СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХОЛЕСТАЗА ПЕЧЕНИ С ПОМОЩЬЮ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА ЛИПОПРОТЕИДОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ Российский патент 1999 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической гастроэнтерологии и может быть использовано для лабораторной диагностики хронических заболеваний печени, а именно холестатических поражений, на основе объективной оценки количественного содержания главных классов холестерин-транспортных липопротеидов сыворотки крови, определяемых на разных стадиях холестаза печени гель-электрофореза.

Известные способы клинической диагностики хронических поражений печени путем морфологического анализа биоптата печени (Логинов А.С., Аруин Л.И. "Клиническая морфология печени". М., Медицина, 1985), проводятся с использованием материала чрескожной пункционной биопсии, что связано с оперативным (лапароскопическим) вмешательством в организм больного, а также малой предсказуемостью диагноза, например, из-за недостаточной информативности получаемого биоптата.

Известен также способ с использованием биохимической энзимодиагностики хронических поражений печени, включая первичный билиарный цирроз (ПБЦ) (Логинов А. С. , Матюшин Б.Н. с соавт., авторское свидетельство N1809384 от 1993 г.; Логинов А.С., Матюшин Б.Н. с соавт. "Новый подход к диагностике холестаза по активности медьсодержащих ферментов "Тер. архив. 1993, N 2, с. 34-36), заключающийся в определении активности ряда антиоксидантных ферментов в биоптате печени. Однако существующий способ не позволяет осуществлять дифференциальную диагностику ранних стадий ПБЦ от терминальной стадии, когда необходимо решать вопрос о продолжении консервативной терапии ПБЦ или о наиболее благоприятных сроках трансляции печени. Кроме того, при выраженном холестазе, особенно на терминальной стадии ПБЦ, биопсийная лапароскопия печени больному противопоказана.

Заявляемый способ в отличие от известных способов диагностики холестаза печени, исключает инвазивное вмешательство, позволяет упростить проведение и повысить надежность диагностики и, что особенно важно, предоставляет возможность проводить разграничение ранних стадий благоприятные для провидения трансплантации печени.

Цель заявляемого способа заключается в повышении точности диагностики хронических заболеваний печени минимальном вмешательстве в организм больного на основе электрофоретического выделения и количественного определения в сыворотке крови основных классов липопротеидов (ЛП): хиломикронов (хило-ЛП), липопротеидов очень низкой плотности (пребета-ЛП), липопротеидов низкой плотности (бета-ЛР), липопротеидов высокой плотности (альфа-ЛП) (см. таблицу)
Поставленная цель достигается за счет использования по новому назначению известного способа выделения транспортных форм холестерина в сыворотке и плазме крови, применяемого для диагностики гиперлипопротеидемий при атеросклеротических поражениях сердечно-сосудистой системы (New Engl. J. Med., 1967, v. 276, p. 34 and 147).

В настоящее время неизвестно использование электрофоретического способа выделения транспортных форм холестерина для диагностики хронических поражений печени.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом: образцы сыворотки или плазмы крови полученной натощак наносят в объеме 5 мкл на агарозную пластину и проводят электрофорез в течение 30 мин при напряжении 100 вольт, пластину фиксируют, сушат, окрашивают на липиды судановым черным и обесцвечивают фон, после дополнительного просушивания пластину анализируют с помощью денситометра при длине волны 600 нм и определяют процентное содержание каждого класса липопротеидов для группы здоровых лиц (норма) и для групп с разной патологией, включая желчно-каменную болезнь (ЖКБ), хронический панкреатит (Хр. П), первичный билиарный цирроз (ПЦБ). Сравнительные данные по класса ЛП в группах здоровых и больных лиц сводятся в таблицу.

На основании количественных данных вычисляется показатель отношений между бета-ЛП и альфа-ЛП (см. чертеж).

Из таблицы следует, что между параметрами соответствующих классов ЛП у лиц контрольной группы (норма) и у группы лиц с ПБЦ, находящихся на 2 - 3 стадии заболевания, не выявлено достоверных различий, хотя наблюдается некоторая тенденция к увеличению уровня бета-ЛП и к снижению уровня альфа-ЛП.

Сравнительный анализ отношений между отдельными классами липопротеидов в исследуемых группах (см. чертеж) позволил установить достоверные различия в показателях отношения бета-ЛП к альфа-ЛП в норме и у больных ПБЦ (p < 0,024), в норме и у больных хроническим панкреатитом (p < 0,001), а также убедиться в отсутствии достоверных различий между нормой и больными ЖКБ (p > 0,27).

Полученные результаты были тщательно сопоставлены и данными клинико-биохимического, инструментального и морфологического исследования. Всего обследовано 137 человек.

Примеры конкретного осуществления способа
Пример 1.

Больная Д., 53 года.

В сыворотке крови, полученной с диагностической целью и подвергнутой электрофорезу по заявляемому способу, определяют с помощью денситометра процентное содержание основных классов липопротеидов (хиломикроны, бета-ЛП, пребета-ЛП, альфа-ЛП) и вычисляют показатель отношений бета-ЛП/альфа-ЛП, у данной больной содержание бета-ЛП составляет 56,1%, а уровень альфа-ЛП равен 18,7%. Соответственно показатель отношений между данными классами липопротеидов равен 3,0, что находится в пределах соответствующих значений показателя для 2 - 3 стадии ПБЦ (см. чертеж).

