ЭМУЛЬСИЯ ТИПА "МАСЛО В ВОДЕ", НОСИТЕЛЬ НА ЕЕ ОСНОВЕ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ Российский патент 1999 года по МПК A61K47/26 A61K9/107 A61K9/127 A61K9/50 

Изобретение относится к эмульсиям типа "масло в воде", содержащим полярный липидный материал в качестве эмульгатора. Эти эмульсии используются в качестве носителей для активного вещества в фармацевтической композиции, а также в пищевых, косметических, кормовых и сельскохозяйственных продуктах.

Эмульсии типа "масло в воде" для фармацевтических применений, таких как диетотерапия и введение липофильных лекарственных средств, обычно основаны на природных липидах. Масло обычно представляет собой растительное масло, такое как соевое масло, сафлоровое масло или триацилглицериновое (со средней длиной цепи) масло (МСТ). Эмульгатором обычно является фосфолипид, такой как фосфолипиды яичного желтка (яичный лецитин) или соевые фосфолипиды (лецитин сои). Эти эмульгаторы состоят из смесей разных классов фосфолипидов, таких как фосфатидилхолин и фосфатидилэтаноламин, которые являются цвиттерионными, и фосфатидилинозит, который является анионным. Широко известно, что лицетиновые эмульгаторы являются наиболее применяемыми природными липидами для приготовления эмульсий в промышленном масштабе указанного выше типа. Также хорошо известно, что такие эмульсии имеют недостатки и создают проблемы, которые связаны с тем, что эмульгатор представляет собой фосфолипиды. К таким недостаткам и проблемам относятся, например, большие разбросы в размерах частиц и слияния частиц, приводящие к разрушению эмульсии, так называемому появлению "сливок".

Большинство коммерческих жировых эмульсий основано на яичных фосфолипидах, которые получают от животных, в большинстве случаев из порошка яичного желтка. Животные источники, в некоторых случаях, связаны с проблемами вирусного загрязнения и, в конкретном случае применения порошка яичного желтка, бактериального загрязнения, например, сальмонеллой (Salmonella). Другим важным признаком яичных фосфолипидов является содержание полиненасыщенных жирных эфиров, таких как арахидонат и докозагексаеноат, которые чрезвычайно чувствительны к окислению в присутствии даже небольших количеств кислорода. Поэтому запах и вкус яичных фосфолипидов зачастую очень неприятный и эти качества могут передаваться жировым эмульсиям. Загрязнение и оксиление могут часто вызывать проблемы, касающиеся промышленной безопасности и аспектов торговли.

В Европейском патенте EP-A2-0402090 описана годная в пищу эмульсия масла в воде, пригодная для кремов и заправок, содержащая 10-90% от общего содержания масла и жира диглицеридной смеси. Для улучшения стабильности этой эмульсии можно также включать 0,1-10% фосфолипидов в расчете на масляную фазу.

В EP-A2-0391369 описана стабильная фармацевтическая композиция эмульсии типа "масло в воде", содержащая эффективное количество липофильного лекарственного средства. Эта эмульсия состоит из 3-50% маслянистого носителя, в основном МСТ-масла, 0,05-20% фосфолипида, 0,03-10% неионогенного сурфактанта и 0,05-50% ионогенного поверхностно-активного вещества. Отмечается, что улучшенная стабильность обусловлена синергизмом между указанными ингредиентами.

Гликозилглицериды являются типом гликолипидов, которые представляют собой хорошо известные компоненты мембран клеток растений. Два типа на основе галактозы, моногалактозилдиацилглицерин, МГДТ, и дигалактозилдиацилглицерин, ДГДГ, составляющие до 40% сухого веса тилакоидных мембран наиболее известны.

Гликолипиды растений имеют углеводные единицы, в основном состоящие из галактозы, связанные с глицерином. В МГДГ положение 1 галактозного кольца имеет β связь с глицерином, а в ДГДГ имеется α, 1 ---> 6-связь между сахарами. Минорным компонентом является сульфолипид растения, более точно называемый сульфохиновозилдиацилглицерином, СХДГ, который содержит предпочтительнее сульфонат, чем гидроксильную группу, связанный с углеродом в положении 6 концевого дезоксиглюкозного остатка. Большинство растительных гликолипидов могут быть описаны общей формулой

где R₁ и R₂ независимо являются остатками насыщенной или ненасыщенной жирной кислоты с 2-24 атомами углерода и 0-6 двойных связей, дополнительно этерифицированными гидроксикислотами, то есть эстолидами, или водородом; углевод является моносахаридной единицей; n=1-5; и R₃ обозначает гидроксил или сульфонатную группу.

При исследовании взаимодействия гликозилглицеридов с водой и другими полярными растворителями было неожиданно обнаружено, что специфические гликолипидные материалы из злаков ведут себя так, что делает эти липидные материалы пригодными и простыми для использования в качестве материала-носителя, в частности для фармацевтических композиций, а также для других композиций, таких как косметические, сельскохозяйственные, пищевые и кормовые.

В EP 9400368 описан промышленно применимый процесс получения гликолипидного материала из растений, предпочтительно из злаков, посредством экстракции и хроматографических разделений. Полученный таким образом гликолипидный материал можно использовать в качестве амфильного материала в фармацевтике, косметике и пищевых продуктах.

Настоящее изобретение касается эмульсии типа масло в воде, содержащей 0,01-50% от массы всего препарата, предпочтительно 0.1-10%, эмульгатора и 0,1-70% от массы всего препарата масляного материала, эмульгированного в полярном растворителе, отличающийся тем, что эмульгатор представляет собой галактолипидный материал, состоящий по меньшей мере из 50% дигалактозилдиацилглицеринов, а остальной частью являются другие полярные липиды.

В предпочтительном препарате галактолипидный материал состоит приблизительно из 70-80% дигалактоизилдиацилглицеринов и 20-30% других полярных липидов.

В другом предпочтительном препарате галактолипидный материал состоит до 100% из дигалактоизилдиацилглицеринов.

Дигалактозилдиацилглицерины могут быть описаны общей формулой

где R₁ и R₂ независимо представляет собой остатки ненасыщенных или насыщенных жирных кислот, содержащие 10-22 атомов углерода и 0-4 двойные связи, или водород; и R₃ обозначает гидроксил или сульфонатную группу.

