ПРОИЗВОДНЫЕ ДИФТОРПЕНТАПЕПТИДОВ ИЛИ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫЕ СОЛИ ИЛИ ГИДРАТЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТЬЮ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ Российский патент 1999 года по МПК C07K7/06 A61K38/08 

Изобретение относится к новым пептидным производным, которые являются пригодными для применения в качестве противовоспалительных средств.

Известны некоторые полипептидные производные, обладающие различной биологической активностью. Такие полипептидные производные раскрываются в следующих ссылках:
патент США N 4242329, выданный 30 декабря 1980 г Claeson, Simonsson & Arielly;
патент США N 4316889, выданный 23 февраля 1982 Bajusz, Hasenohrl Bagdy;
патент США N 4399065, выданный 16 августа 1983 Bajusz, Hasenohrl, Barabas & Bagdy;
патент США N 4401594, выданный 30 августа 1983 Umezawa, Takeuchi, Aoyagi, Ishii, Saino & Someno;
патент США N 4478745, выданный 23 октября 1984 Bajusz, Hasenohrl, Barabas & Bagdy:
патент США N4528133, выданный 9 июля 1985 Kasafirek, Fric, Slaby & Robalova;
патент США N 4596789, выданный 24 июня 1986 Dutta, Stein, Trainor & Wildonger;
патент США N 4623639, выданный 18 ноября 1986 Hassall, Johnson & Roberts;
патент США N 4703036, выданный 27 октября 1987 Bajusz, Hasenohrl, Bagdy, Barabas, Dioszegi, Fittler, Jozsa, Horvath & Jozst;
патент США N 4880780, выданный 14 ноября 1989 Trainor & Stein;
патент США N 4883863, выданный 28 ноября Abe, Yaginuma, Nagasawa & Kuroiwa;
патент США N 4902781, выданный 20 февраля 1990 Mizoue, Okazaki, Hanada, Omura & Amamoto;
патент США N 4923890, выданный 8 мая 1990 Trainor & Stein;
патент США N 5066643, выданный 19 ноября 1991 Abeles & Gelb;
заявка на патент PCT N 84/00365 Galpin & Wilby, опубликованная 2 февраля 1984;
заявка на патент PCT N 87/02675 Hoover, опубликованная 7 мая 1987;
заявка на патент Японии N 47-30618 Toray, Inds. Inc, опубликованная 9 ноября 1972;
заявка на патент Японии N 57-145846 Mitsubishi Chem. Ind. KK, опубликованная 19 июля 1974;
заявка на патент Японии N 58-164563 Daiichi Kagaku Yaku, опубликованная 25 марта 1982;
заявка на Европейский патент N 0275101 Merrell Dow Pharmaceuticals. Inc. , опубликованная 20 июля 1988; Aoyagi, Miyata, Nanbo, Kojirna, Matsuzaki, Ishizuka, Takeuchi & Umezawa, "Biological Activities of Leupeptins", The Iournal of Antibiotik, Vol.XXII No. 11 (Nov. 1969), pp. 558-568; Bajusz, Barabas, Tolnay, Szell & Bagdy, "Inhibition of Thrombin and Trypsin by Tripeptide Aldehydes", Int. j. Peptide Protein Res., Vol. 12 (1978), pp. 217-221; Gaal, Bacsy & Rappay, "Cationic Ferritin Uptake by Cultured Anterior Pituitary Cells Treated with the Proteinase Inhibitor, BOC-DPhe-Phe-Lys-H", Histochemistry, Vol. 88 (1988), pp. 401-406; Makara, Rappay, Garamvolgyi, Nagy, Danko & Bajusz, "The Tripeptide Aldehyde, Boc-DPhe-Phe-Lysinal, is a Novel Ca2⁺ Channel Inhibitor in Pituitary Cells", European Journal of Pharmacology, Vol. 151 (1988), pp. 147-149; Nagy, Makara, Horvath, Rappay, Kurcz & Bajusz, "Tripeptide Aldehyde Protease Inhibitors May Depress in Vitro Prolactin and Growth Hormone Release", Endocrinology, Vol. 116, No. 4 (1985), pp. 1426-1432; Rappay, Makara, Bajusz & Nagy, "Various Proteinase Inhibitors Decrease Prolactin and Growth Hormone Release by Anterior Pituitary Cells", Life Sciences, Vol. 36 (1985), pp. 549- 555.

Целью настоящего изобретения является предложить новые дифторпентапептидные производные, которые применимы в качестве противовоспалительных средств.

Другой целью настоящего изобретения является предложить новые дифторпентапептидные производные, которые уменьшают резорбцию костей и/или гетеротопическое формирование костей, связанное с ревматоидным артритом.

Целью настоящего изобретения является также предложить новые фармацевтические композиции, содержащие определенные дифторпентапептидные производные.

Также целью настоящего изобретения является предложить способы лечения заболеваний, которые характеризуются воспалением, с использованием соединений, о которых идет речь.

Настоящее изобретение включает противовоспалительные соединения, имеющие следующую формулу:

в которой: (a) - X выбирают из группы, состоящей из циклического алкила, содержащего от 4 до 15 атомов углерода: разветвленного алкила, по крайней мере с двумя разветвлениями, содержащего от 6 до 15 атомов углерода; и арилалкила, содержащего от 6 до 15 атомов углерода;
(b) n представляет собой целое число от 0 до 2;
(c) - V выбирают из группы, состоящей из - OC(O)-, N(Q)C(O)-, -N(Q)C(S)-, -C(O), -SO₂- и P(O)(OH)-;
(d) - Q представляет собой водород; или линейную или разветвленную алкильную цепь, насыщенную или ненасыщенную с 1 или 2 двойными связями, содержащую от 1 до 6 атомов углерода; или -Q и -X связаны ковалентно с образованием циклической группы, которая содержит азот, с которым связан -Q, и которая содержит от 5 до 20 атомов углерода;
(e) Z представляет собой -O- или -NH-; когда V представляет собой -OC(O)-, -Z- представляет собой -NH-;
(f) -R¹ выбирают из группы, состоящей из линейного или разветвленного алкила, насыщенного или ненасыщенного с 1 или 2 двойными связями, содержащего от 1 до 6 атомов углерода; циклического алкила, насыщенного или ненасыщенного с 1 или 2 двойными связями, содержащего от 3 до 10 атомов углерода; и арилалкила, в котором алифатическая часть является насыщенной и содержит 1 или 2 атома углерода; и атом углерода, связанный с -R¹, находится в D- или в L-конфигурации;
(g) -R² выбирают из группы, состоящей из линейного или разветвленного алкила, насыщенного или ненасыщенного с 1 или 2 двойными связями, содержащего от 1 до 6 атомов углерода, циклического алкила, насыщенного или ненасыщенного с 1 или 2 двойными связями, содержащего от 3 до 10 атомов углерода; и арилалкила, в котором алифатическая часть является насыщенной и содержит 1 или 2 атома углерода; и атом углерода, связанный с -R², находится в L- конфигурации:
(h) -R³ представляет собой -(CH₂)_m-A-NH₂ или -(CH₂)_m-AB-C(NH₂)= NH, где m является целым числом от 1 до 6, -A- является ковалентной связью или п-фенилом или п-циклогексилом, и -B- представляет собой ковалентную связь или -NH-; и атом углерода, связанный с -R³, находится в L-конфигурации:
(i) -R⁴ выбирают из группы, состоящей из линейного или разветвленного алкила, насыщенного или ненасыщенного с 1 или 2 двойными связями, содержащего от 1 до 6 атомов углерода; циклического алкила, насыщенного или ненасыщенного с 1 или 2 двойными связями, содержащего от 3 до 10 атомов углерода; и арилалкила, в котором алифатическая часть является насыщенной и содержит 1 или 2 атома углерода; и атом углерода, связанный с - R⁴, находится в L-конфигурации;
(j) -R⁵ представляет собой - (CH₂)_m-A-NH₂ или -(CH₂)_m-AB-C(NH₂) = NH, где m является целым числом от 1 до 6, -A- представляет собой ковалентную связь или п-фенил или п-циклогексил, и -B- представляет собой ковалентную связь или -NH-; и атом углерода, связанный с -R⁵, находится в D- или L-конфигурации, и
(k) -Y представляет собой водород или метил.

Настоящее изобретение также включает фармацевтические композиции, содержащие вышеупомянутые соединения, и способы лечения воспаления или боли с применением таких соединений и композиций.

