СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ ГЕМОФИЛЕЗА, СТРЕПТОКОККОЗА И ПАСТЕРЕЛЛЕЗА СВИНЕЙ Российский патент 1998 года по МПК A61K39/40 A61K39/02 A61K39/102 A61K39/395 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к получению лечебной сыворотки против гемофилеза, стрептококозза и пастереллеза свиней.

Цель изобретения - разработать способ получения высокоэффективной лечебной сыворотки одновременно против гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней, ускорение способа и уменьшение объема вводимого антигена.

Для этого пастереллезный антиген готовят из штамма Pasteurella multocida ВГНКИ N 681-Деп. серовара B, добавляют к нему инактивированные культуры штаммов Pasteurella multocida ВГНКИ N 1231-Деп. серовара A, Pasteurella multocida ВГНКИ N Т-80-Деп. серовара D, дополнительно готовят антиген из инактивированных концентрированных культур Haemophilus pleuropneumoniae МГАПБ N ГУ-19 серовара I и Haemophilus pleuropneumoniae МГАПБ N 5870 серовара II и инактивированный концентрированный антиген из штамма Streptococcus suis ВГНКИ "Касли" серовара 2, грундиммунизацию и гипериммунизацию проводят каждым из полученных антигенов раздельно, причем грундиммунизацию - двукратно с интервалом 21 день, а гипериммунизацию осуществляют 8-10 внутримышечнными инъекциями с интервалом 2-3 дня пастереллезным антигеном при общей дозе 645-1000 млрд. микробных тел, гемофилезным - 800-1000 млрд. микробных тел и стрептококковым в количестве 1000 - 1255 млрд. микробных тел.

Сущность предлагаемого способа состоит в следующем. Для создания грундиммунитета свиньям двукратно подкожно в разные участки тела вводят инактивированный концентрированный пастереллезный антиген в дозе 1-2 млрд. микробных тел, инактивированный концентрированный гемофилезный антиген в дозе 2-3 млрд. микробных тел, инактивированный концентрированный стрептококковый антиген в дозе 3-4 млрд. микробных тел и повторно через 21 день 2-4 млрд. микробных тел пастереллезного, 4-6 млрд.микробных тел гимофилезного и 6-8 млрд. микробных тел стрептококкового антигена.

Гипериммунизацию свиней проводят путем 8-10 внутримышечных инъекций в возрастающих дозах инактивированного концентрированного пастереллезного антигена, очищенного от культуральной жидкости, в количестве 645-1000 млрд. микробных тел, гемофилезного антигена в количестве 800-1000 млрд. микробных тел и стрептококкового - в общей дозе 1000 - 1255 млрд. микробных тел с интервалом 2-3 дня (см. табл.).

В процессе эксплуатации после каждого взятия крови через 1-2 дня проводят очередные внутримышечные инъекции инактивированного концентрированного пастереллезного, гемофилезного и стрептококкового антигена в дозе по 200 морд. микробных тел каждого, а через 7-10 дней после этого от продуцентов снова берут кровь.

Пример 1. Гипериммунизацию свиней проводили путем 10 внутримышечных инъекций в возрастающих дозах инактивированного пастереллезного антигена 10-миллиардной концентрации, очищенного от культуральной жидкости, в общем количестве 1000 млрд. микробных тел по схеме:
1 инъекция 10 млрд.микробных тел 1 мл
2 инъекция 20 млрд.микробных тел 2 мл
3 инъекция 40 млрд.микробных тел 4 мл
4 инъекция 50 млрд.микробных тел 5 мл
5 инъекция 80 млрд.микробных тел 8 мл
6 инъекция 120 млрд.микробных тел 12 мл
7 инъекция 140 млрд.микробных тел 14 мл
8 инъекция 160 млрд.микробных тел 16 мл
9 инъекция 180 млрд.микробных тел 18 мл
10 инъекция 200 млрд.микробных тел 20 мл,
10 внутримышечных инъекций инактивированного концентрированного гемофилезного антигена 10-миллиардной концентрации в общем количестве 1000 млрд. микр.тел по той же схеме:
1 инъекция 10 млрд.микробных тел 1 мл
2 инъекция 20 млрд.микробных тел 2 мл
3 инъекция 40 млрд.микробных тел 4 мл
4 инъекция 50 млрд.микробных тел 5 мл
5 инъекция 80 млрд.микробных тел 8 мл
6 инъекция 120 млрд.микробных тел 12 мл
7 инъекция 140 млрд.микробных тел 14 мл
8 инъекция 160 млрд.микробных тел 16 мл
9 инъекция 180 млрд.микробных тел 18 мл
10 инъекция 200 млрд.микробных тел 20 мл,
10 внутримышечных инъекций инактивированного концентрированного стрептококкового антигена 10-миллиардной концентрации в общем количестве 1255 млрд.микробных тел по схеме:
1 инъекция 15 млрд.микробных тел 1,5 мл
2 инъекция 30 млрд.микробных тел 3 мл
3 инъекция 60 млрд.микробных тел 6 мл
4 инъекция 100 млрд.микробных тел 10 мл
5 инъекция 150 млрд.микробных тел 15 мл
6 инъекция 160 млрд.микробных тел 16 мл
7 инъекция 170 млрд.микробных тел 17 мл
8 инъекция 180 млрд.микробных тел 18 мл
9 инъекция 190 млрд.микробных тел 19 мл
10 инъекция 200 млрд.микробных тел 20 мл
с интервалом между инъекциями 2-3 дня. Через 7-10 дней у свиней брали кровь, получали сыворотку и определяли ее активность в РА.

