СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАННИХ СТАДИЙ ЖЕЛЧНО-КАМЕННОЙ БОЛЕЗНИ Российский патент 1999 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, в частности клинической гастроэнтерологии, и может быть использовано для лабораторной диагностики желчно-каменной болезни.

Основу лабораторных тестов желчно-каменной болезни составляют методы исследования желчи на литогенность, связанные с определением степени насыщения желчи холестерином.

К известным способам тестирования желчи на литогенность относятся
определение холато-холестеринового коэффициента (Лаб. дело, 1978 N 3, стр. 149),
определение индекса литогенности (Клин. медицина, 1984, N 8, стр. 67),
определение индекса насыщения холестерином (Biomed. Biochim. Acta, v. 45, N 6, p. 761).

Известны также морфологические методы диагностики желчно-каменной болезни с помощью поляризационной микроскопии (Хирургия, 1986, N 4, стр. 89) и трансмиссионной электронной микроскопии (Бюлл, эксперим. биол. и мед. 1989, N 8, стр. 521).

Оба метода основаны на изучении фазового состава желчи.

Однако, несмотря на большое количество показателей и диагностических проб, до сих пор отсутствуют вполне надежные диагностические тесты для выявления ранних стадий желчно-каменной болезни (см., например. Лаб. дело, 1990, N 2, стр. 4). Такое положение обусловлено тем, что перенасыщение желчи холестерином встречается в 68% случаев в у практически здоровых людей (Gastroenterology, 1979, v. 77. p. 611), причем разница между средними показателями насыщения желчи холестерином в контрольных образцах и у больных желчно-каменной болезнью остается минимальной и составляет 1,42 + 0,63 и 1,80 + 1,02 соответственно. В свою очередь, реализация морфологических методов требует дорогостоящего оборудования, опытного персонала и возможна в условиях специализированных лабораторий.

^* Известен способ выявления желчнокаменной болезни на любой его стадии путем определения иммуноглобулинов после разделения белков на диск электрофореза в соответствии с А/С 1807417, 1993 - прототип. Однако известный способ обладает низкой чувствительностью и специфичностью.

Целью настоящего изобретения является повышение эффективности и надежности лабораторной диагностике желчно-каменной болезни с возможностью дифференциации первичного холестеринового гепатолитиаза и холецистолитиаза уже на ранних стадиях развития болезни.

Заявляемый способ базируется на открытии немицеллярных транспортных форм холестерина и литогенной желчи (FEBS Lett., 1983, v. 156, p. 265) и доказательствах их прямого участия в формировании желчных камней (Бюлл. эксперимет. биол. и мед., 1989, N 8, стр. 251), что послужило основанием для выделения и использования транспортных форм в качестве диагностических маркеров.

Поставленная цель достигается за счет использования по новому назначению известного способа выделения транспортных форм холестерина в сыворотке и плазме крови с помощью гельэлектрофореза, применяемого для диагностики гиперлипопротеидемий при атеросклеротических поражениях сердечно-сосудистой системы (New Engl. J. Med., 1967, v. 276, p. 34 and 147).

Известный способ диагностики осуществляется следующим образом: образцы сыворотки или плазмы крови наносят на гелевую пластину, подвергают электрофорезу, фиксируют, сушат, окрашивают судановым черным на липопротеиды, обесцвечивают фон и по распределению атерогенных и антиатерогенных транспортных форм холестерина проводят диагностику гиперлипопротеидемий.

В настоящее время неизвестно использование электрофоретического способа выделения немицеллярных транспортных форм холестерина для диагностики ранних стадий желчнокаменной болезни.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом: пузырную, печеночную или дуоденальную порцию желчи центрифугируют 30 минут при 3000 об/мин, надосадочный раствор в объеме 3-5 мкл наносят на агарозную пластину и проводят электрофорез в течение 30 мин, пластину фиксируют, сушат, окрашивают на липиды и обесцвечивают фон, после дополнительного просушивания пластину анализируют визуально или с помощью денситометра; из трех порций желчи диагностическое значение имеют пузырная и печеночная порции, дуоденальная порция не содержит маркеров литогенности и используется для контроля или сравнения. Денситограммы физиологически нормальной и литогенной желчи представлена на графиках (фиг. 1, 2). Нормальная желчь имеет линейный профиль (фиг. 1), тогда как литогенная желчь, полученная у больного с острым калькулезным холециститом, характеризуется нелинейным профилем в виде пиков (фиг. 2).

Примеры конкретного осуществления способа
Пример 1.

Больная Р. , 32 года, поступила с диагнозом - хронический холецистит, хронический гастродуоденит.

