АКАРИЦИДНЫЙ ЛЕКАРСТВЕННЫЙ ПРЕПАРАТ - "АМИТРАЗИН" Российский патент 1998 года по МПК A61K9/10 A01N25/02 

Изобретение относится к области ветеринарии и представляет собой готовый к употреблению лекарственный препарат на основе амитраза, предназначенный для лечения арахноэнтомозов у животных.

В настоящее время известны три группы акарицидных составов на основе амитраза. К первой группе относятся составы в виде концентрата 12,5 - 25% амитраза для получения эмульсии, которая используется для купания или опрыскивания животных (патент Франции N 2443204, 20.07.78, патенты Японии N 79-46381, 04.07.79, N 79-84030, 04.07.79, N 61-238702, 24.10.86, N 62-93202, 28.03.86, патент ЮАР N 85-07503, 27.05.87).

Ко второй группе относятся акарицидные составы на основе амитраза, используемые для изготовления ошейников для животных, а также термические пластинки и таблетки, применяемые в пчеловодстве для борьбы с варроатозом у пчел (патент Великобритании N 2111830, 13.06.83, патент Венгрии N 21951, 29.03.82, патент ГДР N 232181, 20.08.83).

Третью группу составов на основе амитраза составляют готовые к употреблению лекарственные композиции (патент ЮАР N 75-06813, 01.09.76, патент ЕПВ N 50335, 28.04.82).

Известные группы составов не обладают необходимой лечебной эффективностью, так как не воздействуют на некоторые виды клеща и его неполовозрелые формы (яйца, нимфы).

Наиболее близким по совокупности существенных признаков к заявляемому изобретению является акарицидный лекарственный препарат для лечения арахноэнтомозов у животных, содержащий активное вещество амитраз, растворенное в минеральном масле (гидрофобной основе) при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Амитраз - 1
Минеральное масло - 99
Для приготовления 100 г лечебного препарата растворяют 1 г амитраза в 99 г минерального масла и полученным составом многократно смазывают пораженные клещами участки кожи животного (патент ЕПВ N 50335, МКИ A 01 N 25/02, 28.04.82).

Акарицидный препарат, описанный выше, обладает высоким системным действием на клещей группы Sarcoptes и Ixodal, однако практически не дает эффекта при лечении подкожных клещей Demodex, что связано с неспособностью амитраза преодолевать биологические мембраны и проникать через кожу, а также воздействовать на неполовозрелые формы клеща (яйца и нимфы), имеющие более плотную хитиновую структуру по сравнению со взрослым клещом.

Кроме того, заявителем было экспериментально установлено, что препарат обладает сильным местно-раздражающим действием, приводящим к концу курса лечения к гиперкератозам (огрублению и ороговению кожных покровов), обусловленным высокой концентрацией активного вещества - амитраза в препарате, что подтверждается данными научно-технической литературы (Cullen L.K., Pesnollsen J. A. Cardio-vascular and respiratory effects of acaricide amitraz. //Journal Veterinary Pharmacologue and Therapy, 1987. v. 10. N 2. p. 134-143).

Задачей изобретения является создание стабильной лекарственной формы на основе амитраза, обладающей высокой акарицидной активностью в отношении любых видов клещей, в том числе и их неполовозрелых форм (яиц, нимф), за счет повышения биодоступности в сочетании с хорошей переносимостью препарата.

Поставленная задача решается тем, что в акарицидный лекарственный препарат, содержащий амитраз и гидрофобную основу, дополнительно введен диметилсульфоксид, а в качестве гидрофобной основы используют рафинированное растительное масло при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Амитраз - 0,1 - 0,25
Диметилсульфоксид - 23,5 - 45,0
Рафинированное растительное масло - Остальное
В качестве растворителя амитраза в прототипе использовано минеральное масло, которое, проявляя гидрофобное свойство, не смачивает поверхность клеща, и для усиления лечебного эффекта требуется увеличивать концентрацию амитраза (до 1%), что и вызывает сильное кожно-раздражающее воздействие, связанное с тем, что амитраз является сильным ядовитым веществом.

В заявляемом акарицидном лекарственном препарате - "Амитразине" в качестве гидрофобной основы использовано рафинированное растительное масло, в котором амитраз не растворяется, а растворяется в диметилсульфоксиде (ДМСО) - органическом растворителе, обладающем сильной проникающей способностью. Амитраз растворяют в ДМСО, который не смешивается с маслом, но после тщательного перемешивания при 35^oC в термостате образуется эмульсия желтого цвета. В состав растительного масла входят непредельные жирные кислоты (пальметиновые, олеиновые), обладающие поверхностно-активными свойствами, что стабилизирует эмульсию.

