ИММУНОТРОПНОЕ СРЕДСТВО Российский патент 1999 года по МПК A61K35/64 A61K35/78 

Изобретение относится к области медицины, ветеринарии, а именно к фармакологии, и может использоваться для профилактики и лечения вторичных иммунодефицитных состояний у человека, животных и птиц при вирусных, опухолевых и бактериальных заболеваниях, а также для повышения устойчивости организма к действию неспецифических повреждающих факторов при интенсивной химиотерапии и рентгенотерапии злокачественных новообразований, при поражении СПИДом, радиацией, при аутоиммунных заболеваниях.

Известно средство для восстановления и стимуляции иммунной системы, включающее экстракт прополиса, маточного молочка, пыльцы и меда (1). Средство используется в качестве компонента лекарственной терапии.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому является биостимулирующее средство, содержащее фитоэкстракты, мед, прополис и цветочную пыльцу (2). Средство повышает защитные функции организма к действию неспецифических комплексных повреждающих факторов, в частности радиации.

Однако известные средства, включающие обычный цветочный мед, прополис, фитоэкстракты, маточное молочко являются стимуляторами иммунной системы и одновременно могут активировать опухолевую трансформацию клеток организма у людей, животных и птиц, особенно у особей, чувствительных к заражению онковирусами, или больных злокачественными опухолями. Кроме этого, известные средства содержат пыльцу, которая является сильным аллергеном.

Задачей изобретения является создание иммунотропного средства, обладающего иммуностимулирующим, антибактериальным, противовирусным действием и одновременно противоопухолевой активностью с исключением активации клеточной пролиферации, которая обуславливает опухолевую трансформацию клеток при использовании биостимулирующих средств.

Поставленная задача достигается иммунотропным средством, включающим 99,5-25 мас.% монофлерного меда, содержащего 3-окси-флавон-силибин, и 0,5-75 % мас. экстракта растений семейства сложноцветных, содержащих 3-окси-флавон-силибин, полученным переработкой по меньшей мере дважды пчелами с последующим фракционированием путем замораживания водного раствора полученного меда до температуры примерно -60^oC с последующим размораживанием до 15-30^oC.

Средство предпочтительно в качестве монофлерного меда содержит фракцию монофлерного меда, выделенную путем замораживания водного раствора меда, возможно содержащего электролит, до температуры примерно -60^oC с последующим размораживанием до 15-30^oC.

Экспрессный пчелиный мед, содержащий 3-окси-флавон- силибин, полисахариды, микроэлементы и ферменты, не обладает токсическим действием, но тормозит лектинин индуцированный митогенез. Кроме этого известно, что 3-окси-флавон-силибин содержится в экстракте чертополоха колючего, не обладает токсическими свойствами и может оказаться ценным благодаря своим свойствам при лечении аутоиммунных заболеваний (3).

Очистку проводят, как указано выше, путем медленного замораживания водного раствора меда, при этом раствор может содержать электролит, со скоростью -1^oC/ч до температуры примерно -60^oC с последующим размораживанием со скоростью предпочтительно 1^oC/ч. Концентрация раствора меда составляет, как правило, не более 80 маc.%. Первые две-три фракции обычно не используют. Постепенное изменение температуры позволяет удалить белки, вызывающие побочные негативные реакции, которые вызывают компоненты неразрушенных пыльцевых зерен.

Преимуществом фракции монофлерного меда является полное отсутствие токсичности, проверенной в лабораторных условиях на белых мышах, морских свинках, кроликах и птицах, а также на крупных домашних животных при парентеральном введении.

Наличие 3-окси-флавон-силибина в безбелковой фракции монофлерного меда семейства сложноцветных подтверждают на цыплятах, чувствительных к заражению вирусом саркомы Рауса. Цыплятам с растущими опухолями вводят фракцию монофлерного меда, содержащую 3-окси-флавон-силибин. Только при наличии во фракции 3-окси-флавон-силибина наблюдается рассасывание опухолей, уменьшение некроза. У опытных цыплят наблюдается сухой некроз и постепенное рассасывание опухоли.

Вторым компонентом заявляемого иммуностимулирующего средства является экстракт цветущих растений семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин.

Экстракцию биологически активных веществ осуществляют обработкой 70%-ным водным раствором этилового спирта растений семейства сложноцветных, что позволяет полностью отделить экстракт от пектинов, с последующим загущением в вакуумном устройстве до содержания влаги не более 25%.

Предпочтительно экстракт содержит витамины, по меньшей мере A, E, PP, F. Экстракт может содержать микроэлементы, по крайней мере Mg, Ca, Zr, Ni, Fe.