В качестве предпочтительных примеров остатков жирных кислот могут быть упомянуты природно встречающиеся жирные ацильные группы, такие как остатки насыщенных кислот пальмитиновой (C₁₅H₃₁CO; 16: 0) и стеариновой кислоты (C₁₇H₃₅CO; 18: 0); мононенасыщенной олеиновой кислоты (C₁₇H₃₃CO; 18:1); и полиненасыщенных кислот линолевой (C₁₇H₃₁CO; 18:2) и линоленовой кислоты (C₁₇H₂₉CO; 18: 3). Остатки жирных кислот могут также содержать гидроксикислоты, связанные с глицериновой частью, гидроксильные группы которых этерифицированы дополнительными жирными кислотами, так называемые эстолиды.

Другими полярными липидами, являющимися частью галактолипидного материала, являются смеси различных глико- и фосфолипидов, таких как МГДГ и фосфатидилхолины. Состав зависит от исходного материала и процесса, применяемого для приготовления галактолипидов.

Конкретные соотношения компонентов галактолипидного материала не являются критическими для данного изобретения, пока содержание ДГДГ равно по меньшей мере 50%. Однако для многих применений максимальные преимущества реализуется при высоком содержании ДГДГ, наиболее важного образующего бислой компонента.

Галактолипидный материал может быть экстрагирован почти из любого типа растительного материала. Предпочтительными растительными материалами являются семена и зерна из зерновых культур, например пшеницы, ржи, овса, кукурузы, проса, риса и кунжута. Овсяная крупа, а также пшеничная клейковина имеют высокую концентрацию липидов и поэтому преимущественно используются в процессе получения галактолипидного материала. Дигалактозилдиацилглицерины галактолипидного материала могут быть, если это приемлемо, синтетического происхождения.

Маслянистый материал является любым липофильным материалом, имеющим жидкую или полутвердую консистенцию при комнатной температуре. Никаких особых ограничений не существует в отношении масляного материала. В качестве примеров можно назвать растительные масла, животные жиры, синтетические масла, жирные кислоты, природные синтетические глицериды и липофильные лекарственные средства и т.д.

Предпочтительными маслами являются растительные масла, содержащие γ-линоленовую кислоту (ГЛК), такие как масла энотеры и масло бурачника, и рыбий жир, содержащий эйкозапентаеновую кислоту (ЭПК) и докозагексановую кислоту (ДГК). Отношение между эмульгатором и маслянистым материалом предпочтительно находится в пределах 1:40 по массе, в особенности 1:25 - 1:15.

Выгодной особенностью, присущей галактолипидам, являются галактозные единицы, содержащие полярную головную группу в каждом липиде, которые могут стерически стабилизировать капельки эмульсии и, следовательно, обеспечить пролонгированную продолжительность жизни при инъекции в кровоток.

В соответствии с настоящим изобретением можно использовать синтетические дигликозилдиацилглицерины на основе галактозы или любой другой моносахаридной единицы, такой как глюкоза, и природные гликозилглицериды, выделенные из любого источника, на основе иных углеводных единиц, чем галактоза, таких как глюкоза.

Эмульсии типа "масло в воде" согласно изобретению получают с применением галактолипидного материала в качестве эмульгатора, но они могут содержать другие низкомолекулярные соединения в эффективном изотоническом количестве. Эмульсия масло в воде может также содержать необязательно добавки, известные в этой области знаний, с целью улучшения различных свойств композиции, например ароматизаторы, красители, загустители, косурфактанты, консерванты, антиоксиданты и т.д.

Эмульсии получают общепринятыми способами. Например, 30 мас.% эмульсию триацилглицеринового масла (со средней длиной цепи) в воде готовят диспергированием эмульгатора, представляющего собой галактолипидный материал, в масле. Глицерин и воду смешивают. Масляную фазу, а также водную фазу предварительно нагревают и затем масляную фазу добавляют к водной фазе при смешивании с высоким сдвигающим усилием. Затем смесь подвергают гомогенизации при высоком давлении.

Изобретение также касается фармацевтической композиции, содержащей терапевтически активно действующее вещество в комбинации с эмульсией типа "масло в воде".

Терапевтически активное вещество может быть липофильным лекарственным средством, таким как противораковые агенты, антимикробные и, в частности, противогрибковые агенты, иммуносупрессанты, подобные циклоспорину, дерматологические лекарственные средства, психотропные, анестетические и другие лекарственные средства, которые являются липофильными и могут представлять проблемы при приготовлении композиции, которые могут быть решены с применением галактолипидов.

Предпочтительным масляным материалом для такой эмульсии, в дополнение к ранее упомянутым предпочтительным маслам, является МСТ-масло (см. выше). Имеется также много липидов, таких как свободные жирные кислоты, моно-, ди и триацилглицерины, фосфолипиды, сложные эфиры холестерина и липиды многих других типов, которые сами по себе обладают терапевтическим действием и которые могут быть преимущественно приготовлены в форме эмульсии на основе галактолипидов. В этом случае терапевтически активным веществом является маслянистый материал, который может также иметь другие биоактивные свойства.

Фармацевтическая композиция может содержать следующие ингредиенты: терапевтически активное вещество в терапевтически эффективном количестве; галактолипидный эмульгатор, 0,1-5,0% от массы всей композиции; масляный материал, 1-50 мас.% от всей композиции; необязательно, изотонический агент в изотонически эффективном количестве.

Изотоническим агентом является, например, глицерин, но может быть также любой изотонический агент в изотонически эффективном количестве.

Полярным растворителем может быть вода или водные растворы, такие как буферы и солевой раствор, или другой общепринятый растворитель, такой как этанол, глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, гликофуран, метилпирролидон, транскутол. Однако вода является предпочтительным растворителем.

Фармацевтическая композиция для парентерального введения может содержать следующие ингредиенты: 0,2-3% 2,6-диизопропилфенола; 0,3-5% галактолипидного материала; 5-30% триацилглицеринового масла; изотонически активное количество изотонического агента; воду (до 100%).

Фармацевтическая композиция может быть приготовлена для перорального, энтерального парентерального, ректального, вагинального, топического, глазного, назального или ушного введения животным, в частности, млекопитающим, в том числе человеку.

