку эффективности лечения невынашивания беременности осуществляют по изменению в крови беременных после лечения содержания лактата до 1,0-1,4 ммоль/л, МДА - до 4,3-6,0 нмоль/мл, АОА - до 68-74%. При этих значениях результат лечения оценивается как эффективный, свидетельствующий о нормализации функции фетоплацентарной системы.

Способ осуществляется следующим образом.

У беременной натощак утром из вены забирают 2-3 мл крови, получают сыворотку общепринятым методом, в которой определяют МДА по методу (Jagiketal, Jan. j. Vitamin., 1968, v. 37, p. 105) и АОА по методу (Промыслов И.Ш.-Вопросы медицинской химии, 1990, N 4, с. 90-92).

К 0,3 мл сыворотки крови добавляют 2,4 мл 1/12 н. серной кислоты, встряхивают и добавляют 0,3 мл 10%-ной фосфорно-вольфрамовой кислоты, содержимое пробирки перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 10 мин.

Центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют. Осадок дважды промывают 1 мл бидистиллированной воды. К осадку добавляют 3 мл бидистиллированной воды и 1 мл 0,8%-ного раствора 2-тиобарбитуровой кислоты. Содержимое пробирки встряхивают и нагревают в кипящей бане в течение 1 ч, охлаждают и центрифугируют 15 мин при 6000 об/мин.

Интенсивность розовой окраски определяют на спектрофотометре при длине волны 532 нм в кювете толщиной слоя 1 см против воды.

Расчет содержания МДА проводится по формуле

где E - показания прибора;
0,3 - количество сыворотки;
10⁶ - коэффициент пересчета, нмоль;
1,56•10⁵ - молярный коэффициент экстинкции;
4 - разведение сыворотки.

Концентрация МДА выражена в нмоль/мл.

Для определения АОА берут четыре пробирки. В 1-2 пробирки вносят по 0,5 мл рабочего стандартного раствора (концентрация 4 мкл/мл), приготовленного из стандартного раствора (концентрация 10 мкл/мл) путем растворения 400 мкл стандартного раствора в 100 мл бидистиллированной воды. Стандартный раствор (концентрация 10 мкл/мл) готовится следующим образом: 10 мкл линоленовой кислоты растворяют в 1 мл этанола.

В те же пробирки вносят 0,05 мл 12 ммоль/л сульфата железа (II), а в первую пробирку добавляют 0,02 мл сыворотки крови. Обе пробирки ставят на 1 ч на инкубацию при 37^oC с постоянным перемешиванием ингредиентов.

В 3-4 пробирки вносят те же компоненты, что и в 1-2, инкубацию не проводят.

Во все пробирки вносят по 1 мл 5%-ной трихлоруксусной кислоты, перемешивают и центрифугируют 10 мин при 400 об/мин. Супернатанты переносят в чистые химические пробирки и добавляют по 1 мл 0,8%-ного раствора 2-тиобарбитуровой кислоты, помещают в кипящую водяную баню на 10 мин, затем охлаждают.

Количественное определение суммарной антиоксидантной активности проводят на спектрофотометре при длине волны 532 нм против воды.

Общую антиоксидантную активность рассчитывают по формуле

где Etоп

У беременных женщин утром натощак забирают кровь из локтевой вены для определения лактата по методу (Gidmann I. Verlag Chemie., Weinhein., 1974, Bd II, S.1510).

0,5 мл крови вносят в пробирку, содержащую 1,0 мл 0,6 М холодной перхлорной кислоты. Тщательно перемешивают стеклянной палочкой и оставляют при комнатной температуре на 10 мин. Центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. Для определения содержания лактата используют супернатант (он может храниться в течение 24 ч при температуре +5^oC).

Ферментативную реакцию проводят следующим образом: в химическую пробирку вносят 2 мл буфера (гидразин-глициновый буфер pH 9,0-9,5. В 100 мл буфера содержится 7,5 г глицина, 5,2 г гидрозин-сульфата и 0,2 г ЭДТА.Все это растворяется в 45 мл 2 н. NaOH, объем смеси доводят бидистиллированной водой до 100 мл). К буферу добавляют 0,2 мл супернатанта, 0,2 мл НАД и 0,02 мл ЛДГ. В контрольную пробирку вносят 2,0 мл буфера, 0,1 мл H₂O, 0,1 мл 0,6 М перхлорной кислоты, 0,2 мл НАД и 0,02 мл ЛДГ. Содержимое пробирок перемешивают стеклянной палочкой и инкубируют 1 ч при температуре 25^oC.

Измерение экстинкций проводят на спектрофотометре при длине волны 365 нм в кювете 1 см против воздуха.