ПРи нанесении эмульсии на пораженные клещом участки кожи животного хитиновая оболочка клеща, проявляя гидрофильные свойства, притягивает каплю ДМСО с амитразом и благодаря своей большой проникающей способности ДМСО быстро "протягивает" амитраз через хитин, поражая нервную систему клеща. Масляная основа за счет поверхностно-активных веществ (ПАВ) "обволакивает" каплю ДМСО, образуя своеобразную капсулу, и не дает ДМСО оторваться от поверхности клеща, что позволяет амитразу в ДМСО полностью локализоваться на поверхности клеща. При этом подвергаются воздействию и уничтожаются яйца и нимфы клеща, имеющие более плотную хитиновую оболочку, чем у половозрелой формы, а также клещи вида Demodex, обитающие в волосяных фолликулах под кожей.

Сочетание диметилсульфоксида (с растворенным в нем амитразом) с рафинированным растительным маслом в качестве гидрофобной основы при установленном экспериментально соотношении компонентов (мас. %) придает лекарственному препарату "Амитраз" свойства, удовлетворяющие решению поставленной задачи.

Экспериментальные данные по выбору оптимального состава лекарственной формы представлены в табл. 1. В табл. 2 приведены результаты проведенных сравнительных испытаний заявляемого лекарственного препарата и прототипа.

Медико-биологическими исследованиями установлено, что амитраз обладает акарицидной активностью в отношении возбудителей арахноэнтомозов в концентрации (мас. %) 0,05 - 1,0 (Ветеринарная рецептура с основами терапии и профилактики. Справочник. К.И.Абуладзе, В.М.Данилевский, под ред. И.Е. Мозгова, М., Агропромиздат, 1988, с. 354-359).

Экспериментальным путем заявителем было установлено соотношение активного вещества - амитраза, гидрофобной основы - рафинированного растительного масла, и добавки - диметилсульфоксида (табл. 1). Опыты проводили на лабораторных кроликах породы Шиншилла весом 2,4 - 3,5 кг в двадцати группах по пять животных. На предварительно обезволошенный и скарифицированный участок кожи размером 10 - 12 см² наносили исследуемый экспериментальный состав в количестве 0,2 мл на 1 см². На шею кролика надевали специальный воротник, препятствующий слизыванию раствора. Через 30 мин с обработанного участка брали 5 глубоких соскобов и спектрофотометрически определяли концентрацию амитраза в эпидермисе. Перед соскобами проводили тщательный осмотр участка кожи для определения наличия раздражающего эффекта (зуд, покраснение, ожог) и контролировали поведенческую реакцию кроликов после обработки. Результаты обрабатывали статистическим методом.

Критерием оценки выбираемых соотношений служили показатели биодоступности и отсутствие побочного действия - местно-раздражающего эффекта.

Из табл. 1 следует, что лекарственный препарат с содержанием амитраза 0,5 мас. % не удовлетворяет лечебным требованиям из-за сильного местно-раздражающего действия, а при содержании амитраза - 0,05 мас.% препарат не удовлетворяет по биодоступности. Как упоминалось ранее в тексте описания, необходимой и достаточной концентрацией амитраза в глубоких слоях кожи для полного уничтожения клещей и его форм является концентрация более 0,05 мас. %. Заявителем установлено, что для достижения этих концентраций амитраза в глубоких слоях кожи исходные лечебные составы должны содержать амитраз в концентрации 0,1 - 0,25 мас.%. При содержании диметилсульфоксида более 45,0 мас. % лекарственный препарат не удовлетворяет поставленной задаче ввиду наличия побочных эффектов (сильное раздражение, покраснение, зуд).

Таким образом, как видно из поз. 9, 10, 14 и 15 табл. 1, оптимальным соотношением компонентов в акарицидном лекарственном препарате "Амитразин" с точки зрения поставленной задачи является, мас.%:
Амитраз - 0,1 - 0,25
Диметилсульфоксид - 23,5 - 45,0
Рафинированное растительное масло - Остальное
Лечебную эффективность заявляемого акарицидного лекарственного препарата проверяли на спонтанно больных демодекозом (Demodex canis) двадцати собаках различного возраста и пород, которые были разбиты на две экспериментальные группы по десять особей. В первой группе животных обрабатывали 1%-ным раствором амитраза в минеральном масле, изготовленным согласно прототипу. Обработку проводили один раз в сутки через три дня в суточной дозе 0,2 мл/см² поверхности очага поражения. Дополнительно обрабатывали кожу вокруг очага поражения демодекозом шириной один сантиметр.

Во второй группе животных обработку проводили аналогичным образом заявляемым лечебным препаратом "Амитразин" с оптимальным соотношением компонентов, мас.%:
Амитраз - 0,25
Диметилсульфоксид - 23,5
Рафинированное растительное масло - 76,25
В обеих группах лечение проводили в течение 24 дней (8 обработок), наблюдение за животными продолжали 30 дней после начала лечения. Клинический эффект составов лечебных препаратов оценивали по следующим параметрам:
общая площадь очагов поражения (см²);
наличие клещей и личинок в глубоких соскобах (ед/поля зрения);
наличие вторичной бактериальной и грибковой микрофлоры в очаге поражения;
обсемененность.