Эмульсии на основе галактолипидов являются удивительно стабильными препаратами по сравнению с фосфолипидными эмульсиями, приготовленными из яичного лецитина или осевого лецитина. Тесты встряхивания, которые разрушают фосфолипидные эмульсии, не оказывают действия на галактолипидные эмульсии.

Галактолипидные эмульсии также проявляют узкое и стойкое распределение размеров частиц, что обычно является проблемой в случае фосфолипидных эмульсий. Коммерчески доступные жировые эмульсии на основе яичного лецитина часто создают проблему, заключающуюся в том, что они содержат слишком большие частицы, что может вызвать такие проблемы, как явление разрушения эмульсии - появление "сливок" или появление капель масла на поверхности.

Галактолипидные эмульсии также удивительно стабильны к стерилизации автоклавированием в обычном автоклаве. Коммерчески доступные жировые эмульсии часто требуется автоклавировать в специальных вращающихся автоклавах, что создает технические проблемы. Применение стандартных процедур автоклавирования является явным промышленным усовершенствованием, обеспечиваемым этим изобретением.

Галактолипидный материал.

Галактолипидный материал получали из различных зерновых, как указано ниже, и использовали для приготовления препаратов носителя и фармацевтических композиций согласно изобретению, как описано в примерах. В заявке % обозначает мас.%, если нет других указаний. Соотношение растворителей в смесях растворителей дано в объемных частях.

Галактолипидный материал из овса
200 кг зерен овса (Kungsornen AB, Sweden) растирали и экстрагировали 1000 л 95% этанола при 70^oC в течение 3 ч в экстракционном чане при перемешивании. Суспензию центрифугировали в еще теплом виде и отделяли от твердых частиц. Жидкую фракцию упаривали при 60^oC, получая приблизительно 10 кг светло-коричневого масла.

Масло наносили на колонну из нержавеющей стали, содержащую 6,25 кг силикагеля (Matrex Silica Si, размер частиц 20-45 мм, диаметр пор 60 из Amicon Corp. , USA). Температура колонны была 50^oC. Затем колонну промывали 30 л смеси гексан:изопропанол, 90:10 для удаления всех неполярных липидов.

Затем галактолипидный материал элюировали из колонны 20 л смеси гексан: изопропанол, 60: 40, получая фракцию галактозилдиацилглицерина. Упаривание этой фракции дало приблизительно 700 г ДГДГ, основного класса липидов. Затем этот галактолипидный материал диспергировали в воде и подвергали лиофилизации, что приводило к образованию легко сыпучего порошка.

Обогащение ДГДГ из галактолипидов.

50 г галактолипидов из овса, полученных, как описано выше, имеющих содержание ДГДГ приблизительно 70%, растворяли в 250 мл смеси гексан:изопропанол, 70:30, получая общее количество 300 мл. Полученный раствор нагружали на колонку силикагеля (100 г) и менее полярные компоненты элюировали 1 л смеси гексан-изопропанол, 70:30. Обогащенную ДГДГ фракцию элюировали 2 л ацетона. Ацетон выпаривали и фракцию лиофилизировали. Общий выход был 17 г почти чистого продукта ДГДГ.

Гидрогенизации галактолипидов.

200 г смеси галактолипидов, полученных из овса, как описано выше, растворяли в 2 л теплого изопропанола. 15 г катализатора палладия на угле (Pd 15%, влажность 53%, Engelhard Rome s.r.i., Italy) помещали на дно реактора под давлением (Model N 4552M, Parr Instrument Co., USA), снабженного двумя импеллерами на стержне мешалки. Затем раствор переносили в реактор при герметизации азотом для снижения опасности воспламенения. Реакторный сосуд закрывали герметично и сначала подвергали давлению три раза с азотом для удаления воздуха и затем повышали давление три раза с водородом (Plus 4,5, из AGA Gas AB, Sweden). Давление водорода затем поддерживали при 6 бар, мешалку устанавливали на 600 об/мин. и смесь нагревали до 70^oC. Достижение реакционной смесью установленной температурной точки занимало 14 минут. Процесс гидрогенизации проводили в течение 6 часов, после чего продукт реакции фильтровали через фильтр 0,45 мкм для удаления частиц угля и палладия. Растворитель выпаривали на роторном испарителе, оставшийся твердый материал диспергировали в 1600 мл деионизованной воды и леофилизировали.

Выход гидрогенизированных галактолипидов после фильтрования и лиофилизации был 155 г. Качество гидрогенизации оценивали газовой хроматографией; только насыщенные жирные кислоты можно было обнаружить в гидрогенизированном продукте.

Галактолипиды из клейковины пшеницы.

1 кг порошка клейковины пшеницы (AB Skanebrannerier, Sweden) экстрагировали 4 л 95% этанола при 70^oC в течение 3 часов в химическом стакане. Затем эту суспензию фильтровали под давлением 400-500 кПа и осадок на фильтре промывали 1 л теплого 95% этанола. Объединенные этанольные растворы выпаривали максимально при 60^oC, получая приблизительно 60 г желтого масла.

Масло наносили на колонку из нержавеющей стали, содержащую 45 г силикагеля (Matrex Silica Si, размер частиц 20-45 мкм, размер пор 60 из Amicon Corp. USA). Затем колонку промывали 700 мл смеси гексан:изопропанол, 90:10 для удаления нейтральных липидов.

Для удаления МГДГ и некоторых других полярных липидов колонку затем промывали 1000 мл смеси гексан:изопропанол, 70:30. Элюцию ДГДГ проводили 100 мл чистого ацетона. После выпаривания получали приблизительно 4 г чистого продукта ДГДГ.

Галактолипиды из ржи.

100 г ржаных хлопьев (Kungscrnen AB, Sweden) перемешивали в течение 60 минут в смеси промышленного гексана и изопропанола, 90:10. Суспензию фильтровали и выпаривали, получая 0,5 г полярных липидов. Остаток, растворенный в 10 мл смеси гексан:изопропанол, 70:30, наносили на три колонки Sep-pak Silica plus (Millipore Corp., USA), соединенные последовательно, промывали 20 мл той же самой смеси растворителей и элюировали 15 мл ацетона. Элюат упаривали и лиофилизировали, получая 47 мг галактолипидов.

Химическая и физическая характеристики различных галактолипидных материалов.

Анализ классов липидов.

