СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ВНУТРИУТРОБНОГО ИНФИЦИРОВАНИЯ Российский патент 1998 года по МПК G01N33/53 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству.

Близкими решениями данной проблемы являются способ диагностики MartinsS, . "Восходящее инфицирование во время беременности как причина преждевременных родов" (Z. Geburtsh Perinatol. - 1989. - Bd. 193, N 1, S1-7). Автор предлагает с помощью цитологического и бактериологического исследования мазков определять наличие воспалительного процесса во влагалище и цервикальном канале у беременных и относить таких женщин в группу высокого риска по инфицированию плодного яйца восходящим путем.

Известен способ диагностики ChaisiluattanaP., Monif G.R. "Потенциальное применение определения C-реактивного белка в акушерстве и гинекологии "(Obstef. Gynecol. susr. - 1989. - Vol. 44, N 5, - p. 355-360). Авторы предлагают определить степень воспалительного процесса у плода и (или) у матери по наличию высокого уровня C-реактивного белка (СРБ) в сыворотке крови беременной женщины. Но данный способ не является специфичным для внутриутробного инфицирования, так как уровень СРБ может повышаться при наличии воспалительной реакции на инфекцию любой локализации у матери, например, при туберкулезе, ревматизме.

Наиболее близким является способ Болтовской М.Н., Зарайского Е.И., Фукс Б. Б., Сухих Г.Т., Канафати Т.И., Старосветской Н.А., Назимовой С.В., Маршицкой М.И., Лихорева В.А. Гистологическое и клинико-диагностическое изучение плацентарного альфа₁ - микроглобулина (ПАМГ-1) с помощью моноклональных антител (Бюллетень экспериментальной биологии 1991, 1, с. 397 - 400) [1].

Авторы отмечают, что ПАМГ-1, синтезируясь с материнской части плаценты, увеличивает свой уровень в сыворотке крови матери при наличии плацентарной недостаточности (ПН), связанной с гепертической и цитомегаловирусной инфекцией. Но значения ПАМГ-1 изменяются и при другой акушерской патологии, например при угрозе прерывания беременности, ПН неинфекционного генеза, позднем гестозе, хроническом ДВС-синдроме, внутриутробной гипотрофии плода, синдроме задержки развития плода.

Однако данный способ диагностики не является специфичным, точным и достоверным критерием наличия внутриутробного инфицирования.

Задачей изобретения является повышение специфичности способа путем сочетания бактериологического, цитологического, иммунологического и иммуноферментного анализов.

Поставленная задача достигается путем сочетания бактериологического, цитологического, иммунологического и иммуноферментного анализов.

Внутриутробное инфицирование диагносцируют при показателях ПАМГ-1≥-30 мг/мл в сочетании с бактериологическими, цитологическими и иммунологическими данными за наличие любой инфекции, любой локализации в организме беременной женщины.

Если ПАМГ-1 ≥ 30 мг/мл, но лабораторные данные не указывают на наличие инфекционного процесса, диагносцируют плацентарную недостаточность инфекционного генеза.

При наличии клинико-лабораторных данных инфекции у беременной, но при ПАМГ-1 < 30 мг/ил следует "искать" инфекцию, не затрагивающую непосредственно плодное яйцо.

Способ осуществляется следующим образом. У женщины во II триместре беременности производится забор крови утром натощак в количестве 5 мл из кубитальной или локтевой вены. Методом центрифугирования получают не менее 1 мл сыворотки, в которой определяют наличие СРБ-иммунологическим методом преципитации в капилляре и ПАМГ-1 - методом "ПАМГ-фертитест", основанным на применении моноклональных антител.

Для бактериологического и цитологического исследований брали мазки из цервикального канала шейки матки и заднего свода влагалища до мануального исследования после введения зеркал и подъемника. На цитологию материал брали ложечкой Фолькмана и помещали его на предметное стекло. На бактериологическое исследование материал брали стерильным ватным тампоном после обработки шейки матки стерильным физиологическим раствором.

В лаборатории доставленные мазки высушивали на воздухе, окрашивали гематоксилин-эозином по Карачи, Майеру и микроскопировали с иммерсионным объективом при увеличении 10 • 100, 90 • 100. В мазках отмечали проявления воспалительной реакции, вызванные различной специфической и неспецифической микрофлорой.

Исследуемый материал, взятый тампоном, засевали этим тампоном, используя штриховую технику посева, на половину чашки Петри с кровяным агаром, затем производили посев тампоном в сахарный бульон. Посевы инкубировали при 37^oC, просматривая ежедневно.

При появлении роста на плотных средах проводили подсчет колоний различной морфологии, учитывая их соотношение.

Таким образом, до настоящего времени были известны лишь методы прогнозирования внутриутробного инфицирования плода и выделялись среди беременных группы риска по инфицированию плодного яйца. Существующие способы диагностики внутриутробного инфицирования касаются уже рожденных с внутриутробной инфекцией детей. Поэтому предлагаемый способ является не только специфичным, но и ранним, позволяющим во время беременности, до рождения ребенка поставить диагноз внутриутробного инфицирования.