Для определения обсемененности очага поражения микрофлорой проводили мерный высев соскобов на желточно-солевой агар и дополнительно для выявления наличия микроскопических грибов в материале высевали соскобы на среду агар Сабуро с добавлением растворов пенициллина и стрептомицина для подавления бактериальной флоры (t^o - 37^oC, время - 2 сут, pH 6,6 - 6,8). Суммарное количество выросших колоний (КОЕ) высчитывали под микроскопом. Площадь очагов поражения определяли планиметрически.

Как видно из табл. 2, при обработке собак, больных демодекозом, 1%-ным раствором амитраза в минеральном масле наблюдался умеренный клинический эффект: снижение общей площади очага поражения на 7 - 100% (среднее - 47%) и уменьшение количества демодекозных клещей и их неполовозрелых форм в глубоких соскобах. Однако обследование поверхности кожи в очагах поражения демодекозом показало наличие и продолжение воспалительного процесса (зуд, раздражение или гиперкератоз поверхности очага поражения). Бактериологическое обследование глубоких соскобов показало, что количество патогенной вторичной микрофлоры (кокки, дрожжеподобные грибы) не уменьшилось, а у некоторых животных даже возросло (среднее уменьшение - 24,6%). Все эти данные говорят о том, что амитраз в лекарственной форме, предложенной в прототипе, обладает выраженным местно-раздражающим действием и низкой биодоступностью и, как следствие, низкой лечебной эффективностью.

Во второй группе собак, где проводилось лечение амитразином, площадь очагов поражения уменьшилась за 30 дней лечения на 75,4 - 100% (среднее - 92,6%). Микроскопирование глубоких соскобов показало полное отсутствие демодекозных клещей, а количество их неполовозрелых форм уменьшилось в 2 - 13 раз за 30 дней лечения. Бактериологическое обследование очагов поражения показало, что количество патогенной микрофлоры уменьшилось на 87,5 - 99,9%. Снижение обсемененности очагов вторичной бактериальной флорой под действием "амитразина" положительно сказалось на характере кожных покровов: зуд и воспаление исчезли, кожа приобрела естественный цвет и вид, без струпьев и корок. Во всех очагах, обработанных амитразином, началось появление нового волосяного покрова взамен выпавшего.

Таким образом, лекарственный препарат заявляемого состава "Амитразин" проявляет значительно более высокий лечебный эффект по сравнению с прототипом, несмотря на значительно меньшее (в 4 раза) содержание активного вещества амитраза.

Пример осуществления изобретения.

Для приготовления 100 г 0,25%-ного раствора амитразина берут 0,25 г амитраза и растворяют при перемешивании в 25 г диметилсульфоксида при 35^o - 40^oC (в термостате). Затем добавляют рафинированное растительное масло в количестве, необходимом для получения 100 г смеси (74,75 г). Все компоненты подвергают интенсивному перемешиванию механической мешалкой в течение 15 - 20 мин до получения устойчивой эмульсии желтого цвета, которую затем фильтруют через стеклянный фильтр и разливают в стеклянные флаконы емкостью 10, 15 или 20 мл с навинчивающейся пробкой.

Амитразин относится к умеренно токсичным для теплокровных животных соединением (III класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76) и дает устойчивый лечебный эффект при лечении ушной чесотки (отодектоза пушных зверей и собак), нотоэдроза кошек и демодекоза собак.

Таким образом, из вышеизложенного следует, что заявителем разработан новый акарицидный лекарственный препарат - "Амитразин", обладающий, в отличие от прототипа, комплексным действием на очаг поражения: кроме воздействия непосредственно на клещей (кожного и демодекозного) и его неполовозрелые формы амитразин за счет антисептических, бактерицидных и анальгезирующих свойств диметилсульфоксида действует как антисептик на вторичную бактериальную и грибковую флоры в очаге поражения, а также снимает воспаление и способствует отделению и удалению омертвевших и ороговевших участков кожи.

Лечебный препарат "Амитразин" обладает стабильностью, хорошей биодоступностью, прекрасной переносимостью в сочетании с высоким лечебным эффектом.

Лекарственный препарат для использования в ветеринарии. В акарицидный лекарственный препарат, содержащий амитраз и гидрофобную основу, дополнительно введен диметилсульфоксид. В качестве гидрофобной основы используют рафинированное растительное масло при следующем соотношении компонентов, мас. %: амитраз 0,1 - 0,25; диметилсульфоксид 23,5 - 45,0; рафинированное растительное масло остальное. 2 табл.

Акарицидный лекарственный препарат, содержащий амитраз и гидрофобную основу, отличающийся тем, что в него дополнительно введен диметилсульфоксид, а в качестве гидрофобной основы используют рафинированное растительное масло при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Амитраз - 0,1 - 0,25
Диметилсульфоксид - 23,5 - 45,0
Рафинированное растительное масло - Остальноес