ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ОСТЕОИНДУКЦИИ, СПОСОБ ГЕНЕРАЦИИ НОВОЙ КОСТИ Российский патент 1998 года по МПК A61K38/02 A61K38/02 A61K31/59 

Изобретение относится к области остеоиндукции (росту кости). Конкретно, настоящее изобретение относится к новым лекарственным композициям, включающим костные морфогенетические белки и соединение витамина D, что обеспечивает синергичный рост кости.

В здоровых организмах рост костей происходит нормальным образом и переломы заживают без применения лекарств. Тем не менее в некоторых случаях кости могут быть ослаблены и заживление проходит плохо. Например, заживление может протекать медленно у пожилых и у пациентов, которые лечились кортикостероидами, таких, как пациенты, перенесшие трансплантацию, и пациенты, лечившиеся по поводу хронических легочных заболеваний. Другим примером является остеопороз. Остеопороз - аномальная нехватка костной ткани, часто имеющая место у женщин в климактерическом периоде и у пожилых мужчин. Такое нарушение повышает риск небольших переломов в костях, особенно в позвоночнике. В настоящее время остеопороз лечат в основном кальцием, витамином D, эстрогеном или кальцитонином, гормоном, который контролирует использование кальция организмом. К сожалению, эти виды лечения являются просто профилактическими против дальнейшей потери костной ткани. Существует необходимость найти лечение, которое не просто предотвратит потерю ткани, но и будет способствовать ее образованию.

(1989) "Bone Morphogenic Proteins and Vitamin D", Nutrition Reviews, Vol. т. 47, стр. 364 - 366, делает вывод, что содержание D в диете препятствует утрате остеоиндуктивной активности межклеточного костного материала.

Turner, R. T. , J.Farley, I.I. Vandersteenhoven, S. Epstein, N.H. Bell, and D.I. Baylink, (1988) "Demonstration of Reduced Mitogenic and Osteoinductive Activities in Demineralized Allogeneic Bone Matrix from Vitamin D-deficient Rats", The Journal of Clinical Inyestigation, Inc. Vol. т.82, стр. 212 - 217 раскрывают имплантацию деминерализованной костной матрицы от крыс, страдающих недостатком витамина D, нормальным крысам. Деминерализованная костная матрица от крыс, страдающих недостатком витамина D, не так эффективно способствовала остеоиндукции, как деминерализованная костная матрица от нормальных крыс.

Sampath, T.K., S. Weintraub, and A.H. Reddi, (1984) "Extracellular Matrix Proteins Involved in bone Induction are Vitamin D Dependent", Biochemical and Biophysical Research Communications; Vol. т. 124, стр. 829 - 835 раскрывают исследование по поводу имплантации деминерализованной костной матрицы от нормальных крыс и деминерализованной костной матрицы крыс, страдающих рахитом, в котором матрица рахитичной кости не индуцировала рост кости, в то время как матрица нормальной кости это делала. Был сделан вывод, что витамин D необходим для продуцирования костноиндуктивных белков в костной матрице живой крысы.

В патенте N 4761471, Urist, выданном 2 августа 1988 г., раскрывается композиция костного морфогенетического белка, включающая фактор костного морфогенетического белка (КМБ) и КМБ-ассоциированного белка, имеющего молекулярный вес 34,000 дальтона. Раскрывается также использование таких факторов и композиций для индуцирования образования костной ткани у млекопитающих.

В патенте N 4455256, Urist, выданном членам правления университета Калифорнии 19 июня 1984 г., раскрывается костный морфогенетический белок с молекулярным весом в пределах 1,000 - 100,000 дальтонов.

В следующих публикациях раскрыты другие различные костные морфогенетические белки/факторы, остеоиндуктивные факторы, остеогенные факторы и другие белки/факторы, связанные с костным ростом: U.S. Patent 4,968,590, Kubersampath and Rueger; выданном November 6, 1990; U.S. Patent 4,698,328, Neer, Potts and Slovik; выданном October 6, 1987; U.S. Patent 4,877,864, Wang, Wozney and Rosen; выданном October 31, 1989; U.S. Patent 4,861,757, Antoniades, Lynch and Williams, выданном August 29, 1989; U.S. Patent 4,810,691, Seyedin, Thomas, Bentz, Ellingsworth and Armstrong, выданном March 7, 1989; U.S. Patent 4,804,744, Sen, выданном February 14, 1989; U.S.Patent 4,795,804, Urist, выданном January 3, 1989; U.S. Patent 4,789,663, Wallace, Smestad, McPherson, Piez and Ross, выданном December 6, 1988; U.S. Patent 4,789,732, Urist, выданном December 6, 1988; U.S. Patent 4,774,322, Seyeden, Thomas, Bentz, Ellingsworth and Armstrong, выданном September 27, 1988; U.S. Patent 4,698,328, Neer and Slovik, выданном October 6, 1987; U.S. Patent 4,627,982, Seyedin and Thomas, выданном December 9, 1986; U.S. Patent 4,619,989, Urist, выданном October 28, 1986; U.S. Patent 4,596,547, Urist, выданном June 24, 1986; U.S. Patent 4,563,489, Urist, выданном January 7, 1986; U.S. Patent 4,563,350, Nathan, Seyedin and Bents, выданном January 7, 1986; U. S. Patent 4,526,909, Uris, выданном July 2, 1985; U.S. Patent 4,434,894, Seyedin and Thomas, выданном February 23, 1984; U.S. Patent 4,294,753, Urist, выданном October 13, 1981; European Patent Application 349048, Bad, Muhlard, Gazit and Shteyer, опубликованной January 3, 1990; European Patent Application 309241, Chu, Nathan and Seyedin, опубликованной March 29, 1989; European Patent Application 336760, Benz, Nathan, Rosen Dasch and Seyedin, опубликованной October 11, 1989; European Patent Application 145155, Sen, опубликованной July 10, 1985; World Patent Application 89/10934, Roos, Burns, Guy and McKnight, опубликованной November 16, 1989; World Patent Application 89/09787 and 89/09789, Opperman, Kubersampath, Rueger and Oskaynak, опубликованной October 19, 1989; and World Patent Application 88/00205, Wang, Wozney and Rosen, опубликованной January 14, 1988.

Целью настоящего изобретения является способ генерации роста новой кости у млекопитающих.

Другой целью изобретения является фармацевтическая композиция для использования в генерации роста кости у млекопитающих.

Настоящее изобретение относится к способу генерации роста новой кости у млекопитающих, включающему назначение млекопитающему комбинации безопасного и эффективного количества соединения витамина D и безопасного и эффективного количества одного или нескольких КМБ, или остеоиндуктивного экстракта, содержащего один или несколько КМБ.

Настоящее изобретение далее включает композицию для генерации роста новой кости у млекопитающих, включающую безопасное и эффективное количество соединения витамина D; безопасное и эффективное количество КМБ или остеоиндуктивного экстракта, содержащего один или несколько КМБ; и фармацевтически приемлемый носитель.