Термин "алкил", который здесь используется, если нет иных указаний, означает углеродсодержащие линейные, разветвленные или замкнутые в цикл цепи, которые могут быть насыщенными или ненасыщенными, и которые могут быть незамещенными или содержать заместители. "Циклический алкил", который здесь упоминается, может содержать все или только часть общего числа указанных атомов углерода, присутствующих в алкильной группе в самом циклическом кольце. Циклический алкил включает моноциклоалкил, бициклоалкил и/или трициклоалкил.

Предпочтительными алкилами являются алкилы, отмеченные в настоящем абзаце, если в конкретных примерах не упоминаются иные группы. Предпочтительными являются насыщенные алкилы. Предпочтительными являются незамещенные алкилы. Предпочтительные заместители для алкильной группы выбирают среди галогена, аминогруппы, гидроксильной группы, алкоксигруппы, цианогруппы, нитрогруппы, арила и трифторметила. Используемый здесь термин "алкоксигруппа" означает -O-алкил. Предпочтительно, чтобы замещенный алкил представлял собой моно-, ди- или тризамещенный алкил в, особенности - монозамещенный.

Термин "арил", который используется здесь, если нет иных указаний, означает арильное кольцо, которое может быть незамещенным или содержать заместители. Предпочтительным является арил, о котором упоминается в настоящем абзаце, если нет иных указаний в конкретных примерах. Предпочтительными арилами являются фенил и нафтил, особенно - фенил. Предпочтительными арилами являются моно-, ди-, тризамещенные или незамещенные арилы; более предпочтительными являются монозамещенные или незамещенные арилы, в особенности - незамещенные. Предпочтительные заместители включают алкил, галоген, аминогруппу, гидроксигруппу, алкоксигруппу, цианогруппу, нитрогруппу и трифторметил.

Термин "арилалкил", который здесь используется, означает алкил, замещенный арилом. Предпочтительным арилалкилом является арилметил.

Термин "алифатические", который используется здесь, означает углеродсодержащие с разомкнутой цепью части арилалкилов.

В настоящем описании используются указанные далее аббревиатуры. Аббревиатуры для аминокислот могут относиться к самим аминокислотам, но чаще - к аминокислотным группам, которые являются составными частями пептида или производного пептида.

Arg - аргинил
Orn - орнитил
Leu - лейцил
Gly - глицил
трет-Bug - трет-бутилглицил
Phe - фенилаланил
Adoc - адамантилоксикарбонил
Z - бензилоксикарбонил
Boc - трет-бутоксикарбонил
DECP - диэтилцианофосфонат
Me - метил
Et - этил
TEA - триэтиламин
ДМФА - диметилформамид
TFA - трифторацетат
ipa - изопропанол
Bn - бензил
Lys - лизил
Ac - ацетил
ТСХ - тонкослойная хроматография
TSA - толуолсульфоновая кислота
ТГФ - тетрагидрофуран
HOBt - гидроксибензотриазол
DCC - дициклогексилкарбодиимид
DIPEA - N,N-диизопропилэтиламин
Chg - циклогексилглицил
Cha - циклогексилаланил
Nal - нафтилаланил
Trp - триптофил
Adg - адамантилглицил
p-Gphe - р-гуанидинофенилаланил
3,5-Dmadoc - 3,5-диметиладамантилоксикарбонил
eBroc - эндоборнилциклокарбонил
Noc - нафтилоксикарбонил
Moc - ментилоксикарбонил
Ad - адамантоил
Fmoc - флуоренилметоксикарбонил
Ada - адамантанацетил
Adac - адамантиламинокарбонил
Mnoc - морфолинил
Norad - норадамантоил
Hadoc - гомоадамантилоксикарбонил
Foc - фенхилоксикарбонил
Imoc - изоментилоксикарбонил
Ipoc - изопинокамфанилоксикарбонил
AC - ацетил
ДМФА - диметилформамид
ЖХВР - жидкостная хроматография высокого разрешения
Новые противовоспалительные соединения настоящего изобретения являются соединениями, имеющими следующую химическую формулу:

(I)
В формуле I n представляет собой целое число от 0 до 2; предпочтительно n представляет собой 0 или 1. В формуле I R¹ выбирают из группы, состоящей из линейного или разветвленного алкила, насыщенного или ненасыщенного с 1 или 2 двойными связями, содержащего от 1 до 6 атомов углерода; циклического алкила, насыщенного или ненасыщенного с 1 или 2 двойными связями, содержащего от 3 до 10 атомов углерода; и арилалкила, причем алифатическая часть является насыщенной и содержит 1 или 2 атома углерода. Предпочтительным R¹ является насыщенный алкил. Предпочтительными алкилами являются ненасыщенный алкил или арилалкил, в особенности бензил или нафтилметилен. Предпочтительными циклическими алкилами являются (циклический C₃-C₈) /предпочтительнее (C₅-C₆) /-метил или адамантилметил. Предпочтительным R¹ является гидрофобная группа, предпочтительно с гидрофобностью, сконцентрированной вблизи атома углерода, к которому привязывается R¹. Конкретные примеры R¹ включают трет-бутил, 1,1-диметилпропил, изопропил, изобутил, втор-бутил, неопентил, циклогексил, циклогексилметил, адамантил, адамантилметил, бензил, нафтилметилен; наиболее предпочтительным R¹ является трет-бутил.

В формуле I углерод, к которому присоединяется R¹, находится либо в D-, либо в L-, предпочтительно в D- конфигурации. Структура -Z- CH(R¹) -C(O)- является аминокислотной частью (далее - -AA1-), когда -Z- представляет собой -NH; предпочтительные аминокислотные группы для -AA1- включают трет-Bug, Val, Ile, Leu, Chg, Cha, Phe, Nal, Trp и Arg; более предпочтительными являются трет-Bug, Val и Ile, наиболее предпочтительными -AA1- является трет-Bug.

В формуле I R² выбирают из группы, состоящей из линейного или разветвленного алкила, насыщенного или ненасыщенного с 1 или 2 двойными связями, содержащего от 1 до 6 атомов углерода; циклического алкила, насыщенного или ненасыщенного с 1 или 2 двойными связями, содержащего от 3 до 10 атомов углерода; и аралкила, причем алифатическая часть является насыщенной и содержит 1 или 2 атома углерода. Предпочтительный разветвленный или циклический алкил является насыщенным. Предпочтительные разветвленные или циклические алкилы являются незамещенными. Предпочтительный разветвленный алкил содержит от 3 до 5 атомов углерода; наиболее предпочтительным разветвленным алкилом является трет-бутил. Предпочтительный циклический алкил имеет кольцо C₃-C₇, предпочтительное C₅-C₆ связанное с метиленом, этиленом или н-пропиленом (предпочтительно с метиленом или этиленом, предпочтительнее с метиленом, который связан с атомом углерода в формуле I, к которому присоединяется R². Предпочтительными арилалкилами являются бензил, п-гидроксибензил и нафтилметилен. Более предпочтительный R² выбирают среди изопропила, изобутила, втор-бутила, циклогексилметила, бензила и нафтилметилена; наиболее предпочтительным является бензил.

В формуле I атом углерода, к которому присоединяется R², находится в D- или L-конфигурации. Структура -NH-CH(R²)- C(O)- представляет собой аминокислотную группу (далее -AA² -): предпочтительные для /AA²- аминокислотные группы включают Phe, Nal, Cha, Leu и Ile; наиболее предпочтительной -AA² - является Phe.

В формуле I R³ представляет собой -(CH₂)_m-A-NH₂ или - (CH₂)_m -A-B-C(NH₂) = NH, где m является целым числом от 1 до 6, -A представляет собой ковалентную связь, п-фенил или п-циклогексил, и -B- представляет собой ковалентную связь или - NH-. Когда -A представляет собой ковалентную связь, m предпочтительно равен 2-5, предпочтительнее 2-4, и еще предпочтительнее 3 или 4. Когда -A- представляет собой п-фенил или п-циклогексил, m предпочтительно равен 1-4, предпочтительнее 1-3, еще предпочтительнее 1. Предпочтительно, -A- представляет собой ковалентную связь. -B- предпочтительно представляет собой -NH-. Более предпочтительным R³ является 3-гуанидино-н-пропил или 4-амино-н-бутил.

В формуле I углерод, к которому присоединяется R³, находится в D- или L-конфигурации, предпочтительно в L-конфигурации. Структура -NH-CH(R³)-C(O)- является аминокислотной группой (далее -AA³-); предпочтительные для -AA³- аминокислотные группы включают Arg, Lys, гомо-Arg, п-амидино-phe, п-амино-phe и п-Gphe; наиболее предпочтительной -AA³ является Lys.

