СПОСОБ ПОДБОРА АНТИСЕПТИКОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГНОЙНЫХ РАН Российский патент 1998 года по МПК G01N33/569 

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано в процессе лечения нагноительных осложнений раневого процесса.

Известен способ подбора антисептиков для лечения гнойных ран путем посева выделенных культур возбудителя на плотные среды с различными концентрациями антисептиков (А. П. Красильников. Справочник по антисептике. - Минск, 1995, с. 187-188).

Этот метод предполагает приготовление плотных сред с различными концентрациями антисептика. Поскольку авторы предлагают использовать интервал концентраций по ряду Фульда, то для определения чувствительности к одному препарату необходимо использование 22 чашек Петри и 330 мл питательных сред. Посев исследуемых культур производится методом реплик с помощью штампа-репликатора на 25 или 50 культур. Учет результатов проводят по наличию или отсутствию роста бактерий в зонах посева на фоне трафарета с номерами культур и в сопоставлении с контрольным посевом.

Метод имеет ряд существенных недостатков:
большой расход питательных сред и трудоемкость;
метод реплик сложен в исполнении, громоздок, в связи с чем может использоваться только для массовых обследований больных в крупных лечебных учреждениях;
раздельное исследование чистых культур, требующее их предварительного выделения, удлиняет сроки исследования до 3 сут.;
метод определения раздельной антисептикочувствительности чистых культур является ориентировочным, так как не учитывает взаимодействия бактерий разных видов в биоценозе, а чувствительность бактерий одного вида колеблется в широких пределах.

Изобретение направлено на решение задачи: повышение эффективности способа и сокращение сроков исследования.

Указанная задача решается путем взаимодействия раневой микрофлоры на питательной среде с различными антисептиками в различных концентрациях, инкубации смеси и учета результатов по отсутствию роста бактерий.

Новым в способе является то, что берут цельное раневое отделяемое, добавляют к нему жидкую питательную среду, например среду 199. Смесь гомогенизируют, центрифугируют и вносят в лунки с различными антисептиками. Полученную смесь инкубируют в течение 12-36 ч. и при отсутствии роста бактерий в лунке с определенным антисептиком его рекомендуют для лечения гнойной раны (в виде промывания и влажных повязок).

Способ осуществляют следующим образом.

У больного забирают образец раневого отделяемого (0,1-0,3 мл), вносят в пробирку с 3-5 мл питательной среды, например, среды 199, гомогенизируют в магнитной мешалке и центрифугируют 5-7 мин при 1500 об/мин для осаждения крупных частиц раневого детрита.

В стандартном стерильном 96-луночном полистироловом планшете готовят ряды 10-кратных разведений официнальных растворов антисептиков в объеме 80-100 мкл до концентрации 1:100000 включительно (всего 6 лунок на каждый из препаратов). В лунки вносят по 40-50 мкл исследуемого гомогената.

Инкубацию производят при 36-38^oC в течение 12-36 ч. Подбор антисептиков производят по отсутствию роста микрофлоры в лунках с разведениями антисептика по сравнению с контролем.

Пример 1. Больной А-н, 33 года, поступил в хирургическую клинику с диагнозом: многооскольчатый открытый перелом плечевой кости с нарушением целостности сосудисто-нервного пучка и массивным размозжением мышц плеча и предплечья. В послеоперационном периоде развилось обширное нагноение мягких тканей поврежденной конечности. Гнойное отделяемое из ран (0,2 мл) внесено в 4 мл среды 199, произведена гомогенизация и центрифугирование для осаждения крупных частиц детрита. Приготовлены разведения стандартных растворов диоксидина, хлоргексидина, димексида, фурацилина и борной кислоты начиная от исходного раствора до концентрации 1:100000. После 20 ч. инкубации наблюдалось ингибирование роста микрофлоры раствором диоксидина в разведении 1:100, растворами хлоргексидина, фурацилина и борной кислоты - до разведения 1:10, димексид роста раневой микрофлоры не подавлял.

В соответствии с показателями антисептикочувствительности раневой микрофлоры в комплекс лечебных мероприятий были включены ежедневные промывания ран раствором диоксидина и наложение повязок с ним.