Данные ультрасонографии: со стороны печени, желчного пузыря, общего желчного протока, почек, селезенки признаков органической патологии не выявлено.

Данные фазово-контрастной микроскопии: в пузырной порции желчи обнаружены кристаллы холестерина типа "битого стекла" и микросферолиты.

Данные трансмиссионной электронной микроскопии: в пузырной порции желчи выявлены агломераты везикул и ламелл.

Таким образом, данные ультрасонографии не дают оснований для выделений субклинической стадии болезни, хотя результаты морфологических исследований желчи следует интерпретировать в пользу начальной стадии желчно-каменной болезни.

Желчь больной обследована заявляемым способом.

Порции желчи получали дуоденальным зондированием. Для анализа брали по 5 мл дуоденальной, пузырной и печеночной желчи, каждую порцию центрифугировали 30 мин при 3000 об/мин. Надосадочную желчь объемом 5 мкл помещали в соответствующую ячейку агарозной пластины и проводили электрофорез в течение 30 мин при напряжении 100 В. Далее, пластину фиксировали, сушили, окрашивали судановым черным на липопротеиды, обесцвечивали фон, повторно сушили и сканировали при длине волны 600 нм на денситометре (марка "Аппрайз", фирма "Бекман", Австрия). Для обработки результатов сканирования и построения графиков использовали программное обеспечение денситометра.

Денситометрический профиль электрофореграмм дуоденальной, пузырной и печеночной порции желчи представлены на графиках (фиг. 3 - 5). Профиль дуоденальной (фиг. 3) и печеночной (фиг. 5) желчи не отличается от нормы (фиг. 1), что свидетельствует об отсутствии маркерных липопротеидов в данных порциях. В пузырной порции желчи обнаруживается пик липопротеидов (фиг. 4), который свидетельствует о литогенном состоянии желчи и, соответственно, о начальной, предкаменной стадии заболевания с прогнозом первичного формирования холестериновых камней в полости желчного пузыря.

Диагноз: холецистолитиаз в начальной стадии.

Пример 2.

Больной Т., поступил с диагнозом - хронический холецистит.

Данные ультрасонографии: желчный пузырь и желчные протоки без изменений.

Данные холецистографии: конкременты не выявлены, гипокинезия желчного пузыря.

Данные фазово-контрастной микроскопии: выявлены индивидуальные кристаллы холестерина ромбической и прямоугольной формы, а также агломераты кристаллов холестерина типа "битого стекла".

Данные трансмиссионной электронной микроскопии: в печеночной и пузырной желчи обнаружены агломераты везикул и ламелл.

Желчь больного обследована заявляемым способом.

Денсиметрический профиль электрофореграмм дуоденальной, пузырной и печеночной желчи представлен на графиках (фиг. 6 - 8). Профиль дуоденальной желчи (фиг. 6) не отличается от нормы (фиг. 1), тогда как в пузырной и печеночной порциях обнаруживаются липопротеидные пики (фиг. 7, 8). Наличие пиков свидетельствует о начальной стадии желчно-каменной болезни с прогнозом первичного формирования и локализацией желчных камней как в полости желчного пузыря, так и в печеночных протоках.

Диагноз: начальная стадия холецистолитиаза в сочетании с первичным гепатолитиазом.

Использование предлагаемого способа диагностики ранних стадий желчно-каменной болезни с помощью гель-электрофореза обеспечивает по сравнению с существующими способами следующие преимущества:
возможность диагностики предкаменной стадии болезни,
возможность дифференциальной диагностики данной стадии в различных отделах желчевыводящих путей,
возможность стандартизации диагностических исследований и получения сопоставимых результатов,
имеет высокую прогностическую ценность.

Применение этого метода значительно повысит качество диагностики, а соответственно профилактики и лечения гастроэнтерологических больных и будет способствовать пониманию эпидемиологических закономерностей желчно-каменной болезни.

Изобретение относится к медицине, точнее к клинической гастроэнтерологии. Способ включает очистку желчи от примесей с помощью центрифугирования, электрофорез желчи на гелевой пластине, окрашивание пластины судановым черным на наличие липопротеидной фракции и ее идентификацию с помощью денситометра или визуально. Способ позволяет производить дифференциальную диагностику холестеринового гепатолитиаза и/или холецистолитиаза на ранней стадии желчно-каменной болезни. 8 ил.

Способ диагностики ранних стадий желчно-каменной болезни путем электрофоретического анализа, отличающийся тем, что проводят электрофорез на агарозной пластине пузырной или печеночной порции желчи, окрашивают пластину судановым черным для идентификации фракции липопротеидов и при наличии пика на денситометрическом профиле электрофореграммы определяют начальную стадию желчно-каменной болезни в разных отделах желчевыводящих путей.