В формуле I R⁴ выбирают из группы, состоящей из линейного или разветвленного алкила, насыщенного или ненасыщенного с 1 или 2 двойными связями, содержащего от 1 до 6 атомов углерода; циклического алкила, насыщенного или ненасыщенного с 1 или 2 двойными связями, содержащего от 3 до 10 атомов углерода; и арилалкила, причем алифатическая часть является насыщенной и содержит 1 или 2 атома углерода. Предпочтительными разветвленным или циклическим алкилом являются насыщенные и незамещенные. Предпочтительный разветвленный алкил содержит от 3 до 5 атомов углерода; наиболее предпочтительным разветвленным алкилом является изобутил. Предпочтительный циклический алкил содержит кольцо C₃-C₇, предпочтительнее - C₅-C₆ связанное с метиленом, этиленом или н-пропиленом (предпочтительно с метиленом или этиленом, предпочтительнее с метиленом), который присоединяется к атому углерода в формуле I, к которому присоединяется R⁴. Предпочтительными арилалкилами являются бензил, п-гидроксибензил и нафтилметилен. Более предпочтительный R⁴ выбирают среди изопропила, изобутила, втор-бутила, циклогексилметила, бензила и нафтилметилена; наиболее предпочтительным является бензил.

В формуле I атом углерода, к которому присоединяется R⁴, находится в D- или L-конфигурации. Структура -NH-CH-(R⁴)-C(O)- является аминокислотной группой (далее -AA⁴ -); предпочтительные аминокислотные группы для - AA⁴ - включают Phe, Nal,Cha, Leu и Ile; наиболее предпочтительный -AA⁴- является Leu.

В формуле I R⁵ является -(CH₂)_m -A-NH₂ или -(CH₂)_m-A-B-C(NH₂) - NH, где m является целым числом от 1 до 6, -A- представляет собой ковалентную связь, п-фенил или п-циклогексил, и -B- является ковалентной связью или -NH-. Когда -A- представляет собой ковалентную связь, m предпочтительно равен 2-5, предпочтительнее 2-4, еще предпочтительнее 3 или 4. Когда -A- представляет собой п-фенил или п-циклогексил, m предпочтительно равен 1-4, предпочтительнее 1-3, еще предпочтительнее 1. Предпочтительно -A- представляет собой ковалентную связь, -B- предпочтительно представляет собой -NH-. Более предпочтительным R⁵ является 3-гуанидино-н-пропил или 4-амино-н-бутил.

В формуле I атом углерода, к которому присоединяется R⁵, находится в D- или L-конфигурации, предпочтительно в L-конфигурации. Структура -NH-CH(R⁵)-C(O) - является аминокислотной группой (далее -AA⁵); предпочтительные аминокислотные группы для -AA⁵ включают Arg, гомо-Arg, Lys, п-амидино-Phe, п-амино-Phe и п-Gphe; наиболее предпочтительной -AA⁵ - является Arg.

В формуле I -Y представляет собой водород или метил. В формуле I -Z- представляет собой -O- или -NH-. Предпочтительным -Z- является -NH-. В формуле I -V- выбирают среди -OC(O)-, -N(Q)C(O)-, -N(Q)C(S)-, -C(O)-, -SO₂ и P(O) (OH). Предпочтительный -V- выбирают среди OC(O)-N(Q)C(O)-,-N(Q)C(S)- и -C(O)-. Более предпочтительным -V является -OC(O)- или -N(Q)C(O)-. Наиболее предпочтительным -V- является -OC(O)-. Когда -V- представляет собой -OC(O)-, -Z- представляет собой -NH-.

В формуле I -X выбирают среди циклического алкила, содержащего от 4 до 15 атомов углерода; разветвленного алкила, содержащего от 6 до 15 атомов углерода и по крайней мере два разветвления; и арила, содержащего от 6 до 15 атомов углерода. Предпочтительный -X содержит от 6 до 12 атомов углерода; более предпочтительный -X содержит от 8 до 10 атомов углерода. Предпочтительные алкильные -X являются насыщенными. Предпочтительный -X является незамещенный или замещенным незамещенным алкилом или арилом. Предочтительный циклический алкил представляет собой моноциклоалкил, бициклоалкил или трициклоалкил. Более предпочтительными являются бициклоалкил и трициклоалкил, в особенности - трициклоалкил. Предпочтительный циклоалкил содержит в каждом цикле 5 или 6 атомов углерода, предпочтительнее 6 атомов углерода. Весьма предпочтительным -X является адамантил. Предпочтительными -X-арилами являются флуоренил, нафтил и фенил, незамещенные или замещенные алкилом. Особенно предпочтительным арилом для -X являются нафтил и флуоренил. Когда -X представляет собой арил или циклический алкил, n предпочтительно равен 1.

В формуле I, когда -V- представляет собой -N(Q)C(O)- или N(Q)C(S)-, -Q выбирают среди водорода; линейного или разветвленного алкила, насыщенного или ненасыщенного с 1 или 2 двойными связями, содержащего от 1 до 6 атомов углерода; или -Q и -X соединяются ковалентно, образуя циклическую группу, которая включает атом азота, к которому-Q, и которая содержит от 5 до 20 атомов углерода. Предпочтительная - Q-X содержит от 6 до 15 атомов углерода; более предпочтительная -Q-X содержит от 8 до 12 атомов углерода. Предпочтительная -Q-X является незамещенной или замещенной незамещенным алкилом или арилом. Предпочтительная циклическая группа

является моноциклической, бициклической или трициклической; более предпочтительна моноциклическая. Наиболее предпочтительным -Q является водород.

В формуле I предпочтительная группа X-(CH₂)_n-V- (далее X'-) включает Adoc, Ad, Fmoc, Adac, Mnoc, Norad, Hadoc, Foc, Imoc, Ipoc, 3,5-Dmadoc, eBroc, Noc и Мос; более предпочтительными X' являются Adoc, Ipoc и eBroc; наиболее предпочтительным -X' является Adoc.

Предпочтительные противовоспалительные соединения настоящего изобретения включают фармацевтически приемлемые соли вышеупомянутых соединений. Особенно предпочтительные соли включают соли присоединения, образованные сильными кислотами и вышеупомянутыми соединениями. Особенно предпочтительными являются такие соли присоединения, в которых либо -R³, либо -R⁵, либо оба являются протонированными, что приводит в результате к положительному заряду на группах -R³ и -R⁵. Предпочтительные соединения настоящего изобретения часто ассоциируются с одной или несколькими молекулами воды, образуя гидраты. Предпочтительные противовоспалительные соединения настоящего изобретения включают соединения А, приведенные в конце описания.

Формирование композиции
Фармацневтические композиции настоящего изобретения включают безопасное и эффективное количество дифторпентапептидного производного, определение которому дается выше, и фармацевтически приемлемый носитель. Такие композиции содержат, как правило, от 0,1 до 95 мас.% дифторпентапептидного производного, предпочтительно от 1% до 90%, предпочтительнее от 5% до 75%.

Термин "фармацевтически приемлемый носитель", который используется здесь, как относительно к одному или нескольким совместимым твердым или жидким наполнителям- разбавителям или инкапсулирующим веществам, которые являются подходящими для введения человеку или более низшим животным. Термин "совместимые", который здесь используется, означает, что компоненты фармацевтических композиций способны смешиваться с дифторпентапептидными производными настоящего изобретения и друг с другом таким образом, что не происходит взаимодействия, которое существенно снижало бы фармацевтическую эффективность композиции в условиях ее применения. Фармацевтически приемлемы носители, конечно, должны быть достаточно высокочистыми и достаточно малотоксичными, чтобы считать их подходящими для введения человеку или более низшему животному, которых лечат.

Примерами веществ, которые могут служить в качестве фармацевтически приемлемых носителей, являются:
сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; целлюлоза и ее производные, такие как натрийкарбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза и ацетат целлюлозы; измельченный трагакант; солод; желатин; тальк; стеариновая кислота; стеарат магния; сульфат кальция; растительные масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, сезамное масло, оливковое масло, кукурузное масло и масло какао;
полиолы, такие как пропиленгликоль, глицерин, сорбит, маннит и полиэтиленгликоль;
алгиновая кислота; свободная от пирогена вода; изотонический физиологический раствор; фосфатные буферные растворы; полутвердое масло-какао (основа для суппозиториев); эмульгаторы, такие как TweensR; смачиватели и смазки, такие как лаурил-сульфат натрия; красители; вкусовые добавки; стабилизаторы; антиоксиданты; консерванты;
а также другие нетоксичные совместимые вещества, применяемые в фармацевтических формулировках. Другие совместимые фармацевтические добавки и активные ингредиенты могут быть включены в фармацевтически приемлемый носитель для применения в композициях настоящего изобретения.