Настоящее изобретение включает назначение млекопитающему комбинации безопасного и эффективного количества соединения витамина D и безопасного и эффективного количества одного или нескольких КМБ или остеоиндуктивного экстракта, содержащего один или несколько КМБ. Было заявлено, что лечение даже одним из препаратов соединения витамина D, КМБ или остеоиндуктивного экстракта усиливает рост кости. Неожиданно было выявлено, что лечение соединением витамина D в комбинации с остеоиндуктивным экстрактом или в комбинации, по меньшей мере, с одним КМБ имеет больший рост кости, чем при лечении только одним из препаратов. Субъекты, нуждающиеся в таком лечении, страдают рядом заболеваний, которые поддаются такому лечению. Они включают, но не ограничены до переломов костей (открытых и закрытых), переломов с плохим заживлением, врожденных дефектов, вспомогательных элементов в пластической хирургии. Препараты также используются в лечении онкологических резекций, всех заболеваний, классифицируемых как остеопороз, ревматоидный артрит, остеоартрит, септический артрит, рахит, органическое включение протезных суставов и зубные имплантации, периодентальные заболевания и дефекты, а также нарушения остеогенеза и остеомалация (разжижение костей).

Термин "безопасное и эффективное количество", используемый здесь, означает количество соединения, достаточное, чтобы индуцировать положительное изменение в состоянии, требующем лечения, но достаточно низкое, чтобы избежать побочных явлений (с разумным коэффициентом пользы риска) в значении нормальной оценки с точки зрения медицины. Безопасное и эффективное количество соединения или композиции будет меняться в зависимости от состояния, требующего лечения, возраста и физического состояния пациента, степени состояния, длительности лечения, характера сопутствующей терапии, конкретного применяемого соединения или композиции, конкретного используемого фармацевтически приемлемого носителя или наполнителя и других факторов в объеме знаний и квалификации врача.

Используемый здесь термин "восстановление перелома" означает восстановление перелома кости хирургическими или манипулятивными средствами до ее нормального анатомического положения.

"КМБ" означает костный морфогенетический белок.

"q.s." означает в достаточном количестве.

Все проценты указаны по весу, если не оговорено иначе.

"Региональное лечение" включает лечение костных переломов (закрытых и открытых), лечение затяжных переломов, лечение хирургии, лечение онкологических резекций, органическое включение протезных суставов, органическое включение зубных имплантатов и лечение периодонтальных заболеваний и дефектов.

Используемое выражение "систематическое лечение" включает лечение заболеваний, классифицируемых как остеопороз, ревматоидный артрит, остеоартрит, септический артрит, рахит и остеогенетические заболевания.

Все дозировки для систематического лечения даются как сухой вес активного вещества на кг веса тела млекопитающего.

Все дозы для регионального лечения даются как сухой вес активного вещества на см² площади поверхности минерализованной ткани, требующей лечения.

Термин "минерализованная ткань" означает кости и зубы.

Соединения витамина D
Одним компонентом, включенным в способ настоящего изобретения, является соединение витамина D. Здесь "соединение витамина D" включает витамин D, эргокальциферол (витамин D₂) холекальциферол (витамин D₃) и их биологически активные метаболиты и предшественники. Предпочтительные соединения витамина D включают, но не ограничены витамином D₃ (Sigma, St. Louis, MO), витамином D₃ (Sigma, St. Louis, MO), 1-α-гидрокси витамина D₃, 1-α-фторо витамина D₃, 3-деокси-1,25-дигидрокси витамина D₃, 25-гидрокси-5,6-транс витамина D₃, 25-гидрокси витамина D₂, 25-гидрокси витамина D₃ (Hoffman La Roche), 1,25-дигидрокси витамина D₂, 24,25-дигидрокси витамина D₂, 24,25-дигидрокси витамина D₃, (Hoffman La Roche) и 1,25-дигидрокси витамина D₃ (Duphar, Veenendaa 1, Holland).