Результаты определения активности:
титры полученной сыворотки в РА составили
РА
к Pasteurella multocida
A 1:400 контроль (прототип) 1:400
B 1:800 контроль (прототип) 1:800
D 1:400 контроль (прототип) 1:400
к M. pleuropneumoniae
5870 1:320
ГУ-19 1:640
к Streptococcus suis
Касли 1:200
Пример 2. В сравнении с примером 1 увеличено количество инъекций и доза антигенов при гипериммунизации. Проводят 11 инъекций пастереллезного и гемофилезного антигенов по схеме: 10-20-40-50-80-120-140-160-180-200-220 млрд. тел, стрептококкового 15-30-60-100-150-160-170-180-190-200-220 млрд. микробных тел. Общее количество антигенов: пастереллезного - 1220 млрд.микробных тел, гемофилезного - 1220 млрд.микробных тел, стептококкового - 1475 млрд.микробных тел.

Титры полученной сыворотки в РА составили:
к Pasteurella multocida
A 1:400
B 1:800
D 1:400
Haemophilus pleuropneumoniae 5870 1:320
ГУ 1:640
Streptococcus suis Касли 1:200.

Пример 3. Еще больше увеличено количество инъекций и доза антигенов. Доза пастереллезного антигена - 10-20-40-50-80-120-140-160-180-200-220-250 млрд. микробных тел, гемофилезного - 10-20-40-50-80-120-140-160-180-200-220-250 млрд. микробных тел, стрептококкового - 15-30-60-100-150-160-170-180-190-200-220-250 морд. микробных тел. Общее количество антигенов: пастереллезного - 1470 млрд.микробных тел, гемофилезного - 1470 млрд.микробных тел, стрептококкового - 1725 млрд.микробных тел.

Титры полученной сыворотки в РА составили:
к Pasteurella multocida
A 1:400
B 1:800
D 1:400
Haemophilus pleuropneumoniae 5870 1:320
ГУ-19 1:640
Streptococcus suis Касли 1:200.

Увеличение числа инъекций больше 10 и количества антигенов пастереллезного и гемофилезного больше 1000 млрд.микробных тел, стрептококкового больше 1255 млрд.микробных тел не привело к дальнейшему повышению титра антител сыворотки. Увеличение количества антигенов и числа инъекций нецелесообразно, так как оказывает дополнительную нагрузку на иммунную систему продуцентов и невыгодно с экономической точки зрения.

Пример 4. Уменьшили количество инъекций до 8: пастереллезного антигена - 5-10-20-40-80-120-170-200 млрд.микробных тел, гемофилезного - 10-20-40-60-100-150-200-220 млрд. микробных тел, стрептококкового - 10-30-60-100-150-180-220-250 млрд.микробных тел. Общее количество антигенов: пастереллезного - 645 млрд.микробных тел, гемофилезного - 800 млрд.микробных тел, стрептококкового - 1000 млрд.микробных тел.

Титры полученной сыворотки в РА составили:
к Pasteurella multocida
A 1:400
B 1:800
D 1:400
Haemophilus pleuropneumoniae 5870 1:320
ГУ 1:640
Streptococcus suis Касли 1:200.

