СПОСОБ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ РИНОПНЕВМОНИИ, САЛЬМОНЕЛЛЕЗНОГО АБОРТА И МЫТА ЛОШАДЕЙ АССОЦИИРОВАННОЙ ВАКЦИНОЙ В УСЛОВИЯХ ТАБУННОГО СОДЕРЖАНИЯ Российский патент 2014 года по МПК A61K39/09 A61K39/112 A61K39/27 A61K39/39 A61P31/00 

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к способам профилактики инфекционных болезней лошадей.

Аналоги изобретения. Известны способы профилактики сальмонеллезного аборта лошадей, которые предусматривают иммунизацию лошадей вакциной из штамма бактерий Salmonella abortus equi БН-12 с добавлением полирибоната или культуры штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП (патенты РФ на изобретения №2178713, опубл. 27.01.2002 г., бюл. №3 и №2218925, опубл. 20.12.2003 г., бюл. №35). Однако эти способы не используются для профилактики ринопневмонии и мыта. Вакцины вводятся отдельно от других профилактических препаратов (например, от вакцины против ринопневмонии и мыта).

Известна живая вакцина против ринопневмонии лошадей, сухая культуральная из штаммов CB/69 (инструкция по применению утверждена Россельхознадзором 20.12.2006 г.). Однако инструкция по использованию указанной вирус-вакцины предусматривает двукратное введение, что вызывает определенные трудности при ее применении в табунном коневодстве. Также как показали предварительные исследования, нежелательно применение живых вакцин в экстремальных условиях табунного содержания в следствие их повышенной реактогенности.

Известен способ специфической профилактики ринопневмонии и сальмонеллезного аборта лошадей, включающий одновременное введение в разные места инактивированной вакцины против сальмонеллезного аборта из штамма бактерий Sal. abortus equi БН-12 и живой вирус-вакцины против ринопневмонии лошадей из штамма вируса CB/69 (Петрова С.Г. Иммунопрофилактика абортов лошадей сальмонеллезной и ринопневмонийной этиологии в условиях Якутии. Автореф. диссер. на соиск. уч. степ. канд. вет. наук, Якутск, 2006).

Однако данный способ предусматривает введение двух разных вакцин в разные места. Для профилактики ринопневмонии используется живая, а не инактивированная вакцина. Следовательно, способ является малоэффективным в условиях табунного содержания лошадей.

Вышеназванные вакцины вводятся отдельно в разные места, что значительно усложняет процесс иммунизации и повышает его трудоемкость.

Известны способы профилактики мыта лошадей, которые предусматривают иммунизацию лошадей вакциной из штаммов бактерий Streptococcus equi H-34 с добавлением полирибоната или культуры штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП (патенты РФ на изобретения №2122428, опубл. 27.11.1998 г., бюл. №33 и №2143279, опубл. 27.12.1999 г., бюл. №36). Однако эти способы не используются для профилактики сальмонеллеза и ринопневмонии лошадей.

Известен способ специфической профилактики ринопневмонии и сальмонеллезного аборта лошадей ассоциированной вакциной в условиях табунного содержания (патенты РФ на изобретения №2424823, опубл. 27.07.2011 г., бюл. №21). Однако вакцина не используется для профилактики мыта лошадей.

В основу изобретения положена задача разработки профилактики сальмонеллезного аборта, ринопневмонии и мыта лошадей ассоциированной инактивированной вакциной.

Технический результат изобретения - способ специфической профилактики сальмонеллезного аборта, ринопневмонии и мыта ассоциированной инактивированной вакциной. Для изготовления ассоциированной вакцины используют равные части инактивированной вакцины из штамма Sal. abortus equi БН-12, инактивированной вакцины из штамма CB/69 и инактивированной вакцины из штамма бактерий Streptococcus equi H-34. К вакцине добавляют культуральную жидкость штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП, которая повышает иммуногенность вакцины и иммунобиологическую реактивность организма. Введение ассоциированной вакцины с культуральной жидкостью штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП вызывает иммунитет высокой напряженности не менее чем у 88,8% вакцинированных лабораторных животных и снижает заболеваемость мытом (предохраняет от заболевания 95,1% молодняка).