Предпочтительное соединение витамина D выбирают из 25-гидрокси витамина D₂, 25-гидрокси витамина D₃, 1,25-дигидрокси витамина D₂, 24,25-дигидрокси витамина D₂, 24,25-дигидрокси витамина D₃ и 1,25-дигидрокси витамина D₃, наиболее предпочтительно из 1,25-дигидрокси витамина D₃. Дополнительные соединения витамина D, полезные для настоящего изобретения, хорошо известны специалистам и включают, но не ограничены до тех, которые раскрыты в следующих патентах США, каждый из которых включен сюда как ссылка: U.S. Patent 4,970,203, DeLuca and Kwiecinski, выданный November 13, 1990; U.S. Patent 4,927,815, DeLuca, Kutner, Perlman and Schnoes, выданный May 22, 1990; U.S. Patent 4,857,518, DeLuca, Ikekawa and Tanaka, выданный August 15, 1989; U.S. Patent 4,851,401, DeLuca, Kulner, Perlman and Schnoes, выданный July 25, 1989; U. S. Patent 4,851,400, DeLuca, Ikekawa and Tanaka, выданный July 25, 1989; U. S. Patent 4,842,012, DeLuca, Kutner, Perlman, Phelps, Schnoes and Sicinski; выданный July 11, 1989; U.S. Patent 4,816,417, Dame, DeLuca and Pierce, выданный March 28, 1989; U.S. Patent 4,269,181, DeLuca, Schnoes, Sicinski and Tanaka, выданный September 6, 1988; U.S. Patent 4,755,329, DeLuca, Lee and Schnoes, выданный July 5, 1988; U.S. Patent 4,719,205, DeLuca, Schoes, Sicinski and Tanaka, выданный January 12, 1988; U. S. Patent 4,719,204, DeLuca, Schnoes, Sicinski and Tanaka, выданный January 12, 1988; U.S. Patent 4,717,721, DeLuca, Ikekawa, Ostrem and Schnoes, выданный January 5, 1988; U. S. Patent 4,689,180, DeLuca, Schnoes, Sicinski and Tanaka, выданный August 25, 1987; U.S. Patent 4,619,920, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi and Tanaka, выданный October 28, 1986; U.S. Patent 4,594,192, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi and Tanaka, выданный June 10, 1986; U.S. Patent 4,588,716, DeLuca and Schnoes, выданный May 13, 1986; U.S. Patent 4,588,528 DeLuca, Ikekawa and Tanaka, выданный May 13, 1986; U.S. Patent 4,564,474, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi and Tanaka, выданный January 14, 1986; U.S. Patent 4,555,364, DeLuca, Lee, Phelps and Schnoes, выданный November 26, 1985; U.S. Patent 4,554,106, DeLuca, Lee, Phelps and Schnoes, выданный November 19, 1985; U.S. Patent 4,552,698, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi and Tanaka, выданный November 11, 1985; U.S. Patent 4,512,925, DeLuca, Lee and Schoes, выданный April 23, 1985; U.S. Patent 4,505,906, DeLuca, Schoes, Sicinski and Tanaka, выданный March 19, 1985; U.S. Patent 4,502,991, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi and Tanaka, выданный March 5, 1985; U.S. Patent 4,500,460, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi and Tanaka, выданный February 19, 1985; U.S. Patent 4,481,198, Chu, DeLuca, Kabakoff and Schnoes, выданный November 6, 1984; U.S. Patent 4,461,766, DeLuca, Hart and Schnoes, выданный July 24, 1984; U.S. Patent 4,448,726, DeLuca, Paaren, Schnoes and Smith; выданный May 15, 1984; U.S. Patent 4,448,721 DeLuca, Morzycki and Schnoes, выданный May 15, 1984; U.S. Patent 4,428,946, DeLuca, Iorgensen and Schnoes, выданный January 31, 1984; U. S. Patent 4,411,833, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi and Tanaka, выданный October 25, 1983; U. S. Patent 4,367,177; DeLuca, Schnoes and Wichmann, выданный January 4, 1983; U.S. Patent 4,358,406; DeLuca, Ikekawa, Kobayashi and Tanaka, выданный November 9, 1982; U.S. Patent 4,338,312, DeLuca, Iorgensen and Schnoes, выданный July 6, 1982; U.S. Patent 4,338,250, DeLuca, Hamer, Paaren and Schnoes, выданный July 6, 1982; U.S. Patent 4,336,193, DeLuca, Fivizzani, Paaren, Schnoes and Wichmann, выданный June 22, 1982; U. S. Patent 4,313,942, DeLuca, Frank, Paaren and Schnoes, выданный February 2, 1982; U. S. Patent 4,307,231, DeLuca, Paaren, Schnoes, Tanaka and Wichmann, выданный December 22, 1981; U.S. Patent 4,307,025; DeLuca, Ikekawa, Morisaki, Oshida, Schnoes and Tanaka, выданный December 22, 1981; U.S. Patent 4,305,880; DeLuca, Ikekawa, Kobayashi and Tanaka, выданный December 15, 1981; U.S. Patent 4,297,289; DeLuca, Fivizzani, Paaren and Schnoes, выданный October 27, 1981; U.S. Patent 4,292,250; DeLuca, Levan and Schnoes, выданный September 29, 1981; U.S. Patent 4,265,822; DeLuca, Hamer, Paaren and Schnoes, выданный May 5, 1981; U.S. Patent 4,264,513, DeLuca, Fivizzani, Napoli and Schnoes, выданный April 28, 1981; U.S. Patent 4,263,214, DeLuca, Napli, Onisko and Schnoes, выданный April 21, 1981; U.S. Patent 4,260,804, DeLuca, Esvelt and Schoes, выданный April 7, 1981; U.S. Patent 4,260,549, DeLuca, Hamer, Paaren and Schnoes, выданный April 7, 1981; U.S. Patent 4,254,045, DeLuca, Ikekawa, Morisaki, Osida and Tanaka, выданный March 3, 1981; U.S. Reissue Patent 30,538, DeLuca Lam and Schnoes, выданный March 3, 1981; U.S. Patent 4,248,791, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi and Tanaka, выданный February 3, 1981; U.S. Patent 4,234,495, DeLuca, Hamer, Paaren and Schnoes, выданный November 18, 1980; U.S. Patent 4,230,627; DeLuca, Napoli and Schnoes, выданный October 28, 1980; U.S. Patent 4,229,359, Alper, DeLuca, Schnoes and Tanaka, выданный October 21, 1980; U.S. Patent 4,229,358, DeLuca, Napoli, Onisko and Schnoes, выданный October 21, 1980; U.S. Patent 4,229,357, DeLuca, Napoli, Onisko and Schnoes, выданный October 21, 1980; U.S. Patent 4,226,788, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi, Schnoes and Tanaka, выданный October 7, 1980; U.S. Patent 4,226,787, DeLuca, Napoli, Onisko and Schnoes, выданный October 7, 1980; U.S. Patent 4,224,231, Alper, DeLuca, Schnoes and Tanaka, выданный September 23, 1980; U.S. Patent 4,224,230, DeLuca, Napoli, Onisko and Schnoes, выданный September 23, 1980; U.S. Patent 4,223,131, DeLuca, Schnoes and Wichmann, выданный September 16, 1980; U.S. Patent 4,217,288, DeLuca, Onisko and Schnoes, выданный August 12, 1980; U.S. Patent 4,209,634, DeLuca, Esvelt and Schnoes, выданный June 24, 1980; U.S. Patent 4,202,829, DeLuca, Hamer, Paaren and Schnoes, выданный May 13, 1980; U.S. Patent 4,201,881, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi, Schnoes and Tanaka, выданный May 6, 1980; U.S. Patent 4,196,133, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi, Schnoes and Tanaka, выданный April 1, 1980; U.S. Patent 4,195,027, DeLuca, Hamer, Paaren and Schnoes, выданный March 25, 1980; U.S. Patent 4,188,345, DeLuca, Napoli, Onisko and Schnoes, выданный February 12, 1980 and U.S. Patent 3,906,014, DeLuca, Lam and Schnoes, выданный Septembery 16, 1975.

Дополнительные соединения витамина D полезные в настоящем изобретении и раскрытые этими ссылками, включают, но не ограничены гидроксилированными 24-гомо-витамина D; циклопентано-витамина D; гидроксилированного 26-гомо витамина D; 1 α -гидроксивитамина D; 1-гидроксивитамина D; 1 -α-гидроксивитамина D₂; 1 α, 25-дигидрокси-22 Z-дегидроксивитамина D; 26,26,26,27,27-пентафторo-1-α-гидрокси-27-метоксивитамина D₃; 2 α-фторвитамина D₃; 1,24-дигидрокси-дельта 22-витамина D₃; 23,23-дифторо-25-гидрокси-витамина D₃; 1-гидрокси-3,5-цикловитамина D; 23,23-дифторо-1 α , 25-дигидрокси-витамина D₃; 1,23-дигидроксивитамина D; гидрокси-витамина D₂; 23,23-дифторо-1 α , 25-дигидрокси-витамина D₃; 23,23-дифторо-25-гидрокси-витамина D₃; 26,26,26,27,27,27-гексафторо-1 α , 25-дигидроксихолестерола; 23,25-дигидроксивитамина D₃; 26,26,26,27,27,27-гексафторо-1 α , 25-дигидроксикальциферола; 1 α , 25-дигидрокси-2 β -фторвитамина D₃; 24-фторо-25-гидроксихолекальциферола; 5,6-транс-витамина D; 1 α -гидрокси-25-кето-27-нор-холекальциферола; фторо-витамина D; 1 α -гидрокси-2 β -фторохолекальциферола; 3-деокси-1 α -гидроксихолекальциферола; 25-гидрокси-26,26,26,27,27,27-гексафторохолекальциферола; α -гидрокси-3,5-цикло-витамина D; 25-гидроксихолекальциферола; 24,24-дифторо-1 α , 25-дигидроксихолекальциферола; 25-гидроксихолекальциферола; 25-гидроксихолекалциферол-26, 23-лактона; 24,24-дифторо-1 α , 25-дигидроксихолекальциферола; 24,24-дифторо-25-гидроксихолекальциферола; 3,5-цикловитамина D и 3-деокси-α-гидроксихолекальциферола.

Дополнительные соединения витамина D, полезные в настоящем изобретении, далее включают те, которые раскрыты в Handbook of Vitamins L.J. Machlin, Ed. , Mercel Dekker, Inc (1984), включенным сюда ссылкой. Соединения витамина D, полезны в настоящем изобретении, раскрытые этой ссылкой, включают, но не ограничиваются до 1,25-дигидрокси витамина D, 3-деокси-1,25-дигидрокси витамина D, 27-нор-25-гидрокси витамина D₃, 26,27-бис-нор-25-гидрокси витамина D₃, 25-гидрокси витамина D, 1,25-дигидрокси витамина D, 1 α- гидрокси витамина D₃ и 25-фторо-1 α-гидрокси витамина D₃.

Безопасное и эффективное количество соединения витамина D дозируется в комбинации, по меньшей мере с одним КМБ или в комбинации с остеиндуктивным экстрактом, содержащим, по меньшей мере, один КМБ.

