ПРОТИВОГАСТРИТНОЕ И/ИЛИ ПРОТИВОЯЗВЕННОЕ СРЕДСТВО, ШТАММ И КОМПОЗИЦИЯ Российский патент 1999 года по МПК A61K35/74 C12N1/20 C12N1/20 C12R1/23 

Данное изобретение относится к противогастритному и/или противоязвенному средству и к штамму молочнокислых бактерий, способному производить это средство.

Известно, что некоторые штаммы молочнокислых бактерий показывают хорошее сцепление с клетками кишечника и за счет этого свойства пригодны для терапевтического применения.

Европейский патент EP 199535 /Горбах и Гольдин/, например, раскрывает штамм молочнокислых бактерий, названный GG по инициалам изобретателей, который зарегистрирован в АТСС /Американская типовая коллекция культур/ под номером 53103, который предназначен для назначения людям или животным для терапевтического или профилактического лечения пищеварительного тракта.

Данное изобретение предлагает противогастритное и/или противоязвенное средство и штамм молочнокислой бактерии, способный производить это средство, которое можно было бы назначать людям или животным для терапевтического или профилактического лечения желудка и, в частности, привратника желудка (пилорус).

Данное изобретение относится к противогастритному и/или противоязвенному средству, которое способно вытеснять болезнетворные бактерии из клеток кишечника и/или желудка, к биологически чистой культуре штамма молочнокислой бактерии, выбранной за способность производить это средство, и к композиции, содержащей, с одной стороны, эффективное количество средства или упомянутой культуры, а с другой стороны, съедобный носитель, конкретнее фармацевтически приемлемый носитель и/или пищевой продукт, такой как кислое молоко, конкретнее, йогурт или порошок на основе молока.

Оказалось, что некоторые штаммы молочнокислых бактерий могут вытеснять болезнетворные бактерии, например, такие как Helicobacter(H.)pylori из клеток кишечника, к которым они прилипают. Также оказалось, что эти штаммы имеют способность производить средство, имеющее такую способность вытеснения и, прежде всего, производить его в средстве культуры штамма.

Соответственно, средство, штамм и композиция по изобретению конкретнее предназначены для назначения людям или животным для терапевтического или профилактического лечения желудка, в частности, для лечения гастритов или язв желудка или привратника желудка. Один из различных штаммов, выбранных по данному изобретению, был зарегистрирован по Будапештскому договору 30.6.92 в Национальной коллекции микроорганизмов /CNCM/ в Пастеровском институте, 28 рю дю д-р Ру, 75724 Париж Седекс 15, Франция, где ему был присвоен номер CNCM 1-1225.

Подробности морфологии и общие свойства этого штамма приведены ниже:
Морфология
Грамм-положительный микроорганизм, немотильный, не образующий спор.

- Довольно короткие и толстые палочки.

Метаболизм
- Микроаэрофильный микроорганизм с гомоферментативным метаболизмом, вызывающим производство молочной кислоты L/+/ и D/-/
- Другие характеристики: каталаза /-/, производство CO₂/-/ гидролиз аргинина /-/.

Ферментация сахаров:
Амигдалин /+/, арабиноза /-/, целлобиоза /+/, эскулин /+/, фруктоза /+/, галактоза /-/, глюкоза /+/, лактоза /+/, мальтоза /+/-/, маннитол /-/, манноза /+/, мелибиоза /-/, раффиноза /+/, рибоза /-/, салицин /+/, сахароза /+/, трегалоза /+/.

Конкретные свойства, за которые данный штамм может быть выбран, приводятся ниже:
Прилипание
Прилипание к клеткам желудка может сравниваться с прилипанием к клеткам кишечника при условии, что рецепторы, узнаваемые микроорганизмом на двух типах клеток, подобны друг другу, и микроорганизмы показывают сильную способность прилипания к этим двум типам клеток.

Некоторые болезнетворные микроорганизмы, такие как Helicobacter pylori, обладают этим свойством.

Известно, в частности, что Helicobacter pylori способен приставать к клеткам кишечника человека, полученным из раковых опухолей, аденокарциномы, например, к клеткам HT29/ /см. Пинто и др. Биол. Целл. 55, 193-196, 1982/ в монослойной культуре in vitro.

Для этого, клетки HT29 культивируются при 37^oC в минимальной необходимой среде Eagle, модифицированной Дульбекко /DMEM/, содержащей 10% галактозы и диализованную телячью плазму в атмосфере 10% CO₂ и 90% воздуха, и используются до прохождения 2-ого деления. Культивирование проводится на обезжиренных стеклышках, разложенных в 24 чашках.

H. pylori культивируется на пластинках Мюллера-Хинтона, на 10-процентной овечьей крови в течение 72 часов при 37^oC в атмосфере 5% O₂, 10%CO₂ и 85% азота. С пластинок соскребают и собирают бактерии и затем промывают в физиологическом растворе.