Фармацевтически приемлемый носитель, используемый в сочетании с дифторпентапептидным производным настоящего изобретения, применяют в концентрации, достаточной для обеспечения нужного на практике объема и соотношения при дозировке. Вообще, фармацевтически приемлемый носитель, как правило, составляет от 5 мас.% до 99,9 мас.% фармацевтической композиции настоящего изобретения, предпочтительно -10 % до 99%, предпочтительнее от 25% до 95%.

Разовые дозировки дифторпентапептидных производных настоящего изобретения в фармацевтических композициях составляют, как правило, от 1 мг до 1000 мг, предпочтительно от 50 мг до 800 мг, предпочтительнее от 100 мг до 500 мг.

Выбор фармацевтически приемлемого носителя для использования в сочетании с дифторпентапептидными производными настоящего изобретения определяется путем, которым должен вводиться активный ингредиент. Предпочтительными способами введения активных ингредиентов по настоящему изобретению являются инъекции, прием внутрь, ингаляции и местное нанесение.

Способы и материалы для производства инъецируемых формулировок можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., 1985, Chapter 85, p. 1518 и эта работа во всей полноте включена в настоящее в качестве ссылки. Обычно предлагаются три типа инъецируемых лекарственных форм:
(1) водные растворы, (2) неводные растворы; и (3) эмульсии.

Инъецируемые лекарственные формы обычно содержат от 0,001 мг/мл до 10 мг/мл, предпочтительно от 0,4 мг/мл до 0,6 мг/мл соединения настоящего изобретения. Предлагаемые композиции инъецируемых лекарственных форм настоящего изобретения включают стерильные водные растворы или эмульсии с pH от 3 до 8 (предпочтительнее с pH от 4 до 6).

Предпочтительные фармацевтические носители, в которых дифторпентапептидные производные по настоящему изобретению могут вводиться путем приема внутрь, представляют собой протеиновые микрокапсулы и раскрываются в следующих патентах:
патент США N 4895725, выданный 23 января 1990 Kantor, Steiner & Pack;
патент США N 4925673, выданный 15 мая 1990 Steiner & Rosen; патент США N 4976968, выданный 11 декабря 1990 Steiner; и патент США N 4983402, выданный 8 января 1991 Steiner;
все четыре патента включены в настоящее в качестве ссылок.

Способы осуществления противовоспалительного действия и аналгезии
Настоящее изобретение также включает в себя способы создания противовоспалительного действия и/или аналгезии у человека или более низших животных через введение человеку или более низшему животному, нуждающемуся в таком лечении, безопасного и эффективного количества дифторпентапептидного производного настоящего изобретения. Это количество может быть дано в разовой дозе или в виде многих повторных доз в курсе лечения. Хотя для снижения воспаления и аналгезии эффективными являются и более высокие дозы, чем упомянутые здесь, следует принять предосторожности в отношении некоторых пациентов, чтобы предупредить вредные побочные действия. Дифторпептапептидные производные и композиции настоящего изобретения могут использоваться для снижения воспаления при различных нарушениях в более глубоких структурах, мышцах, сумках, сухожилиях и сосудах, связанных с заболеванием и травмой, для лечения и предупреждения боли.

Предпочтительными способами введения дифторпентапептидных производных настоящего изобретения являются инъекция, прием внутрь, ингаляция и местное введение. Специфические способы введения включают, без ограничения, пероральный прием внутрь, инъекцию, такую как внутримышечная, внутривенная, интраперитонеальная, интрадермальная и подкожная инъекция; и местное нанесение, такое как трансдермальное, пероральное, через слизистую и под язык.

Термин "безопасное и эффективное количество", который используется здесь, означает количество дифторпентапептидного производного или композиции, вполне достаточное для заметного позитивного изменения состояния, которое лечится, но достаточно малое, чтобы не вызывать серьезных побочных эффектов (при разумном соотношении польза/риск) в пределах исследованных медицинских показаний. Безопасное и эффективное количество дифторпентапептидного производного или композиции будет изменяться в зависимости от конкретного состояния, которое лечится, от возраста и физического состояния пациента, которого лечат, от тяжести состояния, продолжительности лечения, от вида сопутствующей терапии, конкретного используемого активного ингредиента, конкретно используемого фармацевтически приемлемого носителя и подобных факторов, в соответствии со знаниями и заключениями лечащего врача.

Предпочтительные суточные дозы дифторпентапептидных производных по настоящему изобретению лежат в интервале от 0,1 мг на 1 кг массы тела до 500 мг/кг, предпочтительнее от 1 мг/кг до 100 мг/кг, еще предпочтительнее от 2 мг/кг до 50 мг/кг. Могут быть введения от 1 до 4 разовых доз в сутки, предпочтительнее от 2 до 3 разовых доз в сутки. Предпочтительное количество дифторпентапептидных производных, вводимых путем инъекции, составляет от 0,1 мг/кг/сутки до 50 мг/кг/сутки, предпочтительнее от 1 мг/кг/сутки до 10 мг/кг/сутки. Предпочтительное количество дифторпентапептидных производных, вводимых перорально - приемом внутрь - составляет от 1 мг/кг/сутки до 500 мг/кг/сутки, предпочтительнее от 5 мг/кг/сутки до 100 мг/кг/сутки. Предпочтительное количество дифторпентапептидных производных, вводимых путем ингаляции, составляет от 0,1 мг/кг/сутки до 500 мг/кг/сутки, предпочтительнее от 5 мг/кг/сутки до 100 мг/кг/сутки. Предпочтительное количество дифторпентапептидных производных, вводимых локально, составляет от 1 мг/кг/сутки до 500 мг/кг/сутки, предпочтительнее от 50 мг/кг/сутки до 250 мг/кг/сутки.

Способы синтеза соединения
Следующие далее, не являющиеся ограничивающими, схемы и примеры демонстрируют способы синтеза дифторпентапептидных производных настоящего изобретения.

1. Синтез Adoc-D-трет-Bug-Phe-Lys-C(O)-CF₂-C(O)-Leu-Arg-OMe-Adoc-D-Tpeт-Bug-OH
К раствору 48,8 г (0,370) D-трет-бутилглицина в 371 мл 1N NaOH и 159 мл диоксана при 0^oC добавляют 33,9 г (0,40 М) NaHCO, а затем по каплям добавляют раствор 80,8 г (0,40 М) адамантилфторформиата в 371 мл диоксана в течение 3 ч. Смесь перемешивают при этой температуре в течение 0,5 ч и удаляют охлаждающую баню. Раствор перемешивают в течение 3 ч и доводят pH до 10 1N NaOH. Этот раствор экстрагируют EtOAc и оставшуюся водную фазу подкисляют до pH 3. Этот подкисленный раствор экстрагируют EtOAc, сушат и удаляют растворитель, получают 118 г продукта, который является однородным по ТСХ (94/5/1 - CH₂Cl₂/ipa/AcOH), Rf = 0,90.

Adoc-D-трет-Bug-Phe-OBn
К раствору 115 г (0,37 М) Adoc-D-трет-Bug-OH и L-Phe-OBn. п-TSA (0,36 М) в 1 л CH₂Cl₂ добавляют 74,6 г (0,74 М) TEA, а затем добавляют 60,8 г (0,37 М) DECP и полученный в результате раствор перемешивают в течение ночи. Удаляют растворитель, и продукт снова растворяют в EtOAc и последовательно промывают соляным раствором, 0,4 N HCl и насыщенным NaHCO. Раствор сушат и растворитель удаляют. Остаток хроматографируют на кремнеземе и получают 186 г продукта. ТСХ (85/15 - гексан/EtOAc), Rf = 0,40.

Adokc-D-трет-Bug-Phe-OH (1)
В сухую колбу в атмосфере азота загружают 34,0 г 5% Pd-на-угле. Колбу охлаждают до -78^oC и добавляют 200 мл сухого обезгаженного MeOH. К этой суспензии добавляют 8,8 мл муравьиной кислоты (88%), а затем добавляют смесь 36,0 г Adok-D-трет-Bug-Phe-OBn (0,066 М) в 100 мл MeOH и 4,4 мл муравьиной кислоты. Удаляют охлаждающую баню и суспензию перемешивают в течение 2 ч. После этого добавляют еще 200 мл 4,4% муравьиной кислоты в MeOH, суспензию перемешивают в течение ночи. Смесь фильтруют через фильтровальную бумагу из стекловолокна в атмосфере азота. Фильтрат снова фильтруют через слой целита для удаления всех следов катализатора. Удаляют растворитель и получают 17,3 г продукта.