Предпочтительный диапазон дозировки соединения витамина D для систематического лечения составляет от 1 нг до около 1 мг, предпочтительно от 10 нг до около 500 μг, более предпочтительно от 20 нг до 10 μг.

При региональном лечении диапазон дозировки соединения витамина D приблизительно составляет от 1 нг до 1 мг, предпочтительно от 10 нг до 500 нг, еще предпочтительнее от 10 нг до 50 нг, а лучше от 20 нг до 30 нг.

Дозировки назначаются курсом лечения от 1 дня до 6 месяцев, предпочтительнее от 1 недели до 1 месяца. Дозы назначаются от разового приема в месяц до 5 раз в день, а лучше от одного раза в неделю до одного раза в день.

Костные морфогенетические белки
В одном воплощении настоящего изобретения соединение витамина D назначают в комбинации с одним или несколькими КМБ-ми для генерации роста кости у млекопитающих. Эти КМБ предпочтительно выбирают из группы, состоящей из КМБ-1, КМБ-2, КМБ-3, КМБ-4, КМБ-5, КМБ-6 и КМБ-7.

Безопасное и эффективное количество КМБ, предпочтительно выбранное из группы, состоящей из КМБ-1, КМБ-2, КМБ-3, КМБ-4, КМБ-4, КМБ-6 и КМБ-7, дозируется в комбинации с соединением витамина D.

Предпочтительный диапазон дозировки КМБ для систематического лечения составляет от 1 пг до 100 μ г, предпочтительно от 1 нг до 10 μг, еще предпочтительнее от 10 нг до 2,5 μг.

При региональном лечении предпочтительный диапазон дозировки КМБ составляет от 1 пг до 100 μг, более предпочтительно от 1,5 до 90 μг, предпочтительно от 1,8 до 75 μг, более предпочтительно 2,0 - 50 μг, более предпочтительно 2,2 - 25 μг, более предпочтительно 2,3 - 10 μг, и наконец от 2,5 до 5 μг. Оптимальная доза - по меньшей мере около 2,5 μг.

Дозировки назначаются курсом лечения от 1 дня до 6 месяцев, предпочтительнее от 1 недели до 2 месяца. Дозы назначаются от разового приема в месяц до 5 раз в день, а лучше от одного раза в неделю до одного раза в месяц.

Здесь "КМБ-1" означает пептид, закодированный последовательностью ДНК, включающей последовательность IDN : I.

"КМБ-2" означает пептид, закодированный последовательностью ДНК, включающей последовательность ID N:2.

"КМБ-3" означает пептид, закодированный последовательностью ДНК, включающей последовательность 1D N:3.

"КМБ-4" означает пептид, закодированный последовательностью ДНК, включающей последовательность ID N:4.

"КМБ-5" означает пептид, закодированный последовательностью ДНК, включающей последовательность ID N:5.

"КМБ-6" означает пептид,закодированный последовательностью ДНК, включающей последовательность ID N:6.

"КМБ-7" означает пептид, закодированный последовательностью ДНК, включающей последовательность ID N:7.

Обозначения A, T, G и C относятся к нуклеотидам, содержащим аденин, тимин, гуанин и цитозин, соответственно.

Остеоиндуктивный экстракт
Другим компонентом изобретения является остеоиндуктивный экстракт. Остеоиндуктивный экстракт означает химический экстракт кости, включающий один или несколько разных костных морфогенетических белков, включающих, но не ограниченных до КМБ-1, КМБ-2, КМБ-3, КМБ-4, КМБ-5, КМБ-6 и КМБ-7, в которых каждый КМБ имеет молекулярный вес от 28,000 до 40,000 дальтонов. Диапазон молекулярного веса от 28,000 до 40,000 дальтонов подразумевает вес димера КМБ. Предпочтительно, молекулярный вес димера составляет от 30,000 до 34,000 дальтонов. Димер КМБ включает два мономера, каждый с молекулярным весом от 14,000 до 20,000 дальтонов, а лучше от 15,000 до 17,000 дальтонов.

Предпочтительным способом получения остеондуктивного экстракта является следующий.

Снять кожу на лодыжках крысы Лонга-Эванса, возраст которой 7-8 недель (Charles River laboratories, Wilmington, MA). Удалить обе большеберцовые кости и поместить в холодную воду. Промыть кость дистиллированной водой, чтобы удалить некоторую ткань (другую ткань, кроме костной). Дать высохнуть кости на воздухе. Перемолоть кости в смесителе Остерайзера (Oster Commercial Mil-waukee, WI), с водой и льдом. Установить смеситель на скорость "разжижение" и продолжить добавлять кость. Дать размолотому материалу несколько минут для осаждения. Перелить жидкий слой. Поместить твердый слой на перемешивающую тарелку и добавить для промывания дистиллированной воды. Продолжать промывание до тех пор, пока промывные воды не станут чистыми. Когда дистиллированная вода станет чистой, добавить лед и перемешать. Добавить 1 мл 1 мМ фенилметилсульфонил фторида (ФМСФ). Промывать 1 ч с частым добавлением льда. Сделать второе промывание. Поместить образец в ванну с ледяной водой на перемешивающую тарелку. Обезжирить абсолютным этанолом, затем дважды обезжирить этиловым эфиром. Распределить костный материал на стеклянных чашках Петри. Дать высохнуть на воздухе костным фрагментам в течение ночи.

Взвесить костные фрагменты. Используя сито /из стандартной серии сит США, Newark Wire Cloth Co. Newark, N.J., сито # 40 задерживает частицы более 425 μм и сито # 170 задерживает частицы более 90 μм), изолировать костные частицы в пределах 90 -425 μм. Размолоть частицы больше 425 μм в микромельнице (Science ware Bel - Art Products, Pequannock, NJ) в течение 1 мин с добавлением сухого льда к костным частицам для поддержания материала холодным. Повторить просеивание и этапы измельчения в микромельнице с частицами, больше чем 425 μм до тех пор, пока общий выход не будет более 2/3 от первоначального веса кости. Выдерживать частицы при 40^oC до следующего этапа. Взвесить изолированные частицы.

На каждый грамм частиц добавить 25 мл 0,6N HCl. Усиленно перемешивать при 4^oC 2 ч. После 2 ч прекратить перемешивание и дать частицам осесть. Декантировать HCl. Добавить свежую 0,6N HCl и вновь перемешивать 2 ч. Декантировать HCl и в третий раз добавить 0,6N HCl и перемешивать еще 2 ч. Декантировать HCl и промыть дистиллированной водой. С использованием лакмусовой бумажки проверить pH воды на отсутствие HCl. Продолжить промывание дистиллированной водой до тех пор, пока pH не будет между 5 и 5,5. Промыть костные частицы этанолом 3 раза. Взболтать, дать осадиться и удалить всплывающий слой. Промыть костные частицы этиловым эфиром 3 раза, как описано выше. Высушить в течение ночи на стеклянных тарелках. Высушенные костные частицы считаются "кислотными деминерализованными костными частицами".

