СПОСОБ ПОДБОРА АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГНОЙНО- ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ Российский патент 1999 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в процессе лечения гнойно-воспалительных и инфекционных заболеваний в хирургической, гинекологической и терапевтической практике.

Известный способ подбора антибиотиков для лечения гнойных процессов ограничивается определением чувствительности микрофлоры к серийным разведениям препаратов (С.М.Навашин, И.П.Фомина. Рациональная антибиотикотерапия, - М., Медицина, 1982, с. 38-41).

Недостатком этого способа является то, что он не учитывает влияние антибактериальных препаратов на иммунную систему больного.

Изобретение направлено на решение задачи: повышение эффективности способа за счет учета иммунодепрессивного действия антибактериальных препаратов.

Указанная задача решается путем исследования антибиограммы микрофлоры и влияния антибиотика на активность нейтрофилов периферической крови в пробе с нитросиним тетразолием. Тест восстановления нитросинего тетразолия используется для оценки метаболической активности фагоцитирующих клеток, сопряженной с кислородзависимыми механизмами бактерицидности. В основе метода лежит восстановление в цитоплазме фагоцитирующих клеток нитросинего тетразолия до диформазана под влиянием супероксидного аниона, образующегося в процессе дыхательного взрыва при активации клетки. Диформазан осаждается в цитоплазме клетки в виде темно-синих гранул, количество которых зависит от степени активации клетки.

Новым в способе является то, что периферическую кровь больного смешивают с антибактериальными препаратами и нитросиним тетразолием, подсчитывают в смеси количество нейтрофильных гранулоцитов с сине-фиолетовыми гранулами формазана в цитоплазме и выбирают препарат с их максимальным количеством.

Способ осуществляют следующим образом.

Изучают антибиотикограмму выделенных от данного больного бактериальных культур методом серийных разведений по общепринятой методике. Отмечают наименьшую концентрацию антибиотиков, при которой не наблюдается роста бактерий, и принимают ее за минимальную подавляющую концентрацию (МПК).

Затем изучают влияние отобранных на основании антибиотикограммы антибактериальных препаратов на активность нейтрофилов периферической крови в пробе с нитросиним тетразолием (НСТ-тест). У больного забирают образец крови (0,1 - 0,2 мл) из пальца, добавляя гепарин (20 ЕД на 1 мл крови). На обезжиренное предметное стекло наносят ряд капель крови объемом 0,01 мл.

В качестве контроля изучают естественный (спонтанный) уровень исходной окислительно-восстановительной функции нейтрофильных гранулоцитов. При этом к капле крови добавляют 0,01 мл фосфатно-солевого буферного раствора (pH 7,2).

Для изучения влияния антибактериальных препаратов к каплям крови добавляют по 0,01 мл растворов изучаемых антибактериальных препаратов в среднетерапевтических концентрациях.

Капли осторожно смешивают стеклянной палочкой и помещают стекла во влажных камерах в термостат при 37^oC на 5 минут. Затем добавляют к каждой пробе по 0,01 мл 0,15% раствора нитросинего тетразолия, снова смешивают стеклянной палочкой и ставят в термостат на 30 минут. После инкубации мазки высушивают, фиксируют метиловым спиртом 10 минут и окрашивают 2% раствором метилового зеленого. При микроскопии мазков под масляной иммерсией оценивают активность взаимодействия клеток с нитросиним тетразолием по наличию и количеству клеток с сине - фиолетовыми гранулами формазана в цитоплазме. Оценка результатов проводится в условных единицах с учетом активности реакции в клетках (С.М. Гордиенко. Оценка клеточного иммунитета в клинической практике. - Барнаул, 1983).

Для лечения отбирают препарат, обладающий наименьшим показателем минимальной подавляющей концентрации и оказывающий минимальное иммунодепрессивное действие (наибольшее количество условных единиц по данным НСТ-теста).

Примеры конкретного выполнения.

Пример 1. Больной П-н, 60 лет, поступил в хирургическую клинику с диагнозом: желчнокаменная болезнь, хронический калькулезный холецистит, холедохолитиаз, стеноз большого дуоденального сосочка II ст. Острый гнойный холангит. Механическая желтуха.