Анализ классов липидов выполняли жидкостной хроматографией высокого разрешения, ЖХВР, с применением колонки, заполненной модифицированным диолом диоксидом кремния (Li-Chrosphere 100 DIOL, 5 мкм, 250 мм х 4 мм - вн. д.; E. Merck, Germany). Колонку заключали в водяную баню, поддерживаемую при 75^oC. Аналитическая система состояла из насоса CM 4000 ЖХВР (LDC/Milton Roy, USA) и инжектора, модель 7125, с петлей для инъекции 20 мкл (Rheodyne Inc., USA). Испарительный детектор светорассеяния представлял собой Sedex 45 (S.E.D.E.R. E., France), снабженный камерой распыления Sedex 55 с температурой клистрона и давлением входящего воздуха 97^oC и 2,0 бар, соответственно.

Скорость тока подвижной фазы была 1 мл/мин. во время анализа. Использовали бинарный градиент растворителей, линейный в течение 25 минут, начинающийся со 100% A и заканчивающийся 100% B, где A = гексан:изопропанол:н-бутанол: тетрагидрофуран: изооктан:вода, 64:20:6:4,5:5,4:1, и B = изопропанол: н-бутанол:тетрагидрофуран:изооктан:вода, 75:6:4,5:5:10. Все растворители содержали ацетат аммония, 180 мг/л.

Сбор и обработку данных выполняли с версией 4.22 системы GynkoSoft Data (Softron GmbH, Germany). Обычно для анализа вводили 100 мкг. Идентификация была основана на сравнении времени удерживания с аутентичными стандартами (Karlshamns LipidTeknik AB, Sweden). Летучие соединения не детектировались в этой системе. Количественное определение выполняли на основе расчетов площадей пиков.

Дзета-потенциалы определяли на разбавленных водных дисперсиях галактолипидов при помощи прибора Zetasizer 4 (Malvern Instruments Ltd., US).

Характеристика различных галактолипидных материалов в табл. 1. (табл. 1-4 см. в конце описания).

Анализ жирных кислот.

Анализ профиля жирных кислот выполняли газовой хроматографией после переэтерификации липидов с метиловыми эфирами жирных кислот. Их разделяли и количественно определяли при помощи газовой хроматографии на капиллярных колонках с применением Varian 3500 Capillary Gas Chromatograph, снабженного капиллярной колонкой 30 м х 0,25 мм (внутр. диаметр) (DB-WAX; J&W Scientific, USA), инжектором на колонке и детектором пламенной ионизации. В качестве газа-носителя использовали гелий. Интегрирование выполняли версией 4.22 системы GynkoSoft Data (Softron GmbH, Germany). Переэтирификацию выполняли добавлением 1 мг липидной пробы к 2 мл смеси диметилкарбонат:изооктан, 1:1. 1 мл раствора, содержащего 2,3 г натрия, растворенного в 200 мл метанола добавляли и тест-пробирку сильно встряхивали в течение 30 минут и оставляли при комнатной температуре в течение 15 минут для гарантии полной реакции. Добавляли 3 мл воды, тест-пробирки встряхивали и затем центрифугировали при 2xg. 0,5 мкл органического слоя вводили на хроматограф со следующими условиями разделения. Температура термостата была запрограммирована, начиная с 130^oC (2 мин.), затем увеличение до 150^oC (30^o/мин) и 220^oC (3,2^oC/мин.) и выдерживание при этой температуре в течение 10 минут. Температура инжектора была 130^oC и температура детектора была 250^oC. Первоначальная скорость тока газа была 2,7 мл/мин. Результаты выражали в виде нормализованных массовых процентов с применением метода наружных стандартов. Не применяли корректирующих коэффициентов для минорных компонентов, для которых не были доступны стандарты или стандарты были недостаточно чистыми.

ЯМР-спектроскопия дигалактозилдиацилглицеринов
Одномерные развязанные протоном спектры ¹³C ЯМР природного относительно содержания регистрировали на спектрометре Bruker AM-400 (Bruker Analytische Messtechnik GmbH, Germany) при ¹³С-частоте 100,614 МГц. Угол импульсов был 36^o, время повторения импульса 1,0 сек. и разрешение 1,526 Гц на точку данных. Во время обработки применяли расширение линии 3 Гц. Пробы (10-40 мг) разбавляли в смеси 730 мкл DMSO-d₆ (Aldrich Chemical Corp., Inc., USA) и 20 мкл D₂O (Aldrich Chemical Corp., Inc., USA) и переносили в пробирку ЯМР (5 мм, внутренний диаметр).

В описанных ниже примерах использовали коммерчески доступные химикалии без дополнительной очистки, если нет других указаний. Во всех приготовлениях растворов использовали деионизованную, профильтрованную через мембрану воду. В качестве модельных масел использовали соевое масло и триацилглицериновое (со средней длиной цепи) масло (МСТ-масло), жиры рыбы и масла с высоким содержанием γ-линоленовой кислоты (ГЛК), полученные из семян энотеры. Однако тип материала масла не является критическим для получения специфических преимуществ данного изобретения.

Соевое масло, кукурузное масло и МСТ-масло были изготовлены Karlshamns AB, Sweden и очищены хроматографически. Масла энотеры с разным содержанием ГЛК, свободная ГЛК и жиры рыбы были изготовлены Callanisch Ltd., Scotland и применялись в полученном от изготовления виде, за исключением жиров рыбы, которые были очищены хроматографически.

Антиоксиданты аскорбилпальмитат и E 442 (фосфатиды аммония) получали из Roche Products Ltd., UK и Palsgaard AS, Denmark, соответственно.

Эмульсии готовили гомогенизацией при высоком давлении с применением различного оборудования, указанного в примерах. Распределение размеров частиц (капелек) и дзета-потенциал полученных эмульсий определяли по динамическому светорассеянию (Zetasizer 4; Malvern Instruments Ltd., UK) при комнатной температуре. Измерения размеров частиц приводили при угле 90^oC с применением ячейки A 104 и мультимодального анализа. Данные представлены как средние величины Z. Дзета-потенциалы измеряли с той же самой ячейкой со следующими установками прибора: режим скрещенного пучка, F(ka) = 1,50 и напряжение на клеммах ячейки 134 B.

Пример 1. Приготовление 10% жировой эмульсии (МСТ-масла).

