ИММУНОТРОПНЫЙ ПРЕПАРАТ Российский патент 1999 года по МПК A61K35/64 A61K35/78 

Изобретение относится к области медицины, ветеринарии, а именно к фармакологии, и может использоваться для профилактики и лечения опухолевых заболеваний, при поражении СПИДом, при аутоиммунных заболеваниях, хронических воспалительных процессах вирусной и бактериальной природы.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому является средство, включающее экстракт левзеи и родиолы розовой, экстракт солодки, прополис, пыльцу, маточное молочко и мед (1). Известное средство повышает сопротивляемость организма к действию неспецифических повреждающих факторов - радиации и токсинов.

Недостатком известного средства является активирование процесса клеточной пролиферации, которая способствует опухолевой трансформации клеток. Кроме этого, известный препарат содержит пыльцу, которая является сильным аллергеном.

Задачей изобретения является создание иммунотропного препарата, обладающего противоопухолевой и антиметастатической активностью, обеспечивающего увеличение сроков ремиссии и повышенной эффективностью при профилактике рецидивов.

Поставленная задача достигается иммунотропным препаратом, включающим 98-25% мас. монофлерного меда, содержащего 3-окси-флавон-силибин, 1-35% мас. экстракта цветущих растений семейства сложноцветных, содержащего 3-окси-флавон-силибин, и 1-40% мас. флавоноидной фракции березового прополиса, при этом препарат получен переработкой, по меньшей мере дважды, пчелами с последующим фракционированием путем замораживания водного раствора полученного меда до температуры примерно -60^oC с последующим размораживанием до 15 - 30^oC.

Используемый монофлерный пчелиный мед семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин, не обладающий токсическим действием, тормозит лектинин индуцированный митогенез. Кроме этого известно, что 3-окси-флавон-силибин содержится в экстракте чертополоха колючего и не обладает токсическими свойствами (2). Указанный экологически чистый монофлерный мед преимущественно очищают путем медленного замораживания водного раствора или раствора, дополнительно содержащего экcтракт меда с концентрацией не более 80% мас. до температуры примерно -60^oC с последующим размораживанием до температуры 15-30^oC. Постепенное изменение температуры позволяет удалить белки, вызывающие побочные негативные реакции, которые вызывают компоненты неразрушенных пыльцевых зерен. Такая очистка позволяет получить фракцию монофлерного меда, преимуществом которой является полное отсутствие токсичности и аллергических реакций, проверенное в лабораторных условиях на белых мышах, морских свинках, кроликах и птицах, а также на крупных домашних животных при парентеральном введении.

Наличие 3-окси-флавон-силибина в монофлерном меде семейства сложноцветных подтверждают на цыплятах, чувствительных к заражению вирусом саркомы Рауса. Цыплятам с растущими опухолями вводят монофлерный мед, содержащий 3-окси-флавон-силибин. Только при наличии 3-оси-флавон-силибина наблюдается рассасывание опухолей, уменьшение некроза. У опытных цыплят наблюдается сухой некроз и постепенное рассасывание опухоли.

Вторым компонентом заявляемого иммунотропного препарата является экстракт цветущих растений семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин.

Экстракцию биологически активных веществ осуществляют обработкой 70%-ным водным раствором этилового спирта цветущих растений семейства сложноцветных, что позволяет полностью отделить экстракт от пектинов, с последующим загущением в вакуумном устройстве до содержания влаги не более 25%.

Экстракт может содержать 3-окси-флавон-силибин до 30% мас.

Экстракт предпочтительно содержит витамины, по меньшей мере A, E, PP, F. Экстракт может содержать микроэлементы, по крайней мере Mg, Ca, Zn, Ni, Fe.

Важным компонентом заявляемого иммунотропного препарата являются флавоноидные фракции прополиса березового, предпочтительно разведенные раствором хлорофилла вида "а" и "в".

Известно, что водорастворимый хлорофилл содержит порфириновые производные преимущественно в виде их комплексов с магнием (3), (4).

Прополис в своем составе содержит большое количество фенольных структурно-родственных хелатообразующих соединений. Вероятно, фенольные соединения прополиса взаимодействуют с порфириновыми комплексами, включающими магний или металлы переменной валентности, с образованием хелатных соединений, обуславливающих противоопухолевую активность.