Уменьшение числа инъекций до 8 при уменьшении общего количества вводимых антигенов: пастереллезного - до 645 млрд.микробных тел, гемофилезного - до 800 млрд. микробных тел, стрептококкового - до 1000 млрд.микробных тел не привело к снижению титра антител в сыворотке.

Пример 5. Уменьшение числа инъекций до 7 при уменьшении общего количества вводимых микробных тел: пастереллезного антигена - до 510 млрд.микробных тел (10-20-40-80-100-120-140 млрд.микробных тел), гемофилезного антигена - до 700 млрд. микробных тел (20-40-60-100-120-160-200 млрд.микробных тел), стрептококкового антигена - до 800 млрд.микробных тел (10-30-60-100-150-200-250 млрд.микробных тел).

Титры полученной сыворотки в РА составили:
к Pasteurella multocida
A 1:200
B 1:400
D 1:200
Haemophilus pleuropneumoniae 5870 1:160
ГУ-19 1:160
Streptococcus suis Касли 1:100.

Уменьшение числа инъекций до 7 при уменьшении общего количества вводимых антигенов: пастереллезного - до 510 млрд.микробных тел, гемофилезного - 700 млрд. микробных тел, стрептококкового - до 800 млрд.микробных тел привело к снижению титров антител в полученной сыворотке.

Предложенный способ апробирован с положительными результатами в лабораторных и производственных условиях.

Способ обладает следующими преимуществами: позволяет получить сыворотку одновременно против гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней, сыворотка, полученная этим способом, активна в отношении Pasteurella multocida сероваров A, B и D, Haemophilus pleuropneumoniae сероваров I и II и Streptococcus suis серовара 2, использование концентрированных антигенов позволяет уменьшить объемное и суммарное количество вводимых антигенов, снизить неспецифическую нагрузку на иммунную систему продуцентов, что дает возможность увеличить специфическую нагрузку в части гемофилезного и стрептококкового антигена.

Сыворотка предназначена для создания пассивного иммунитета у свиней одновременно против гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза. В качестве антигенов берут культуры Pasteurella multocida серовара А штамма 1231, серовара В штамма 681 и серовара D штамма Т-80 в количестве 645-1000 млрд. микробных тел и дополнительно вводят Haecmophilus pleuropneumomiae серовара I штамма ГУ-19 и серовара II штамма 5870 и в количестве 800-1000 млрд. микробных тел, Streptococcus suis серовара 2 штамма Касли в количестве 1000-1255 млрд. микробных тел. Для создания грундиммунитета свиньям двукратно подкожно в разные участки тела вводят инактивированный концентрированный пастереллезный антиген в дозе 1-2 млрд. микробных тел, инактивированный концентрированный гемофилезный антиген в дозе 2-3 млрд. микробных тел, инактивированный концентрированный стрептококковый антиген в дозе 3-4 млрд. микробных тел и повторно через 21 день 2-4 млрд. микробных тел пастереллезного, 4-6 млрд. микробных тел гемофилезного и 6-8 млрд. микробных тел стрептококкового антигена. Гипериммунизацию проводят инактивированным концентрированным пастереллезным, гемофилезным и стрептококковым антигенами 8 - 10-кратно с интервалом 2-3 дня. 1 табл.

\\\1 Способ получения гипериммунной сыворотки против гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней, включающий приготовление антигена из инактивированных концентрированных культур Pasteurella multocida сероваров A, B и D, грундиммунизацию, гипериммунизацию возрастающими дозами антигена с последующими крововзятием и выделением целевого продукта, отличающийся тем, что дополнительно готовят антигены из инактивированных концентрированных культур Haemophilus pleuropneumoniae сероваров I и II и антиген из штамма Касли Streptococcus suis серовара II, при этом грундиммунизацию и гипериммунизацию проводят каждым антигеном раздельно в разные участки тела в области региональных лимфатических узлов (предлопаточных и коленной складки), причем грундиммунизацию осуществляют двукратно с интервалом 21 день, гипериммунизацию - 8 - 10-кратными внутримышечными инъекциями с интервалом 2 - 3 дня при общей дозе пастереллезного антигена 645 - 1000 млрд.микробных тел, гемофилезного антигена - 800 - 1000 млрд.микробных тел и стрептококкового антигена - 1000 - 1255 млрд.микробных тел.