Готовили эмульсию масла в воде (размер партии 200 г), содержащую следующие ингредиенты:
Ингредиент - %
Эмульгатор - 0,5
МСТ-масло - 10,0
Глицерин, 99% - 2,3
Вода - До 100,0
Эмульгатор, являющийся галактолипидом, диспергировали в масле. Глицерин смешивали с водой. Масляную фазу и водную фазу предварительно нагревали до 70^oC и 85^oC, соответственно. Водную фазу добавляли к масляной фазе при смешивании с высоким сдвигающим усилием при 18000 об/мин. в течение 6 минут. Затем эту пред-эмульсию гомогенизировали при 80 МПа и 50^oC в течение 6 циклов (Mini-Lab 8,30 H; APV Rannis AS, Denmark). Образовавшаяся эмульсия имела средний размер капелек 243 нм.

Пример 2. Приготовление 20% жировой эмульсии (МСТ-масла).

Готовили эмульсию масла в воде (размер партии 200 г), содержащую следующие ингредиенты:
Ингредиент - %
Эмульгатор - 1,0
МСТ-масло - 20,1
Глицерин, 99% - 2,3
Вода - До 100,0
Эмульгатор, являющийся галактолипидом, диспергировали в масле. Глицерин и воду смешивали. Масляную фазу предварительно нагревали до 90^oC и водную фазу нагревали до 50^oC. Масляную фазу добавляли к водной фазе при смешивании с высоким сдвигающим усилием при 14000 об/мин. в течение 4 минут. Эту пред-эмульсию затем гомогенизировали при 80 МПа и 45^oC в течение 5 циклов (Mini-Lab 8,30 H; APV Rannie AS, Denmark). Образовавшаяся эмульсия имела средний размер капелек 213 нм. Этот средний размер не изменялся значительно при автоклавировании (121^oC, 20 минут) и качании (120 ч, 150 циклов/мин.).

Пример 4. Приготовление 30% жировой эмульсии (МСТ-масла).

Готовили эмульсию масла в воде (размер партии 200 г) с использованием следующих ингредиентов:
Ингредиент - %
Эмульгатор - 1,5
МСТ-масло - 30,1
Глицерин, 99% - 2,3
Вода - До 100,0
Эмульгатор, являющийся галактолипидом, диспергировали в масле. Глицерин и воду смешивали. Масляную фазу предварительно нагревали до 67^oC и водную фазу нагревали до 55^oC. Масляную фазу добавляли к водной фазе во время смешивания с высоким сдвигающим усилием при 13000 об/мин. в течение 6 минут. Пред-эмульсию затем гомогенизировали при 80 МПа и 40^oC в течение 6 циклов (Mini-Lab 8,30 H; APV Rannie AS, Denmark), что приводило к среднему размеру капелек 200 нм.

Одну часть полученной эмульсии стерилизовали нагреванием в стандартном настольном автоклаве при 121^oC в течение 20 мин. После тепловой обработки определяли размер капелек, который был 209 нм, что указывало на то, что этот процесс не влиял значительно на капельки эмульсии.

Другую часть эмульсии подвергали тесту встряхивания при 150 циклах/мин. в течение 5 дней. После этого не было обнаружено агрегации капель эмульсии и последующего разрушения (появления "сливок") эмульсии. Средний размер капель, 206 нм, указывал на то, что эта эмульсия была очень стабильной при качании при высокой частоте в течение длительного периода времени. Стерилизованная нагреванием эмульсия также была подвергнута тому же самому тесту встряхивания без заметного изменения в результатах этого теста.

Эмульсия на основе 1,2% яичных фосфолипидов и 20% соевого масла не выдерживала тест встряхивания при той же самой частоте; появление "сливок" можно было наблюдать на поверхности эмульсии с яичными фосфолипидами после 1-2 часов.

Пример 4. Приготовление 39% жировой эмульсии (МСТ-масла).

Готовили эмульсию масла в воде (размер партии 200 г) с применением следующих ингредиентов:
Ингредиент - %
Эмульгатор - 2,0
МСТ-масло - 39,4
Вода - До 100,0
Эмульгатор, являющийся галактолипидом, диспергировали в масле. Водную и масляную фазу предварительно нагревали до 70^oC и масло добавляли к водной фазе при смешивании с высоким сдвигающим усилием при 16000 об/мин. в течение 7 минут. Эту пред-эмульсию затем гомогенизировали при 82 МПа и 50^oC в течение 6 циклов (Mini-Lab 8,30 H; APV Rannie AS, Denmark). Такое приготовление дало эмульсию со слегка напоминающей сливки консистенцией и узким распределением размеров капелек со средним размером капелек 206 нм.

Пример 5. Приготовление 50% жировой эмульсии (МСТ-масла).

Готовили эмульсию масла в воде (размер партии 200 г), содержащую следующие ингредиенты:
Ингредиент - %
Эмульгатор - 2,5
МСТ-масло - 50,3
Глицерин, 99% - 2,3
Вода - До 100,0
Эмульгатор, являющийся галактолипидом, диспергировали в масле. Глицерин и воду смешивали. Масляную фазу предварительно нагревали до 60^oC и водную фазу нагревали до 75^oC. Масляную фазу добавляли к водной фазе при смешивании с высокой сдвигающей силой при 20000 об/мин. в течение 4,5 минут. Эту пред-эмульсию гомогенизировали затем при 80 МПа и 55^oC в течение 5 циклов (Mini-Lab 8,30 H; APV Rannies AS, Denmark). Образованная эмульсия была очень вязкой (подобно йогурту) со средним размером капелек 235 нм.

Пример 6. Приготовление 20% жировой эмульсии (МСТ/соевого масла).

Готовили эмульсию масла в воде (размер партии 200 г), содержащую следующие ингредиенты:
Ингредиент - 5
Галактолипидный материал - 1,0
Фосфатидилхолин из оси - 1,0
Соевое масло - 10,0
МСТ-масло - 10,0
Глицерин, 99% - 2,3
Вода - До 100,0
Галактолипидный материал и фосфатидилхолин сои диспергировали в смеси масел. Глицерин и воду смешивали. Масляную фазу предварительно нагревали до 65^oC и водную фазу нагревали до 55^oC. Водную фазу добавляли к масляной фазе при смешивании с высоким сдвигающим усилием при 11000 об/мин. в течение 9 минут. Эту пред-эмульсию затем гомогенизировали при 80 МПа и 46^oC в течение 5 циклов (Mini-Lab 8,30 H; APV Rannie AS, Denmark). Образовавшаяся эмульсия имела средний размер капелек 262 нм, который не изменялся значительно после автоклавирования.