К 15 сут. , согласно клиническим и бактериологическим критериям, раны очистились, рост грануляций, краевая эпителизация.

По результатам проведенного параллельно классического бактериологического исследования из раневого отделяемого выделена культура S. epidermidis с высокой чувствительностью к диоксидину.

Пример 2. Больная П-ва, 65 лет, диагноз: аденокарцинома нисходящей ободочной кишки с распадом, перфорацией в забрюшинное пространство. Абсцесс забрюшинного пространства.

После операции развилось массивное нагноение операционной раны. Раневое отделяемое (гной) в количестве 0,15 мл внесено в 3 мл среды 199, гомогенизировано на магнитной мешалке. Крупные частицы гноя осаждены путем центрифугирования при 1500 об/мин в течение 10 мин, после чего материал внесен в лунки планшета с разведениями стандартных растворов диоксидина, хлоргексидина, димексида фурацилина и борной кислоты, начиная от исходного раствора до концентрации 1: 100000. После 12 ч. инкубации наблюдалось угнетение роста микрофлоры раствором хлоргексидина в разведении 1:10000, растворами фурацилина и диоксидина - 1:100, димексид и борная кислота роста раневой микрофлоры не подавляли. Менее чем через сутки после забора материала в комплекс лечебных мероприятий включено промывание раны раствором хлоргексидина. К 4-м суткам по клиническим и бактериологическим критериям рана очистилась, сочные грануляции.

Бактериологическое исследование раневого отделяемого позволило к 4-м суткам выделить и идентифицировать культуры Escherichia coil, Candida albicans и Enterobacter cloacaeae.

Пример 3. Больная О-ва, 29 лет, диагноз: флегмонозный аппендицит, местный перитонит. Нагноение операционной раны на 10-е сутки после аппендэктомии.

Гной из раны (0,25 мл) внесен в среду 199, проведены его гомогенизация и центрифугирование (10 мин, 1500 об/мин), после чего он внесен в стерильный планшет с приготовленными 10-кратными разведениями стандартных растворов хлоргексидина, фурацилина, борной кислоты и димексида. После 36 ч. инкубации наблюдалось угнетение роста раневой микрофлоры раствором димексида - в разведении 1: 1000, растворами хлоргексидина и фурацилина - 1:100, раствор борной кислоты роста флоры не подавлял.

В соответствии с показателями антисептикочувствительности раневой микрофлоры в комплекс лечебных мероприятий включено промывание раны раствором димексида. На третьи сутки рана очистилась, роста микроорганизмов в отделяемом не наблюдалось. К этому же сроку из первичного материала была выделена по классической методике, идентифицирована как E.coli и проверена на чувствительность к антисептикам культура возбудителя.

Положительный эффект: предлагаемый способ экономичен, сокращает расход питательных сред в 6 раз, не требует сложного подготовительного этапа, менее трудоемок. Способ может применяться в любых лечебных учреждениях. Применение способа дает существенный выигрыш во времени для начала рациональной антисептикотерапии так как исследование занимает от 12 до 36 ч. по сравнению с 72 ч. в способе-прототипе. Определение суммарной антисептикочувствительности раневой микрофлоры позволяет выбрать препарат, наиболее эффективно подавляющий рост всех компонентов микробного сообщества.

Способ может быть использован в медицине, в частности в хирургии, и позволяет повысить эффективность способа и сократить сроки исследования. У больного забирают цельное раневое отделяемое, добавляют к нему жидкую питательную среду, гомогенизируют, центрифугируют, вносят в лунке с различными антисептиками и полученную смесь инкубируют в течение 12-36 ч. Раневая микрофлора взаимодействует на питательной среде с различными антисептиками в различных концентрациях, а результаты учитывают по отсутствию роста бактерий.

Способ подбора антисептиков для лечения гнойных ран путем взаимодействия раневой микрофлоры на питательной среде с различными антисептиками в различных концентрациях, инкубации смеси и учета результатов по отсутствию роста бактерий, отличающийся тем, что берут цельное раневое отделяемое, добавляют к нему жидкую питательную среду, гомогенизируют, центрифугируют, вносят в лунки с различными антисептиками и полученную смесь инкубируют в течение 12 - 36 ч.