Полученный экстракт в виде раствора (соотношение экстракт : разбавитель = 1 : 5-40) добавляют в монофлерный мед семейства сложноцветных, постепенно скармливают отобранным пчелиным семьям на изолированной пасеке в период окончания продуктивного взятка в многокорпусных ульях. В отобранных семьях пчел предварительно удаляли все рамки с ранее заготовленным медом, а вместо них ставили рамки с сушью. После скармливания отбирали рамки с медом полностью запечатанными. Откачку меда проводили на специально изготовленных из мягких пород дерева медогонках, которые исключают контакт экспрессного меда с металлом.

Полученный экспрессный витаминизированный мед семейства сложноцветных, содержащий ряд микроэлементов, освобождают от белковых фракций, после чего его можно вновь скормить пчелам. Предпочтительно этот процесс повторить трижды с целью концентрирования составляющих компонентов и обеспечения максимальной биологической очистки заявленного средства.

По-видимому, при переработке экстракта меда пчелами происходит ингибирование свободных радикалов и нейтрализация активных групп, входящих в состав гликозидов и 3-окси-флавон-силибина, что позволяет исключить активацию клеточной пролиферации при использовании предлагаемого средства.

Предлагаемое иммунотропное средство стимулирует иммунные процессы, нормализует обмен веществ, повышает антитоксическую функцию печени, не оказывает отрицательного влияния на почки, повышает фагоцитарную активность макрофагов, нормализует показатели крови (гемоглобин, лейкоформулу, СОЭ и др.), увеличивает содержание в крови витамина А и глобулиновых фракций белков, проявляет антибактериальный и противовирусный эффект, задерживает рост некоторых видов опухолевых клеток.

Изобретение иллюстрируется нижеследующими примерами.

Пример 1.

В монофлерный зрелый мед семейства сложноцветных, соответствующий ГОСТ 19792-74, содержащий в составе 3-окси-флавон- силибин, добавляют 20 мас.% экстракта цветущих растений семейства сложноцветных, содержащего 3-окси-флавон-силибин. Экстракт получен предварительно путем добавления экстракта в монофлерный мед семейства сложноцветных, скармливания полученной смеси отобранным пчелиным семьям с последующей откачкой экспрессного меда.

Количество используемого экспрессного меда изменяется в зависимости от количества биологически активных веществ, которое необходимо для изготовления иммунотропного средства.

Полученное средство проверяли на наличие ингибирующих свойств к типовым штаммам опухолевых вирусов - вируса саркомы Рауса, серологических подгрупп: A, B, C в опытах in vitro. Дополнительно выявляли цитотоксические свойства.

Пример 2.

Экстракт цветущих растений семейства сложноцветных получают путем экстрагирования 70%-ным водным раствором этилового спирта. Экстракт, свободный от пектинов, сгущали в вакууме до содержания влаги 20%.

Экстракт добавляли в монофлерный зрелый мед семейства сложноцветных, соответствующий ГОСТ 19792-74, содержащий в составе 3-окси-флавон-силибин. Полученную смесь постепенно трехкратно скармливали отобранным пчелиным семьям. В отобранных семьях предварительно удалили все рамки с ранее заготовленным медом, а вместо них поставили рамки с сушью. После скармливания смеси отбирали рамки с медом полностью запечатанными. После откачки меда осуществляли фракционирование для отделения белковых фракций и получали иммунотропное средство, содержащее 0,5 мас.% экстракта цветущих растений семейства сложноцветных.

Полученное средство проверяли на наличие ингибирующих свойств к типовым штаммам опухолевых вирусов и выявляли цитотоксические свойства.

Пример 3.

Получали средство согласно примеру 2, но средство содержало 60 мас.% экстракта цветущих растений семейства сложноцветных.

Средство также проверяли на наличие ингибирующих и цитотоксических свойств.

Пример 4.

Определение цитотоксических и ингибирующих опухолевые вирусы доз каждой фракции проводили in vitro в субкультуре клеток куриных эмбриональных фибробластов, зараженных типовыми штаммами вируса саркомы Рауса.

Для стандартизации средства по данным 5-7 опытов устанавливали методом разведения средства следующие дозы:
1. Цитотоксическая доза должна быть не ниже 150 мкг/мл (ЦТД₅₀/мл)
2. Ингибирующая опухолевую трансформацию клеток доза должна быть не ниже 1,5±0,2 lg ОД₅₀/мл (онкогенных доз).

3. Концентрация экстракта цветущих растений семейства сложноцветных в пределах 250 мкг/мл.

Пример 5.

Проверка эффекта заявленного средства и сходных с ним препаратов производилась при лечении и профилактике иммунодефицитных состояний при хронических опухолевых болезнях.