Пример 7. Приготовление 20% жировой эмульсии (соевого масла).

Готовили эмульсию масла в воде (размер партии 200 г) с применением следующих ингредиентов:
Ингредиент - %
Эмульгатор - 1,5
Соевое масло - 20,0
Глицерин, 99% - 2,3
Вода - До 100,0
Эмульгатор, являющийся галактолипидом, диспергировали и гидратировали в части воды. Глицерин и остальную воду добавляли к дисперсии и смешивали. Водную дисперсию подвергали гомогенизации при высоком давлении в течение 2 циклов при 60 МПа и 40^oC. Соевое масло, предварительно нагретое до 40^oC, добавляли к водной суспензии при смешивании с высоким сдвигающим усилием при 13000 об/мин. в течение 10 минут. Затем эту пред-эмульсию гомогенизировали при 80 МПа и 40^oC в течение 6 циклов (Mini-Lab 8,30 H; APV Rannie AS, Denmark). После охлаждения до комнатной температуры эмульсию доводили до pH 7,2 раствором 2 М NaOH.

Табл. 4 суммирует средний размер капелек в нм эмульсий, описанных в примерах 1-7.

Кроме того, в табл. 4 даны дзета-потенциалы в мВ, показывающие, что капельки эмульсии несли значительный отрицательный заряд, что означает хорошее время хранения этих эмульсий.

Пример 8. Приготовление 20% жировой эмульсии (масло энотеры, содержащего 8% ГЛК).

Готовили эмульсию масла в воде (размер партии 200 г) с применением следующих ингредиентов:
Ингредиент - %
Эмульгатор, гидрогенизированный - 1,02
Масло энотеры - 20,46
Вода - До 100,0
Эмульгатор, являющийся гидрогенизированным галактолипидом, диспергировали в масле. Масляную фазу и воду предварительно нагревали до 62^oC и 73^oC, соответственно и масляную фазу добавляли к воде при смешивании с высоким сдвигающим усилием при 14000 об/мин, в течение 2,5 минут. Эту пред-эмульсию затем гомогенезировали при 80 МПа и 56^oC в течение 7 циклов (Mini-Lab 8,30 H; APV Rannie AS, Denmark). Это приготовление дало эмульсию со средним размером капелек 240 нм. Дзета-потенциал был - 57 мВ.

Пример 9. Приготовление 20% жировой эмульсии (масла энотеры, содержащего 9% ГЛК).

Готовили эмульсию масла в воде (размер партии 200 г) с применением следующих ингредиентов:
Ингредиент - %
Эмульгатор, обогащенный - 1,01
Масло энотеры - 20,16
Вода - До 100,0
Эмульгатор, являющийся обогащенным галактолипидом, диспергировали в масле. Масляную фазу и воду предварительно нагревали до 64^oC и 63^oC, соответственно, и масляную фазу добавляли к воде при смешивании с высоким сдвигающим усилием при 13500 об/мин. в течение 2,5 минут. Затем эту пред-эмульсию гомогенизировали при 80 МПа и 50^oC в течение 7 циклов (Mini-Lab 8,30 H; APV Rannie AS, Denmark). Это приготовление дало эмульсию со средним размером капелек 260 нм и дзета-потенциалом - 50 мВ.

Пример 10. Приготовление 40% жировой суспензии масла энотеры, содержащего 9% ГЛК).

Готовили эмульсию масла в воде (размер партии 300 г) с применением следующих ингредиентов:
Ингредиент - %
Эмульгатор - 1,99
Масло энотеры - 39,55
Ацетат витамина E - 1,08
Фосфатиды аммония, E 442 - 0,10
Аскорбилпальмитат - 0,02
Сахароза - 14,08
Лимонная отдушка - 2.00
Сорбат калия - 0,10
Лимонная кислота - 0,01
Вода - До 100,0
Эмульгатор и антиоксиданты диспергировали в масле. Сахарозу, консервант, ароматизатор и воду смешивали. Масляную фазу и водную фазу предварительно нагревали до 60^oC и 68^oC, соответственно, и масло добавляли к водной фазе при смешивании с высоким сдвигающим усилием при 17000 об/мин. в течение 4 минут. Эту пред-эмульсию затем гомогенизировали при 80 МПа и 60^oC в течение 5 циклов (Mini-Lab 8,30 H; APV Rannie AS, Denmark). Это приготовление дало эмульсию со средним размером капелек 230 нм и дзета-потенциалом - 72 мВ. pH был 5.8.

Пример 11. Приготовление 36% жировой эмульсии (масла энотеры, содержащего 9% ГЛК).

Готовили эмульсию масла в воде (размер партии 2300 г) со следующими ингредиентами:
Ингредиент - %
Эмульгатор - 1,80
Масло энотеры - 35,97
Ацетат витамина E - 1,09
Фосфатиды аммония, E 442 - 0,10
Аскорбилпальмитат - 0,02
Сахароза - 15,00
Банановая отдушка - 2,00
Сорбат калия - 0,10
Вода - До 100,0
Эмульгатор и антиоксиданты диспергировали в масле. Сахарозу, консервант, ароматизатор и воду смешивали. Масляную фазу и водную фазу предварительно нагревали до 58^oC и 63^oC, соответственно, и масло добавляли к водной фазе при смешивании с высоким сдвигающим усилием при 16000 об/мин. в течение 7,5 минут. Затем эту пред-эмульсию гомогенизировали (Model LAB, Type 12,5 ¹H, APV Rannie AS, Denmark) при общем давлении 50 МПа и давлении 100 МПа в течение второй стадии. Скорость течения была 0,82 л/мин., общее время 12 минут и температура 48^oC. Это приготовление дало эмульсию со средним размером капелек 230 нм и дзета-потенциалом - 72 мВ.

Пример 12. Приготовление 40% жировой эмульсии (обогащенного масла энотеры, содержащего 20% ГЛК).

