Способ получения сыворотки для лечения и профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных, преимущественно свиней, пушных зверей и кроликов Советский патент 1993 года по МПК A61K39/102 

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к получению сыворотки против пастереллеза сельскохозяйственных животных.

I Цель работы - повышение активности целевого продукта, сокращение длительно- CJH и упрощение способа его получения.

i Поставленная цель достигается благо- дёря тому, что из штаммов Pasteurella mjultoclda сероварианта В используют наи- бЬлееиммуногённый штамм ВГНКИ №656- ДЕП, дополнительно вводят штаммы

Pasteureila multocida ВГНКИ № 8683-ДЕП сероварианта А и ВГНКИ № Т-80-ДЕП сероварианта D, культивирование проводят в течение 5-6 ч при шуттелировании, клетки концентрируют центрифугированием при факторе разделения 2500д в течение 39- 41 мин, полученный осадок ресуспендируют в физиологическом растворе до концентрации 20 млрд. кл./мл, инактивацию проводят 0,02% формальдегидом при 44,5-45,5°С в течение 4-6 ч, а гипериммунизацию осуществляют 8-10 кратными внутримышечными

00

инъекциями с интервалом 2-3 дня при общем объеме вводимого антигена 85-95 мл.

Полученную сыворотку вводят животным с целью профилактики подкожно в следующих дозах: взрослым свиньям 30- 40 мл, поросятам 10-30 мл, кроликам 5-10 мл, пушным зверям 5-10 мл.

С лечебной целью сыворотку вводят животным в двойной дозе внутримышечно илм внутривенно в начальной стадии заболевания при остром лечении.

В связи с тем, что активность сыворотки повышается, профилактические и лечебные дозы не изменяются по сравнению со способом-прототипом, при том, что спектр ее действия значительно расширяется.

П р и м е р 1. Для приготовления антигена используют штамм: № 656 серовариан- та В, № 8683 сероварианта А и Т-80 сероварианта D. Данные штаммы культивируют в течение 5,5 часов на бульоне Хоттин- гера при шуттелировании. После окончания культивирования определяют концентрацию микробных тел фотометрически и чистоту выращенной культуры. Выращенные культуры пастерелл концентрируют путем центрифугирования при факторе разделения 2500д 40 мин. Осадок ресуспендируют в физиологическом растворе до концентрации 20 млн. м.т. в 1 мл. К концентрированным культурам добавляют формальдегид до концентрации 0,02% и инактивируют при 45°С в течение 5 часов. Полученным антигеном проводят 9 внутримышечных инъекций с интервалом 2 дня, при этом общий объем вводимого антигена составляет 90 мл. Для лучшего рассасывания антиген вводят подогретым до температуры 37°С в 3-5 мест. Через 8 дней у волов берут кровь для определения титра в РНГА. Целевой продукт выделяют из крови известным способом.

Результаты.

Титр полученной сыворотки в РНГА:

на антиген сероварианта А - 1:2048;

- -В-1:1024;

- -D-1:1024. Длительность цикла гиперйммунизации 28 дней.

Получение сыворотки, описанное в примерах 2-13 осуществляли аналогично примеру 1. Параметры и результаты опытов приведены в таблице.

Сыворотка, полученная предложенным способом опробирована с положительным результатом в производственных условиях,

Предложенный способ в отличии от известного обладает следующими преимуществами: сыворотка, полученная данным способом, обладает широким спектром действия и эффективна при различных формах пастереллезов, т.к. антиген, используемый

для её получения содержит штаммы различных серовариантов (А, В, D); концентриро- вание с помощью центрифугирования позволяет максимально сконцентрировать антиген, полностью очистить его от культуральной жидкости, оказывающей чрезмерную неспецифическую нагрузку на иммунную систему продуцентов, а также ис- ключить реактогенные алюмокалиевые квасцы; способ более прост в исполнении и

менее трудоемок, т.к.:

а) культивируют 3 штамма в течение 5-6 ч:.;... .