В качестве компонента ассоциированной вакцины используют штамм Sal. abortus equi БН-12 и штамм бактерий Str. equi H-34, депонированные в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) (справки о депонировании штамма от 20.01.1997 г., №63/27 и от 17.12.1993 г., №988/27). Штаммы могут быть получены в лаборатории по разработке микробных препаратов Якутского НИИ сельского хозяйства Россельхозакадемии и ВГНКИ.

В качестве другого компонента ассоциированной вакцины применяют штамм вируса ринопневмонии CB/69.

Для повышения эффективности ассоциированной вакцины и повышения иммунобиологической реактивности организма к вакцине в качестве иммуномодулятора добавляют культуральную жидкость бульонной культуры штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП. Штамм бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП выделен из мерзлотно-переходной средне-суглинистой почвы Якутии. Депонирован в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ). Справки о депонировании выданы 17 октября 1994 г. за №002/9 и 6 февраля 2001 г. за №181/15. Получен патент РФ №2105810 «Штамм бактерий Bacillus subtilis, используемый для обеззараживания птичьего помета и навоза от патогенных микроорганизмов» от 27 февраля 1998 г. Лабораторными опытами подтверждена способность штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП стимулировать иммунологическую реактивность организма.

Штамм бактерий Sal. abortus БН-12 выращивают на мясопептонном бульоне до накопления 8 млрд. микробных клеток в 1 мл. Бактериальную массу инактивирую формалином в течение 72 часов, затем добавляют гель гидроокиси алюминия до 6% концентрации.

Штамм бактерий Str. equi H-34 выращивают в мясопептонном бульоне содержащем 10% сыворотки крови лошади и 1% глюкозы до накопления 3 млрд. микробных клеток в 1 мл. Бактериальную массу инактивируют формалином в течение 72 часов, затем добавляют гель гидроокиси алюминия до 6% концентрации.

Штамм CB/69 культивируют в первичных культурах (или субкультуре) клеток почки поросенка, теленка, кролика или перевиваемых, чувствительных к вирусу культурах (ПТ, СПЭВ и др.) в течение 48-72 часов. Титр вируса культуральной жидкости до его инактивации формальдегидом должен составлять не менее 7,0-7,51 g₅₀/Mn.

Штамм бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП выращивают в мясопептонном агаре pН 7,0-7,2 в течение 5-7 суток при 37°C, затем суспензируют в физиологическом растворе хлористого натрия в концентрации 1 млрд. КОЕ в 1 мл. Фильтруют через миллипоровые фильтры.

Затем к 3 мл ассоциированной вакцины, состоящей с 1 мл инактивированной вакцины против сальмонеллезного аборта, 1 мл инактивированной вакцины против ринопневмонии, 1 мл инактивированной вакцины против мыта и добавляют 1 мл культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП.

Для определения напряженности иммунитета отбирают 40 голов белых мышей BALB/c в возрасте 10-40 суток массой 5-7 г. Первую группу (9 голов) иммунизируют однократно ассоциированной вакциной с культуральной жидкостью штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП, вторую группу (8 голов) вакцинируют двукратно с интервалом 14 дней, а третью группу (22 головы) не вакцинируют и в дальнейшем используют в качестве отрицательного и положительного контролей. Вакцину вводят подкожно в область спины в дозе 0,3 мл.

Через 14 суток после однократной и через 12 суток после повторной иммунизации опытных и контрольных белых мышей заражают интрацеребрально адаптированным нейротропным штаммом ПП1/1 вируса ринопневмонии лошадей в дозе 0,02·6,0 lg ТСД₅₀/мл. Эффективность иммунизации определяют по количеству мышей, устойчивых к заболеваемости и летальности. В течение 10 дней наблюдения за животными защитный эффект от экспериментального заражения вирусом ринопневмонии при однократном введении вакцины составляет 44,4%, а при двукратном - 88,8%.