Пример 1. Беременная К., 28 лет, обратилась к врачу женской консультации с жалобами на ухудшение общего состояния и осложнение шевеления плода. После проведенного клинического обследования беременной было проведено дополнительное лабораторное исследование, которое включало определение уровня СРБ и ПАМГ-1 в сыворотке материнской крови, цитологию и бакпосев влагалищного содержимого, а также УЗИ. Заключение врача ультразвуковой диагностики было следующим: беременность 20 недель, плацентарная недостаточность, внутриутробная гипоксия плода. Получены лабораторные данные: ПАМГ-1 составил 58 мг/мл, СРБ - резко положительный, в мазках - лейкоцитоз, обильная смешанная флора, при бакпосеве отмечен массивный рост эпидермального стафилококка и выделена уреаплазма. На основании полученных данных был поставлен клинический диагноз: беременность 20 недель, плацентарная недостаточность на фоне внутриутробного инфицирования, субкомпенсированная форма. Беременная была госпитализирована в стационар, где начато специфическое лечение.

Пример 2. Беременная С. обратилась к участковому гинекологу на плановый диспансерный учет. Было проведено УЗИ, лабораторное обследование, включая СРБ, ПАМГ-1, цитологическое и бактериологическое исследование мазков из влагалища и цервикального канала. Уровень СРБ был равен нулю, ПАМГ-1 - 45 кг/мл, при бакпосеве выделен скудный рост золотистого стафилококка, в мазках - незначительное количество лейкоцитов, умеренная бациллярная флора. При УЗИ выявилась компенсированная плацентарная недостаточность. Заключительный диагноз: беременность 22 недели, плацентарная недостаточность неинфекционного генеза, компенсированная флора.

Пример 3. Беременная П. обратилась к участковому гинекологу с жалобами на ухудшение общего состояния, повышение температуры тела до 37,2^oC. Женщине было назначено клинико-лабораторное обследование, включая анализ крови на СРБ, ПАМГ-1, цитологическое и бактериологическое исследование мазков из влагалища и цервикального канала, УЗИ. Результаты оказались следующими: ПАМГ-1 - 23 нг/мл, СРБ - положительный, в мазках - умеренный лейкоцитоз, бециллярная флора, при бакпосеве - скудный рост кишечной палочки и эпидермального стафилококка, при УЗИ - беременность 19 недель. После консультации терапевта был поставлен заключительный диагноз: беременность 19 недель, острая распираторная вирусная инфекция.

Пример 4. Беременная Л., состоящая на диспансерном учете в женской консультации, обратилась к участковому акушеру-гинекологу с жалобами на уменьшение шевеления плода. Пациентке было принято общепринятое клинико-лабораторное обследование, включая УЗИ. Учитывая отсутствие клиники воспалительного процесса, СРБ не определялся, а так как женщина не жаловалась на патологические выделения из половых путей взятие мазков на цитологию и бакпосев не проводились. На основании данных обследования был поставлен диагноз: беременность 21 неделя, внутриутробная гипоксия плода. При УЗИ признаки плацентарной недостаточности не выявлены. Через две недели после проведенного амбулаторного лечения при повторном УЗИ было обнаружено: беременность 23 недели, плацентарная недостаточность, многоводие, внутриутробная гипоксия плода. Беременная была госпитализирована в стационар. Клинические признаки стойкой внутриутробной гипоксии, многоводия и плацентарной недостаточности указывали на возможную инфекционную причину данной акушерской патологии. Но для своевременного назначения специфической антибиотикотерапии, которая показана при утробном инфицировании, необходимы четкие достоверные лабораторные критерии, которые врач не имел.

Таким образом, поставленная задача может быть достигнута за счет одновременного использования различных методов обследования: бактериологического, цитологического, иммунологического и иммуноферментного анализов.

Изобретение может быть использовано в медицине, в частности в акушерстве. У женщин во II триместре беременности производят забор крови, в которой определяют наличие С-реактивного белка (СРБ) иммунологическим методом преципитации в капилляре и плацентарного альфа-1-микроглобулина (ПАМГ-1) методом "ПАМГ-фертитест", основанном на применении моноклональных антител. Для бактериологического и цитологического исследований берут мазки из цервикального канала шейки матки и заднего свода влагалища. В мазках отмечают проявления воспалительной реакции, вызванной различной специфической и неспецифической микрофлорой. И при уровне ПАМГ-1 ≥ 30 нг/мл, отсутствии СРБ и неинфицированных половых органов диагностируют плацентарную недостаточность неинфекционного генеза, а при уровне ПАМГ-1 ≥ 30 нг/мл, наличии СРБ и инфицированных половых органов диагностируют внутриутробное инфицирование (плацентарную недостаточность инфекционного генеза). Способ позволяет повысить специфичность диагностики.

Способ ранней диагностики внутриутробного инфицирования, включающий определение уровня плацентарного альфа-1-микроглобулина (ПАМГ-1) с помощью иммуноферментного анализа сыворотки крови беременной женщины, отличающийся тем, что дополнительно проводят бактериологическое и цитологическое исследование мазков из цервикального канала шейки матки и заднего свода влагалища и иммунологическое исследование сыворотки крови на наличие С реактивного белка (СРБ) и при уровне ПАМГ-1 ≥ 30 нг/мл, отсутствии СРБ и неинфицированных половых органах диагностируют плацентарную недостаточность неинфекционного генеза, а при уровне ПАМГ-1 ≥ 30 нг/мл, наличии СРБ и инфицированных половых органах диагностируют внутриутробное инфицирование (плацентарная недостаточность инфекционного генеза.