α-Boc,Σ-Z-Lys-C(OH)-CF₂-C(O)-OEt. (3)
К раствору 79,2 г (1,21 М) активированного цикла в 0,600 л ТГФ добавляют 2,36 г этилбромдифторацетата и раствор доводят до кипения с обратным холодильником. Вскоре после того, как начнется кипение, добавляют по каплям смесь 236 г (1,16 М) этилбромдифторацетата и 176 г (0,485 М) (2) в 1,80 л ТГФ. Синтез (2) см. в Burhart. J., N. Peet and P. Bey, "a Novel Method for the Preparation of Peptidyl a-Keto Esters", Tetrahedron Letters, Vol. 31, No. 10, pp. 1385-1388 (1990). Раствор кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч, охлаждают и гасят насыщенным KHSO₄. Погашенный продукт разбавляют EtOAc, и последовательно промывают насыщенным KHSO₄, насыщенные NaHCO₃ и соляным раствором. После этого раствор осушают MgSO₄, удаляют растворитель. Остаток хроматографируют на кремнеземе и получают 68,0 г чистого продукта. Rf = 0,20, 75/25 - гексан/EtOAc.

α-Boc,Σ-Z-Lys-C(OH)-CF₂-C(O)-ONa. (4)
К раствору 1,00 г (0,002 М) (3) в 10 мл MeOH добавляют 2 мл 1N NaOH, и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч и растворитель удаляют. Остаток растворяют в небольшом количестве воды и молочного вида раствор экстрагируют эфиром. Из водной фазы удаляют воду и остаток тщательно сушат с помощью вакуумного насоса в течение 24 ч. Извлекают 0,069 г продукта.

К раствору 0,500 г (1,03 ммоль) (4) и 0,470 г (1,26 ммоль) Ley-Arg(NO₂)-OMe•HCl в 30 ДМФА добавляют в один прием 0,019 г (1,4 ммоль) HOBt. Вслед за этим добавляют по каплям 0,260 г (1,26 ммоль) DCC в 3 мл ДМФА. Наконец, добавляют 0,003 мл DIPEA и раствор перемешивают в течение 48 ч. Удаляют под вакуумом ДМФА и остаток растворяют в EtOAc. Раствор переносят в делительную воронку и промывают 0,1N HCl, насыщенным раствором NaHCO₃ и соляным раствором. Этилацетатный слой сушат над MgSO₄, фильтруют и удаляют растворитель. Остаток хроматографируют на кремнеземе и получают 0,420 г продукта. Rf = 0,68, 90/10 - CH₂Cl₂/MeOH.

Σ-Z-Lys-C(OH)-CF₂-C(O)-Leu-Arg(NO₂)-OMe•HCl.
К раствору (5) (17,3 г, 0,022 М) в 200 мл диоксана добавляют 666,8 мл (0,220 М) 3,3 М HCl в диоксане и смесь перемешивают в течение 1 ч. Затем добавляют еще 5 мл 3,3 М HCl в диоксане и раствор перемешивают еще в течение 0,25 ч. Растворитель удаляют и остаток помещают под действием вакуумного насоса. Твердый остаток обрабатывают эфиром в атмосфере N₂ и фильтруют. Извлекают 16,0 г белого твердого вещества.

Adoc-D-трет-Bug-Phe-Lys (Z) -C(OH)-CF₂-C(O)-Leu-Arg(NO₂)-OMe (6)
К раствору 16,0 г остатка от предыдущей реакции (0,022 М) и 11,1 г (1) (0,024 М) в 300 мл CH₂Cl₂ добавляют по каплям 6,69 мл (0,048 М) TEA, а затем добавляют по каплям 3,64 мл (0,024 М) DECP. Раствор перемешивают в течение ночи и удаляют растворитель. Остаток растворяют в EtOAc и промывают раствор последовательно 0,1N HCl, насыщенным раствором NaHCO₃ и соляным раствором. Раствор сушат, удаляют растворитель и получают 26,6 г продукта, который хроматографируют на кремнеземе, после чего получают 12,7 г чистого продукта. Rf = 0,85, 90/10 -CH₂Cl₂/MeOH.

Adoc-D-трет-Bug-Phe-Lys(Z)-C(O)CF₂C(O)-Leu-Arg (NO₂)-OMe.

К суспензии 14,3 г (0,034 М) периодинана Десса-Мартина (Dess-Martin periodinane) в 1,15 л CH₂Cl₂ добавляют 0,910 мл сухого пиридина, после чего добавляют по каплям 12,7 г (0,011 М) (6) в 2,3 л CH₂Cl₂. Получение периодинана Десса-Мартина см. в Dess, D., and J. Martin, Journal of Organic Chemistry, Vol. 48, pp 4155-4156 (1983). Суспензию перемешивают в течение 2 ч. Добавляют 58,7 г (0,24 М) Na₂S₂O₄ в насыщенном NaHCO₃ и получающийся в результате раствор перемешивают в течение 0,5 ч. Фазы разделяют и водную экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические фазы сушат и растворитель удаляют; получают 13,9 продукта, который используют в последующей реакции без очистки. (Rf = 0,30, 95/5 - CH₂Cl₂/MеOH).

Adoc-D-трет-Bug-Phe-Lys-C(O)CF₂C(O)-Leu-Arg-OMe (7)
К раствору 13,4 г (0,012 М) остатка от предыдущей реакции в 200 мл сухого ДМФА добавляют 6 г палладиевой черни, и получающуюся в результате смесь обезгаживают в течение 0,5 ч. К этой суспензии добавляют 8 мл 3,3 М HCl в диоксане. Реакционную смесь помещают на качалку Паара/Рааr shaker/ и гидрируют в течение 6 ч. Суспензию фильтруют через целит и удаляют растворитель. Остаток хроматографируют ЖХВР с обращенной фазой (CH₃CN/H₂O), получают 6,5 г продукта. Схемы реакций см. в конце описания.

II. Синтез Adoc-D-трет-Bug-Phe-Arg-C(O)-CF₂-C(O)-Ala-Arg-OMe
Adoc-D-трет-Bug-OH,
К раствору 48,8 г (0,370 M) D-трет-бутилглицина в 371 мл 1N NaOH и 159 мл диоксана при 0^oC добавляют в течение 3 ч 33,9 г (0,40 М) адаментилфторформиата в 371 мл диоксана. Смесь перемешивают при этой температуре в течение 0,5 ч и охлаждающую баню удаляют. Раствор перемешивают в течение 3 ч и доводят pH до 10 1N NaOH. Этот раствор экстрагируют EtOAc и оставшуюся водную фазу подкисляют до pH 3. Этот кислый раствор экстрагируют EtOAc, сушат, удаляют растворитель и получают 118 г продукта, который является однородным по ТСХ (94/5/1 - CH₂Cl₂/изо-pa/AсOH). Rf= 0,90.

Adoc-D-трет-Bug-Phe-OBn.

К раствору 115 г (0,37 M) Adoc-D-трет-But-OH и L-Phe-OBn. п-TSA (0,36 M) в 1 л CH₂Cl₂ добавляют 74,6 г (0,74 M) TEA, затем добавляют 60,8 г (0,37 M) DECP и получающийся в результате раствор перемешивают в течение ночи. Растворитель удаляют, продукт снова растворяют в EtOAc и последовательно промывают раствор соляным раствором, 0,4N HCl и насыщенным раствором NaHCO₃. Раствор сушат и растворитель удаляют. Остаток хроматографируют на кремнеземе, получают 186 г продукта. ТСХ (85/15 - гексан/EtOAc), Rf = 0,40.

Adoc-D-трет-Bug-Phe-OH (1)
В сухую колбу в атмосфере азота загружают 34,0 г 5% Pd-на-угле. Колбу охлаждают до -78^oC, добавляют 200 мл сухого обезгаженного MeOH. К этой суспензии добавляют 8,8 мл муравьиной кислоты (88%), после чего добавляют смесь 36,0 г Adoc-D-трет-Bug-Phe-OBn (0,066 М) в 100 мл MeOH и 4,4 муравьиной кислоты. Убирают охлаждающую баню, и суспензию перемешивают в течение 2 ч. После этого добавляют еще 200 мл 4,4% муравьиной кислоты в MeOH и суспензию перемешивают в течение ночи. Смесь фильтруют через фильтр из бумаги из стекловолокна в атмосфере азота. Фильтрат фильтруют повторно уже через слой целита, чтобы удалить все следы катализатора. После удаления растворителя получают 17,3 г продукта.