Расчет содержания лактата производят по формуле
C_лактат=(E₂-E₁)•10,1,
где E₁ - оптическая плотность контроля;
E₂ - оптическая плотность пробы;
10,1 - коэффициент пересчета, включающий конечный объем пробы, коэффициент разведения по отношению к 1 л крови и коэффициент микромолярной экстинкции НАДН₂ при длине волны 365 нм и кювете шириной 1 см.

Концентрация лактата выражена в моль/л.

Пример 1. Беременная С., 24 года. Обследована в клинико-диагностической поликлинике Ивановского НИИ материнства и детства. Диагноз: беременность 24 недели, здорова.

Согласно предлагаемому способу в крови беременной проведено исследование содержания лактата, которое составило 1,2 ммоль/л, МДА - 5,0 нмоль/мл, АОА - 72%. Все показатели соответствуют физиологической норме.

В течение последующего периода беременность протекала без осложнений и завершилась рождением здорового ребенка с оценкой по шкале Апгар на 1-5-й мин жизни 8-9 баллов, массой тела 3500 г. В крови новорожденного ребенка содержание лактата составило 1,2 ммоль/л, МДА - 5,1 нмоль/мл, АОА - 75%. Все биохимические показатели соответствовали физиологической норме.

Пример 2. Беременная С. , 22 года. Поступила в стационар с жалобами на боли внизу живота. На основании клинических данных и акушерского анамнеза поставлен диагноз: беременность 24 недели, угроза невынашивания. Экстрагенитальной патологии нет.

Согласно предлагаемому способу в крови беременной проведено исследование содержания лактата, которое составило 0,4 ммоль/л (при норме 1,0-1,4), МДА - 5,7 нмоль/мл (при норме 4,3-6,0), АОА - 48% (при норме 68-74).

Беременной было проведено медикаментозное лечение (курантил, спленин, эссенциале, димедрол) в сочетании с Хелпер-терапией путем воздействия инфракрасным излучением на область акупунктурной точки Хуа-Гай (XIY.20), в дозе 10% (минимальная доза), продолжительность сеанса 5 мин, в количестве 6 сеансов.

Через 2 недели после лечения боли прекратились, состояние беременной улучшилось. При повторном исследовании крови беременной содержание лактата составило 1,1 ммоль/л, МДА - 5,1 нмоль/мл, АОА - 72%, что свидетельствует о нормализации биохимических показателей.

В течение последующего периода беременности женщина жалоб не предъявляла. Беременность завершилась рождением здорового ребенка с оценкой по шкале Апгар на 1 - 5-й мин жизни 8 - 9 баллов, массой тела 3330 г. В крови ребенка содержание лактата составило 1,4 ммоль/л, МДА - 5,2 нмоль/мл, АОА - 74%, что соответствовало физиологической норме. Ребенок выписан из роддома на 5-й день жизни.

Таким образом, согласно предлагаемому способу проведенное лечение оценено как эффективное.

Пример 3.Беременная Г., 20 лет. Поступила в стационар с жалобами на боли внизу живота. На основании клинических данных и акушерского анамнеза поставлен диагноз: беременность 24 недели, угроза невынашивания. Экстрагенитальной патологии не выявлено.

Согласно предлагаемому способу в крови беременной проведено исследование содержания лактата, которое составило 1,6 ммоль/л (при норме 1,0 - 1,4), МДА - 6,4 нмоль/мл (при норме 4,3 - 6,0), АОА - 65% (при норме 68 - 74).

Беременной было проведено медикаментозное лечение (курантил, сульфат магния, спазмолитики, бета-миметики, аскорутин, витамин "E").

Через 2 недели боли прекратились. При повторном обследовании крови беременной содержание лактата составило 1,3 ммоль/л, МДА - 4,8 нмоль/мл, АОА - 70%, что свидетельствовало о нормализации биохимических показателей.

В течение последующего периода беременности женщина жалоб не предъявляла. Беременность завершилась рождением здорового ребенка с оценкой по шкале Апгар на 1 - 5-й мин жизни 8 - 9 баллов, массой тела 3350 г. В крови ребенка содержание лактата составило 1,3 ммоль/л, МДА - 5,3 нмоль/мл, АОА - 76%, что соответствует физиологической норме. Ребенок выписан из роддома на 5-й день жизни.

Таким образом, согласно предлагаемому способу проведенное лечение оценено как эффективное.

Пример 4.Беременная Б., 20 лет. Поступила в стационар с жалобами на боли внизу живота. На основании клинических данных и акушерского анамнеза поставлен диагноз: беременность 25 - 26 недель, угроза невынашивания. Экстрагенитальной патологии не выявлено.