Готовили эмульсию масла в воде (размер партии 300 г) со следующими ингредиентами:
Ингредиент - %
Эмульгатор - 2,49
Обогащенное масло энотеры, 20% ГЛК - 39,85
Ацетат витамина E - 0,39
Фосфат аммония, E 442 - 0,10
Аскорбилпальмитат - 0,02
Сахароза - 15,04
Лимонная отдушка - 2,00
Сорбат калия - 0,10
Вода - До 100,0
Эмульгатор и антиоксиданты диспергировали в масле. Сахарозу, консервант, ароматизатор и воду смешивали. Обе фазы предварительно нагревали до 65-70^oC и масло добавляли к водной фазе при смешивании с высоким сдвигающим усилием при 15000 об/мин. в течение 3,5 минут. Затем эту пред-эмульсию гомогенизировали при 80 МПа и 60^oC в течение 5 циклов (Mini-Lab 8,30 H; APV Rannie AS, Denmark). Это приготовление дало эмульсию с густой подобной йогурту консистенцией.

Пример 13. Приготовление 11% жировой эмульсии (обогащенного масла энотеры, содержащего 80% ГЛК).

Готовили 100 г эмульсии масла в воде, содержащей следующие ингредиенты:
Ингредиент - %
Эмульгатор, обогащенный - 1.0
Обогащенное масло энотеры, 80% ГЛК - 11,0
Глицерин, 2,3% в воде - До 100,0
Эмульгатор, являющийся обогащенным галактолипидным материалом, растворяли в масле при приблизительно 50^oC в атмосфере азота. Глицерин и воду смешивали. Водную фазу добавляли к масляной фазе при смешивании с высоким сдвигающим усилием при 12000 об/мин. в течение 30 сек. Эту пред-эмульсию нагревали до 35^oC и гомогенизировали при 83 МПа в течение 5 минут (EmulsiFlex-C30, Avestin Inc. , Canada). Полученная эмульсия имела средний размер капелек 224 нм, дзета-потенциал - 40 мВ и легко фильтровалась через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм.

Пример 14. Приготовление 20% жировой эмульсии (свободной жирной кислоты, содержащей 70% ГЛК).

50 г эмульсии масла в воде готовили из следующих ингредиентов:
Ингредиент - %
Эмульгатор, обогащенный - 2,5
Свободная жирная кислота, 70% ГЛК - 20,0
Глицерин, 2,3% в воде - До 100,0
Эмульгатор, являющийся обогащенным галактолипидным материалом, растворяли в свободной жирной кислоте при приблизительно 50^oC в атмосфере азота. Глицерин и воду смешивали. Водную фазу добавляли к масляной фазе при смешивании с высоким сдвигающим усилием при 12000 об/мин. в течение 30 сек. Эту пред-эмульсию нагревали до 35^oC и гомогенизировали при 86 МПа в течение 6,5 минут (EmulsiFlex-C30, Avestin Inc. , Canada). Полученная эмульсия имела средний размер капелек 211 нм, дзета-потенциала - 40 мВ и легко фильтровалась через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм.

Пример 15. Приготовление 39% жировой эмульсии (жира сардины, богатого эйкозапентаеновой кислотой (ЭПК).

Готовили эмульсию масла в воде (размер партии 250 г) со следующими ингредиентами:
Ингредиент - %
Эмульгатор - 3,8
Жир сардины - 38,93
Ацетат витамина E - 1,08
Фосфатиды аммония, E 442 - 1,00
Аскорбилпальмитат - 0,02
Сахароза - 14,98
Отдушка перечной мяты - 1,0
Сорбат калия - 0,20
Вода - До 100,0
Эмульгатор и антиоксиданты диспергировали в жире. Сахарозу, консервант, ароматизатор и воду смешивали. Масляную фазу и водную фазу предварительно нагревали до 57^oC и 51^oC, соответственно, и масло добавляли к водной фазе при смешивании с высоким сдвигающим усилием при 16000 об/мин. в течение 3,5 минут. Затем эту пред-эмульсию гомогенизировали при 80 МПа и 55^oC в течение 7 циклов (Mini-Lab 8,30 H; APV Rannie AS, Denmark). Это приготовление дало эмульсию со средним размером капелек 190 нм и дзета-потенциалом - 72 мВ.

Пример 16. Приготовление 39% жировой эмульсии (жира тунца, богатого докозагексановой кислоты (ДГК)).

Готовили эмульсию масла в воде (размер партии 250 г) со следующими ингредиентами:
Ингредиент - %
Эмульгатор - 3,91
Жир рыбы тунца - 39,08
Ацетат витамина E - 1,10
Фосфатиды аммония, E 442 - 1,00
Аскорбилпальмитат - 0,02
Сахароза - 14.94
Отдушка перечной мяты - 1,00
Сорбат калия - 0,20
Вода - До 100,0
Эмульгатор и антиоксиданты диспергировали в жире. Сахарозу, консервант, ароматизатор и воду смешивали. Масляную фазу и водную фазу предварительно нагревали до 59^oC и 64^oC, соответственно, и масло добавляли к водной фазе при смешивании с высоким сдвигающим усилием при 16000 об/мин. в течение 5 минут. Затем эту пред-эмульсию гомогенизировали при 80 МПа и 60^oC в течение 7 циклов (Mini-Lab 8,30 H; APV Rannie AS, Denmark). Это приготовление дало эмульсию со средним размером капелек 190 нм и дзета-потенциалом - 75 мВ.

Пример 17. Приготовление 40% жировой эмульсии (кукурузного масла).

Готовили эмульсию масла в воде (размер партии 200 г) со следующими ингредиентами:
Ингредиент - %
Эмульгатор - 2,00
Кукурузное масло - 40,08
Фосфатиды аммония, E 442 - 1,00
Аскорбилпальмитат - 0,02
Сахароза - 14.98
Сорбат калия - 0,10
Вода - До 100,0
Эмульгатор и антиоксиданты диспергировали в масле. Сахарозу, консервант и воду смешивали. Обе фазы предварительно нагревали до 65^oC и масло добавляли к водной фазе при смешивании с высоким сдвигающим усилием при 15000 об/мин. в течение 4 минут. Затем эту пред-эмульсию гомогенизировали при 80 МПа и 55^oC в течение 7 циклов (Mini-Lab 8,30 H; APV Rannie AS, Danmark). Это приготовление дало эмульсию с узким распределением размеров и средним размером капелек 210 нм и дзета-потенциалом - 74 мВ.