H. pylori вводится в культуру клеток HT29 в количестве 10⁶ живых микроорганизмов или клеток /cfu/ на кв.см. Все вместе подвергают инкубации в течение 2 часов при 37^oC и монослои промывают 3 раза.

Количество клеток H.pylori, прилипших к клеткам HT29, определяют тестом на уреазу /тест Ятрокс-Эйч пи/, принцип которого состоит в том, что водный раствор мочевины и фенола изменяет цвет от желтого до розового цвета функции в присутствии уреазы, которая катаболизирует производство основных продуктов метаболизма мочевины, аммиака и бикарбоната. Интенсивность реакции считывают со спектрофотометра по получению с волной 550 нм. Этот тест линеен для величин 10⁴-10⁶ си эф ю/мл.

Вытеснение
Для определения способности штамма, культуры, средства или композиции по изобретению вытеснять болезнетворные бактерии можно, например, рассмотреть степень вытеснения бактерий H.pylori, прилипших к клеткам HT29.

Для этого раствор или суспензию молочнокислой бактерии, подлежащей выбору, или средства, которое нужно испытать, можно добавить к клеткам HT29, к которым прилипли клетки H.pylori, после чего все вместе подвергают инкубации в течение 1 часа и несколько раз промывают, а затем проводят тест на уреазу.

Если, например, таким образом добавить культуру штамма L.acidophilus CNCM 1-1225 с его средой культивирования /MRS или молоко/, разведенные на 50% DMEM, в количестве 10⁷cfu на кв. см, то получается, что из 2•10⁶cfu приставших клеток H.pylori, насчитывающихся на кв.см. при отсутствии конкурирующих бактерий, остается только 6•10³ си эф ю/кв.см. после инкубации в течение 1 часа вместе сo штаммом L.acidophilus CNCM 1-1225.

Это показывает преимущество, которое такой штамм может иметь при лечении гастритов или язв желудка или пилорума.

Подобным же образом, если добавить супернатантную фазу этой культуры L. acidophilus к клеткам HT29, к которым прилипли клетки H.pylori, также наблюдается значительное вытеснение клеток H.pylori. Это показывает, что некоторые штаммы молочнокислых бактерий, в данном случае штамм L.acidopnilus CNCM 1-1225, способны выделять секрет, являющийся противогастритным и/или противоязвенным средством в их среде культивирования. Соответственно, супернатантная фаза и средство, полученное из нее, могут сами быть весьма ценными при лечении гастритов или язв желудка или привратника желудка.

Изобретение касается штамма молочнокислых бактерий Lactobacillus johnsonii (acidophilus) CNCM 1-1225, используемого в качестве продуцента противогастритного и/или противоязвенного средства. Изобретение касается того, что биомасса молочнокислых бактерий L.johnsonii CNCM 1-1225 и/или культуральная жидкость, и/или супернатантная фаза, полученные при культивировании указанного штамма, являются противогастритным и/или противоязвенным средством, способным вытеснять болезнетворные бактерии Helicobacter pylori из клеток кишечника и/или желудка. Изобретение касается композиции указанного назначения, содержащей эффективное количество противогастритного и/или противоязвенного средства по п .1 или штамм L.johnsonii CNCM 1-1225, фармацевтически приемлемый носитель и/или пищевой продукт. Предпочтительным пищевым носителем является сквашенное молоко или порошок на основе молока. Предлагаемая культура и композиция на ее основе обладает более высокой способностью вытеснять патогенные бактерии H.pylori из клеток кишечника, к которым они прилипают. 3с. и 1 з.п.ф-лы.

1. Противогастритное и/или противоязвенное средство на основе штамма молочнокислых бактерий Lactobacillus, отличающееся тем, что оно содержит биомассу молочнокислых бактерий штамма Lactobacillus johnsonii CNCM 1-1225, и/или культуральную жидкость, и/или супернатантную фазу, полученные при культивировании указанного штамма и способные вытеснять болезнетворные бактерии Helicobacter pylori из клеток кишечника и/или желудка. 2. Штамм молочнокислых бактерий Lactobacillus johnsonii CNCM 1-1225 - продуцент средства по п.1. 3. Противогастритная и/или противоязвенная композиция, содержащая противогастритное и/или противоязвенное средство на основе штамма молочнокислых бактерий Lactobacillus и фармацевтически приемлемый носитель и/или эксципиент, отличающаяся тем, что в качестве противогастритного и/или противоязвенного средства она содержит эффективное количество указанного в п.1 средства или штамм L. johnsonii CNCM 1-1225. 4. Композиция по п.3, отличающаяся тем, что указанным носителем и/или эксципиентом является фармацевтически приемлемый носитель и/или пищевой продукт, такой как сквашенное молоко, в частности йогурт или порошок на основе молока.