После курса предоперационной подготовки больной был прооперирован; уровень бактериохолии составил 10⁸ КОЕ/мл. Показатели антибиотикочувствительности микрофлоры желчи (выделена и идентифицирована культура Escherichia coli) составили:
Минимальная подавляющая концентрация, мкг/мл:
ципрофлоксацин - 4
гентамицин - 4
клафоран - 16
ампиокс - 32
пенициллин - 32
левомицетин - н/ч
Показатели НСТ-теста составили:
спонтанный - 5 условных единиц (у.е.);
в присутствии антибиотиков:
ципрофлоксацин - 33 у.е.

гентамицин - 10 у.е.

ампиокс - 8 у.е.

клафоран - 3 у.е.

С учетом показателей антибиограммы и НСТ-теста больному был назначен ципрофлоксацин. Проводимая терапия позволила быстро купировать эндогенную интоксикацию; уровень бактериохолии снизился до 10² КОЕ/мл к 5 дню.

Пример 2. Б-я 3-ва, 36 лет, поступила с диагнозом: Периаппендикулярный абсцесс.

Больная оперирована; произведено вскрытие гнойника; общее микробное число составило 10⁷ КОЕ / мл. Показатели антибиограммы бактериальной флоры были следующими;
ципрофлоксацин - < 0,1
гентамицин - < 0,1
тиенам - 0,4
клафоран - 1
фортум - 2
цефобид - 8
канамицин - н/ч
левомицетин - н/ч
Показатели НСТ-теста составили:
спонтанный - 10 y.e.

в присутствии антибиотиков:
гентамицин - 24 у.е.

ципрофлоксацин - 23 у.е.

фортум - 13 у.е.

клафоран - 7 у.е.

С учетом показателей антибиограммы и НСТ-теста больной назначен гентамицин. В результате проведенного лечения состояние больной улучшилось: симптомы эндогенной интоксикации исчезли к 3 дню, к 5 дню микробная обсемененность не определялась.

Пример 3. Б-й М-ин, 52 лет, поступил с диагнозом: Острый гнойный рецидивирующий холангит. Холангиогенные абсцессы печени. Состояние после гепатикоеюноанастомоза на транспеченочных дренажах.

При поступлении выполнено бактериологическое исследование желчи (выделены культуры Pseudomonas aeruginosa и Es-cherichia coli при общем уровне микробного числа 10⁷ КОЕ/мл).

Минимальная подавляющая концентрация, мкг/мл :
ципрофлоксацин - 1
тиенам - 1
клафоран - 16
цефазолин - 32
рифампицин - 32
эритромицин - 32
пенициллин - н/ч
ампиокс - н/ч
гентамицин - н/ч
левомицетин - н/ч
линкомицин - н/ч
Показатели HCT-теста составили:
спонтанный - 9 у.е.

в присутствии антибиотиков:
ципрофлоксацин - 10 у.е..

клафоран - 6 у.е.

тиенам - 5 у.е.

рифампицин - 5 у.е.

цефазолин - 2 у.е.

Больному назначен ципрофлоксацин, через 6 дней уровень микробной обсемененности снизился до 10² КОЕ/мл.

Положительный эффект: предлагаемый способ экономичен, высокочувствителен, специфичен за счет того, что учитывает индивидуальные иммунологические особенности больного. Для проведения исследования требуется минимальное количество крови. Способ может применяться в любых лечебных учреждениях.

Способ может быть использован в медицине, а именно для лечения гнойно-воспалительных процессов. Способ осуществляют путем смешивания периферической крови больного с антибактериальными препаратами, отобранными по результатам антибиотикограммы, и нитросиним тетразолием. Подсчитывают в смеси количество нейтрофильных гранулоцитов с сине-фиолетовыми гранулами формазана. Для лечения выбирают препарат с их максимальным числом. Способ повышает эффективность лечения за счет учета иммунодепрессивного действия антибактериального препарата.

Способ подбора антибактериальных препаратов для лечения гнойно-воспалительных процессов с помощью антибиотикограммы микрофлоры больного, отличающийся тем, что периферическую кровь больного смешивают с антибактериальными препаратами, отобранными по результатам интибиотикограммы, и нитросиним тетразолием, подсчитывают в смеси количество нейтрофильных гранулоцитов с сине-фиолетовыми гранулами формазана в цитоплазме и выбирают препарат с их максимальным количеством.