Кислотные деминерализованные костные частицы обезбелковываются следующим образом. Взвесить материал после высушивания. На каждый грамм материала добавить раствор из 30 мл 4 M гуанидин-HCl, 10 мМ Трис и 1,0 мМ ФМСФ, pH 6,4 к костному материалу в химическом стакане. Экстрагировать 16 ч при 4^oC с энергичным перемешиванием. После 16-ти часовой экстракции прекратить перемешивание и дать материалу осадиться. Отлить раствор гуанидина и оставить. Экстрагировать материал во второй раз 6 - 7 ч с использованием свежего раствора гуанидин-HCl. После экстракции отлить раствор и соединить с ранее оставленным. Костные частицы теперь деминерализованы и обезбелкованы.

Диализировать оставленный раствор гуанидин-HCl на дистиллированной H₂O при 40^oC с использованием 50 мм диализных трубок (с отсечением молекулярного веса 3500). После диализа лиофилизировать материал и повторно растворить лиофилизированный материал в 4 М мочевины - 0,05 М Трис-0,1 M NaCl, pH 7,4. Смешать растворимый материал в конической центрифужной трубке с гепарин-агарозой и смешивать всю ночь на ротаторе при 40^oC. Налить шлам гепарин-агарозы в колонну. Промыть одним объемом колонны буфером из 4 М мочевины, 0,05 М Трис, 0,1 М NaCl, pH 7,4. Собрать фракцию. Промыть 3 объемами колонны буфером из 4 М мочевины, 0,05 М Трис, 0,2 М NaCl, pH 7,4. Отделить материал 3 объемами колонны раствором 4 М мочевины, 0,05 М Трис, 0,75 М NaCl, pH 7,4. Концентрировать этот образец в 50 мл концентратора Амикона (Amicon Corp., Danvers, MA) с фильтром (отсечение 10,000 молекулярный вес) до 4-5 мл. Провести анализ на концентрацию протеина с использованием БЦК (бицинхониновой кислоты) - реагента анализа на белок (Pierce, Rockford, IL) и диализировать (диализные трубки с отсечением молекулярного веса 3500) в 4 М гуанидин - 0,01 М Трис, pH 7,4. Загрузить материал на колонну Sephacry l S-200 и собрать фракции. Фракции, содержащие основные пиковые количества белка, диализируются на 1 М уксусной кислоте и определяются на активность.

Активные фракции из гелевой фильтрации соединяются и диализируются на трех сменах 6 М мочевины, 25 мМ ацетата натрия, pH 4,6. Диализат закладывается на колонну карбоксиметилсефарозы (КМ-сефарозы), уравновешенную тем же буфером. Колонна промывается 6 М мочевины, 25 мМ ацетата натрия, pH 4,6 и элюируется с использованием 0 - 0,5 М NaCl градиента. Фракция анализируются на концентрацию белка и гелевый электрофорез с натрийдодецилсульфатом. Активность в семи фракциях до и после начала пика белка вместе подвергается дальнейшей очистке.

Соединенные КМ-сефарозные фракции диализируются три раза 24 ч каждая на 1%-ной уксусной кислоте. Диализат лиофилизируется до сухости и гранулы белка растворяются в 30 мл 6 М мочевины, 0,5 М NaCl, 25 мМ фосфата натрия, pH 7,4. Образец подается на колонну хелатирующей сефарозы, загруженную цинком и уравновешенную вышеуказанным буфером. Колонна промывается этим буфером и затем элюируется градиентом из 6 М мочевины, 0,5 М NaCl, 25 мМ фосфата натрия, pH 7,4, до градиента из 6 М мочевины, 0,5 М NaCl, 25 мМ ацетата натрия, pH 4,6. Аликвоты каждой фракции помечаются ¹²⁵I и анализируются SDS гелевым электрофорезом. Аликвоты (100 μл) каждой фракции соединяются с 400 μл промывного буфера, диализируются на 1%-ной уксусной кислоте и оцениваются на активность. Высокоочищенные пептиды с молекулярным весом в диапазоне 25 - 40 кд тестируются в пробах на костную индуктивность.

Безопасное и эффективное количество остеоиндуктивного экстракта дозируется в комбинации с соединением витамина D. Для систематического лечения дозировка остеоиндуктивного экстракта включает по меньшей мере один КМБ в количестве от 1 пг до 100 μг, предпочтительно от 1 нг до 10 μг, еще предпочтительнее от 10 нг до 2,5 μг.

Для регионального лечения дозировка остеоиндуктивного экстракта включает, по меньшей мере, один КМБ в количестве от 1 пг до 100 μг, лучше от 1,5 до 90 μг, еще лучше от 1,8 до 75 μг, от 2,0 до 50 μг, от 2,2 до 25 μг, от 2,3 до 10 μг, а лучше всего - от 2,5 до 5 μг. Наилучшая дозировка составляет по меньшей мере, около 2,5 μг.

Лечение желательно проводить курсом от 1 дня до 6-ти месячного периода, лучше от 1 недели до 1 месяца. Частота приема может быть от 1 раза в месяц до 5 раз в день, лучше от 1 раза в неделю до 1 раза в день.

Фармацевтически приемлемый носитель
Соединение витамина D, остеоиндуктивный экстракт или КМБ могут назначаться с фармацевтически приемлемым носителем. Термин фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель означает один или несколько совместных твердых или жидких наполняющих разбавителей или капсулирующих веществ, которые приемлемы для назначения человеку или животному. Термин совместимый, используемый здесь, означает, что компоненты фармацевтических композиций способны смешиваться с соединением объекта изобретения и друг с другом таким образом, который ни в коей мере не повлияет на снижение фармацевтической активности фармацевтической композиции в условиях обычного применения, фармацевтически приемлемые носители безусловно должны быть высоко чистыми и нетоксичными, чтобы их можно было использовать для назначения человеку или животному.

Некоторые примеры веществ, используемых в качестве фармацевтически приемлемых носителей, включают сахара, такие, как лактоза, глюкоза, и сахароза; крахмалы, такие, как кукурузный и картофельный крахмал; целлюлозу и ее производные, такие, как натрий карбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза, ацетат целлюлозы; порошковый трагакант; солод; желатин; тальк; стеариновую кислоту; стеарат магния; сульфат кальция; растительные масла, такие, как арахисовое масло, хлопковое, кунжутное, оливковое, кукурузное масла и масло какао; полиолы, такие, как пропиленгликоль, глицерин, сорбитол, маннитол и полиэтиленгликоль; сахар; алгиновую кислоту; свободную от пирогенов воду; изотонический раствор; фосфатные буферные растворы; масло какао (основа для шариков); эмульгаторы, такие, как Tweens; а также другие нетоксичные совместимые вещества, используемые в фармацевтических препаратах. Могут также присутствовать смачивающие агенты и присадки, такие, как натрийлаурилсульфат, а также окрашивающие, ароматизирующие агенты, наполнители, таблетирующие агенты, стабилизаторы, антиокислители и консерванты.

В композиции настоящего изобретения в фармацевтически приемлемый носитель можно включить другие совместимые фармацевтические добавки и активные вещества (например, пилюли NSAI; болеутоляющие, мышечные релаксанты). Например, в фармацевтически приемлемый носитель можно ввести известные препараты местного обезболивания (т.е. бензил, спирт, новокаин, лидокаин).

Дополнительные примеры носителей включают коллаген, деминерализованные костные частицы, керамические и металлические имплантанты, коллагеновые мембраны и костные трансплантаты (изогенные или аллогенные).