α-Boc,Σ-Z-Lys-C(OH)-CF₂-C(O)-OEt.(3).
К раствору 79,2 г (1,21 М) активированного цинка в 0,600 л ТГФ добавляют 2,36 г этилбромдифторацетата и раствор доводят до кипения с обратным холодильником. Как только начнется кипение, добавляют по каплям смесь 236 г (1,16 М) этилбромдифторацетата и 176 г (0,485 М) 2 в 1,80 л ТГФ. Раствор кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч, охлаждают и гасят насыщенным раствором KHSO₄. Погашенный продукт разбавляют EtOAc и последовательно промывают насыщенным раствором KHSO₄, насыщенным раствором NaHCO₃ и соляным раствором. После этого осуществляют сушку над MgSO₄ и удаляют растворитель. Остаток хроматографируют на кремнеземе и получают 68,0 г чистого продукта. Rf = 0,20, 75/25 - гексан/EtOAc.

α-Boc,Σ-Z-Lys-C(OH)-CF₂-C(O)-ONa.(4).
К раствору 1,00 г (0,002 М) 3 в 10 мл MeOH добавляют 2 мл 1N NaOH. Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч и растворитель удаляют. Остаток растворяют в небольшом количестве воды и молокоподобный раствор экстрагируют эфиром. Из водной фазы удаляют воду и остаток тщательно высушивают под действием вакуумного насоса в течение 24 ч. Извлекают 0,069 г продукта.

К раствору 0,500 г (1,03 ммоль) 4 и 0,470 г (1,26 ммоль) Leu-Arg(NO₂)-OMe•HCl в 30 мл DMB добавляют 0,019 г (1,26 ммоль) HOBt в один прием. Вслед за этим добавляют по каплям 0,260 г (1,26 ммоль) DCC в 3 мл ДМФА. Наконец, добавляют 0,003 мл DIPEA и раствор перемешивают в течение 48 ч. ДМФА удаляют под вакуумом и остаток растворяют в EtOAc. Раствор переносят в делительную воронку и промывают 0,1N HCl, насыщенным раствором NaHCO₃ и соляным раствором. Этилацетатный слой сушат над MgSO₄, фильтруют и удаляют растворитель. Остаток хроматографируют на силикагеле и получают 0,420 г продукта. Rf = 0,68, 90/10 - CH₂Cl₂/MeOH.

К раствору 5 (17,3 г, 0,022 М) в 200 мл диоксана добавляют 66,8 мл (0,220 М) 3,3 М HCl в диоксане. Смесь перемешивают в течение 1 ч. Затем добавляют еще 5 мл 3,3 М HCl в диоксане и раствор перемешивают еще в течение 0,25 ч. Удаляют растворитель и остаток помещают под действие вакуумного насоса. Твердый остаток обрабатывают эфиром в атмосфере N₂ и фильтруют. Извлекают 16,0 г белого твердого вещества.

Adoc-D-трет-Bug-Phe-Lys(Z)-C(OH)-CH₂-C())-Leu-Arg (NO₂)-OMe (6)
К раствору 16,0 г сырого продукта предыдущей реакции (0,022 М) и 11,1 г 1 (0,024 М) в 300 мл CH₂Cl₂ добавляют по каплям 6,69 мл (0,048 М) TEA, после чего добавляют по каплям 3,64 мл (0,024 М) DECP. Раствор перемешивают в течение ночи и удаляют растворитель. Остаток растворяют в EtOAc и раствор последовательно промывают 0,1N HCl, насыщенным раствором NaHCO₃ и соляным раствором. Раствор сушат, удаляют растворитель и получают 26,6 г, которые хроматографируют на кремнеземе, и получают 12,6 г чистого продукта. Rf = 0,85, 90/10 - CH₂Cl₂/MeOH
Adoc-D-трет-Bug-Phe-Lys(Z)-C(O)CF₂C(O)-Ley-Arg(NO₂)-OMe.

К раствору 14,3 г (0,034 М) периодинана Десса-Мартина в 1,15 л CH₂Cl₂ добавляют 0,910 мл сухого пиридина и вслед за этим добавляют по каплям 12,7 г (0,011 М) продукта предыдущей реакции в 2,3 л CH₂Cl₂. Суспензию перемешивают в течение 2 ч и добавляют 58,7 г (0,024 М) Na₂S₂O₄ в насыщенном NaHCO₃. Образующий в результате раствор перемешивают в течение 0,5 ч. Фазы разделяют и водную фазу экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические фазы сушат, удаляют растворитель и получают 13,9 г продукта, который используют в последующей реакции без очистки (Rf= 0,30, 95/5 - CH₂Cl₂/MeOH).

Adoс-D-трет-Bug-Phe-Lys-C(O)CF₂C(O)-Leu-Arg-OMe•TFA (7)
К раствору 13,4 г (0,012 М) сырого продукта предыдущей реакции в 200 мл сухого ДМФА добавляют 6 г палладиевой черни. Получающуюся в результате суспензию дегазируют в течение 0,5 ч. К этой суспензии добавляют 8 мл 3,3 М HCl в диоксане. Реакционную смесь помещают на качалку Паара и гидрируют в течение 6 ч. Суспензию фильтруют через целит и растворитель удаляют. Остаток хроматографируют ЖХВР с обращенной фазой (CH₂CN/H₂O/TFA) и получают 6,5 г продукта.

α-Boc,γ-Bn,γ-Z-Orn-C(OH)-CF₂-C(O)OEt (9).
К раствору 5,67 г (0,087 М) активированного цинка в сухом ТГФ добавляют 1,0 г этилбромидфторацетата и температуру поднимают до температуры кипения с обратным холодильником. В это время добавляют 15,2 г (0,037 М) -Bn, -Z-Вос-орнитилметилена 8 и 16,9 г (0,083 М) этилбромдифторацетата в ТГФ, и суспензию кипятят с обратным холодильником в течение 0,5 ч. Раствор охлаждают и гасят реакцию насыщенным KHSO₄.

Раствор разбавляют EtOAc и промывают насыщенным раствором KHSO₄, насыщенным раствором NaHCO₃ и соляным раствором. Раствор сушат и растворитель удаляют. Остаток хроматографируют на кремнеземе и получают 6,58 г продукта. Rf = 0,22, 99/1 - CH₂Cl₂/ipa.

α-Boc,γ-Bn,γ-Z-Orn-C(OH)-CF₂-C(O)ONa.
Сложный эфир 9 (0,965 г, 1,71 ммоль) растворяют в 15 мл MeOH и добавляют 1,71 мл 1N NaOH. Раствор перемешивают в течение 3 ч и растворитель удаляют. Остаток помещают под вакуум с откачкой в течение ночи и используют в последующей реакции в том виде, какой есть (0,870 г).

К раствору 0,870 г (1,56 ммоль) сырого продукта предыдущей реакции и 0,579 г (1,90 ммоль) Ala-Arg(NO₂)-OMe•HCl в 80 мл сухого ДМФА добавляют 0,283 г (2,09 ммоль) HOBt, после чего последовательно добавляют 0,392 г (1,90 ммоль) DCC в 20 мл ДМФА и 0,068 мл (0,30 ммоль) DIPEA. Смесь перемешивают в течение 18 ч при комнатной температуре и удаляют растворитель. Остаток растворяют в EtOAc и раствор промывают 0,1N HCl, насыщенным раствором NaHCO₃ и соляным раствором. Раствор сушат и удаляют растворитель. Хроматография на силикагеле дает 0,520 г продукта (Rf = 0,20 и 0,22).

α-Boc-Orn-C(OH)-CF₂-C(O)-Ala-Arg(NO₂)-OMe.
Трипептид 10 (0,338 г, 0,43 ммоль) растворяют в 10 мл ДМФА и добавляют 0,15 г палладиевой черни. Суспензию обезгаживают и добавляют 0,20 мл 4,0 М HCl в диоксане. Смесь гидрируют на аппарате Паара в течение ночи и фильтруют через целит. Остаток снова растворяют в MeOH и добавляют 0,20 г Pd(OH)₂. Суспензию гидрируют на аппарате Паара в течение 24 ч при добавлении 351,5 Па (50 ф/дюйм²). Суспензию фильтруют через целит и удаляют растворитель. Остаток используют в последующей реакции без очистки.

Сырой амин (0,220 г, 0,39 ммоль) растворяют в ТГФ и добавляют 0,325 г (0,91 ммоль) N, N-бис-Z-S-метилизотиомочевины. К этому раствору добавляют 0,150 г Hg(OAc)₂ (0,47 ммоль) и смесь перемешивают в течение ночи. Раствор разбавляют EtOAc и последовательно промывают 0,1N HCl, насыщенным раствором NaHCO₃ и соляным раствором. Органическую фазу сушат и растворитель удаляют. Остаток хроматографируют на кремнеземе и получают 0,170 г продукта в виде смеси диастереометров. Rf = 0,60, 0,62, 5% MeOH/CH₂Cl₂.