Таким образом можно диагностировать первичный билиарный цирроз печени, 2 - 3 стадии. Это совпадает с заключительным клиническим диагнозом: первичный билиарный цирроз печени, 3 стадия, портальная гипертензия, варикозное расширение вен пищевода, распространенный остеохондроз. Вместе с тем следует отметить, что заключение о диагнозе по предлагаемому способу диагностики сделано в течение 45 мин, что сокращает более чем в 2 раза затраты времени в сравнении с энзимодиагностикой (2 часа).

Пример 2.

Больная М., 52 года.

После электрофореза сыворотки крови по заявляемому способу и денситометрии гелевой пластины получены значения бета-ЛП = 73,2 и альфа-ЛП 15,8%. Показатель отношений между этими классами липопротеидов равен 4,6, что превышает соответствующие средние значения для 2 - 3 стадии ПБЦ (см. график на чертеже). В связи с этим возможен диагноз: первичный билиарный цирроз, 3 стадия с возможностью перехода в 4 стадию. Заключительный клинический диагноз: первичный билиарный цирроз печени.

Через 12,5 месяцев проведено повторное взятие сыворотки крови у данной больной и выполнен новый анализ заявляемым способом. Получены значения для бета-ЛП = 77,2 и для альфа-ЛП = 11,0. Соответствующий показатель отношений между этими классами составляет 7,2, что соответствует 4-й стадии ПБЦ. В заключительном клиническом диагнозе констатируется: билиарный цирроз печени, 3 - 4 стадия, активный, портальная гипертензия, варикозное расширение вен пищевода.

На данном примере видно, что предлагаемый способ позволяет более точно выявлять стадии холестатического поражения печени и прогнозировать динамику заболевания.

Пример 3.

Больная С., 49 лет.

После проведения электрофореза сыворотки крови по предлагаемому способу и выполнения денситометрии найдены значения бета-ЛП = 81,9% и альфа-ЛП = 7,8%. Соответствующий показатель между данными классами липопротеидов равен 10,5 т.е. находится в пределах доверительного интервала аналогичных показателей для терминальной стадии ПБЦ. На основании сравнительных показателей можно сделать вывод о наличии первичного билиарного цирроза печени 4-й (терминальной) стадии. Больная, вероятно, нуждается в проведении ортотопической трансплантации печени. В то же время на основании традиционных методов клинико-биохимического и инструментального исследования был поставлен следующий заключительный клинический диагноз: первичный билиарный цирроз печени, 3 стадия, активный, дисфункция яичников, псориаз.

Через 4 месяца больная скончалась.

На данном примере видно, что заявляемый способ точнее отражает выраженность холестатического поражения печени и, следовательно, может использоваться для выявления терминальной стадии хронического заболевания, когда пункционная биопсия печени противопаказана. Предлагаемый способ может иметь определяющее значение при решении вопроса о показаниях и противопоказаниях к проведению трансплантации печени у больных ПБЦ на терминальной стадии заболевания.

Использование предлагаемого способа диагностики холестаза печени с помощью электрофореза липопротеидов сыворотки крови обеспечивает по сравнению с существующими следующие преимущества:
возможность неинвазионной диагностики больных с холестатическими поражениями печени,
возможность количественной оценки патологического процесса,
возможность контроля на каждой стадии болезни и, что особенно важно, на терминальной стадии заболевания, когда пункционная биопсия для морфологического или энзимодиагностического анализа противопоказана,
отличается высокой прогностической ценностью, в связи с чем может быть использован в качестве основного биохимического теста при решении вопроса о продолжении консервативного лечения или об уточнении оптимальных показаний к хирургическому вмешательству.

сокращает более чем в два раза затраты времени на проведение лабораторных исследований в сравнении с прототипом.

Применение этого способа значительно повысит качество диагностики, а соответственно профилактики и лечения холестатических поражений печени и будет способствовать пониманию патогенетических механизмов и эпидемиологических закономерностей заболеваний связанных с холестазом.

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической гастроэнтерологии. Способ позволяет в сыворотке крови больных с помощью гель-электрофореза на агарозной пластине выделить основные классы липопротеидов, определить процентное содержание каждого класса ЛП, после чего рассчитать показатель отношений между бета-ЛП и альфа-ЛП, сопоставляют данный показатель с контрольным и определяют степень выраженности холестатического поражения печени. Технический результат - повышение эффективности и сокращение сроков лабораторной диагностики заболеваний, сопровождающихся синдромом холестаза печени. 1 ил.

Способ диагностики холестатических поражений печени путем клинико-биохимического исследования сыворотки крови больных, отличающийся тем, что проводят электрофоретическое количественное определение основных классов липопротеидов сыворотки крови, рассчитывают показатель отношений между бета-липопротеидами и альфа-липопротеидами и на основании показателей величины отношения между указанными классами липопротеидов определяют степень выраженности холестатического поражения печени на ранней и терминальной стадии первичного билиарного цирроза.