Стандартизацию прополиса проводят экспресс-методами, позволяющими при использовании небольшого количества вещества дать характеристику каждой партии. Основу разработанных экспресс-методов составляют цветные реакции 0,1%-ного спиртового раствора прополиса с рядом комплексообразующих реагентов, в частности водными растворами хлорного железа, ацетатом меди и ацетатом свинца, определяющими наличие и содержание флавоноидов, и 20%-ной щелочью, изомеризующей флавононы, постоянно присутствующие в прополисе. Для характеристики партий прополиса используется различная адсорбируемость его компонентов на окиси алюминия второй степени активности, а также его способность максимально растворяться в смеси хлороформ: ацетон при их массовом соотношении 2: 1 соответственно, что в итоге позволяет количественно определить содержание балластной и биологически активной фракций прополиса. Стандартизировать прополис можно и по подавлению роста растений.

Предлагаемый по изобретению препарат получают смешиванием всех указанных компонентов с последующим скармливанием полученного состава отобранным пчелиным семьям на изолированной пасеке в период окончания продуктивного взятка в многокорпусных ульях. В отобранных семьях предварительно удаляли все рамки с ранее заготовленным медом, а вместо них ставили рамки с сушью. После скармливания отбирали рамки с медом полностью запечатанными. Откачку меда проводили на специально изготовленных из мягких пород дерева медогонках, которые исключают контакт экспрессного меда с металлом.

Полученный экспрессный мед освобождают от белковых фракций описанным выше способом, после чего его вновь скармливают пчелам. Предпочтительно этот процесс повторить трижды с целью концентрирования составляющих компонентов и обеспечения максимальной биологической очистки заявленного препарата.

Экспрессный мед обеспечивает полную совместимость смеси и защитное действие по отношению к 3-окси-флавон-силибину, флавоноидным фракциям прополиса, а также к хлорофиллу из высших растений.

Препарат может дополнительно содержать экстракт корней подофилла щитовидного. Экстракцию осуществляют 70%-ным водным раствором этилового спирта с последующим загущением в вакууме до содержания влаги не более 25%. Препарат, как правило, содержит не менее 1% подофилла от всей массы препарата. Предпочтительно готовый экстракт смешивают с монофлерным медом, скармливают пчелам и после этого добавляют в иммунотропному препарату. Можно скармливать пчелам совместно с другими компонентами, входящими в состав препарата по изобретению.

Препарат может дополнительно содержать комплекс витаминов, содержащий по меньшей мере витамины A, E, PP, F и микроэлементы, включающие, как правило, Mg, Ca, Zn, Ni, Fe.

Необходимо отметить, что смесь компонентов препарата по изобретению обладает более выраженным бактериостатическим, фунгицидным и противоопухолевым действием, чем отдельно взятые компоненты. Препарат стимулирует T-систему иммунитета и опосредованно через макрофаги B-систему иммунитета.

Изобретение иллюстрируется нижеприведенными примерами.

Пример 1.

В монофлерный зрелый мед семейства сложноцветных, соответствующий ГОСТ 19792-74, содержащий в своем составе 3-окси-флавон-силибин, добавляют до 30% мас. экстракта цветущих растений этого же семейства.

Экстракт получали экстрагированием растений 70%-ным водным раствором этилового спирта до полного отделения пектинов с последующим загущением экстракта в вакууме до содержания влаги не более 25%.

Одновременно добавляют в монофлерный мед до 20% мас. флавоноидных фракций березового прополиса.

Полученную смесь постепенно скармливают отобранным пчелиным семьям на изолированной пасеке, как описано выше.

Далее осуществляют фракционирование, помещают полученный состав в специально изготовленные сосуды, в которых обеспечиваются равномерное замораживание и отбор проб. Замораживание осуществляют до -40^oC. Затем осуществляют медленное размораживание до температуры +18^oC. Первые фракции, содержащие белок, не использовали.

Препарат согласно изобретению представляет собой фракции экспрессного меда, содержащие 3-окси-флавон-силибин, флавоноидные фракции березового прополиса и экстракта растений семейства сложноцветных, содержащего 3-окси-флавон-силибин.