Adoc-D-трет-Bug-Phe-Arg(Z)₂-C(OH)-CH₂-C(O)-Ala- Arg(NO₂)-OMe (12)
К раствору 0,228 г (0,262 ммоль) 11 в 5 мл диоксана добавляют 0,656 мл HCl в диоксане. Раствор перемешивают в течение 1 ч и добавляют еще 0,656 мл HCl в диоксане. После перемешивания еще в течение 1 ч удаляют растворитель и остаток откачивают под вакуумом в течение ночи. Продукт гидролиза растворяют в 5 мл CH₂Cl₂ и соединяют с 0,120 г (0,262 ммоль) Adoc-D-трет-Bug-Phe-OH. К раствору добавляют 0,073 мл (0,525 ммоль) TEA и вслед за этим добавляют 0,043 мл DECP. Получающуюся в результате смесь перемешивают в течение ночи. Растворитель удаляют и остаток хроматографируют на кремнеземе, получают 0,086 г продукта в виде смеси диастереометров. Rf = 0,65, 0,68 4% ipa/CH₂Cl₂.

Adoc-D-трет-Bug-Phe-Arg(Z)₂-C(O)-CF₂-C(O)-Ala-Arg (NO₂)-OMe.

К суспензии 0,094 г (0,16 ммоль) периодинана Десса-Мартина в 5 мл CH₂Cl₂ добавляют шприцом 0,091 г (0,052 ммоль) 12, растворенного в 0,5 мл. Смесь перемешивают в течение 0,5 ч и добавляют 0,385 г (1,55 ммоль) Na₂S₂O₃ в насыщенном NaHCO₃. Через 0,5 ч раствор экстрагируют EtOAc, органическую фазу отделяют и сушат над MgSO₄. После удаления растворителя получают 0,94 г сырого продукта. Rf= 0,68, 0,71, 4% ipa/CH₂Cl₂.

Adoc-D-трет-Bug-Phe-Arg-C(O)-CF₂-C(O)-Ala-Arg- Ome•TFA (13)
Сырой спирт растворяют в 2 мл ДМФА и добавляют 50 мг палладиевой черни. Суспензию обезгаживают и добавляют 0,040 мл 4,0М HCl в диоксане. Смесь гидрируют на аппарате Паара в течение 20 ч при давлении 351,5 Па (50 ф/дюйм²). Суспензию фильтруют через целит и растворитель удаляют. Остаток хроматографируют на колонке и продукт вымывают смесью (CH₃CN/H₂O/TFA), получают 0,044 г чистого продукта.

N,N'-бис-Kapбобензилокси-S-метилизотиомочевина (14)
К раствору димера сульфата S-метилизотиомочевины (5,00 г 18,0 ммоль) в холодном (0^oC) 1N NaOH (36,0 мл, 36,0 ммоль) добавляют 11,3 мл (79,0 ммоль) бензилхлорформиата и 79,0 мл (79,0 ммоль) 1N NaOH по каплям и из отдельных делительных воронок. Суспензию перемешивают в течение 0,5 ч при 0^oC и в течение 1,5 ч при комнатной температуре. Раствор экстрагируют этилацетатом, сушат сульфатом магния и фильтрат упаривают. Хроматография на силикагеле дает 2,62 г чистого продукта. Rf = 0,40 (15% EtOAc в петролейном эфире).

III. Синтез N-обрывающих связывающих элементов
Adоc-D-трет-Bug-Phe-OBn.

К 5 мл 15% раствора фосгена в толуоле в атмосфере аргона добавляют 0,140 мл TEA (1,00 ммоль). Вслед за этим по каплям через шприц добавляют 0,112 г (0,750 ммоль) 1-адамантанамина в 1 мл толуола. Образующуюся в результате смесь перемешивают в течение 0,3 ч и избыток фосгена удаляют посредством продувания аргоном. Твердое вещество отфильтровывают путем отсасывания на воронке с впаянным стеклянным фильтром и растворитель удаляют. Остаток снова растворяют в дихлорметане и охлаждают до 0^oC в атмосфере аргона. К этому раствору добавляют 0,140 мл TEA (1,00) и вслед за этим в один прием добавляют 0,100 г (0,250 ммоль) d-трет-Bug-Phe-OBn•HCl. Образующийся раствор удаляют. Хроматография на кремнеземе дает 0,350 г продукта.

Гидрирование этого соединения с последующим сочетанием с продуктом гидролиза 11 дает соединения, которые успешно разработаны для выбора N- обрывающего связывающего элемента.

Способы проверки активности соединений
Перечисленные далее методики, не являющиеся ограничивающими, представляют собой способы проверки противовоспалительного и/или аналгезирующего действия дифторпептипептидных производных настоящего изобретения.

Для предсказания противовоспалительной активности соединений известны некоторые испытания ингибирования ферментов. Такие ферментативные испытания пригодны для измерения активности соединений настоящего изобретения. В число таких ферментативных испытаний входят испытания с панкреатическим калликреином свиньи (РРК) - см. ссылки A, E и F: испытания с мочевым калликреином человека (HUK) - см. ссылки E и F; испытания с калликреином плазмы человека (НРК) - см. ссылки B и E: с плазмином человека (HP) - см. ссылки B и C; и испытания с урокиназой (UK) - см. ссылку D. Указанные ссылки, которые включены все в настоящее в качестве ссылок, перечислены далее.

(A) Lottenberg, R., U. Christensen, C.М. Jackson & P. L. Coleman. "Assay of Coagulation Proteases Using Peptide Chromogenic and Fluorogenic Substrates", Methods in Enzymology, Vol. 80, Academic Press, New York, NY (1981), pp. 341-361;
(B) Geiger, R., "Kallikrein", Methods of Enzymatic Analysis, Vol.y, 3rd Edition, Bergmeyer, ed. Academic Press, New York, NY (1984), pp. 129-143;
(C) Morris, J.P., S. Blatt, D.R. Powell, D,K. Strickland & F.J.Castellino, "Role of Lysine Binding Regions in the Kinetic Properties of Human Plasmin", Biochemistry, Vol. 20. No 17 (August 18, 1981) p. 4811;
(D) Wohl. R.C., L. Summaria & K.C. Robbins, "Kinetics of Activation of Human Plasminogen by Different Activator Species at pH 7,4 and 37^oC" The Journal Biological Chemistry, Vol. 255, No 5 (March 10, 1980), pp. 2005- 2013;
(E) Okunishi, h. j. Burton & J. Spragg, "Specificity of Substrate Analogue Inhibitors of Human Unnary Rallikrein, " Hypertension, Vol. 7 No. 3, Suppl. 1 (May-June, 1985), pp. 172- 175;
(F) Amundsen, E., J. Putter, P. Friberger, M. Rnos, M. Larsbraten & G. Claeson, "Methods for the Determination of Clandular Kallikrein by Means of a Chromogenic Tripeptide Substrate", в Kinis-II part A, Fuji, S., et al., eds. Plenum Press, New, York, NY (1979), pp. 83-95.

Другой подходящий способ испытаний основывается на способе определения ингибирования слабосвязывающего фермента, раскрытом в Imperiali, B. & R.H. Abeles, "Inhibition of Serine Proteases by Peptidyl Fluoromethyl Ketones", Biochemistry, Vol. 25 (1986) pp. 3760-3767. Способ модифицируется так, как описано ниже, чтобы исследовать ингибирование слабого связывания плазмина человека, панкреатического калликреина свиньи и калликреина плазмы человека.

Реакции. Реакционные смеси содержат 78 мМ трис-HCl- буфера, pH 7,4 78 мM NaCl, 0,2 мг/мл альбумина коровьей сыворотки, 0,2 мМ S-2251 (D-Val-Leu-Arg-п-нитроанилин), 0,5 е/мл плазмина (1 мМ) и изменяющиеся концентрации испытуемого соединения, которое исследует, в общем объеме 1 мл. Исходный раствор плазмина содержит 1 е/мл в 50% глицерине. Измерение поглощения вследствие выделения п-нитроанилина при ферментативно расщеплении S-2251 контролируются, используя спектрофотометрическую систему HP-8450, установленную для измерений A^400-410-A^470-490. Температура составляет 30^oC.

Вычисления, K_obsd и V_s (скорость в установившемся состоянии при ингибировании) определяют путем обработки кривой прогрессии (первые 20 мин) в уравнении (i), используя программное обеспечения Labtech NotebookR. Оцениваемый k₁ вычисляют для каждой комбинации V_s и скорость без ингибирования V (уравнение ii), при (S) = 0,2 мМ и K_m = 0,77 мМ.