Выбор фармацевтически приемлемого носителя, используемого вместе с соединениями настоящего изобретения, определяется способом назначения соединения. Предпочтительными способами введения соединений настоящего изобретения являются инъекции, оральный прием через рот и местно-оральный через носовую полость или комбинированный (т.е. остеоиндуктивный экстракт в инъекциях и соединениях витамина D - орально).

Если соединение предназначено для инъекций, лучшим фармацевтически приемлемым носителем будет стерильный физиологический раствор. Подходящие фармацевтически приемлемые носители для орального применения местно - через ротовую полость включают носители для таблеток и капсул, верхне-орального носителя для паст, гелей и жидкостей, для назначения через нос - носители, приемлемые для капель, спреев, ингаляций и порошков.

Может использоваться отдельный фармацевтически приемлемый носитель вместе с каждым активным компонентом настоящего изобретения или один фармацевтически приемлемый носитель может использоваться вместе со смесью активных компонентов настоящего изобретения. В любом случае носитель используется в концентрации, достаточной, чтобы уложиться в нужный размер лекарственной формы. Носители в общем могут включать от 0,1 до 99,99999% по весу фармацевтических композиций настоящего изобретения, предпочтительно от 50 до 99,999 %, более предпочтительно от 75 до 99,9 %.

Конкретные носители для орального и инъекционного применения описаны в следующих патентах США, приведенных в описании в качестве ссылок: патент США N 4401663 Buckwalter et al, выданный 30 августа 1983 г.; патент 4424205 La-Hann et al, выданный 31 января 1984 г.; патент N 4443473, Buckwalter et al, выданный 12 апреля 1984 г.; патент 4493848 LaHann et al, выданный 15 января 1984 г. Отдельные фармацевтические композиции настоящего изобретения приведены в примерах далее.

Фармацевтически приемлемые носители для получения единичных дозированных форм для орального применения, верхне-орального, в нос и в инъекциях хорошо известны в области техники. Их выбор будет зависеть от вторичных соображений, таких, как вкус, стоимость, стабильность при хранении, что неважно для целей настоящего изобретения и оставляется на усмотрение специалиста. Более подробно фармацевтически приемлемые носители, приемлемые для композиции настоящего изобретения, описывается ниже.

А. Форма для орального применения
Соединение витамина D обычно назначают в оральной форме. Используются различные оральные дозированные формы, включая такие твердые формы как таблетки, капсулы, гранулы, порошки и микрокапсулы, Эти оральные формы содержат безопасное и эффективное количество, обычно не менее 5%, а предпочтительно от 1 до 10% соединения настоящего изобретения. Таблетки могут быть в прессованной форме, с покрытием для всасывания в кишечнике, с покрытием сахаром или пленкой и содержать присадки, смазывающие вещества, ПАВ, разбавители, разлагающие агенты, красители, ароматизирующие агенты, консерванты, рассасывающие агенты. Жидкие оральные дозированные формы включают водные и неводные растворы, эмульсии, суспензии, растворы и/или суспензии, восстановленные из выделяющих газ гранул, содержащие подходящие растворители, консерванты, эмульгирующие агенты, суспендирующие агенты, разбавители, подсластители, рассасывающие агенты, красители и ароматизирующие агенты. Предпочтительные носители для орального назначения включают желатин и пропиленгликоль. Конкретные примеры фармацевтически приемлемых носителей и наполнителей, использующих в приготовлении форм оральной дозировки, содержащих соединения настоящего изобретения, описаны в патенте США 3903297 Robert, выданном 2 сентября 1975 г. и включенном сюда как ссылка. Технология и композиции для приготовления твердых оральных форм описаны в Marshall, "Solid Oral Dosade Forms," Modern Pharmaceutics т. 7 (Banker ahd Rhotes, editors), 359-427 (1979). Технология и композиции для приготовления таблеток (прессованных, формованных), капсул (твердых и мягких желатиновых) и пилюлей описаны в Remington's Pharmaceutical Science (Arthur Osol editor), 1553-1593 (1980), включенном сюда ссылкой.

B. Местно-оральные дозированные формы
Носитель для местно-орального применения, используемый здесь, означает носитель для интересующего компонента композиции, которая назначается в оральную полость, находится там в течение определенного времени, и затем большая часть ее не проглатывается, а выполаскивается или выплевывается. Такие композиции включают зубные пасты, зубные гели, зубные порошки, полоскания для рта, освежители рта, профилактические пасты, растворы в лечении зубов, биогели или другие подобные продукты.

Компоненты местно-орального носителя совместимы друг с другом и другими компонентами, особенно с соединением витамина D и остеоиндуктивным экстрактом или КМБ, используемыми в оральной композиции объекта изобретения. Таким образом предпочтительные носители для местно-орального применения обеспечивают желаемые характеристики для зубных паст, зубных гелей, зубных порошков, полосканий для рта, освежителей рта, профилактических паст, растворов, применяемых в лечении зубов и пр. Носители местно-орального применения включают компоненты, используемые обычно в таких композициях, которые хорошо известны практикам. Такие компоненты включают, но не ограничены противокариозными агентами, агентами, препятствующими образованию налета, зубных камней, ПАВ, ароматизирующих, подслащающих агентов, связующих агентов, сгущающих, буферных, цветовых агентов и пигментов, увлажнителей, консервантов, этанола и воды.

Предпочтительные композиции объекта изобретения - в виде паст. Компоненты таких зубных паст обычно включают вещество, шлифующее зубную эмаль (от 10 до 50%), ПАВ (от 0,5 до 10%), сгуститель (от 0,1 до 5%), увлажнитель (от 10 до 55%), ароматизирующий агент (от 0,04 до 2%), подсластитель (от 0,1 до 3%), краситель (от 0,01 до 0,5%) и воду (от 2 до 45%). Такие зубные пасты могут также включать один или несколько противокариозных агентов (от 0,05 до 0,3% в виде ионов фтористого соединения), агентов, препятствующих образованию камней (от 0,1 до 13%), и агентов, препятствующих образованию налета (от 0,1 до 5%).

Другие предпочтительные композиции объекта изобретения - полоскания для рта и освежители ротовой полости в виде аэрозоля. Компоненты таких продуктов включают воду (от 45 до 95%), этанол (от 0 до 25%), увлажнитель (от 0 до 50%), ПАВ (от 0,01 до 7%), ароматизирующий агент (отдушку) от 0,04 до 2%, подсластитель (от 0,1 до 3%) и краситель (от 0,001 до 0,5%). Такие полоскания и освежители также могут содержать один или несколько противокариозных агентов (от 0,05 до 0,3% в виде ионов фторида), агентов, препятствующих образованию камней (от 0,01 до 3%) и налета (от 0,1 до 5%).

Еще одни предпочтительные композиции объекта изобретения - растворы для зубов. Компоненты таких растворов обычно включают воду (от 90 до 99%), консервант (от 0,01 до 0,5%), сгуститель (от 0 до 5%), отдушку (от 0,04 до 2%), подсластитель (от 0,1 до 3%) и ПАВ (от 0 до 5%).