Лечение проводили методом парентерального введения заявленного средства в дозе 20 мкг/кг с интервалом в трое суток и перорального в дозе 25 мл рабочего раствора три раза в день. Результаты проведенных экспериментов приведены в таблице (см. в конце описания).

Эффект от использования заявляемого средства выше, чем от каждого отдельного компонента средства и выше, чем от использования сходных с ним по составу средств.

Клинические испытания заявляемого средства проведены на двух группах больных с иммунодефицитным состоянием.

Первая группа из 32 больных женщин в возрасте 40-51 года со злокачественными опухолями матки и яичников в стадии T₁N₀M₀ до T₂N₂M₀ и с прогрессирующим быстрым ростом опухолей. Было назначено комплексное лечение: хирургическое, химиотерапия, гормональные препараты и заявляемое средство в дозе 0,2 мл/кг с интервалом через трое суток. В опытной группе наблюдали усиление специфического действия цитостатических препаратов и ослабление их общетоксического действия на организм всех больных. В результате были уменьшены дозы цитостатических препаратов по сравнению с контролем. Не было выявлено ни одного случая непереносимости предлагаемого средства и возникновения побочных явлений. Увеличились сроки ремиссии.

Пример 6.

Больные А. и Н. по 8 и 10 лет. Диагноз при поступлении - лимфоидный лейкоз. Больным назначена химиотерапия и предлагаемое иммунотропное средство внутримышечно в дозе 0,025 мл/кг с интервалом 3 суток. Цикл активной иммунотерапии проводился до химиотерапии и в период химиотерапии в течение 30 суток. Неприятных ощущений и признаков интоксикации больные не наблюдали. Наступила длительная ремиссия.

Пример 7.

Больные Н., Т., О по 18-20 лет. Диагноз при поступлении нейродермит. Был назначен курс активной неспецифической иммунотерапии с применением средства по изобретению в дозе 0,05 мл/кг веса. Признаков интоксикации и неприятных ощущений не наблюдалось. Исчезли полностью все клинические признаки болезни. Наступила длительная ремиссия.

Список источников информации
1. Патент СССР 1836094, МКИ A 61 K 35/64, опуб. 1993 г.

2. Патент СССР 1826910, МКИ A 61 K 35/64, опуб. 1993 г.

3. Т.Н.Дранник, Ю.А.Гриневич, Г.М.Дизик, Иммунотропные препараты, Киев, Здоров^,я, 1994, С. 212.

Изобретение относится к медицине, ветеринарии, а именно к фармакологии, и может использоваться для профилактики и лечения вторичных иммунодефицитных состояний при вирусных, опухолевых и бактериальных заболеваниях. Иммунотропное средство включает экстракт растений семейства сложноцветных в количестве 0,5-75 мас.% и монофлерный мед, содержащий 3-окси-флавон-силибин, в количестве 25-99,5, при этом средство получено переработкой указанного состава пчелами, по меньшей мере дважды, с последующим фракционированием путем замораживания водного раствора меда до -60^oС с последующим размораживанием до 15-30^oС. Технический результат: иммунотропное средство стимулирует иммунные процессы, нормализует обмен веществ, проявляет антибактериальную, противовирусную активность и задерживает рост некоторых видов опухолевых клеток. 4 з. п.ф-лы, 1 табл.

1. Иммунотропное средство для восстановления и стимуляции иммунной системы, включающее фитоэкстракт, отличающееся тем, что в качестве фитоэкстракта оно включает экстракт растений семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин, и дополнительно монофлерный мед семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Экстракт растений семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин - 0,5-75
Монофлерный мед, содержащий 3-окси-флавон-силибин - 25-99,5
при этом средство получено переработкой указанного состава пчелами по меньшей мере дважды, с последующим фракционированием путем замораживания водного раствора меда до температуры примерно -60^oC с последующим размораживанием до 15-30^oC. 2. Средство по п.1, отличающееся тем, что в качестве монофлерного меда оно включает его фракцию, выделенную путем замораживания водного раствора меда до температуры примерно -60^oC с последующим размораживанием до 15-30^oC. 3. Средство по пп.1 и 2, отличающееся тем, что оно получено фракционированием путем замораживания и последующего размораживания со скоростью 1^oC/ч. 4. Средство по пп.1-3, отличающееся тем, что экстракт содержит комплекс витаминов и микроэлементы. 5. Средство по п.4, отличающееся тем, что комплекс витаминов включает по меньшей мере витамины A, E, PP, F, а микроэлементы - по меньшей мере Mg, Ca, Zn, Ni, Fe.