(i) A=V_st - ((Y_s - V_o)/K_obsd) (1-exp (-K_obsdt) + A_o
(ii) k₁ = (1)/((VN_s - 1)(1+ (s)/km))
Затем график "K_obsd - концентрация испытуемого соединения" для различных опытов сопоставляют с прямой y= mx+b (см. уравнение iii); k_on = m(1+ (S)/k_m)b k_off = b вычисляют после этого. Окончательное значение k₁ вычисляют из уравнения iv.

(iii) k_obsd = (1)/((V/V_s - 1)(1 + (S)/k_m))
(iv) k₁ = k_off/k_on
Для предсказания противовоспалительной активности соединений известны некоторые испытания in vivo. Такие испытания in vivo пригодны для измерения активности соединений настоящего изобретения. Такие испытания in vivo раскрываются в перечисленных далее работах, которые включены в настоящее в качестве ссылок.

Winter, C. A. , Е.A. Risley, G.V. Nuss, "Carrageenin-Induced Edema in Hind Paw of theRat as an Assay for Antiinflammatory Drugs", Proc. Soc. Exp. Biol, N.Y., Vol. 111 (1962), pp. 544-547;
Vander Wende, C. & S. Margolin, "Analgesic Tests Based Upon Experimentally Induced Acute Abdominal Pain in Rats", Federal Proceedings., Vol. 15(1956), p. 494;
Blackman, A. , J.W. Burns, J.B. Farmer, H. Radziwonik, J. Westwick, "An X-Ray nalysis of Adjuvant Arthritis in the Rat. The Effect of Prednisolone and Indomethacin', Agents and Actions, Vol, 7/1 (1977), p. 145-151;
Winter, C.A., & G.W. Nuss, "Treatment of Adjuvant Arthritis in Rats witi-inflammatory Drugs" Arthritis and Rheumatism, Vol. 9, No 3 (June, 1966), pp. 394-404; и
Francis, M.D., K. Hovanclk & R.W.Boyce, "NE-58095: A.Diphosphonate Which Prevents Bone Erosion and Preserves Joint Architectur in Experimental Architecture in Experimental Arthritis" Int. J. Tiss. Reac., Vol. XI, No. 5 (1989), pp. 239-252.

Композиции и способы применения соединений
Далее приводятся примеры предполагаемых композиций и применения по настоящему изобретению.

Пример I
Обычными методами изготовляют таблетки, каждая из которых имеет следующий состав:
Компонент - Количество (кг)
Noc-D-трет-Bug-Phe-Lys-C(O) CF₂C(O)-teu-Arg-OMe - 400
Микрокристаллическая целлюлоза - 200
Предварительно желатинорованный крахмал - 200
Povidone К-30 - 40
Стеарат магния - 20
Пациенту назначают по одной таблетке четыре раза в день, чтобы смягчить воспаление суставов вследствие артрита.

Пример II
Обычными способами готовят лосьон следующего состава.

Компонент - Количество (мг)
eBroc-D-трет-Bug-Phe-Arg-C(O)CF₂C(O)-Gly-Arg-OMe - 2,5
Глицерин - 4,0
Метилпарабен - 0,2
Пропилпарабен - 0,1
Карбопол 934 - 0,15
NaOH - 0,46
Цетилстеарилпальмитат - 1,0
Стеариновая кислота - 0,5
Ланолиновые жирные кислоты - 0,5
Цетиловый спирт - 3,0
Цантамовая смола - 0,75
Стеароил-2-лактолат натрия - 0,75
Изопропилмиристат - 2,0
Вода - до заданного количества qs
Один грамм такого лосьона наносят на область покраснения на кожу два раза в день для уменьшения воспаления и боли.

Пример III
Раствор готовят обычным способом, причем каждый 2 мл раствора имеют следующий состав.

Компонент - Количество (мг)
Adoc-D-Phe-Phe-Lys-C(O)CF₂C(O)-D-Phe-Arg-OH - 80
Бензальконийхлорид - 40
Стериальный водный физиологический раствор - qs.

Дозу раствора в 2 мл вводят пациенту, страдающему от артрита, для уменьшения воспаления и боли.

Пример IV
Готовят обычными способами раствор следующего состава.

Компонент - Количество (мг)
Adoc-D-трет-Bug-Phe-Arg-C(O)CF₂C(O)-Ala-Arg-OH - 5,0
Бензальконийхлорид - 0,02
Натрийкарбоксиметилцеллюлоза - 0,01
Водный физиологический раствор - qs.

Вводят посредством инграляции 0,2-мл дозу такого раствора пациенту, нуждающемуся в облегчении расстройства верхних дыхательных путей вследствие астмы.

Хотя здесь описаны конкретные варианты осуществления изобретения, для специалистов в этой области техники будет очевидно, что могут быть осуществлены различные изменения и модификации настоящего изобретения без отходов от его сущности и объема. Подразумевается, что прилагаемая формула изобретения защищает все такие модификации, которые входят в объем настоящего изобретения.

Описываются новые производные дифторпентапептидов общей формулы I, где значения X, Y, V, Z, R₁, R₂, R₃, R₅, R₄ указаны в п.1 формулы, обладающие противовоспалительной активностью, а также фармацевтическая композиция на основе вышеуказанных соединений. 3 с. и 6 з.п. ф-лы.

1. Производное дифторпентапептидов формулы I

где X = циклический алкил, содержащий от 4 до 15 атомов углерода;
V = -OC(O)-;
Z = -NH-;
R₁ - насыщенный алкил (C₁-C₆) линейный или разветвленный, атом углерода, связанный с R₁, находится в D- или L-конфигурации;
R₂ - арилалкил, в котором алифатическая часть является насыщенной и содержит от 1 до 2 атомов углерода и атом углерода, связанный с R₂, находится либо в D-, либо в L-конфигурации;
R₃ - -(CH₂)_m -A-NH₂ или -(CH₂)_m -A-B - C(NH₂) = NH,
где m = 1-6;
А - ковалентная связь или п-фенил;
В - -NH- и атом углерода, связанный с R₃, находится в L-конфигурации;
R₄ - насыщенный алкил (C₁-C₆)-линейный или разветвленный, атом углерода, связанный с R₄, находится либо в D-, либо в L-конфигурации;
R₅ - -(CH₂)_m -A-NH₂ или -(CH₂)_m -A-B-C(NH₂) = NH, где m = 1-6;
a - ковалентная связь;
В - NH и атом углерода, связанный с R₅, находится либо в D-, либо в L-конфигурации;
Y = метил,
или их фармацевтически приемлемые соли или гидраты. 2. Производные дифторпентапептидов общей формулы I по п.1, где -V- = -OC(O)-; Z = -NH-; m = 1-5; X - насыщенный и незамещенный бициклоалкил, содержащий от 8 до 12 атомов углерода; R₁ - алкил (C₁-C₅) с линейной или разветвленной цепью. 3. Производные дифторпентапептидов общей формулы I по п.2, где R₃ = -(CH₂)_m -A-NH₂, где А = ковалентная связь, m = 3-5; R₅ = (CH₂)_m -A-B-C(NH₂) = NH; A = ковалентная связь; B - NH; m = 2-4; Y - метил; V - -OC(O)-. 4. Производные дифторпентапептидов общей формулы

где X¹ - арамантилоксикарбонил,
AA¹ - трет.бутилглицил, валил, изолейцил, лейцил;
AA² - фенилаланил, нафтилаланил;
AA³ - лизил, п - гуанидинофенилаланил, аргинил, п - амидинофенилаланил;
AA⁴ - лейцил, изолейцил;
AA⁵ - аргинил, гомоаргинил, лизил;
Y - метил,
или их фармацевтически приемлемый соли и гидраты. 5. Производные дифторпентапептидов по п.4, где AA³ - лизил, аргинил; AA⁵ = аргинил; X¹ = адамантилоксикарбонил. 6. Производные дифторпентапептидов по пп.4 или 5, где AA¹ - трет.бутилглицил, валил, изолейцил; AA² - фенилаланил; AA⁴ - лейцил. 7. Производные дифторпентапептидов по пп.4-6, где AA¹ = трет.бутилглицил; X = адамантилоксикарбонил; Y - метил. 8. Фармацевтическая композиция, обладающая противовоспалительной активностью, содержащая активный ингредиент на основе пептидного производного и фармацевтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что в качестве пептидного производного она содержит эффективное количество соединения формулы I по любому из пп.1-7. 9. Производное дифторпентапептидов по любому из пп.1-7, обладающие противовоспалительной активностью.