Согласно предлагаемому способу в крови беременной проведено исследование содержания лактата, которое составило 0,6 ммоль/л (при норме 1,0 - 1,4), МДА - 5,9 нмоль/мл (при норме 4,3 - 6,0), АОА - 63% (при норме 68 - 74).

Беременной было проведено медикаментозное лечение (курантил, сульфат магния, спазмолитики, бета-миметики, аскорутин).

Через 2 недели после проведенного лечения боли прекратились. При повторном исследовании крови беременной содержание лактата составило 0,7 ммоль/л (при норме 1,0 - 1,4), МДА - 6,0 нмоль/мл (при норме 4,3 - 6,0), АОА - 66% (при норме 68 - 74).

Согласно предлагаемому способу лечение оценено как неэффективное.

Беременная выписана из стационара по настоятельной просьбе, в последующем жалоб на боли внизу живота не предъявляла. Беременность завершилась рождением доношенного ребенка с оценкой по шкале Апгар на 1 - 5-й мин жизни 7 - 8 баллов, с диагнозом - хроническая внутриутробная гипоксия плода. Поставленный диагноз подтверждается биохимическими исследованиями крови ребенка: содержание лактата составило 2,4 ммоль/л (при норме 1,0 - 1,8); МДА - 5,8 нмоль/мл (при норме 4,9 - 5,3); АОА - 66% (при норме 72 - 78).

Ребенок переведен в отделение патологии новорожденных на 6-й день жизни для дальнейшего лечения.

Таким образом, согласно предлагаемому способу проведенное лечение было оценено как неэффективное, что подтвердилось состоянием ребенка при рождении.

Новизна способа заключается в том, что впервые предлагается оценивать эффективность лечения невынашивания беременности по содержанию в крови беременных лактата (молочной кислоты), МДА (малонового диальдегида), АОА (общей антиоксидантной активности). Кроме того, впервые установлены параметры - лактат 1,0 - 1,4 ммоль/л, МДА - 4,3 - 6,0 нмоль/мл, АОА - 68 - 74%, свидетельствующие о нормализации фетоплацентарной системы.

Наряду с биохимическими показателями эффективность лечения подтверждалась нормализацией клинической картины у беременной и состоянием ребенка при рождении - оценкой по шкале Апгар на 1 и 5-й мин жизни, массой тела, биохимическими показателями (лактат, МДА, АОА).

Существенные отличия способа: предлагаются параметры оценки эффективности лечения невынашивания поздних сроков: содержание в крови беременных лактата 1,0 - 1,4 ммоль/л; МДА 4,3 - 6,0 нмоль/мл; АОА 68 -74%.

Предлагаемым способом была проведена оценка эффективности лечения невынашивания беременности в срок гестации 24 - 28 недель без экстрагенитальной патологии (табл. 1 и 2).

Эффективность 82%.

Контролем служила группа беременных, у которых оценка эффективности лечения производилась по прототипу путем исследования уровня гормонов (экстриол, экстрадиол, прогестерон).

Преимущества способа:
1) точность предлагаемого способа 82%;
2) использование способа для оценки эффективности любого метода лечения невынашивания беременности;
3) исследование параметров в предлагаемом способе может быть проведено независимо от времени суток и биологических ритмов;
4) предлагаемые показатели могут быть использованы как скрининговые тесты для контроля за лечением невынашивания беременности с 20 до 28 недель беременности;
5) для применения способа не требуется дорогостоящего оборудования и специальной подготовки персонала;
6) исследование параметров может быть проведено лаборантом в учреждениях родовспоможения всех уровней;
7) для более быстрого выполнения способа могут использоваться отечественные или зарубежные наборы реактивов "Тест-лактат", "Тест-активные продукты".

Использование: в области медицины, в частности в акушерстве. Технический результат: повышение точности оценки эффективности лечения невынашивания беременности поздних сроков (20-28 недель) с точностью 82%. Сущность изобретения: в периферической венозной крови беременной после лечения определяют содержание лактата, малонового диальдегида (МДА), общую антиоксидантную активность (АОА) и при уровне лактата в крови 1,0-1,4 ммоль/л, МДА 4,5-6,0 нмоль/мл, АОА 68-74% лечение оценивают как эффективное. 2 табл.

Способ оценки эффективности лечения невынашивания беременности поздних сроков путем определения биохимических параметров крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, определяют содержание молочной кислоты (лактата), малонового диальдегида (МДА) и общей антиоксидантной активности (АОА) в крови беременной, и при уровне лактата 1,0 1,4 ммоль/л, МДА 4,3 6,0 нмоль/мл, АОА 68 74% лечение оценивают как эффективное.