ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS SUBTILIS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЯ ПТИЧЬЕГО ПОМЕТА И НАВОЗА ОТ ПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ Российский патент 1998 года по МПК C12N1/20 B09C1/10 C05F3/00 C05F11/08 C12N1/20 C12R1/125 

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и санитарии, представляет собой штамм почвенных споровых аэробных бактерий.

Аналоги изобретения: известен штамм бактерий Bacillus subtilus для обеззараживания объектов внешней среды (заявка EP N 0276132, кл. A 01 N 63/00, опублик. 1988). В литературе есть сообщения с применением штаммов Bac. subtilis с целью профилактики и лечения дисбактериозов у телят (Топчий М.П. Применение препаратов из живых культур сонной палочки при дисбактериозах у телят. Автореф. дис. канд. биол. наук, Минск, 1979, С. 21), повышения привесов в свиноводстве (СССР, N 634729, кл. A 23 K 1/00, опублик. 27.12.78), стимуляции неспецифической резистентности (Резник С.Р. Смирнов В.В. Волынец А. К. Вьюницкая В.А. Влияние перорального введения бактерии рода Bac. subtilis на фагоцитарную активность лейкоцитов крови. Микробиологический журнал, 1982, т. 44, N 4, С. 51 54), лечения и профилактики энтеритов, пневмоний, маститов, гнойных инфекций у свиней, крупного рогатого скота, плотоядных и птиц (Временное наставление по применению препарата споробактерина. Утв. ГУВ СССР, 01.07.1992 г.) и в качестве иммуномодулятора и схемах специфической профилактики бруцеллеза и некробактериоза (Дымов С.К. Самоловов А. А. Лопатин С.В. Жданов П.И. Использование споробактерина в качестве иммуномодулятора в схемах специфической профилактики инфекционных болезней. Эпизоотология, профилактика и меры борьбы с инфекционными болезнями животных: сб. науч. трудов /РАСХН. Сиб. отделение ИЭВСДВ.-Новосибирск, 1993, С. 89 90).

Однако нет сведений по использованию бактериальных препаратов для обеззараживания навоза и птичьего помета.

Штамм Bac. subtilis "ТНП-3" обладает выраженными антагонистическими свойствами в отношении условно-патогенных и патогенных для человека и животных микроорганизмов и используется для обеззараживания птичьего помета и навоза, обсемененных этими микроорганизмами.

Штамм Bac. subtilis "ТНП-3" депонирован 14.10.94 г. в коллекции микроорганизмов лаборатории контроля и стандартизации препаратов против сибирской язвы и листериоза Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) под N 2 "ТНП-3-ДЕП". Справка о депонировании штамма выдана 17.10.94 г. за N 002/9. Штамм Bac. subtilis "ТНП-3" выделен из мерзлотно-переходной, среднесуглинистой почвы ОПХ "Покровское" НПО "Якутское" Республики Саха (Якутия) РФ. Идентифицирован по "Краткому определителю бактерий Берджи". Характеристика штамма ранее не опубликована. Штамм в других целях не использовался.

Морфологические признаки штамма. В мазках культур, приготовленных с МПБ и МПА, окрашенных по Граму, представляет собой грамположительные палочки и короткие цепочки (2 4 палочки). Образует споры овальной формы. Бактерии из суточной бульонной культуры в висячей капле подвижны.

Культуральные свойства штамма. Штамм хорошо растет в мясопептонном бульоне (МПБ) при 37^oC. В этой среде через 12 ч образует на поверхности бульона пленку. Бульон с небольшой опалесценцией при дальнейшем культивировании становится прозрачным. На мясопептонном агаре (МПА) формирует сибиреязвенноподобные колонки: округлые, серо-белого цвета, R o-формы. На кровяном агаре вызывает слабый гемолиз. Свертывает и пептонизирует молоко. Ферментирует глюкозу, арабинозу, ксилозу с образованием кислоты без газа. Продуцирует индол без образования сероводорода. Гидролизует крахмал, желатину.

Из органических источников азота штамма Bac. subtilis "ТНП-3" использует пептон, дрожжевой автолизат, мясной бульон. Оптимальная температура роста 18
34^oC.

В реакции преципитации Асколи и реакции диск-преципитации (по А.И. Завирюхе) дает отрицательный результат. Штамм не чувствителен к бактериофагам "К"-НИЭВ, "Гамма-МВА", Fah-ВНИИВВиМ.

Вирулентные свойства штамма. Штамм не вызывает гибели кроликов, морских свинок и белых мышей при подкожном и внутрибрюшинном введении в дозах соответственно 10 млн. 5 млн. и 1 млн. клеток. Не патогенен для животных и растений.