Пример 2.

Для приготовления препарата по изобретению использовали 35% мас. экстракта цветущих растений семейства сложноцветных, содержащего 3-окси-флавон-силибин, 35% мас. монофлерного пчелиного меда, содержащего 3-окси-флавон-силибин, 30% мас. флавоноидных фракций березового прополиса. Дополнительно вводили в состав 30 мас.ч. в расчете на 100 мас.ч. смеси хлорофилла.

Полученную смесь дважды скармливают пчелам, последующее фракционирование осуществляют путем замораживания со скоростью -1^oC/час до температуры -60^oC и размораживания также со скоростью 1^oC/час до температуры 30^oC. Первые фракции, содержащие белок, не использовали.

Пример 3.

Препарат готовят в соответствии с примером 1, но дополнительно вводят экстракт подофилла щитовидного в количестве 10 мас.ч. на 100 мас.ч. препарата. Используют экстракт, содержащий 25% влаги.

Пример 4.

К препарату, полученному согласно примеру 1, добавляют комплекс витаминов, включающий витамины A, E, PP и F, и микроэлементы Mg, Ca, Zn, Ni, Fe в количестве, обычно используемом в таких препаратах. Добавляемые витамины и микроэлементы совместно с имеющимися в прополисе и экспрессном меде витаминами и микроэлементами обогащают предлагаемый препарат.

Пример 5.

Для препаратов, полученных согласно примерам 1-4, проводили определение цитотоксических и ингибирующих опухолевые вирусы доз in vitro в субкультуре клеток куриных эмбриональных фибробластов, зараженных типовыми штаммами вируса саркомы Рауса.

Для стандартизации препарата по данным 5 - 7 опытов устанавливали методом разведения препарата следующие дозы:
1. Цитотоксическая доза должна быть не ниже 150 мкг/мл (ЦТВ₅₀/мл);
2. Ингибирующая опухолевую трансформацию клеток доза должна быть не ниже 1,5 ± 0,2 lg OD₅₀/мл (онкогенных доз);
3. Концентрация экстракта цветущих растений семейства сложноцветных - в пределах 250 мкг/мл.

Пример 6.

Больной С. , 55 лет, диагноз при поступлении - рак желудка, метастаз в печень. Операбельное удаление опухолей. Проведен курс неспецифической иммунотерапии с применением препарата, полученного по примеру 1, в дозе 0,2 мл/кг веса в течение 35 дней. Наступила стойкая ремиссия.

Пример 7.

Больная Ю., 48 лет, диагноз - рак желудка. Метастазы в печень. Проведена радикальная операция по удалению желудка, мезентериальных лимфатических узлов.

Проведен курс активной неспецифической иммунотерапии в течение 40 суток. Исчезли метастазы в печени. Наступила стойкая ремиссия в течение 5 лет. Больная работает и в настоящее время.

Пример 8.

Больные А., Н., Р., по 8-10 лет (зона радиоактивного загрязнения). Диагноз при поступлении - лимфоидный лейкоз. Больным назначена химиотерапия одновременно с иммунотропным препаратом, полученным согласно примеру 1, в дозе 0,025 мг/кг внутримышечно с интервалом в трое суток. Цикл активной неспецифической иммунотерапии проводили за 10 дней до химиотерапии и в период химиотерапии в течение 30 дней. Неприятных ощущений и признаков интоксикации не наблюдали, наступила длительная ремиссия.

Пример 9.

Больной С. , 70 лет. Диагноз при поступлении - рак легких, метастазы в печень и в лимфатические узлы, позвоночник. Отмечались выраженные признаки интоксикации. Применен курс активной неспецифической иммунотерапии в течение 35 суток. Неприятных ощущений не наблюдали. В результате отмечена положительная клиническая динамика: исчезновение признаков интоксикации, исчезли метастазы в печени и лимфатических узлах. Использовали препарат по изобретению, полученный согласно примеру 2, в дозе 0,2 мл/кг с интервалом в трое суток.

Пример 10.