Отбирают 80 белых мышей массой 18-20 грамм. Первую группу (40 голов) мышей иммунизируют ассоциированной вакциной в дозе 0,2 мл, а вторую группу (40 голов) не иммунизируют. Препараты вводят подкожно в область спины.

Через 14 дней после вакцинации 20 голов мышей первой группы и 20 голов контрольной группы заражают суточной культурой патогенного штамма мытного стрептококка в дозе 5 LD₅₀. 20 голов первой группы и 20 голов контрольной группы заражают суточной культурой патогенного штамма сальмонелл в дозе 5 LD₅₀. В течение 12 дней наблюдения за животными в первой группе (в подгруппах зараженных стрептококками и сальмонеллами) заболевание и падеж не отмечены. В контрольной группе заболели все зараженные мыши. Падеж составляет после заражения стрептококками - 6 голов, а после введения сальмонелл - 8 голов.

Отбирают 265 голов молодняка лошадей 6-7 месячного возраста. Первую группу (81 голова) иммунизируют ассоциированной вакциной с культуральной жидкостью из штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП в дозе 4 мл. Вторую группу (111 голов) иммунизируют инактивированной вакциной против мыта лошадей. Третью группу (73 головы) не вакцинируют и используют в качестве контроля. Вакцины вводят внутримышечно в область верхней трети шеи.

В течение 6 месяцев наблюдения за молодняком лошадей из первой группы заболели мытом 4 головы, второй группы - 8 голов. Эффективность иммунизации в первой группе, привитых ассоциированной вакциной составляет 95,1%, а в группе, привитых вакциной против мыта - 92,7%. В группе неиммунизированного молодняка заболеваемость составляет 84,9%.

Прививка молодняка трехвалентной вакциной вызывает выработку гемагглютинизирующих антител к вирусу ринопневмонии (1:800-1:6400), агглютининов к возбудителю сальмонеллеза (1:200-1:1600) и преципитирующих антител к стрептококкам (1:100) достаточно высоких титрах.

Таким образом, иммунизация инактивированной ассоциированной вакциной из штаммов бактерий Sal. abortus equi БН-12, Str. equi H-34 и штамма CB/69 с культуральной жидкостью штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП вызывает иммунитет высокой напряженности и может быть использована в качестве способа специфической профилактики ринопневмонии, сальмонеллеза и мыта лошадей.

Изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает иммунизацию ассоциированной инактивированной вакциной из равных частей вакцины против сальмонеллезного аборта из штамма бактерий Sal. abortus equi БН-12, инактивированной вакцины против ринопневмонии лошадей из штамма вируса ринопневмонии CB/69, инактивированной вакцины против мыта из штамма бактерий Str. equi Н-34. Способ позволяет повысить эффективность вакцинации за счет создания иммунитета высокой напряженности и снижения трудоемкости. 2 з.п. ф-лы.

1. Способ специфической профилактики ринопневмонии, сальмонеллезного аборта и мыта лошадей путем иммунизации инактивированной вакциной, отличающийся тем, что в качестве специфического средства используют ассоциированную инактивированную вакцину из равных частей вакцины против сальмонеллезного аборта из штамма бактерий Sal. abortus equi БН-12, инактивированной вакцины против ринопневмонии лошадей из штамма вируса ринопневмонии СВ/69 и инактивированной вакцины против мыта из штамма бактерий Str. equi Н-34.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что, дополнительно, в качестве иммуномодулятора, повышающего иммунный ответ, в вакцину вводят культуральную жидкость бульонной культуры штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что напряженный иммунитет против ринопневмонии, сальмонеллезного аборта кобыл и мыта достигается в результате однократной вакцинации.