"Местно-оральный носитель" также обозначает здесь волокна, накладки или трубки, которые можно пропитать активными компонентами настоящего изобретения и ввести или имплантировать в периодонтальную пазуху. Такие композиции объекта изобретения легко получить, будучи специалистом данной области, используя значения и технологию, раскрытые здесь с помощью следующих ссылок: U.S. Patent N 4,666,891, выданный to Golub, McNamara & Ramamurthy on May 19, 1987; European Patent Application N 244,118 A1 in the name of Baker, опубликованный on November 4, 1987; European Patent Application N 286,802 A2 in the name of Kametaka, Miyazaki, Hayashi, Handa & Kameda, опубликованный October 19, 1988; Addy, M., L. Rawle, R. Hardley, H. Newman & J. Coventry, "The development and in vitro evaluation of acrylic strips and dialysis tubing for local drug delivery", Journal of Periodontology, Vol. 53 (1982), pp. 693 - 698; Goodson, J.M., A.D. Haffajce & S.S. Socransky, "Periodontal therapy by Local Delivery of tetracycline", Journal of Clinical Periodontology, Vol. 6 (1979), pp 83 - 92, Goodson, J., D. Holdorow, R. Dunn, P. Hogan & S. Dunham, "Monolithic tetracycline containing fibers for controlled delivery to periodontal pockets", Journal of Periodontology, Vol. 54 (1983), pp. 575 - 579; Dunn, R. , J. Gibson, B. Perkins, J. Goodson & L.Laufe, "Fibrous delivery systems for antimicrobial agents", Polymer Science and Technology, Vol. 32 (1985), pp. 47 - 59; Dunn, R., J. Gibson, B. Perkins, J. Goodson & L. Laufe, "Fibrous delivery systems for antimicrobial agents", Polymer Material Science Engineering, Vol. 51 (1984), pp. 28 - 31; Olanoff, L. & J. Anderson, "Controlled release of tetracycline - III; A-physiological pharmacokinetic model of the pregnant rat", Journal of Pharmacokineties and Biopharmaceuties, Vol. 8 (1980), pp. 599 - 620; Elkayam, A. Strabholz, A. Soskolne, M. Sela & L. Golub, "Sustained release device contaning Minocycline for threatment of periodontal disease", Sournal of Controlled Release, Vol. 7 (1988). pp. 231 - 236; and Goodson, J., "Multicenter evalution of tetracycline fiber therapy. I. Experimental Desing", Journal of Dental Reserch, Vol. 68 (1989), p. 197; and reference cited therein.

Формы дозировки для инъекций
Дозировка активных соединений изобретения для инъекций, которая и безопасна и эффективна в целях обеспечения активного костного роста, зависит от конкретного состояния, требующего лечения, степени заболевания, длительности лечения, специфической смеси используемых компонентов, концентрации и других факторов, зависящих от знаний и опыта врача, и должна быть совместима с разумным коэффициентом пользы, риска, который связан с применением любого лекарственного соединения. Кроме того, более низкие дозировки используются, когда необходим только локальный или незначительный рост кости, а более высокие - при общем росте или росте крупных костей.

Способы и материалы для приготовления инъекционных препаратов можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences, 17 изд. 1985 г., гл. 85, стр. 1518, раскрытие которых вводится сюда ссылкой полностью. Лучше, если инъекционная композиция представляет собой водный раствор.

Водные раствора предпочтительно состоят из воды (от 80 до 99,999%), подходящего растворителя, разных типов кислот и противомикробного агента. Некоторые солюбилизаторы являются известными. Примерами таких солюбилизаторов являются следующие: соединения мочевины (например, мочевина, уретан); ПАВ (например, Tweens; Spans; деоксихолат натрия и Pluronics)/; целлюлозные агенты (например, карбоксиметилцеллюлоза); карбогидраты (например, сорбитол, маннитол); витамин B (например, никотинамид); производные ксантина; и спирты (например, бензиловый спирт). Примеры используемых кислот включают: глюкуроновую, галактуроновую, фумаровую, гентизиновую, уксусную, лимонную и лактобионовую кислоты. Могут использоваться следующие типы противомикробных агентов: фенилртутный нитрит, тимерозал, бензетоний хлорид, бензалконий хлорид, фенол, крезол и хлорбутанол. Допускается включение местных анастезирующих веществ (например, бензиловый спирт, новокаин, лидокаин).

Остеоиндуктивный экстракт и КМБ лучше вводить в инъекционной форме.

Следующие примеры далее описывают и демонстрируют предпочтительные варианты в объеме настоящего изобретения. Примеры даются исключительно в целях иллюстрации и никоим образом не ограничивают настоящее изобретение, так как возможны многие вариации в объеме изобретения.

Пример 1. Композиция для инъекции, включающая остеоиндуктивный экстракт и оральная композиция, включающая 1,25-дигидрокси витамин D₃ для лечения перелома кости готовятся соединением следующих компонентов с использованием традиционной технологии смешивания.

КБМ композиции
Компонент - Композиция, мас.%
КМБ-1 - 0,04
NaCl - 0,90
Стерильная вода - q.s.

Итого - 100,00
1,25-Дигидрокси витамин D₃ композиция
Компонент - Композиция, мас.%
1,25-дигидрокси витамин D₃ - 0,01
Кукурузный крахмал - 18,49
Лактоза - 63,00
Тальк - 18,00
Стеариновая кислота - 0,50
Итого - 100,00
Инъекция 0,1 см³ композиции КМБ делается в место перелома в период репозиции перелома и после этого ежедневно. 100 μг композиции 1,25-дигидрокси витамина D₃ назначается орально за 24 ч до восстановления перелома и после этого ежедневно. КМБ и 1,25-дигидрокси витамин D₃ назначаются до достижения нужной степени выздоровления, примерно на протяжении недельного периода.

Пример 2.

Инъекционная композиция для лечения костных переломов готовится соединением следующих компонентов с использованием традиционно технологии смешивания.

Компонент - Композиция, мас.%
КМБ-2 - 0,04
25-гидрокси витамин D₂ - 0,01
NaCl - 0,09
Стерильная вода для инъекции - q.s.

Итого - 100,00
0,1 см³ композиции вводится в место заживления перелома, потом инъекции делаются раз в день до нужного восстановления.

Пример 3
Композиция для индуцирования роста кости готовится соединением следующих компонентов с использованием традиционной технологии смешивания.

Компонент - Композиция мас.%
КМБ-3 - 0,04
1,25-Дигидрокси витамин D₂ - 0,01
NaCl - 0,90
Стерильная вода - q.s.

Итого - 100,00
0,1 см³ композиции на см² площади поверхности хирургически восстановленной кости накладывается непосредственно на поверхность кости.

Пример 4
Композиция для ускорения заживления и обеспечения более сильной связи между собственной костью и искусственным протезом готовится соединением следующих компонентов с использованием традиционной техники смешивания.

Компонент - Композиция мас.%
КМБ-1 - 0,04
КМБ-2 - 0,04
КМБ-4 - 0,04
24,25-дигидрокси витамин D₃ - 0,01
NaCl - 0,90
Стерильная вода - q.s.

Итого - 100,00
0,1 см³ площади поверхности собственной кости наносится на участок кости рядом с протезом.

Пример 5 Композиция носителя для местно-орального применения в периодонтальной терапии готовится соединением следующих компонентов, с использованием традиционной технологии смешивания.

Компонент - Композиция мас.%
КМБ-2 - 0,04
NaCl - 0,90
Стерильная вода - q.s.

Итого - 100,00
После подготовки пациента обычной периодонтальной хирургической терапии 0,1 см³ композиции на открытый зуб наносится на место операции. Мягкие ткани зашиваются и закрывают место операции. Это лечение эффективно в восстановлении альвеолярной и опорной кости при утрате периодонта в результате заболевания.