б) сокращается количество инъекций и, следовательно, длительность цикла гипер- иммунизации;

в) в 7-8 раз снижается объем вводимого антигена;способ позволяет избежать аллергических реакций и пастереллоносительст- ва у продуцентов, т.к. используется только инактивированный антиген; способ инактивации позволяет сохранить полноценность антигена, т.к.:

а) инактивации подвергается 5-6-часовая культура, полноценная 8 антигенном от- ношении;

б) режим инактивации щадящий, не вызывающий деструктивных изменений клеток бактерий.

Сыворотка, полученная предложенным

способом, найдет применение в хозяйствах, неблагополучных по пастереллезу, позволит- лечить и профилактировать различные формы пастереллезов сельскохозяйственных культур.

Использование: сыворотка против различных форм пастереллезов сельскохозяйственных животных, способ профилактики лечения пастереллезов сельскохозяйственных животных. Сущность изобретения в качестве штаммов П.мультоцида сероварианта В берут наиболее иммуногенный штамм № 656, дополнительно вводят штаммы N 8683 сероварианта А и Т80 сероварианта D, культивируют в течение 5-6 ч при шуттелировании, проводят концентрацию путем центрифугирования, инактивацию проводят 0,02% формальдегидом при 44,5- 45,5°С в течение 4-6 ч и полученным анти-. геном животным-продуцентам проводят 8-10 внутримышечных инъекций с интервалом 2-3 дня, при этом общий объем .вводимого антигена составляет 85-95 мл. Полученную сыворотку вводят животным с целью профилактики подкожно в следующих дозах (в мл): взрослым свиньям 30-40, поросятам 10-30, кроликам 5-10, пушным зверям 5-10. С лечебной целью сыворотку вводят животным в двойной дозе внутримышечно или внутривенно в начальной стадии заболевания при остром течении. С/1 С ю кэ ч

Формула изобретения.

Способ получения сыворотки для ле- чения и профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных, преиму щественно свиней, пушных зверей и кроликов, включающий отбор штаммов Pasteurella multoclda сероварианта В, совместное культивирование отобранных штаммов в жидкой питательной среде, кон- центрирование клеток, их инактивацию, гипериммунизацию продуцентов полученным антигеном в возрастающих дозах с последующим крововзятием и выделением целевого продукта, отличающийся тем, что,

с целью повышения активности целевого продукта, сокращения длительности и упрощения способа, из штаммов Pastieurella multocida сероварианта В используют штамм Pasteurella multocida ВГНКИ № 656-ДЕП, дополнительно отбирают культуры штаммов Pasteurella multocida ВГНКИ № 8683-ДЕП сероварианта А и Pasteurella rrjultoclda ВГНКИ №Т80-ДЕП сероварианта D, культивирование проводят в течение 5-6 ч при шуттелировании, клетки концентрируРезультаты опытов по получению сыворотки против пастереллезов сельскохозяйственных животных

Серовар. А,

Г В, D

5,5

|| - | i - и ii п

5,0 6,0

м

7

8

3

0

||

Серовар. А,В

Серовар.В,D

Серовар. А, В, D

5,5 .

13

ч

1ч Серовар.В

2ч,36

ют центрифугированием при факторе разделения 2500д в течение 39-41 мин, полученный осадок ресуспендируют в физиологическом растворе до концентрации 20 млрд.кл/мл, инактивацию проводят 0,02%- ным формальдегидом при 44.5-45,5°С в течение 4-6 ч, а гипериммунизацию осуществляют 8-10-кратными внутримышечными инъекциями в интервалом 2-3 дня при общем объеме вводимого антигена 85- 95 мл.

0,02% . ФА, 5 ч,ч5°С

9 Внутримышечно

-И- Ч

-И.

-И.

8

10

9

н. п. и. - i. н.

и. и.

ч. -п.

7 Э

-Ч-ч

Подкожно

ги

з.

иев.

0,5ч,бО°С-

ч инъек. -10 0,5 ч,60°С, b инъекц. - живой а/г .

0,02Sg ФА,5 ч, Э

Ъ

ч - 30 мин, 60 1ч

10 - живой

Внутримышечно

-Ч

Подкожно Подкожно

901:2048 1:1024 1:102 28-35

Продолжение таблицы