Пример 18. Приготовление 11% жировой эмульсии для парентерального введения (соевого масла), содержащей 2,6-диизопропилфенол.

Эмульсию масла в воде (размер партии 150 г), содержащую фармакологически активное соединение, готовили с применением следующих ингредиентов:
Ингредиент - %
Эмульгатор - 1,27
Соевое масло - 10,57
2,6-диизопропилфенол - 1,05
Глицерин, 99% - 2,24
Вода - До 100,0
Эмульгатор, являющийся галактолипидом, и активный ингредиент, анастетическое лекарственное средство, растворяли в соевом масле. Глицерин и воду смешивали. Водную дисперсию и содержащую лекарственное средство масляную фазу предварительно нагревали до 70^oC и 68^oC, соответственно. Масляную фазу добавляли к водной дисперсии при смешивании с высоким сдвигающим усилием при 13000 об/мин. в течение 1,5 минут. Затем эту пред-эмульсию гомогенизировали при 80 МПа и 48^oC в течение 7 циклов (Mini-Lab 8,30 H; APV Rannie AS, Danmark). Полученная эмульсия имела средний размер капелек 170 нм и дзета-потенциал - 63 мВ. Осмоляльность, определенная микроосмометром (Type 13; Hermann Roebling Messtechnik, Germany), была 257 миллиосмоль/кг H₂O.

Выводы, относительно этого изобретения, заключается в том, что можно получать значительно стабильные эмульсии типа "масло в воде" на основе галактолипидного материала, который удовлетворяют важным и необходимым требованиям быть автоклавируемым и устойчивым к жестким механическим обработкам. Эти эмульсии имеют распределения размеров частиц, которые пригодны для парентерального и внутривенного введения. Эти эмульсии не имеют неприятного запаха или вкуса и необычайно стабильны в отношении окисления. Данное изобретение обеспечивает альтернативу фосфолипидным эмульсиям, которая представляет конкретные преимущества по сравнению с такими эмульсиями.

Изобретение относится к эмульсиям типа "масло в воде". Эти эмульсии используются в качестве носителей для активного вещества в фармацевтических композициях, пищевых, косметических, кормовых и сельскохозяйственных продуктах. Эмульсия содержит, мас. %: маслянистый материал 0,1-70; эмульгатор 0,01-50; полярный растворитель остальное. Маслянистый материал эмульгирован в полярном растворителе. Эмульгатор - галактолипидный материал, состоящий по меньшей мере из 50 мас.% дигалактозилдиацилглицеринов. Галактолипидный материал предпочтительно состоит из 70-80 мас.% дигалактозилдиацилглицеринов и 20-30 мас. % других полярных липидов. Фармацевтическая композиция содержит эмульсию в комбинации с терапевтически активным веществом. Эмульсии обладают повышенной стабильностью при хранении и стерилизации автоклавированием. Они проявляют очень узкое и стойкое распределение размеров частиц, что обычно является проблемой. Терапевтически активное вещество в композиции может быть липофильным лекарственным средством, что обычно представляет проблему при приготовлении эмульсий. 3 с. и 12 з.п.ф-лы, 4 табл.

1. Эмульсия типа "масло в воде", включающая маслянистый материал, эмульгированный в полярном растворителе, отличающаяся тем, что она содержит эмульгатор, представляющий собой галактолипидный материал, состоящий по меньшей мере из 50 мас.% дигалактозилдиацилглицеринов, при следующем содержании компонентов, мас.%: маслянистый материал 0,1 - 70; эмульгатор 0,01 - 50; полярный растворитель остальное. 2. Эмульсия по п. 1, отличающаяся тем, что содержит 0,1 - 10 мас.% эмульгатора. 3. Эмульсия по пп.1 и 2, отличающаяся тем, что галактолипидный материал состоит из 70 - 80 мас.% дигалактозилдиацилглицеринов и 20 - 30 мас.% других полярных липидов. 4. Эмульсия по пп.1, 2 и 3, отличающаяся тем, что галактолипидный материал состоит на 100% из дигалактозилдиацилглицеринов. 5. Эмульсия по любому из пп.1 - 4, отличающаяся тем, что маслянистый материал содержит γ-линоленовую кислоту в форме свободной кислоты, ее солей или сложных эфиров. 6. Эмульсия по любому из пп.1 - 5, отличающаяся тем, что маслянистый материал содержит масло энотеры или масло бурачника. 7. Носитель для активного вещества в фармацевтических, пищевых или косметических композициях, отличающийся тем, что он представляет собой эмульсию по любому из пп.1 - 6. 8. Фармацевтическая композиция, отличающаяся тем, что она содержит эмульсию типа "масло в воде" по пп.1 - 6 в комбинации с терапевтически активным веществом. 9. Фармацевтическая композиция по п.8, отличающаяся тем, что маслянистый материал содержит γ-линоленовую кислоту в форме свободной кислоты, ее солей или сложных эфиров. 10. Фармацевтическая композиция по п.8 или 9, отличающаяся тем, что маслянистый материал имеет в основе масло энотеры или масло бурачника. 11. Фармацевтическая композиция по п.8, отличающаяся тем, что маслянистый материал представляет собой триацилглицериновое масло, предпочтительно триацилглицериновое масло со средней длиной цепи (МСТ) или биоактивное вещество. 12. Фармацевтическая композиция по любому из пп.8 - 11, отличающаяся тем, что содержит терапевтически активное вещество в терапевтически эффективном количестве, галактолипидный эмульгатор 0,1 - 5,0 мас.%; маслянистый материал 1 - 50 мас.% и полярный растворитель остальное до 100%. 13. Фармацевтическая композиция по п.11, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит изотонически эффективное количество изотонического агента. 14. Фармацевтическая композиция по п.11 или 13, отличающаяся тем, что для парентерального введения она содержит, мас.%: 0,2 - 3% 2,6-диизопропилфенола; 0,3 - 5 галактолипидного материала; 5 - 30 триацилглицеринового масла; изотонически эффективное количество изотонического агента; воду до 100%. 15. Фармацевтическая композиция по любому из пп.8 - 12, отличающаяся тем, что она предназначена для перорального, энтерального, парентерального, ректального, вагинального, местного, глазного, назального или ушного введения.