Пример 6
Композиция для инъекции, включающая КМБ 2, 3, 4 и 5 и оральная композиция, содержащая 1,25-дигидрокси витамин D₃ для лечения остеопороза готовится соединением следующих компонентов с использованием традиционной техники смешивания.

Композиция остеоиндуктивного экстракта
Компонент - Композиция мас.%
КМБ-2 - 0,001
КМБ-3 - 0,001
КМБ-4 - 0,001
КМБ-5 - 0,001
NaCl - 0,900
Стерильная вода - q.s.

Итого - 100,000
Композиция 1,25-дигидрокси витамина D₃
Компонент - Композиция, мас.%
1,25-дигидрокси витамин D₃ - 0,01
Кукурузный крахмал - 18,49
Лактоза - 63,00
Тальк - 18,00
Стеариновая кислота - 0,50
Итого - 100,00
1 см³ композиции КМБ вводится внутривенно ежедневно. 50 мг композиции 1,25-дигидрокси витамин D₃ назначается орально в течение 1 ч после инъекции остеоиндуктивного экстракта и после этого ежедневно. Остеоиндуктивный экстракт и 1,25-дигидрокси витамин D₃ назначаются в течение 7-дневного курса.

Пример 7
Композиция для индуцирования костного роста при плохом заживлении перелома готовится соединением следующих компонентов с использованием традиционной техники смешивания. Используемый здесь "перелом с осложненными последствиями" означает перелом с плохим заживлением.

Компонент - Композиция, мас.%
КМБ-4 - 0,004
1,25-дигидрокси витамин D₃ - 0,01
Кислотные деминерализованные костные частицы - 90,000
NaCl 0,900
Стерильная вода для инъекции - q.s.

Итого - 100,000
Во время репозиции перелома достаточное количество вышеуказанной композиции накладывается непосредственно на место заживления, заполняя дефицит кости.

Ниже приведены последовательности (число последовательностей 7).

Характеристика последовательности N 2:
длина: - 1547 пар азотных оснований
тип: - нуклеиновая кислота
цепь: - двойная
топология: - линейная
тип молекулы: - кДНК
Характеристика последовательностей N 3:
длина: - 1774 пар азотных оснований
тип: - нуклеиновая кислота
цепь: - двойная
тип молекулы: - кДНК
Характеристика последовательности N 4:
длина: - 1751 пар азотных оснований
тип: - нуклеиновая кислота
цепь: - двойная
топология: - линейная
тип молекулы: - кДНК
Характеристика последовательности N 5:
длина - 2153 пары азотных оснований
тип: - нуклеиновая кислота
цепь: - двойная
топология: - линейная
тип молекулы: - кДНК
Характеристика последовательности N 6:
длина: - 2923 пары азотных оснований
тип: - нуклеиновая кислота
цепь: - двойная
топология: - линейная
тип молекулы: - кДНК
Характеристика последовательности N 7
длина: - 1448 пар азотных соединений
тип: - нуклеиновая кислота
цепь: - двойная
топология: - линейная
тип молекулы: - кДНК
Изобретение описано со ссылкой на некоторые предпочтительные варианты и примеры. Для специалистов очевидны другие варианты, поэтому изобретение не ограничивается данными вариантами и примерами, а ограничено только предлагаемым объемом формулы.

Использование: в медицине, в области остеоиндукции. Сущность изобретения: композиция для генерации роста кости содержит в разовой дозе соединение витамина D количестве от 1 нг до 1 мг и один или несколько костных морфогенетических белков (КМБ), выбранных из группы, включающей КМБ-1, КМБ-2, КМБ-3, КМБ-4, КМБ-5, КМБ-6, КМБ-7 в количестве от 1 пг до 100 мкг, и фармацевтически приемлемый носитель. Способ генерации роста кости включает введение композиции, состоящей из витамина D, одного или нескольких КМБ и фармацевтически приемлемого носителя. Введение новой композиции в организм млекопитающего обеспечивает рост кости. 2 с и 11 з.п. ф-лы.

1. Композиция для генерации роста кости, содержащая соединение витамина D и фармацевтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит один или несколько костных морфогенетических белков (КМБ), выбранных из группы, включающей КМБ-1, КМБ-2, КМБ-3, КМБ-4, КМБ-5, КМБ-6, КМБ-7, при следующем соотношении активных ингредиентов в разовой дозе:
Соединение витамина D - 1 нг - 1 мг
Костный морфогенетический белок - 1 пг - 100 мкг
2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что соединение витамина D является выбранным из группы, состоящей из витамина D₂, витамина D₃, 1-α-гидрокси витамина D₃, 1-α-фтор витамина D₃, 3-деокси-1,25-дигидрокси витамина D₃, 25-гидрокси-5,6-транс витамина D₃, 25-гидрокси витамина D₂, 25-гидрокси витамина D₃, 1,25-дигидрокси витамина D₂, 24,25-дигидрокси витамина D₂, 24,25-дигидрокси витамина D₃ и 1,25-дигидрокси витамина D₃. 3. Композиция по п.2, отличающаяся тем, что указанным соединением витамина D является 1,25-дигидрокси витамин D₃. 4. Композиция по п.3, отличающаяся тем, что фармацевтическим приемлемым носителем является жидкий носитель для инъекций. 5. Композиция по п.3, отличающаяся тем, что фармацевтически приемлемым носителем является жидкий носитель для применения через носовую полость. 6. Композиция по любому из пп. 1 - 5, отличающаяся тем, что костный морфогенетический белок является остеоиндуктивным экстрактом, полученным экстракцией из костного материала млекопитающего и включающим один или более КМБ, выбранных из группы, состоящей из КМБ-1, КМБ-2, КМБ-3, КМБ-4, КМБ-5, КМБ-6 и КМБ-7. 7. Способ генерации роста кости путем введения композиции на основе активного ингредиента, отличающийся тем, что для введения используют композицию по любому из пп.1 - 6. 8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что активные ингредиенты берут в следующем соотношении: соединение витамина D 30 нг - 10 мкг, костный морфогенетический белок по меньшей мере 2,5 мкг. 9. Способ по п.8, отличающийся тем, что соединение витамина D выбирают из группы, состоящей из витамина D₂, витамина D₃, 1-α-гидрокси витамина D₃, 1-α-фтор витамина D₃, 3-деокси-1,25- дигидрокси витамина D₃, 25-гидрокси-5,6-транс витамина D₃, 25-гидрокси витамина D₂, 25-гидрокси витамина D₃, 1,25-дигидрокси витамина D₂, 24,25-дигидрокси витамина D₂, 24,25-дигидрокси витамина D₃ и 1,25-дигидрокси витамина D₃. 10. Способ по п.9, отличающийся тем, что в качестве соединения витамина D используют 1,25-дигидрокси витамин D₃. 11. Способ по п. 9, отличающийся тем, что соединение витамина D и КМБ вводят в виде инъекции. 12. Способ по п. 9, отличающийся тем, что соединение витамина D и КМБ вводят через носовую полость. 13. Способ по любому из пп.7 - 12, отличающийся тем, что в качестве костного морфологического белка используют остеоиндуктивный экстракт, полученный экстракцией из костного материала млекопитающего и включающий один или более КМБ, выбранных из группы, состоящей из КМБ-1, КМБ-2, КМБ-3, КМБ-4, КМБ-5, КМБ-6 и КМБ-7.