Штамм сохраняется в лиофилизированном виде при температуре 2 4^oC в течение года. Нативная культура сохраняется на мясопептонном бульоне в течение 1 месяца.

Антагонистическая активность штамма. Изучение антагонистических свойств Bac. subtilis "ТНП-3" проводили предварительно в лабораторных условиях согласно общепринятых методик (Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, 1982). Предварительно антагонистическую активность Bac. subtilis "ТНП-3" к тест-культурам определяли методом радикальных штрихов. В дальнейшем применяли метод выращивания Bac. subtilis на мясопептонном бульоне в течение 5 дней при 37^oC, затем фильтровали и культуральную жидкость смешивали в равных количествах с агаром. Агар скашивали и на поверхность застывшего агара проводили посев тест-культуры. Через сутки учитывали результат. Отсутствие роста на поверхности агара свидетельствовало о наличии антагонистического действия.

Bac. subtilis "ТНП-3" проявил выраженную антагонистическую активность в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий. В качестве тест-культур были испытаны паспортизированные штаммы: St. aureus (шт. 209 P), полученный в ВГНКИ, Москва; Str. equi (шт. H-34-ДЕП) ЯНИИСХ, г. Якутск; E. coli (шт. 1257)-ВНИИВСГЭ, Москва; Sal. pullorum (шт. 106) ВИЭВ, Москва; а также местные штаммы St. aureuss K-1, Sal. typhymurium, Sal. dublin.

В производственных условиях проводили различные варианты компостирования птичьего помета и навоза с соломой, сапропелью. Способ компостирования - площадочный. Закладка компоста: июнь июль, конец компостирования сентябрь. Размеры буртов: длина произвольная, ширина 2 4 м и высота 1,5 2,0 м.

На разной глубине компостов закладывали тест-объекты. В качестве тест-объектов использовали навоз или помет (5 гр.), контаминированный 1 мл 1 - 2 млрд. взвеси вышеуказанных микроорганизмов. Навоз помещали в капроновые мешочки. Приготовление тест-объектов, взятие проб, изучение выживаемости микроорганизмов проводили согласно общепринятых методик (Руководство по ветеринарной санитарии, 1986). Использование среды: МПБ, МПА, МПБ с 50%-ной сахарозой, МПА с 8,5% -ным NaCl, МПА с 1%-ной глюкозой, магниевую среду: дифференциальные среды (Эндо, Плоскирева, Левина, Висмут-сульфит, среды Гисса). Применяли окраску по Граму. Проводили реакцию плазмокоагуляции, биопробу на белых мышах. Тест-объекты исследовали через каждые 30 дней.

Ставили опытные и контрольные бурты. В опытных добавка к компосту 0,3% и 0,5% (по отношению к массе компоста) 1 млрд. суспензии суточной агаровой культуры Bacillus subtilis "ТНП-3". Контрольные бурты без добавления Bacillus subtilis "ТНП-3". Опыты проведены в течение пяти летних сезонов. Испытано с целью обеззараживания множество вариантов компостирования, из них приведены в таблице те варианты компостирования, где достигнуто полное обеззараживание навоза и птичьего помета по сравнению с контролем.

Как показывают данные таблицы, наиболее надежное обеззараживание птичьего помета, навоза, контаминированного патогеннными, условно-патогенными микроорганизмами такими, как E. coli, St. aureus Str. equi, Sal. t. murium достигается при добавке 0,5%-ной суспензии 1 млрд. взвеси агаровой культуры Bac. subtilis "ТНП-3" и при выдержке до 90 дней в летний период.

Таким образом, впервые в условиях вечной мерзлоты достигнуто надежное обеззараживание птичьего помета и навоза, добавляя микроб-антагонист штамм Bac. suttilis "ТНП-3", выделенный из мерзлотной почвы, обладающий широким спектром антагонистического действия.

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и санитарии и представляет собой штамм почвенных споровых бактерий Bacillus subtilis, используемый для обеззараживания птичьего помета и навоза от патогенных микроорганизмов. Штамм Bacillus subtilis выделен из мерзлотно-пепеходной среднесуглинистой почвы. Депонирован в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов под N ТНП-3-ДЕП. Штамм обладает широким спектром антагонистической активности в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий. 1 табл.

Штамм бактерий Bacillus subtilis ВГНКИ N ТНП-3-ДЕП, используемый для обеззараживания птичьего помета и навоза от патогенных микроорганизмов.