Больные О., Н., по 12-15 лет (зона радиоактивного загрязнения). Диагноз при поступлении - быстро растущие опухоли глаз. Больным назначены химиотерапия и одновременно иммунотропный препарат по изобретению, полученный по примеру 3, в дозе 0,2 мл/кг ежедневно в течение месяца. Неприятных ощущений и признаков интоксикации не наблюдали. Рост опухолей не наблюдали.

Пример 11.

Проверка эффективности заявляемого препарата и сходных с ним препаратов производилась при лечении и профилактике иммунодефицитных состояний при хронических опухолевых болезнях. Лечение проводили методом парентерального введения препарата согласно изобретению в дозе 20 мкг/кг с интервалом в трое суток и перорального в дозе 25 мл рабочего раствора три раза в день. Результаты проведенных исследований приведены в таблице.

Клинические испытания иммунотропного препарата проведены на двух группах больных с иммунодефицитным состоянием.

Первая группа 28 больных женщин в возрасте 45-49 лет со злокачественными опухолями матки. Было назначено комплексное лечение: хирургическое, химиотерапия, гормональные препараты и заявляемый препарат в дозе 0,2 мкг/кг с интервалом через трое суток. В опытной группе наблюдали усиление действия цитостатических препаратов и ослабление их общетоксического действия на организм всех больных. В результате были уменьшены дозы цитостатических препаратов по сравнению с контролем. Не было выявлено ни одного случая непереносимости препарата по изобретению и возникновения побочных явлений. Увеличились сроки ремиссии.

Источники информации
1. Патент СССР 1836094, A 61 K 35/64, 1993.

2. Т.Н.Дранник, Ю.А.Гриневич, Г.М.Дизик, Иммунотропные препараты. - Киев, Здоров'я, 1994, с. 212.

3. Шаронов Ю.А., Шаронова Н.А., Структура и функции гемоглобина. - Молекулярная биология, 1975, N 1, Т.9, с. 145.

4. Шлык А.А. Проблемы биосинтеза хлорофиллов. - Минск, 1971.

Изобретение относится к области медицины, ветеринарии, а именно к фармакологии, и может использоваться для профилактики и лечения опухолевых заболеваний, при поражении СПИДом, при аутоиммунных заболеваниях, хронических воспалительных процессах вирусной и бактериальной природы. Сущность изобретения: иммунотропный препарат, включающий экстракт растений семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин 98-25 мас.%, монофлерный мед, содержащий 3-окси-флавон-силибин 35-1 мас.% и флавоноидную фракцию березового прополиса 40-1 мас.%. Технический результат: иммунотропный препарат, обладающий противоопухолевой и антиметастатической активностью, обеспечивает увеличение срока ремиссии и повышенную эффективность при профилактике рецидивов. 4 з.п.ф-лы, 1 табл.

1. Иммунотропный препарат, включающий фитоэкстракт, прополис и мед, отличающийся тем, что в качестве фитоэкстракта он включает экстракт растений семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин, в качестве прополиса - флавоноидную фракцию березового прополиса, в качестве меда - монофлерный мед семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин, при следующем соотношении, мас.%:
Экстракт растений семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин - 98 - 25
Монофлерный мед, содержащий 3-окси-флавон-сибилин - 35 - 1
Флавоноидная фракция березового прополиса - 40 - 1
при этом препарат получен переработкой указанных компонентов пчелами, по меньшей мере дважды, с последующим фракционированием путем замораживания водного раствора меда до температуры примерно -60^oC с последующим размораживанием до 15 - 30^oC. 2. Иммунотропный препарат по п.1, отличающийся тем, что он дополнительно содержит водорастворимый хлорофилл в качестве разбавителя. 3. Иммунотропный препарат по п.2, отличающийся тем, что массовое соотношение препарат - хлорофилл составляет 1 : 0,3 - 10 соответственно. 4. Иммунотропный препарат по пп.1 - 3, отличающийся тем, что он дополнительно включает экстракт растения подофилла щитовидного в количестве не менее 1 мас.%, обработанный пчелами. 5. Иммунотропный препарат по пп.1 - 4, отличающийся тем, что он дополнительно включает комплекс витаминов, по меньшей мере витамины А, Е, РР, F, и микроэлементы, по меньшей мере Mg, Ca, Zn, Ni, Fe.